短短芽孢桿菌菌株、其菌株的培養(yǎng)方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及微生物與環(huán)境工程領(lǐng)域，具體而言，涉及短短芽孢桿菌菌株、其菌株的培養(yǎng)方法以及應(yīng)用。該短短芽孢桿菌菌株，2013年11月24日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC?NO：M?2013597，保藏名稱為短短芽孢桿菌50L-3a。本發(fā)明提供的短短芽孢桿菌菌株、其菌株的培養(yǎng)方法及其應(yīng)用，將得到的菌液接種到除臭物上，具有較強的除臭能力，利于微生物除臭的廣泛應(yīng)用。
【專利說明】短短芽孢桿菌菌株、其菌株的培養(yǎng)方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物與環(huán)境工程領(lǐng)域，具體而言，涉及短短芽孢桿菌菌株、其菌株的培養(yǎng)方法以及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著人們環(huán)保意識的增強，對環(huán)境質(zhì)量的要求也越來越高，對因惡臭所帶來的污染也更加敏感。產(chǎn)生惡臭的物質(zhì)不僅可使人產(chǎn)生不快和厭惡感，而且許多惡臭物質(zhì)還危害著人們的健康甚至生命，因而國外有些國家較早地就開始了該方面的研究，對惡臭實行專項立法，把惡臭污染從大氣污染中單獨分離出來作為公害的一種。
[0003]微生物除臭技術(shù)是利用能夠轉(zhuǎn)化或者降解惡臭物質(zhì)的特殊微生物的高效吸附、吸收和降解作用對惡臭氣體進行凈化，化惡臭為無臭。不含任何化學藥品，也不含轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品成份，不會造成二次污染，代表著生物環(huán)保產(chǎn)業(yè)發(fā)展的方向。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于一種短短芽孢桿菌菌株、其菌株的培養(yǎng)方法及其應(yīng)用，以解決上述的問題。
[0005]在本發(fā)明的實施例中提供了一種短短芽孢桿菌(Brevibacillus brevis)菌株,其保藏名稱為短短芽孢桿菌50L-3a，保藏號為CCTCCNO:M2013597,于2013年11月24日保存于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址:中國.武漢.武漢大學，郵編:430072。
[0006]本發(fā)明還提供了所述的短短芽孢桿菌菌株的培養(yǎng)方法，將所述短短芽孢桿菌菌株接種于LB培養(yǎng)基；培養(yǎng)溫度為4-61 °C。
[0007]優(yōu)選地，所述LB培養(yǎng)基為LB固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為49_51°C。
[0008]優(yōu)選地，所述LB培養(yǎng)基為LB液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基轉(zhuǎn)速為80-180rpm。
[0009]進一步地，所述培養(yǎng)溫度為49-51 °C。
[0010]進一步地，所述培養(yǎng)基轉(zhuǎn)速為160rpm。
[0011]此外，本發(fā)明還提供了所述的短短芽孢桿菌菌株在除臭方面的應(yīng)用。
[0012]優(yōu)選地，短短芽孢桿菌菌株在畜禽糞便除臭的應(yīng)用。
[0013]進一步地，所述畜禽包括:雞、鴨、鵝、豬、牛、羊、馬。
[0014]優(yōu)選地，短短芽孢桿菌菌株在生活垃圾除臭的應(yīng)用。
[0015]進一步地，所述生活垃圾包括:城市生活陳腐垃圾和城市生活新鮮垃圾。
[0016]本發(fā)明實施例提供的短短芽孢桿菌菌株、其菌株的培養(yǎng)方法及其應(yīng)用，將得到的菌液接種到除臭物上，具有較強的除臭能力，利于微生物除臭的廣泛應(yīng)用。
【具體實施方式】
[0017]下面通過具體的實施例子對本發(fā)明做進一步的詳細描述。
[0018]本發(fā)明實施例中提供了短短芽孢桿菌菌株、其菌株的培養(yǎng)方法及其應(yīng)用。[0019]實施例1
[0020]一、菌株的分離
[0021](I)培養(yǎng)基
