海馬齒水通道蛋白SpAQP1及其編碼基因在提高植物耐鹽中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了海馬齒水通道蛋白SpAQP1及其編碼基因在提高植物耐鹽中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了發(fā)明所提供的與植物耐逆性相關(guān)的蛋白，是如下（a）或（b）的蛋白質(zhì)：（a）由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；（b）將序列表中序列2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物耐逆性相關(guān)的由（a）衍生的蛋白質(zhì)。本發(fā)明從濱海耐鹽植物海馬齒中首次分離了水通道蛋白基因SpAQP1并對(duì)其耐鹽功能進(jìn)行了鑒定；本發(fā)明證實(shí)高鹽脅迫下海馬齒中SpAQP1的表達(dá)受到顯著誘導(dǎo)，說明其功能與耐鹽相關(guān)；本發(fā)明進(jìn)一步將海馬齒耐鹽基因SpAQP1導(dǎo)入煙草，轉(zhuǎn)基因植物的耐鹽能力得到明顯提高，說明SpAQP1蛋白可用于提高作物的耐鹽性。
【專利說明】海馬齒水通道蛋白SpAQPI及其編碼基因在提高植物耐鹽中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及海馬齒水通道蛋白SpAQPl及其編碼基因在提高植物耐鹽中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]土壤鹽堿化是影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)環(huán)境的重大問題。全國(guó)第二次土地普查資料顯示，我國(guó)鹽堿地面積為5.27億畝，其中具有農(nóng)業(yè)利用潛力的面積約為2億畝。通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育耐鹽作物新品種是開發(fā)利用鹽堿地的一條有效途徑。
[0003]海馬齒(Sesuvium portulacastrum)又名濱水菜,屬于雙子葉植物綱石竹亞綱番杏科，為多年生肉質(zhì)草本植物，多生長(zhǎng)在熱帶、亞熱帶海邊沙地，對(duì)濱海高鹽環(huán)境具有極高的耐受性，能夠在海水的沖擊和浸泡下健康生長(zhǎng)并完成其生活史，是一種典型的鹽土植物。因此以海馬齒為材料，從中挖掘耐鹽基因資源用于作物抗逆新品種的培育，對(duì)提高作物耐鹽性、開發(fā)利用鹽堿土壤具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
[0004]水分子的跨膜運(yùn)動(dòng)并不是通過自由擴(kuò)散的方式進(jìn)行的，而是需要一種膜蛋白的協(xié)助來完成，這種蛋白稱為水通道蛋白(aquaporin，AQP)。AQP在動(dòng)物、植物和微生物細(xì)胞中大量存在，在 調(diào)節(jié)水分運(yùn)輸、保持細(xì)胞內(nèi)外水分平衡中發(fā)揮重要作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的一個(gè)目的是提供海馬齒水通道蛋白SpAQPl及其編碼基因。
[0006]本發(fā)明提供的蛋白，是如下(a)或(b)的蛋白質(zhì):
[0007](a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0008](b)將序列表中序列2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物耐逆性相關(guān)的由(a)衍生的蛋白質(zhì)。
[0009]上述一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加為不超過10個(gè)取代和/或缺失和/或添加。
[0010]編碼上述蛋白的DNA分子也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0011]上述DNA分子為如下I) -4)中任一所述的DNA分子:
[0012]I)編碼區(qū)為序列表中序列I所示的DNA分子；
[0013]2)編碼區(qū)為自5’末端第1-852位核苷酸所示的DNA分子；
[0014]3)在嚴(yán)格條件下與I)或2)所示的DNA分子雜交且編碼與植物耐逆性相關(guān)蛋白的DNA分子；
