一種Pfizer腸球菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明為微生物領域，特別涉及一種Pfizer腸球菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括20.8g/L肉浸液肉湯、5.0g/L酵母浸粉鈉、8g/L牛膽汁物、1.0g/L檸檬酸鈉、0.5g/L檸檬酸鐵銨、0.27g/L疊氮化鈉、1.0g/L七葉苷、15.0g/L瓊脂，pH值為6.9-7.3。所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、蛋白胨12.0g、磷酸氫二鉀2.0g。本發(fā)明培養(yǎng)基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應用；菌生長迅速，變異率低；便于觀察，分析。
【專利說明】一種Pf izer腸球菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基及其應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明為微生物領域，特別涉及一種Pfizer腸球菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基及其應用。

【背景技術】
[0002] 微生物培養(yǎng)（microculture)是生物培養(yǎng)的中的一種。所培養(yǎng)的微生物主要有病 毒、細菌、放線菌、真菌等。微生物培養(yǎng)需要用到培養(yǎng)基，根據(jù)微生物的不同種類和生活習性 來配制特定的培養(yǎng)基。微生物培養(yǎng)成功的關鍵在于無菌操作，如果培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基不能 徹底滅菌、培養(yǎng)的過程中有雜菌污染是很容易失敗的。
[0003] 腸球菌（Enterococcus)屬腸球菌屬，是人類和動物腸道正常菌群的一部分，通常 在引起腹腔和盆腔感染所分離的混合菌絲中發(fā)現(xiàn)，既往認為腸球菌是對人類無害的共棲 菌，但近年研究已證實了腸球菌的致病力。在需氧革蘭陽性球菌中，它是僅次于葡萄球菌的 重要院內(nèi)感染致病菌，腸球菌亦可引起院外感染。腸球菌不僅可引起尿路感染、皮膚軟組織 感染，還可引起危及生命的腹腔感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎和腦膜炎等。
[0004] 溶血性鏈球菌，需氧或兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求較高，普通培養(yǎng)基上生長不良，需補 充血清、血液、腹水，大多數(shù)菌株需核黃素、維生素B6、煙酸等生長因子。最適生長溫度為 37°C，在20-42°C能生長，最適pH為7. 4-7. 6。在血清肉湯中易成長鏈，管底呈絮狀或顆粒 狀沉淀生長。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、邊緣整齊、直徑0. 5-0. 75mm的細 小菌落，不同菌株溶血不一。
[0005] 糞腸球菌，根據(jù)最新分類原則，糞鏈球菌又叫糞腸球菌。應用C多糖抗原，根據(jù)蘭 氏（Lancefield)血清學分類，可將鏈球菌分成許多群。糞鏈球菌屬于D群。D群鏈球菌分腸 球菌和非腸球菌兩類。前者包括糞鏈球菌（S. faecalis)、屎鏈球菌（S. faecium)和堅忍鏈 球菌（S. durans),后者有牛鏈球菌（S. bovis)和馬腸鏈球菌（S. equinus)。
[0006] 其營養(yǎng)要求低，在普通營養(yǎng)瓊脂上也可生長。能在KTC或45°C pH 9. 6或含6. 5% NaCl肉湯培養(yǎng)基中生長，并能耐65°C 30分鐘。它可利用精氨酸為能源，發(fā)酵山梨醇，不發(fā) 酵阿拉伯糖。在簡單的培養(yǎng)基上生長不需葉酸。DNA-DNA雜交結(jié)果顯示，腸球菌與鏈球菌屬 同源程度低，故有學者建議另立腸球菌屬，與人類有關者為糞腸球菌（E.faecalis)和屎腸 球菌（E. faecium) 〇
[0007] 培養(yǎng)基（Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料， 一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養(yǎng) 基還含有抗菌素和色素，用于單種微生物培養(yǎng)和鑒定。培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要 求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細菌污染或分解變 質(zhì)，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養(yǎng)基（如組織培 養(yǎng)基），較長時間的貯存，必須放在3?6°C的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管，現(xiàn)在 均改制成粉末。
[0008] 培養(yǎng)基根據(jù)化學分類為天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基和半組合培養(yǎng)基；根據(jù)物理分類 為液體培養(yǎng)基、固定培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基；根據(jù)微生物分類為選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明克服現(xiàn)有技術中的不足，提供一種Pfizer腸球菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基及其應 用。
[0010] 本發(fā)明運用生物化學，微生物學及無機、有機、分析化學和熒光技術的原理，對不 同的碳源、氮源、無機鹽類、維生素、生長促進劑等諸類營養(yǎng)組分的組合進行篩選，對培養(yǎng)基 的PH值、離子強度、氧化-還原電勢、表面張力、氣體環(huán)境等物化因子進行了比較，研究出了 本發(fā)明的培養(yǎng)基。
[0011] 本發(fā)明所采用的技術方案為：
[0012] 一種Pfizer腸球菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括20. 8g/L肉浸液肉 湯、5. Og/L酵母浸粉鈉、8g/L牛膽汁物、I. Og/L檸檬酸鈉、0. 5g/L檸檬酸鐵銨、0. 27g/L疊氮 化鈉、I. 〇g/L七葉苷、15. Og/L瓊脂，pH值為6. 9-7. 3。
[0013] 在以上方案的基礎上，所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3. 0g、 氯化鈉5. 0g、蛋白胨12. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
[0014] 本發(fā)明還公開了所述的Pfizer腸球菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基的應用，用于糞鏈球菌的 選擇性分離和計數(shù)。
[0015] 蛋白胨和酵母浸粉提供氮源、維生素和生長因子；氯化鈉維持均衡的滲透壓；細 菌水解七葉苷與檸檬酸鐵銨中鐵離子反應形成黑色的6, 7-二羥基香豆素；檸檬酸鈉、牛膽 汁物和疊氮化鈉為選擇性抑菌劑，抑制非鏈球菌的細菌；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
[0016] 稱取本品56. 8g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，加熱煮沸1分鐘，分裝于 16mmX 150mm試管，121°C高壓滅菌15分鐘制成斜面長4_5cm，底部長2_3cm。
[0017] 本發(fā)明的有益效果：
[0018] 1、培養(yǎng)基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應用；
[0019] 2、菌生長迅速，變異率低；
[0020] 3、便于觀察，分析。

