一種樟芝菌絲體中腺苷的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種樟芝菌絲體中腺苷的提取方法。所述的提取方法包括以下步驟：先對樟芝菌絲體進行預處理得到預處理后的樟芝菌絲體；再將預處理后的樟芝菌絲體加至蒸餾瓶中恒溫水浴加熱，離心過濾，制得待測樣品溶液；最后在待測樣品溶液中加入甲醇溶液，加熱回液提取，靜置后采用微孔濾膜過濾，取濾液進行HPLC檢測。本發(fā)明中，采用一定濃度的甲醇溶液進行腺苷提取，且溫度限定為42-45℃，可以保證腺苷被充分有效的提取，整個過程中，操作條件溫和，避免了腺苷在提取過程中被破壞，操作過程僅使用一般的溶劑，有效避免了現(xiàn)有技術存在的污染問題。
【專利說明】一種樟芝菌絲體中腺苷的提取方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種真菌有效成份的提取，具體涉及一種樟芝菌絲體中腺苷的提取方法。

【背景技術】
[0002]樟芝Antrodia camphorata又稱牛樟芝或牛樟燕，是臺灣特有珍貴真菌。研究發(fā)現(xiàn)樟芝成分復雜，含有很多生理活性物質具有多種生理活性，如抗氧化、保肝、抗癌、解毒、消炎等，對食物中毒等危急病癥具有神奇的療效。其中最主要的活性成分是多糖和三萜類化合物。其中三萜類化合物是樟芝子實體中含有的成分，可抑制癌細胞生成，用于癌癥的輔助治療。多糖也具有抗腫瘤活性，還具有抗菌、抗病毒、保肝、降血糖、平喘、提高動物對缺氧的耐受性及降低血粘度等作用。腺苷(Adenosine)是一種嘌呤核苷，由糖苷鍵連接腺嘌呤和核糖而成它是機體代謝的中間產物，具有擴張血管降低竇房結的自律性減慢房室傳導和抑制腎素分泌等作用，從而引起心率減慢和血壓降低。核苷是組成DNA、RNA必不可少的重要物質，也是合成三磷酸腺苷(ATP)的主要原料，其具有廣泛生理活性，能抑制血小板的過度聚集.降低血液的粘度，從而改善人體血液循環(huán)，對年老血稠或有瘀血傾向者具有良好的抗血凝的效果.能防止血栓病如腦血栓、心肌梗塞等的發(fā)生。目前ATP已廣泛用于心功能不全及血管動脈硬化等疾病的治療。相關文獻采用HPLC測定樟芝中腺苷含量，但由于測定過程中未能對樣品中腺苷進行充分提取及分離，導致檢測結果也缺乏準確性。為此，本發(fā)明提供一種可對樟芝菌絲體中腺苷進行有效提取與分離的方法，以保證腺苷測定的準確性。


【發(fā)明內容】

[0003]針對上述現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供一種對樟芝菌絲體中腺苷進行有效提取與分離的方法。
[0004]本發(fā)明的技術方案如下:
一種樟芝菌絲體中腺苷的提取方法，所述的提取方法包括以下步驟:
(1)菌絲體預處理:將樟芝菌絲體干燥至恒重，粉碎過篩得到預處理后的樟芝菌絲體；
(2)稱取步驟(I)中制得的預處理后的樟芝菌絲體0.5-3g加至蒸餾瓶中，加蒸餾水20-30ml水浴加熱，離心，微孔濾膜過濾，將離心管與沉淀加水洗滌2次，將濾液與洗滌后的濾液合并作為待測樣品溶液，轉入另一支蒸餾瓶中備用；
(3)在步驟(2)中裝有待測樣品溶液的蒸餾瓶中加入溶劑，加熱回液提取，靜置后采用微孔濾膜過濾，取濾液進行HPLC檢測。
[0005]步驟(I)中所述的干燥為真空干燥，干燥溫度為60_75°C。
[0006]步驟(I)中所述的過篩為過60-80目篩。
[0007]步驟(2)中所述的水浴加熱為恒溫水浴，溫度為50_60°C，水浴加熱時間為20_40mino
[0008]步驟(2)中所述的離心時離心速度為4000-6000r/min,離心時間為20_30min。
[0009]步驟(3)中所述的溶劑為體積濃度為80%_95%的甲醇水溶液步驟(3)中所述的溶劑的加入量20-30ml。
[0010]步驟(3)中所述的加熱回流提取的時間為45-60min，提取溫度為42_45°C。
[0011]步驟(3)中所述的靜置時間為20_30min。
[0012]步驟(3)中所述的過濾次數為2-5次。
[0013]本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，有益效果體現(xiàn)在以下幾點:
1.研究顯示，蛹蟲草菌絲體中腺苷提取的最佳溫度為44°C，實際提取率與理論提取率的誤差僅為1.31%，因此，本發(fā)明中，在對樟芝中腺苷進行提取時，提取溫度限定為42-45°C，而且本發(fā)明中，將預處理后的樟芝菌絲體在水浴恒溫加熱、離心后，將離心管與沉淀加水洗滌2次，均可以保證腺苷被充分有效的提取。
[0014]2.本發(fā)明操作簡單，整個過程中，操作條件溫和，避免了腺苷在提取過程中被破壞。
[0015]3.現(xiàn)有技術中，在對真菌進行腺苷提取時，操作中加入了乙醚與石油醚，對環(huán)境及操作人員均造成了不利的影響，而本發(fā)明中先后對樟芝菌絲體進行預處理、恒溫水浴加熱、離心、甲醇水溶液回流加熱提取，也保證了樟芝菌絲體中腺苷的充分提取，而且可有效避免了現(xiàn)有技術存在的污染問題。