[0015]4)與I)或2)的DNA分子至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且編碼與植物耐逆性相關(guān)蛋白的DNA分子。
[0016]上述嚴(yán)格條件可為在6XSSC，0.5%SDS的溶液中，在65oC下雜交，然后用
2X SSC, 0.1%SDS 和 I X SSC, 0.1%SDS 各洗膜一次。[0017]含有上述DNA分子的表達(dá)盒、重組載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。
[0018]上述重組載體為將序列表中序列I自5’末端第1-852位核苷酸插入載體PCAMBIA1304的Nco I和Spe I酶切位點(diǎn)間得到的載體。
[0019]擴(kuò)增上述DNA分子的全長(zhǎng)或其任一片段的引物對(duì)。
[0020]在本發(fā)明的實(shí)施例中，引物對(duì)如下:
[0021]F-1304-AQP:5/ -GACCATGGCGAAGGATTTTGAAACAGGAGGAG-3;(劃線部分為 Nco I酶切位點(diǎn))和
[0022]R-1304-AQP:5/ -CGACTAGTCACGTTGGAGGAGCTCCTAAAG-3'(劃線部分為 Spe I 酶切位點(diǎn))。
[0023]上述的蛋白、上述DNA分子或上述的表達(dá)盒、重組載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌在調(diào)控植物耐逆性中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0024]上述應(yīng)用中,所述調(diào)控植物耐逆性為提高植物耐逆性。所述耐逆性為耐鹽性；所述植物為單子葉植物或雙子葉植物；所述雙子葉植物具體為煙草(Nicotiana tabacum)。
[0025]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法。
[0026]本發(fā)明提供的方法，是將編碼上述蛋白的DNA分子導(dǎo)入目的植物中，得到轉(zhuǎn)基因植物；所述轉(zhuǎn)基因植物的耐逆性高于所述目的植物。
[0027]上述方法中，編碼上述蛋白的DNA分子是通過上述的重組載體導(dǎo)入目的植物中；
[0028]所述耐逆性為耐鹽性。
[0029]上述方法中，所述植物為單子葉植物或雙子葉植物；所述雙子葉植物具體為煙草。
[0030]本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明從優(yōu)秀耐鹽植物資源海馬齒中分離了水通道蛋白基因SpAQPl, SpAQPl在受到鹽脅迫時(shí)表達(dá)顯著增加，在植物中過表達(dá)時(shí)能明顯提高植物的耐鹽能力。SpAQPl可用于耐鹽作物新品種的培育，在鹽堿地開發(fā)利用中具有廣闊應(yīng)用潛力和價(jià)值。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0031]圖1為NaCl處理不同時(shí)間SpAQPl的相對(duì)表達(dá)量
[0032]圖2為轉(zhuǎn)SpAQPl煙草的PCR鑒定結(jié)果
[0033]圖3為轉(zhuǎn)基因煙草SpAQPl的相對(duì)表達(dá)量分析
[0034]圖4為轉(zhuǎn)SpAQPl煙草的耐鹽試驗(yàn)
【具體實(shí)施方式】
[0035]下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0036]下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0037]實(shí)施例1、海馬齒SpAQPl蛋白及其編碼基因的獲得
[0038]1、海水誘導(dǎo)海馬齒根系差異表達(dá)基因cDNA文庫(kù)的構(gòu)建
[0039]I)海馬齒水培生根和RNA提取
