一種樟芝原種的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種樟芝原種的制作方法，其特征在于，包括以下步驟：將樟芝接種到活化斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，然后再接種到原種培養(yǎng)基上進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，得到樟芝原種；所述的活化斜面培養(yǎng)基是用樟樹〔Cinnamomum?camphora(L.)Presl.〕木屑代替常規(guī)含有牛樟樹（Cinnamomum?kanehirai）木屑的活化斜面培養(yǎng)基中的牛樟樹木屑，所述的原種培養(yǎng)基是用樟樹木屑代替常規(guī)含有牛樟樹木屑的原種培養(yǎng)基中的牛樟樹木屑。本發(fā)明采用普通樟樹〔Cinnamomum?camphora(L.)Presl.〕代替牛樟樹，制作樟芝原種培養(yǎng)基，為樟芝的人工栽培探索新基質(zhì)，以代替珍稀的牛樟樹木材，對樟芝的人工栽培和牛樟樹資源的保護(hù)具有重大意義。
【專利說明】一種樟芝原種的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本發(fā)明屬于珍稀藥用菌馴化栽培【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種樟芝原種的制作方法?！颈尘凹夹g(shù)】:
[0002]樟芝又稱牛樟芝或牛樟屬擔(dān)子菌門(Basidomycota),擔(dān)子菌亞門(Basidiomycotina),層菌綱(Hymenomycetes)，非裙菌目(Aphyllophorales),多孔菌科(Polyporaceae),薄孔菌屬(Antrodia),學(xué)名為[Antrodia camphorata (M.Zang&C.H.Su) Sheng H.ffu, Ryvarden&T.T.Chang]，其常見的另一拉丁名為[Antrodia cinnamomeaΤ.T.Chang&ff.N.Chou]， 實(shí)為同物異名。最初，由大陸學(xué)者臧穆和臺灣學(xué)者蘇慶華于1990年共同報道，為靈芝屬新種樟芝(Ganoderma comphoratum),乃因模式標(biāo)本沾染了靈芝孢子而被誤發(fā)表為靈芝屬(Ganoderma)的成員。后經(jīng)臺灣學(xué)者吳聲華和張東柱等重新組合為現(xiàn)在的薄孔菌屬牛樟芝。
[0003]樟芝是臺灣特有真菌，僅生長于臺灣特有的牛樟樹(Cinnamomum kanehirai)上。牛樟樹(Cinnamomum kanehirai Hay)是臺灣島特有的保育類樹種，屬常綠闊葉大喬木，與一般常見的樟樹不同，葉長約15cm、寬約9cm，每年的六月至十月為生長期，生長于海拔200~2000m的山區(qū)。到目前為止，樟芝是牛樟樹上發(fā)現(xiàn)的唯一木腐菌，其寄生性不強(qiáng)，牛樟樹很少因此而死亡，可存活數(shù)百年。
[0004]由于樟芝在臺灣被視為獨(dú)特而珍貴的藥用真菌，因此具有極高的研究和商業(yè)價值，也是目前臺灣最昂貴的野生真菌，在港澳臺被稱為“神芝”，臺灣民間稱之為“森林中的紅寶石”。而野生樟芝十分罕見，樟芝子實(shí)體的人工栽培則需要采伐牛樟樹作為培養(yǎng)基質(zhì)，故為了保護(hù)牛樟樹資源，需對現(xiàn)有的樟芝人工栽培技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)探索。
[0005]關(guān)于樟芝的研究，近十幾年在臺灣先后有數(shù)十位學(xué)者進(jìn)行了各個方面的研究，包括形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)、液體發(fā)酵、成分分析和藥理作用等，但是樟芝的馴化栽培由于受栽培料的局限，迄今是個難點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】
:
[0006]本發(fā)明的目的是提供一種樟芝原種的制作方法，該制作方法是利用普通樟樹〔Cinnamom um camphora(L.)Presl.〕代替珍稀的牛樟樹木材，實(shí)現(xiàn)了牛樟芝的人工栽培。
