專(zhuān)利名稱(chēng)：一種可用于人體補(bǔ)鐵的鐵蛋白及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種可用于人體補(bǔ)鐵的鐵蛋白及其制備方法和應(yīng)用。
人體容易缺鐵，目前醫(yī)藥上用無(wú)機(jī)鐵補(bǔ)充人體，以減少因缺鐵而引起貧血癥，但效果很差，因無(wú)機(jī)鐵不易吸收，且口感不好，易引起惡心和降低食欲，國(guó)際上都正在以鐵蛋白補(bǔ)鐵為研究方向，鐵蛋白是植物中廣泛存在的一種蛋白質(zhì)，在它的每個(gè)分子中含有4個(gè)鐵原子，其分子量是12000，鐵在這一蛋白中稱(chēng)非血晶質(zhì)的鐵。
本發(fā)明目的是提供一種可用于人體補(bǔ)鐵的鐵蛋白及其制備方法和應(yīng)用，該方法獲得的鐵蛋白表達(dá)量高，含鐵量多。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案這種可用于人體補(bǔ)鐵的鐵蛋白包括蛋白質(zhì)和鐵，其中含鐵2-5％，其余為蛋白質(zhì)。
一種可用于人體補(bǔ)鐵的鐵蛋白的制備方法，其特征包括以下幾個(gè)步驟①工程菌高密度培養(yǎng)；②鐵蛋白的制備。
實(shí)施例1.
1.工程菌高密度培養(yǎng)含鐵蛋白基因的工程菌為大腸桿菌BL21(DE3)，載有鐵蛋白基因的載體為pSE280。大腸桿菌工程菌通過(guò)三級(jí)培養(yǎng)，一級(jí)和二級(jí)在200轉(zhuǎn)/分搖床上，在37℃下用三角形在LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)，各培養(yǎng)6-8小時(shí)，依1％的接種量三級(jí)上罐培養(yǎng)，發(fā)酵罐為20升，罐培養(yǎng)時(shí)用高密度培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)，約培養(yǎng)5小時(shí)后OD600值為13-15時(shí)，用IPTG(異丙基硫代半乳糖苷)誘導(dǎo)，每升加入0.5mol/L IPTG溶液0.5毫升。誘導(dǎo)3-4小時(shí)后放罐。最終菌液OD600值約為18。檸檬酸鐵銨開(kāi)始加入0.1克/升，當(dāng)用IPTG化學(xué)誘導(dǎo)表達(dá)后，依菌體重逐漸增加投入量至不影響菌體生長(zhǎng)的最大量。最終加至每升菌液為0.35克。獲得濕菌體量為60-70克/升。
所用的高密度培養(yǎng)基配方為硫酸銨5.0克/升，磷酸氫二鉀6.0克/升，磷酸二氫鉀3.0克/升，硫酸鎂1.5克/升，胰蛋白胨10-20克/升，酵母提取物2-10克/升，葡萄糖80-100克/升，微量元素(銅、鈷、鈣、鋅、鉬、錳)各10-5-10-4克分子/升。
2.產(chǎn)品制備罐中培養(yǎng)后用連續(xù)離心機(jī)12000轉(zhuǎn)/分離心收集菌體，濕菌體如不馬上處理可放在-20℃下保存。
濕菌體用5倍蒸餾水懸浮，在1000Psi壓力下破碎細(xì)胞(或用超聲波破碎儀破碎)，在10000轉(zhuǎn)/分下離心15分鐘，上清液用5倍體積的分析純乙醇沉淀蛋白，測(cè)定物在40℃減壓干燥，產(chǎn)品再研磨成粉，即得鐵蛋白制品。此種鐵蛋白制品的含鐵量約為2-5％。
3.產(chǎn)品的急性毒性實(shí)驗(yàn)、藥效實(shí)驗(yàn)和含鐵量測(cè)定如下，并可詳見(jiàn)附件1、2、3。
1、產(chǎn)品的急性毒性實(shí)驗(yàn)使蛋白粉劑小鼠灌胃給藥的最大耐受量為8000mg/kg，在連續(xù)7天觀察中動(dòng)物一般狀況良好，行為等未見(jiàn)異常，無(wú)死亡動(dòng)物，且體重增長(zhǎng)。
2、藥效實(shí)驗(yàn)經(jīng)口灌服160mg/kg和80mg/kg，鐵蛋白對(duì)氛鐵貧血大鼠具有明顯抑制貧血形成的作用。
3、含鐵量測(cè)定Fe含量為5.23％。
本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)1.本方法獲得的產(chǎn)品含鐵量高，約2-5％，副件實(shí)驗(yàn)證明可用于人體補(bǔ)鐵，用于治療因缺鐵引起的血色素缺乏癥；2.用高密度培養(yǎng)基可增加濕菌體生產(chǎn)量和產(chǎn)物生產(chǎn)量；3.產(chǎn)品可用于正常人體的鐵的補(bǔ)充，也可用于缺鐵病人補(bǔ)鐵。
權(quán)利要求
1.一種可用于人體補(bǔ)鐵的鐵蛋白，其特征在于它包括蛋白質(zhì)和鐵，其中含鐵2-5％，其余為蛋白質(zhì)。
2.一種可用于人體補(bǔ)鐵的鐵蛋白的制備方法，其特征包括以下幾個(gè)步驟①工程菌的高密度培養(yǎng)；②鐵蛋白的制備方法。
3.按權(quán)利要求2所述的鐵蛋白制備方法，其特征在于①所用的高密度培養(yǎng)基配方為硫酸銨5.0克/升，磷酸氫二鉀6.0克/升，磷酸二氫鉀3.0克/升，硫酸鎂1.5克/升，胰蛋白胨10-20克/升，酵母提取物2-10克/升，葡萄糖80-100克/升，微量元素(銅、鈷、鈣、鋅、鉬、錳)各10-5-10-4克分子/升。
4.一種含有權(quán)利要求1所述的可用于人體補(bǔ)鐵的鐵蛋白的制劑，其特征在于它含有鐵蛋白。
全文摘要
一種可用于人體補(bǔ)鐵的鐵蛋白及其制備方法和應(yīng)用方法包括:工程菌的高密度培養(yǎng);鐵蛋白的制備二大步驟,所述的高密度培養(yǎng)采用培養(yǎng)基為碳酸銨5.0克/升,磷酸氫二鉀6.0克/升,磷酸二氫鉀3.0克/升,硫酸鎂1.5克/升,胰蛋白胨10—20克/升,酵母提取物2—10克/升,葡萄糖80—100克/升,微量元素(銅、鈷、鈣、鋅、鉬、錳)各10
文檔編號(hào)C12P21/00GK1257931SQ98125609
公開(kāi)日2000年6月28日 申請(qǐng)日期1998年12月18日 優(yōu)先權(quán)日1998年12月18日
發(fā)明者吳光耀, 趙進(jìn)東, 劉迎芳, 王春霞 申請(qǐng)人:吳光耀