[0040]從海馬齒(Sesuviumportulacastrum L.參考文獻(xiàn):Zeng, H.C.，Deng, L.H.,&Zhang, C.F.(2006).Cloning of Salt Tolerance - Related cDNAs from theMangrove Plant Sesuvium portulacastrum L.Journal of Integrative PlantBiology, 48 (8),952-957.;公眾可從中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所獲得)母株上剪取長(zhǎng)度5cm左右?guī)в袃蓚€(gè)節(jié)點(diǎn)的莖段，去除下部節(jié)點(diǎn)上的葉片，插入淡水中進(jìn)行水培生根。3-4周后將已生根的海馬齒植株轉(zhuǎn)入海水，分別處理2、4、6、8、12、24和48h，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取3株作為樣品，以未經(jīng)海水處理的海馬齒作為對(duì)照。將各海水處理的樣品混合在一起，采用CTAB法提取根的總RNA，同時(shí)提取對(duì)照樣品根總RNA。
[0041]2)利用抑制差減技術(shù)(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)構(gòu)建差異表達(dá)基因的cDNA文庫(kù)
[0042]使用試劑盒Super SMART? PCR cDNA Synthesis Kit (Clontech 公司)將步驟 I)得到的RNA反轉(zhuǎn)錄合成雙鏈cDNA,以對(duì)照樣品cDNA作為driver海水處理樣品作為tester,利用PCR-Select cDNA Substraction Kit (Clontech公司)構(gòu)建海水處理差異表達(dá)基因cDNA文庫(kù)。
[0043]2、SpAQP I基因的獲得
[0044]對(duì)文庫(kù)中的部分克隆進(jìn)行測(cè)序，得到差異表達(dá)基因的EST序列，通過軟件BLASTx在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行同源性搜素，確定其中一個(gè)EST序列為細(xì)胞質(zhì)膜水通道蛋白5'端序列。根據(jù)已知序列設(shè)計(jì)特異引物AQP-3-RACE:5' -ATGGAGGTGGAGCCAATGAGTTATC-3'，使用SMART RACE cDNA Amplification Kit (Clontech公司)擴(kuò)增未知的3'端序列。將獲得的PCR片段測(cè)序后與已知EST序列拼接，得到一條包含完整開放閱讀框的拼接序列。根據(jù)拼接序列 Y 和:V 末端設(shè)計(jì)特異弓 I 物 F-AQP (5' -ATGGCGAAGGATTTTGAAACAGG-3')和 R-AQP (5' -ACCCAAGACACACTAACAATAACC-3')，以海馬齒根系cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序后與拼接序列比較，二者序列一致，說明拼接序列在海馬齒中確實(shí)存在，從而獲得了海馬齒水通道蛋白基因，命名為SpAQPl，該基因的編碼區(qū)核苷酸序列為序列表中的序列1，編碼的蛋白命名為SpAQPl，該蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列2。
`[0045]實(shí)施例2、海馬齒SpAQPl在高鹽脅迫下的表達(dá)分析
[0046]選取長(zhǎng)勢(shì)一致的海馬齒水培苗，轉(zhuǎn)入濃度為200mM的NaCl水溶液中，分別處理1、
2、4、8、12和24h，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取3棵苗作為實(shí)驗(yàn)材料，以未處理的水培苗作為對(duì)照。
[0047]用CTAB法提取樣品根總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA后，使用UltraSYBR Mixture (北京康為世紀(jì))進(jìn)行Real-time PCR分析。SpAQPl的擴(kuò)增引物為F-AQP-qRT:5 ' -TCTTCTCTGCCACTGACCCCA-3 '，R_AQP_qRT:5 ' -ACCGCAGCACCGAAACTACGA-3 '。內(nèi)參基因?yàn)楹ｑR齒 Actin，引物為 F-Actin-qRT:5 ' -TTGAACCCAAAGGCTAACAGAGA-3 '，R-Actin-qRT:
-CACGACCAGCAAGATCCAAAC-3'。擴(kuò)增條件為 95°C預(yù)變性 10min，40 個(gè)循環(huán):95°C變性30s，57°C退火30s，72°C延伸20s。Real-time PCR擴(kuò)增以及SpAQPl相對(duì)表達(dá)量分析使用Mx3005P QPCR System (Stratagene 公司)進(jìn)行。