【具體實施方式】
[0016]下面結合實施例對本發(fā)明做進一步說明。
[0017]實施例1
一種樟芝菌絲體中腺苷的提取方法，所述的提取方法包括以下步驟:
(1)菌絲體預處理:將樟芝菌絲體在60°C下真空干燥至恒重，粉碎過60目篩得到預處理后的樟芝菌絲體；
(2)稱取步驟(I)中制得的預處理后的樟芝菌絲體0.5g加至蒸餾瓶中，加蒸餾水20ml，在5(TC水浴中恒溫加熱20min,以4000r/min離心20min,微孔濾膜過濾,將離心管與沉淀加水洗滌2次，將濾液與洗滌后的濾液合并作為待測樣品溶液，轉入另一支蒸餾瓶中備用；
(3)在步驟(2)中裝有待測樣品溶液的蒸餾瓶中加入20ml體積濃度為80%的甲醇水溶液，在42°C條件下加熱回液提取45min，靜置20min后采用微孔濾膜過濾2次，取濾液進行HPLC檢測。
[0018]實施例2
一種樟芝菌絲體中腺苷的提取方法，所述的提取方法包括以下步驟:
(1)菌絲體預處理:將樟芝菌絲體在75°C下真空干燥至恒重，粉碎過80目篩得到預處理后的樟芝菌絲體；
(2)稱取步驟(I)中制得的預處理后的樟芝菌絲體3g加至蒸餾瓶中，加蒸餾水30ml，在60°C水浴中恒溫加熱40min,以6000r/min離心30min,微孔濾膜過濾,將離心管與沉淀加水洗滌2次，將濾液與洗滌后的濾液合并作為待測樣品溶液，轉入另一支蒸餾瓶中備用；
(3)在步驟(2)中裝有待測樣品溶液的蒸餾瓶中加入20-30ml體積濃度為95%的甲醇水溶液，在45 °C條件下加熱回液提取60min，靜置20_30min后采用微孔濾膜過濾5次，取濾液進行HPLC檢測。
[0019]實施例3
一種樟芝菌絲體中腺苷的提取方法，所述的提取方法包括以下步驟:
(1)菌絲體預處理:將樟芝菌絲體在70°C下真空干燥至恒重，粉碎過80目篩得到預處理后的樟芝菌絲體；
(2)稱取步驟(I)中制得的預處理后的樟芝菌絲體0.5-3g加至蒸餾瓶中，加蒸餾水25ml,在55°C水浴中恒溫加熱30min,以5000r/min離心25min,微孔濾膜過濾,將離心管與沉淀加水洗滌2次，將濾液與洗滌后的濾液合并作為待測樣品溶液，轉入另一支蒸餾瓶中備用;
(3)在步驟(2)中裝有待測樣品溶液的蒸餾瓶中加入20-30ml體積濃度為90%的甲醇水溶液，在44°C條件下加熱回液提取50min，靜置25min后采用微孔濾膜過濾3次，取濾液進行HPLC檢測。
[0020]上述實施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，并不應理解為對本發(fā)明的限定，本領域技術人員根據本發(fā)明的揭示，不脫離本發(fā)明范疇所做出的改進和修改都應該在本發(fā)明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種樟芝菌絲體中腺苷的提取方法，其特征在于，所述的提取方法包括以下步驟: (1)菌絲體預處理:將樟芝菌絲體干燥至恒重，粉碎過篩得到預處理后的樟芝菌絲體； (2)稱取步驟(I)中制得的預處理后的樟芝菌絲體0.5-3g加至蒸餾瓶中，加蒸餾水20-30ml水浴加熱，離心，微孔濾膜過濾，將離心管與沉淀加水洗滌2次，將濾液與洗滌后的濾液合并作為待測樣品溶液，轉入另一支蒸餾瓶中備用； (3)在步驟(2)中裝有待測樣品溶液的蒸餾瓶中加入溶劑，加熱回液提取，靜置后采用微孔濾膜過濾，取濾液進行HPLC檢測。
2.根據權利要求1所述的樟芝菌絲體中腺苷的提取方法，步驟(I)中所述的干燥為真空干燥，干燥溫度為60-75°C。
3.根據權利要求1所述的樟芝菌絲體中腺苷的提取方法，步驟(I)中所述的過篩為過60-80目篩。
4.根據權利要求1所述的樟芝菌絲體中腺苷的提取方法，步驟(2)中所述的水浴加熱為恒溫水浴，溫度為50-60°C，水浴加熱時間為20-40min。
5.根據權利要求1所述的樟芝菌絲體中腺苷的提取方法，步驟(2)中所述的離心時離心速度為4000-6000r/min，離心時間為20_30min。
6.根據權利要求1所述的樟芝菌絲體中腺苷的提取方法，步驟(3)中所述的溶劑為體積濃度為80%-95%的甲醇水溶液。
7.根據權利要求1所述的樟芝菌絲體中腺苷的提取方法，步驟(3)中所述的溶劑的加入量 20_30ml。
8.根據權利要求1所述的樟芝菌絲體中腺苷的提取方法，步驟(3)中所述的加熱回流提取的時間為45-60min，提取溫度為42_45°C。
9.根據權利要求1所述的樟芝菌絲體中腺苷的提取方法，步驟(3)中所述的靜置時間為 20_30min。
10.根據權利要求1所述的樟芝菌絲體中腺苷的提取方法，步驟(3)中所述的過濾次數為2-5次。
【文檔編號】A23L1/28GK104223044SQ201410471599
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年9月17日 優(yōu)先權日:2014年9月17日
【發(fā)明者】劉巴寧, 鄭安喬 申請人:中山安蕎生物科技有限公司