[0022]LB固體培養(yǎng)基:酵母提取物5g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，瓊脂20g，蒸餾水定容至1000ml, ρΗ7.2。
[0023]LB液體培養(yǎng)基:酵母提取物5g,蛋白胨IOg,氯化鈉5g,蒸懼水定容至1000ml,ρΗ7.2。
[0024]LB培養(yǎng)基為微生物培養(yǎng)常用的培養(yǎng)基，各營養(yǎng)物質(zhì)若是有其他等同物質(zhì)的替換或是其含量的變化只要在合理的范圍，均在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
[0025](2)菌株的獲得
[0026]a、從中國貴州省貴陽市的一個垃圾堆取20g陳腐垃圾樣品放于盛有80ml無菌水并帶有玻璃珠的三角瓶中，50°C ±l°C，160rpm搖床振蕩24h，靜置30min ；
[0027]b、取上清液稀釋10000倍，然后取3ml轉(zhuǎn)入裝有27ml液體LB的三角瓶中，50°C ± I°C，60rpm 振蕩培養(yǎng) 8h ；
[0028]C、取0.1ml培養(yǎng)液涂布LB固體平板，50°C ± 1°C恒溫培養(yǎng)48h ；
[0029]d、挑取單菌落轉(zhuǎn)接斜面LB固體培養(yǎng)基，50°C ±1°C恒溫培養(yǎng)。經(jīng)過多次重復固體培養(yǎng)基純化步驟，得到一種純`化的菌株50L-3a。
[0030](二)形態(tài)特征:
[0031]將菌株50L_3a接種到LB固體培養(yǎng)基上，50°C ± I °C恒溫培養(yǎng)24h，菌落近圓形，0.7-1.1cm，扁平，表面光滑，邊緣整齊，菌落顏色乳白色，不透明；革蘭氏染色為陽性，10X 100倍生物顯微鏡下觀察，單個菌體形狀為桿狀，大小為0.6X 3.5 μ m，芽孢中生或端生，芽孢橢圓形，運動性為陽性。
[0032](三)生理生化特征
[0033]1、V-P試驗培養(yǎng)基:蛋白胨5g,葡萄糖5g,磷酸氫二鉀5g,蒸懼水定容至1000ml,pH7.2,每管分裝 5ml, 115°C滅菌 30min
[0034]將培養(yǎng)24h的菌株50L_3a培養(yǎng)液與40%氫氧化鈉等量相混，加入0.3g肌酸粉末，IOmin后觀察結(jié)果，培養(yǎng)液沒有明顯變化，結(jié)果為陰性。
[0035]2、淀粉水解試驗盧哥氏碘液:5g碘(12)和IOg碘化鉀(KI)溶于85ml蒸餾水中，碘的總濃度為150mg/ml。
[0036]在LB固體培養(yǎng)基中加入0.2%可溶性淀粉，121°C，滅菌20min，冷卻后倒平板備用。將菌株50L-3a劃線接種于平板上，30°C培養(yǎng)2天形成明顯菌落后，在平板上滴加盧哥氏碘液平板整體呈藍黑色，菌落周圍沒有不變色透明圈，結(jié)果為陰性。
[0037]3、明膠水解試驗培養(yǎng)基:蛋白胨5g,明膠120g,蒸懼水定容至1000ml。ρΗ7.4,分裝試管，每管裝約4~5cm, 115°C滅菌20min。
[0038]挑取在LB上培養(yǎng)24h的菌株50L_3a，以較大量穿刺接種于明膠高層約2/3深度。于30°C培養(yǎng)7~14天，明膠被液化，結(jié)果為陽性。
[0039]4、硝酸鹽還原試驗培養(yǎng)基:牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，硝酸鉀lg，蒸餾水定容至1000ml, pH7.2,每管分裝5ml, 121°C蒸汽滅菌20min
[0040]格里斯試劑A液:對氨基苯磺酸0.5g，10%濃度稀醋酸150ml。[0041]格里斯試劑B液:α -萘胺:0.lg，蒸餾水20ml，10%濃度稀醋酸150ml。
[0042]二苯胺試劑:二苯胺0.5g溶于100ml濃硫酸中，再用20ml蒸餾水稀釋。
[0043]將菌株50L_3a接種至硝酸鹽液體培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)，在比色瓷盤小窩中滴入少量的第1，3，5天的培養(yǎng)液，再各加一滴A液和B液，無顏色變化，再滴加兩滴二苯胺試劑，出現(xiàn)藍色結(jié)果為陰性。
[0044]5、接觸酶實驗將在LB固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)18h的菌株50L_3a的菌種用滅菌的牙簽挑取少量抹于滴加了 5%過氧化氫的玻片上，有氣泡產(chǎn)生，結(jié)果為陽性。