[0048]結(jié)果見圖1，其中對(duì)照Oh的相對(duì)表達(dá)量指定為I。結(jié)果顯示，在植株受到鹽脅迫時(shí)，SpAQPl的表達(dá)顯著增強(qiáng)，處理4h后達(dá)到最高峰，為對(duì)照的26倍，說明SpAQPl參與鹽脅迫應(yīng)答。
[0049]實(shí)施例3、SpAQPl在調(diào)控植物耐鹽性中的應(yīng)用
[0050]1、重組載體 pCAMBIA1304-SpAQPl 的構(gòu)建
[0051]以海馬齒根的cDNA 為模板，合成引物 F-1304-AQP:5' -GACCATGGCGAAGGATTTTGAAACAGGAGGAG-3'(劃線部分為 Nco I 酶切位點(diǎn))和 R-1304-AQP:5' -CGACTAGTCACGTTGGAGGAGCTCCTAAAG-3 ’ (劃線部分為Spe I酶切位點(diǎn))進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
[0052]得到864bp的PCR產(chǎn)物，經(jīng)過測(cè)序，該P(yáng)CR產(chǎn)物具有序列表中序列I自5’末端第1-852位核苷酸。
[0053]將該P(yáng)CR產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶Nco I和Spe I進(jìn)行雙酶切，回收854bp酶切產(chǎn)物，與經(jīng)相同酶雙酶切植物表達(dá)載體pCAMBIA1304 (記載在如下文獻(xiàn):Bouquin, T., Mattsson, 0., Nsested, H., Foster, R., &Mundy, J.(2003).TheArabidopsis luelmutant defines a katanin p60ortholog involved in hormonalcontrol of microtubule orientation during cell growth.Journal of cellscience, 116 (5)，791-801 ;公眾可從中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所獲得)得到的12347bp的載體骨架連接，得到重組載體。
[0054]測(cè)序結(jié)果表明該重組載體為將序列表中序列I自5’末端第1-852位核苷酸插入載體PCAMBIA1304的Nco I和Spe I酶切位點(diǎn)間得到的載體，命名為pCAMBIA1304_SpAQPl。
[0055]2、轉(zhuǎn)SpAQP I煙草的獲得
[0056]I)重組農(nóng)桿菌的獲得
[0057]將重組載體pCAMBIA1304-SpAQPl 轉(zhuǎn)入根瘤農(nóng)桿菌 GV3101 (Berres R.0tten L.Tinland, B., Malgarin1-Clog, E., &ffalter, B.(1992).Transformation of vitis tissue bydifferent strains of Agrobacterium tumefaciens containing the T_6b gene.PlantCell Reports, 11 (4), 192-195.;公眾可從中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所獲得，得到重組農(nóng)桿菌。
[0058]提取重組農(nóng)桿菌的質(zhì)粒，測(cè)序?yàn)閜CAMBIA1304_SpAQPl，含有該質(zhì)粒的重組農(nóng)桿菌命名為 GV3101/pCAMBIA1304-SpAQPlo
[0059]2)轉(zhuǎn)SpAQPl煙草的獲得
[0060]從平板挑取重組菌GV3101/pCAMBIA1304-SpAQPl單菌落，接種在含50mg/L利福平，50mg/L慶大霉素，50mg/L卡那霉素的YEP培養(yǎng)基中，28 °C培養(yǎng)至0D600=0.6-0.8。吸取Iul菌液作為模板，使用引物F-1304-AQP和R-1304-AQP進(jìn)行菌液PCR對(duì)重組菌進(jìn)行鑒定，得到864bp的為陽(yáng)性。對(duì)鑒定為陽(yáng)性的菌液以5000rpm離心5min收集菌體,然后用5倍體積的MS液體培養(yǎng)基懸浮，加入終濃度為100 μ M的乙酰丁香酮，得到農(nóng)桿菌侵染菌液。