[0007]本發(fā)明的樟芝原種的制作方法，其特征在于，包括以下步驟:將樟芝接種到活化斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，然后再接種到原種培養(yǎng)基上進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，得到樟芝原種；
[0008]所述的活化斜面培養(yǎng)基是用樟樹〔Cinnamomum camphora(L.)Presl.〕木屑代替常規(guī)含有牛樟樹(Cinnamomum kanehirai)木屑的活化斜面培養(yǎng)基中的牛樟樹木屑，所述的原種培養(yǎng)基是用樟樹木屑代替常規(guī)含有牛樟樹木屑的原種培養(yǎng)基中的牛樟樹木屑。
[0009]優(yōu)選，所述的活化斜面培養(yǎng)基每升是這么配制的:將200g馬鈴薯和100g樟樹木屑煮水，過濾取濾液，然后在濾液中加入20g葡萄糖和20g瓊脂，用水定容至1L。滅菌備用。
[0010]優(yōu)選，所述的原種培養(yǎng)基,按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，由44~78%樟樹木屑、O~44%棉籽殼、10~20%麩皮、1%蔗糖和1%石膏組成。滅菌備用。
[0011]本發(fā)明的另外一個目的是提供樟樹木屑代替牛樟樹木屑在培養(yǎng)樟芝中的應(yīng)用。
[0012]本發(fā)明采用普通樟樹〔Cinnamomum camphora(L.)Presl.〕代替牛樟樹，制作樟芝原種培養(yǎng)基，為樟芝的人工栽培探索新基質(zhì)，以代替珍稀的牛樟樹木材，對樟芝的人工栽培和牛樟樹資源的保護(hù)具有重大意義。
【專利附圖】

【附圖說明】:
[0013]圖1是樟芝在兩種不同斜面培養(yǎng)基上的生長速度比較；
[0014]圖2是樟芝在兩種不同基料原種培養(yǎng)基中的生長速度比較；
[0015]圖3是樟芝在兩 種不同基料原種培養(yǎng)基中的生長速度比較。
【具體實(shí)施方式】:
[0016]以下實(shí)施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步說明，而不是對本發(fā)明的限制。
[0017]實(shí)施例1:
[0018]實(shí)驗(yàn)菌種:樟芝
[0019]實(shí)驗(yàn)步驟:
[0020]1、活化斜面培養(yǎng)基的制備:
[0021]每升培養(yǎng)基的原料:馬鈴薯(去皮)200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，100g樟樹木屑。將馬鈴薯和樟樹木屑煮水(20~30min)，紗布過濾，得濾液，在濾液中加入葡萄糖和瓊月旨，然后用水補(bǔ)足至1L, 121°C滅菌30min,然后倒入試管中，配制成18mmX 180mm的試管斜
面培養(yǎng)基。
[0022]2、樟芝母種的轉(zhuǎn)管活化:在無菌條件下接種，從樟芝原始菌種中切一塊約5mmX5mm、厚約2mm的菌種塊，轉(zhuǎn)入步驟I制得的活化斜面培養(yǎng)基中；以常規(guī)的PDA培養(yǎng)基作為對照。兩種培養(yǎng)基分別做5個重復(fù)。
[0023]3、養(yǎng)菌記錄:置于28土1°C避光培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)8d，待菌絲體前端形成平整一致的菌絲邊緣線時，即可記錄劃線作為菌絲生長速度起始線。而后每隔24h記錄一次菌絲邊緣線，連續(xù)記錄8d的數(shù)值作為統(tǒng)計數(shù)據(jù)。
[0024]4、原種培養(yǎng)基的制備:
[0025](I)樟樹木屑原種培養(yǎng)基:按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，由78%樟樹木屑，20%麩皮，1%蔗糖和1%石膏組成。按上述比例，將樟樹木屑、麩皮、蔗糖和石膏混合后，加水濕潤并拌勻，含水量55-60%,發(fā)酵一天后使用。
[0026](2)雜木屑原種培養(yǎng)基:按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，由78%普通雜木屑，20%麩皮，1%蔗糖和1%石膏組成。按上述比例，將普通雜木屑、麩皮、蔗糖和石膏混合后，加水濕潤并拌勻，含水量55-60%,發(fā)酵一天后使用。