[0045]6、糖醇發(fā)酵試驗培養(yǎng)基:磷酸氫二銨lg，硫酸鎂0.2g，氯化鉀0.2g，酵母膏:0.2g，葡萄糖/甘露醇/蔗糖/乳糖:10g，瓊脂粉5g，溴甲酚紫4g，蒸餾水定容至1000ml，pH7.0，分裝試管，培養(yǎng)基高度為5cm，115°C滅菌20min
[0046]將在斜面培養(yǎng)18h的菌株50L_3a用穿刺針接種于培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)ld，3d，5d，7d后觀察，加葡萄糖的顏色變黃，結(jié)果為陽性；加甘露醇、蔗糖、乳糖的不變色，結(jié)果為陰性。
[0047]7、產(chǎn)硫化氫試驗培養(yǎng)基:蛋白胨IOg,氯化鈉5g,牛肉膏IOg,半胱氨酸0.5g,蒸懼水定容至1000ml, pH7.2,分裝試管,每管液層高度5cm, 112°C滅菌30min。
[0048]將菌株50L_3a接入到培養(yǎng)基后，用鑷子夾取一條用10%醋酸鉛浸泡過的普通濾紙，用棉塞塞緊，使之懸掛于管中，下端接近培養(yǎng)基表面，不接觸液面，在37°C培養(yǎng)。于3，7，14天后觀察，紙條不變，結(jié)果為陰性。
[0049]8、耐鹽性試驗在LB液體培養(yǎng)基中分別加入5%、7%的，滅菌后接入菌株50L_3a，3天后觀測5%渾濁，結(jié)果為陽性；7%氯化鈉的培養(yǎng)基澄清，結(jié)果為陰性。
[0050]將菌株50L_3a的培養(yǎng)特征和生理生化特征的結(jié)果列出，如表1所示。
[0051]表1短短芽孢桿菌菌株的特征
[0052]
【權(quán)利要求】
1.一種短短芽孢桿菌菌株，其特征在于，2013年11月24日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC NO:M2013597，保藏名稱為短短芽孢桿菌50L_3a。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的短短芽孢桿菌菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于，將所述短短芽孢桿菌菌株接種于LB培養(yǎng)基；培養(yǎng)溫度為4-61°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的短短芽孢桿菌菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述LB培養(yǎng)基為LB固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為49-51°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的短短芽孢桿菌菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述LB培養(yǎng)基為LB液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基轉(zhuǎn)速為80-180rpm。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的短短芽孢桿菌菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)溫度為 49-51。。。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的短短芽孢桿菌菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基轉(zhuǎn)速為 160rpm。
7.權(quán)利要求1所述的短短芽孢桿菌菌株在畜禽糞便除臭的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述畜禽包括:雞、鴨、鵝、豬、牛、羊、馬。
9.權(quán)利要求1所述的短短芽孢桿菌菌株在生活垃圾除臭的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述生活垃圾包括:城市生活陳腐垃圾和城市生活新鮮垃圾。
【文檔編號】C12N1/20GK103710293SQ201410003514
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2014年1月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月3日
【發(fā)明者】周禮紅, 廖瀚峰, 丁旭 申請人:周禮紅