一種腸球菌瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用
【專利說明】
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域 本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種腸球菌瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用。
[0002]
【背景技術(shù)】 微生物培養(yǎng)(microculture)是生物培養(yǎng)的中的一種。所培養(yǎng)的微生物主要有病毒、細(xì) 菌、放線菌、真菌等。微生物培養(yǎng)需要用到培養(yǎng)基，根據(jù)微生物的不同種類和生活習(xí)性來配 制特定的培養(yǎng)基。微生物培養(yǎng)成功的關(guān)鍵在于無菌操作，如果培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基不能徹底 滅菌、培養(yǎng)的過程中有雜菌污染是很容易失敗的。
[0003] 腸球菌（Enterococcus)屬腸球菌屬，是人類和動(dòng)物腸道正常菌群的一部分，通常 在引起腹腔和盆腔感染所分離的混合菌絲中發(fā)現(xiàn)，既往認(rèn)為腸球菌是對(duì)人類無害的共棲 菌，但近年研究已證實(shí)了腸球菌的致病力。在需氧革蘭陽(yáng)性球菌中，它是僅次于葡萄球菌的 重要院內(nèi)感染致病菌，腸球菌亦可引起院外感染。腸球菌不僅可引起尿路感染、皮膚軟組織 感染，還可引起危及生命的腹腔感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎和腦膜炎等。
[0004] 溶血性鏈球菌，需氧或兼性厭氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求較高，普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不良，需補(bǔ) 充血清、血液、腹水，大多數(shù)菌株需核黃素、維生素B6、煙酸等生長(zhǎng)因子。最適生長(zhǎng)溫度為 37°C，在20-42°C能生長(zhǎng)，最適pH為7. 4-7. 6。在血清肉湯中易成長(zhǎng)鏈，管底呈絮狀或顆粒 狀沉淀生長(zhǎng)。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、邊緣整齊、直徑0. 5-0. 75mm的細(xì) 小菌落，不同菌株溶血不一。
[0005] 糞腸球菌，根據(jù)最新分類原則，糞鏈球菌又叫糞腸球菌。應(yīng)用C多糖抗原，根據(jù)蘭 氏（Lancefield)血清學(xué)分類，可將鏈球菌分成許多群。糞鏈球菌屬于D群。D群鏈球菌分 腸球菌和非腸球菌兩類。前者包括糞鏈球菌（S.faecalis)、屎鏈球菌（S.faecium)和堅(jiān)忍 鏈球菌（S.durans),后者有牛鏈球菌（S.bovis)和馬腸鏈球菌（S.equinus)。
[0006] 其營(yíng)養(yǎng)要求低，在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上也可生長(zhǎng)。能在10°C或45°CpH9. 6或含 6. 5%NaCl肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，并能耐65°C30分鐘。它可利用精氨酸為能源，發(fā)酵山梨醇， 不發(fā)酵阿拉伯糖。在簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不需葉酸。DNA-DNA雜交結(jié)果顯示，腸球菌與鏈球 菌屬同源程度低，故有學(xué)者建議另立腸球菌屬，與人類有關(guān)者為糞腸球菌（E.faecalis)和 屎腸球菌（E.faecium)。
[0007] 培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料， 一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養(yǎng) 基還含有抗菌素和色素，用于單種微生物培養(yǎng)和鑒定。培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要 求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變 質(zhì)，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對(duì)一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng) 基)，較長(zhǎng)時(shí)間的貯存，必須放在:T6°C的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長(zhǎng)期保管，現(xiàn)在均改 制成粉末。
[0008] 培養(yǎng)基根據(jù)化學(xué)分類為天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基和半組合培養(yǎng)基；根據(jù)物理分類 為液體培養(yǎng)基、固定培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基；根據(jù)微生物分類為選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種腸球菌瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用。
[0010] 本發(fā)明運(yùn)用生物化學(xué)，微生物學(xué)及無機(jī)、有機(jī)、分析化學(xué)和熒光技術(shù)的原理，對(duì)不 同的碳源、氮源、無機(jī)鹽類、維生素、生長(zhǎng)促進(jìn)劑等諸類營(yíng)養(yǎng)組分的組合進(jìn)行篩選，對(duì)培養(yǎng)基 的pH值、離子強(qiáng)度、氧化-還原電勢(shì)、表面張力、氣體環(huán)境等物化因子進(jìn)行了比較，研究出了 本發(fā)明的培養(yǎng)基。