[0027]5、原料分裝滅菌:將樟樹木屑原種培養(yǎng)基和雜木屑原種培養(yǎng)基分別分裝入30mmX250mm的玻璃試管和13cmX27cm的聚丙烯菌袋，裝好后121°C滅菌lh，料溫降至25°C以下備用。
[0028]6、接種:將經(jīng)過步驟2活化斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)的樟芝菌種轉(zhuǎn)接至經(jīng)過步驟5處理的玻璃試管和聚丙烯菌袋中的樟樹木屑和雜木屑原種培養(yǎng)基中，每支18mmX 180mm試管斜面可接30mmX250mm的試管原種6_8支或13cmX27cm的聚丙烯菌袋原種3_5包。以雜木屑原種培養(yǎng)基作對照，兩種原種培養(yǎng)基分別做3個重復(fù)。
[0029]7、養(yǎng)菌:于25± 1°C避光培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)IOd,待菌絲體前端形成平整一致的菌絲邊緣線時，即可記錄劃線作為菌絲生長速度起始線。而后每隔24h記錄一次菌絲邊緣線，連續(xù)記錄8d的數(shù)值作為統(tǒng)計數(shù)據(jù)。
[0030]8、計算樟芝在不同培養(yǎng)基上的平均生長速度，比較得出結(jié)論，并拍照記錄結(jié)果。
[0031]9、實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
[0032]試驗(yàn)結(jié)果如圖1和圖2所示，從圖1可以看出，樟芝在樟樹木屑的活化斜面培養(yǎng)基上的長速遠(yuǎn)遠(yuǎn)快于普通PDA斜面， 菌絲長速達(dá)2.58775mm/d，且菌絲均勻濃密；而在普通PDA斜面上，樟芝菌絲稀疏，色淡，不均勻，且長速慢，僅為0.504mm/d，部分試管到后期甚至停滯不長。
[0033]從圖2可以看出，不論在試管中還是在菌袋中，樟芝在樟樹木屑原種培養(yǎng)基上的長速快于雜木屑原種培養(yǎng)基，在試管中菌絲長速為2.1875mm/d，在菌袋中菌絲長速達(dá)
2.20625mm/d，且菌絲粗壯均勻濃密；而在雜木屑原種培養(yǎng)基上，樟芝菌絲稀疏，色淡，不均勻，且長速緩慢，在試管中菌絲長速僅為0.255mm/d，在菌袋中菌絲長速為0.3025mm/d，有些到后期甚至停滯不長。
[0034]實(shí)施例2:
[0035]實(shí)驗(yàn)菌種:樟芝
[0036]實(shí)驗(yàn)步驟:
[0037]1、活化斜面培養(yǎng)基的制備:
[0038]每升培養(yǎng)基的原料:馬鈴薯(去皮)200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，100g樟樹木屑。將馬鈴薯和樟樹木屑煮水(20~30min)，紗布過濾，得濾液，在濾液中加入葡萄糖和瓊月旨，然后用水補(bǔ)足至1L, 121°C滅菌30min,然后倒入試管中，配制成18mmX 180mm的試管斜
面培養(yǎng)基。
[0039]2、樟芝母種的轉(zhuǎn)管活化:在無菌條件下接種，從樟芝原始菌種中切一塊約5mmX5mm、厚約2mm的菌種塊，轉(zhuǎn)入步驟I制得的活化斜面培養(yǎng)基中；以常規(guī)的PDA培養(yǎng)基作為對照。兩種培養(yǎng)基分別做5個重復(fù)。
[0040]3、養(yǎng)菌記錄:置于28土1°C避光培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)8d，待菌絲體前端形成平整一致的菌絲邊緣線時，即可記錄劃線作為菌絲生長速度起始線。而后每隔24h記錄一次菌絲邊緣線，連續(xù)記錄8d的數(shù)值作為統(tǒng)計數(shù)據(jù)。
[0041]4、原種培養(yǎng)基的制備:
[0042](I)樟樹木屑原種培養(yǎng)基:按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，由44%樟樹木屑，44%棉籽殼，10%麩皮，1%蔗糖和1%石膏組成。按上述比例，將樟樹木屑、棉籽殼、麩皮、蔗糖和石膏混合后,加水濕潤并拌勻,含水量55-60%，發(fā)酵一天后使用。