[0061]將無菌培養(yǎng)的煙草(Nicotiana tabacum cv.K326,文獻(xiàn):彭世清，黃冬芬.擬南芥肌動(dòng)蛋白解聚因子4基因(AtADF4)在煙草中表達(dá)引起植株形態(tài)變化.植物生理與分子生物學(xué)學(xué)報(bào)32.1 (2006):52-56.;公眾可從中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所獲得；以下也稱為野生型煙草)葉片，切成大小約為I X Icm的葉盤，浸入制備好的農(nóng)桿菌菌液中侵染lOmin。用無菌吸水紙吸干葉盤表面的菌液，放置在共培養(yǎng)MS培養(yǎng)基(MS+2.0mg/L6-BA+0.5mg/L IAA, pH5.8)上，28°C暗培養(yǎng)3d。然后將葉盤轉(zhuǎn)入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基(MS+2.0mg/L6-BA+0.5mg/L IAA+10mg/L 潮霉素 +500mg/L 羧芐青霉素，pH5.8)中，置于 25°C，光照周期為16h light/8h dark的光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)不定芽長(zhǎng)到l-2cm時(shí)，在超凈工作臺(tái)中用無菌鋒利刀片將芽切下，接到生根培養(yǎng)基(l/2MS+15mg/L潮霉素+250mg/L羧芐青霉素，pH5.8)上誘導(dǎo)生根，4-5周后即可得到完整的TO代轉(zhuǎn)SpAQPl煙草。將組培苗轉(zhuǎn)至花盆在自然條件下栽培，收獲其自交Tl代種子，Tl代 植株自交收獲T2代種子。
[0062]3)轉(zhuǎn)SpAQPl煙草鑒定[0063]使用煙草直接PCR試劑盒(Tobacco Direct PCR Kit,成都福際生物)，以直徑2mm的葉片為模板，F(xiàn)-1304-AQP和R-1304-AQP為引物，對(duì)TO代轉(zhuǎn)SpAQPl煙草進(jìn)行PCR鑒定，以未轉(zhuǎn)基因的野生煙草作為對(duì)照。
[0064]結(jié)果如圖2所示，M為D2000DNA ladder ;泳道I為野生煙草；泳道2_10為TO代轉(zhuǎn)SpAQPl煙草，顯示大部分轉(zhuǎn)基因煙草植株中可以擴(kuò)增出特異的目的條帶(2、3、5-10能擴(kuò)出864bp產(chǎn)物)，而野生煙草則沒有相應(yīng)的擴(kuò)增條帶。
[0065]使用相同的方法對(duì)Tl和T2代植株進(jìn)行PCR鑒定，得到864bp片段的為陽(yáng)性轉(zhuǎn)SpAQPl 煙草。
[0066]利用含50mg/L潮霉素的MS平板對(duì)Tl代種子進(jìn)行篩選，獲得潮霉素抗性植株(抗性植株正常生長(zhǎng)，敏感植株死亡)，并單株收獲其T2代種子。按相同方法繼續(xù)對(duì)T2代種子進(jìn)行篩選，得到不產(chǎn)生抗性分離的T2代純合轉(zhuǎn)基因株系，用于以下轉(zhuǎn)基因煙草的耐鹽性分析，為T2代純合轉(zhuǎn)SpAQPl煙草株系。
[0067]進(jìn)一步通過qRT-PCR對(duì)T2代轉(zhuǎn)SpAQPl煙草純合株系中SpAQPl的相對(duì)表達(dá)水平進(jìn)行分析。
[0068]具體方法是:提取轉(zhuǎn)基因煙草的葉片RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA作為模板，擴(kuò)增SpAQPl使用的引物為F-AQP-qRT和R_AQP_qRT，內(nèi)參基因使用煙草actin基因，引物為F-NtACTIN-qRT:5, -TCAATCCTMGGCCMCAGAGA-3' R-NtACTIN-qRT:5, _CACGACCAGCMGATCCAAAC_3,。PCR擴(kuò)增及數(shù)據(jù)處理使用Mx3005P QPCR System (Stratagene公司)進(jìn)行。以野生型煙草(WT)為對(duì)照。
[0069]檢測(cè)結(jié)果如圖 3所示，T2代純合轉(zhuǎn)SpAQPl煙草株系1、2、3葉片中的SpAQPl的表
達(dá)水平顯著高于野生煙草。
[0070]采用同樣的方法將空載體pCAMBIA1304轉(zhuǎn)入野生型煙草中，得到TO代轉(zhuǎn)空載體煙草，播種得到T2代轉(zhuǎn)空載體煙草，通過qRT-PCR鑒定，T2代轉(zhuǎn)空載體煙草中SpAQPl表達(dá)與野生型煙草無顯著差異。