【具體實施方式】
[0021] 實施例1 :
[0022] -種Pfizer腸球菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括20. 8g/L肉浸液肉 湯、5. 0g/L酵母浸粉鈉、8g/L牛膽汁物、I. 0g/L檸檬酸鈉、0. 5g/L檸檬酸鐵銨、0. 27g/L疊氮 化鈉、I. 〇g/L七葉苷、15. 0g/L瓊脂，pH值為6. 9-7. 3。
[0023] 所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3. 0g、氯化鈉5. 0g、蛋白胨 12. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
[0024] 稱取本品56. 8g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，加熱煮沸1分鐘，分裝于 16mmX 150mm試管，121°C高壓滅菌15分鐘制成斜面長4_5cm，底部長2_3cm。
[0025] 質(zhì)控菌株接種后，于35±0. 5°C培養(yǎng)24h，
[0026]

【權利要求】
1. 一種Pfizer腸球菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基的組分包括20. 8g/ L肉浸液肉湯、5. Og/L酵母浸粉鈉、8g/L牛膽汁物、1. Og/L檸檬酸鈉、0. 5g/L檸檬酸鐵銨、 0. 27g/L疊氮化鈉、1. Og/L七葉苷、15. Og/L瓊脂，pH值為6. 9-7. 3。
2. 根據(jù)權利要求1所述的Pfizer腸球菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于所述的肉浸液 肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3. 0g、氯化鈉5. 0g、蛋白胨12. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
3. -種根據(jù)權利要求1所述的Pfizer腸球菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基的應用，其特征在于用 于糞鏈球菌的選擇性分離和計數(shù)。
【文檔編號】C12R1/46GK104293717SQ201410529084
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年10月10日 優(yōu)先權日:2014年10月10日
【發(fā)明者】王明剛, 王雪梅 申請人:青島潤鑫偉業(yè)科貿(mào)有限公司