[0043](2)雜木屑原種培養(yǎng)基:按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，由44%普通雜木屑，44%棉籽殼，10%麩皮，1%蔗糖和1%石膏組成。按上述比例，將樟樹木屑、棉籽殼、麩皮、蔗糖和石膏混合后,加水濕潤并拌勻,含水量55-60%，發(fā)酵一天后使用。
[0044]5、原料分裝滅菌:將樟樹木屑原種培養(yǎng)基和雜木屑原種培養(yǎng)基分別分裝入30mmX250mm的玻璃試管和13cmX27cm的聚丙烯菌袋，裝好后121°C滅菌lh，料溫降至25°C以下備用。
[0045]6、接種:將經(jīng)過步驟2活化斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)的樟芝菌種轉(zhuǎn)接至經(jīng)過步驟5處理的玻璃試管和聚丙烯菌袋中的樟樹木屑和雜木屑原種培養(yǎng)基中，每支18mmX 180mm試管斜面可接30mmX250mm的試管原種6-8支或13cmX27cm的菌袋原種3-5包。以雜木屑原種培養(yǎng)基作對照，兩種原種培養(yǎng)基分別做3個重復(fù)。
[0046]7、養(yǎng)菌:于25± 1°C避光培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)IOd,待菌絲體前端形成平整一致的菌絲邊緣線時，即可記錄劃線作為菌絲生長速度起始線。而后每隔24h記錄一次菌絲邊緣線，連續(xù)記錄8d的數(shù)值作為統(tǒng)計數(shù)據(jù)。
[0047]8、計算樟芝在不同培養(yǎng)基上的平均生長速度，比較得出結(jié)論，并拍照記錄結(jié)果。
[0048]9、實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
[0049]試驗(yàn)結(jié)果如圖3所不,樟芝在樟樹木屑原種培養(yǎng)基上的長速快于雜木屑原種培養(yǎng)基，達(dá)到2.4375mm/d，且菌絲粗壯均勻濃密；而在雜木屑原種培養(yǎng)基上，樟芝菌絲稀疏，色淡，不均勻，且長速僅為 0.4275mm/d，多數(shù)到后期菌絲就停滯不長了。
【權(quán)利要求】
1.一種樟芝原種的制作方法，其特征在于，包括以下步驟:將樟芝接種到活化斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，然后再接種到原種培養(yǎng)基上進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，得到樟芝原種； 所述的活化斜面培養(yǎng)基是用樟樹〔Cinnamomum camphora(L.) Presl.〕木屑代替常規(guī)含有牛樟樹(Cinnamomum kanehirai )木屑的活化斜面培養(yǎng)基中的牛樟樹木屑，所述的原種培養(yǎng)基是用樟樹木屑代替常規(guī)含有牛樟樹木屑的原種培養(yǎng)基中的牛樟樹木屑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述的活化斜面培養(yǎng)基每升是這么配制的:將200g馬鈴薯和100g樟樹木屑煮水，過濾取濾液，然后在濾液中加入20g葡萄糖和20g瓊脂,用水定容至1L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述的原種培養(yǎng)基，按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，由44~78%樟樹木屑、O~44%棉籽殼、10~20%麩皮、1%蔗糖和1%石膏組成。
4.樟樹 木屑代替牛樟樹木屑在培養(yǎng)樟芝中的應(yīng)用。
【文檔編號】A01G1/04GK103733881SQ201310719336
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年12月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月23日
【發(fā)明者】黃龍花, 邵滿超, 胡惠萍, 劉遠(yuǎn)超, 曹仁潤, 楊小兵 申請人:廣東省微生物研究所, 廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司