[0071]3、轉(zhuǎn)SpAQPl煙草的耐鹽性研究
[0072]從經(jīng)過鑒定的3個(gè)T2代純合轉(zhuǎn)SpAQPl煙草株系中隨機(jī)選擇植株進(jìn)行耐鹽試驗(yàn)，以野生型煙草和T2代轉(zhuǎn)空載體煙草作為對(duì)照，試驗(yàn)重復(fù)5次，確保結(jié)果的一致性。
[0073]將生長(zhǎng)在相同環(huán)境、苗齡2月左右、長(zhǎng)勢(shì)一致的野生植株和轉(zhuǎn)基因植株用200mMNaCl水溶液進(jìn)行澆灌，每2d澆灌一次，IOd后觀察表型。
[0074]結(jié)果如圖4所示，發(fā)現(xiàn)野生型煙草葉片失綠萎蔫，繼而莖部和葉片出現(xiàn)壞死，而轉(zhuǎn)基因植株癥狀明顯輕于野生植株，基本正常，整體存活率明顯高于野生植株，說明SpAQPl提高了植株的耐鹽性。
[0075]統(tǒng)計(jì)存活率，陽(yáng)性T2代純合轉(zhuǎn)SpAQPl煙草株系的平均存活率為85% ；
[0076]野生型煙草存活率僅為10%以下。
[0077]野生型煙草和T2代轉(zhuǎn)空載體煙草結(jié)果無顯著差異。
【權(quán)利要求】
1.一種蛋白，是如下(a)或(b)的蛋白質(zhì): Ca)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； (b)將序列表中序列2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物耐逆性相關(guān)的由(a)衍生的蛋白質(zhì)。
2.編碼權(quán)利要求1所述蛋白的DNA分子。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的DNA分子，其特征在于:所述DNA分子為如下I)_4)中任一所述的DNA分子: 1)編碼區(qū)為序列表中序列I所示的DNA分子； 2)編碼區(qū)為自5’末端第1-852位核苷酸所示的DNA分子； 3)在嚴(yán)格條件下與I)或2)所示的DNA分子雜交且編碼與植物耐逆性相關(guān)蛋白的DNA分子; 4)與I)或2)的DNA分子至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且編碼與植物耐逆性相關(guān)蛋白的DNA分子。
4.含有權(quán)利要求2或3所述DNA分子的表達(dá)盒、重組載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。
5.擴(kuò)增權(quán)利要求2或3所述DNA分子的全長(zhǎng)或其任一片段的引物對(duì)。
6.權(quán)利要求1所述的蛋白、權(quán)利要求2或3所述DNA分子或權(quán)利要求4所述的表達(dá)盒、重組載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌在調(diào)控植物耐逆性中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于:所述耐逆性為耐鹽性；所述植物為單子葉植物或雙子葉植物；所述雙子葉植物具體為煙草(Nicotiana tabacum)。
8.一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，是將編碼權(quán)利要求1所述蛋白的DNA分子導(dǎo)入目的植物中，得到轉(zhuǎn)基因植物；所述轉(zhuǎn)基因植物的耐逆性高于所述目的植物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于:編碼權(quán)利要求1所述蛋白的DNA分子是通過權(quán)利要求4所述的重組載體導(dǎo)入目的植物中； 所述耐逆性為耐鹽性。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的方法，其特征在于: 所述植物為單子葉植物或雙子葉植物；所述雙子葉植物具體為煙草。
【文檔編號(hào)】C12N15/82GK103804479SQ201410035161
【公開日】2014年5月21日 申請(qǐng)日期:2014年1月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月24日
【發(fā)明者】暢文軍, 張治禮, 朱家紅, 范偉, 劉習(xí)文 申請(qǐng)人:中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所