[0011] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為： 一種腸球菌瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括肉浸液肉湯、4.Og/L酵母浸粉、12g/L牛膽汁物、0. 88g/L檸檬酸鈉、0. 45g/L檸檬酸鐵銨、2g/L磷酸二氫鉀0. 17g/L疊氮化鈉、 〇.98/1七葉苷、15.〇8/1瓊脂，口11值為6.9-7.3。
[0012] 在以上方案的基礎(chǔ)上，所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3. 0g、 氯化鈉5. 0g、胰酪蛋白胨12. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
[0013] 本發(fā)明還公開了一種腸球菌瓊脂培養(yǎng)基的應(yīng)用，用于食品和水中腸球菌的計(jì)數(shù)。
[0014] 胰酪蛋白胨和牛肉浸粉、酵母粉提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子；氯化鈉維持均衡的 滲透壓；細(xì)菌水解七葉苷與檸檬酸鐵銨中鐵離子反應(yīng)形成黑色的6, 7-二羥基香豆素；檸檬 酸鈉、牛膽粉和疊氮化鈉為選擇性抑菌劑，抑制非鏈球菌的細(xì)菌；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
[0015] 稱取本品56. 3g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，121°C高壓滅菌15分鐘，冷至 45土1°C，傾入含lml樣品液平皿中約15ml培養(yǎng)基，混勻，凝固。35±2°C倒置培養(yǎng)基培養(yǎng) 24±2h。
[0016] 注：從保溫開始至做成平板時(shí)間不要超過4h。 本發(fā)明的有益效果： 1、 培養(yǎng)基組方簡(jiǎn)單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用； 2、 菌生長(zhǎng)迅速，變異率低； 3、 便于觀察，分析。
[0017]
【具體實(shí)施方式】 實(shí)施例1 : 一種腸球菌瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括肉浸液肉湯、4. 0g/L酵母浸粉、12g/L牛膽汁物、0. 88g/L檸檬酸鈉、0. 45g/L檸檬酸鐵銨、2g/L磷酸二氫鉀0. 17g/L疊氮化鈉、 〇.98/1七葉苷、15.〇8/1瓊脂，口11值為6.9-7.3。
[0018] 所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3. 0g、氯化鈉5. 0g、胰酪蛋白 胨12. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
[0019] 稱取本品56. 3g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，121°C高壓滅菌15分鐘，冷至 45土1°C，傾入含lml樣品液平皿中約15ml培養(yǎng)基，混勻，凝固。35±2°C倒置培養(yǎng)基培養(yǎng) 24±2h。
[0020] 注：從保溫開始至做成平板時(shí)間不要超過4h。 在36±0. 5°C培養(yǎng)24小時(shí)
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種腸球菌瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基的組分包括肉浸液肉湯、4. Og/L酵 母浸粉、12g/L牛膽汁物、0. 88g/L檸檬酸鈉、0. 45g/L檸檬酸鐵銨、2g/L磷酸二氫鉀0. 17g/ 1疊氮化鈉、0.98/1七葉苷、15.〇8/1瓊脂，？!1值為6.9-7.3。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的種腸球菌瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于所述的肉浸液肉湯為每升 肉浸液肉湯中含有牛肉粉3. 0g、氯化鈉5. 0g、胰酪蛋白胨12. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
3. -種根據(jù)權(quán)利要求1所述的種腸球菌瓊脂培養(yǎng)基的應(yīng)用，其特征在于用于食品和水 中腸球菌的計(jì)數(shù)。
【專利摘要】本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種腸球菌瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括肉浸液肉湯、4.0g/L酵母浸粉、12g/L牛膽汁物、0.88g/L檸檬酸鈉、0.45g/L檸檬酸鐵銨、2g/L磷酸二氫鉀0.17g/L疊氮化鈉、0.9g/L七葉苷、15.0g/L瓊脂，pH值為6.9-7.3。所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、胰酪蛋白胨12.0g、磷酸氫二鉀2.0g。本發(fā)明培養(yǎng)基組方簡(jiǎn)單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用；菌生長(zhǎng)迅速，變異率低；便于觀察，分析。
【IPC分類】C12R1-01, C12Q1-06
【公開號(hào)】CN104651461
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201310599687
【發(fā)明人】劉漢斌
【申請(qǐng)人】劉漢斌
【公開日】2015年5月27日
【申請(qǐng)日】2013年11月25日