激酶活性探針及治療相關(guān)疾病的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種激酶活性探針及治療相關(guān)疾病的方法，其不僅可以很好的抑制布魯頓酪氨基酸激酶（Bruton’s?tyrosine?kinase,Btk）的活性，并且能夠與Btk的激酶結(jié)構(gòu)域中ATP結(jié)合口袋處的半胱氨酸殘基形成共價結(jié)合。其不僅可以體外標(biāo)記Btk酶，也可以體外標(biāo)記表達(dá)Btk酶的細(xì)胞或組織，也可以評估一種Btk抑制劑在動物體內(nèi)的藥效。
【專利說明】激酶活性探針及治療相關(guān)疾病的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及激酶活性探針及治療相關(guān)疾病的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蛋白激酶是真核生物中最大的基因家族之一，正被廣泛研究。目前已經(jīng)有超過500多種激酶被發(fā)現(xiàn)，占人類基因的2%。它通過催化轉(zhuǎn)移ATP Y位的一個帶負(fù)電磷酸基團(tuán)至其底物蛋白上，修飾其生物活性，從而調(diào)節(jié)著真核細(xì)胞中大多數(shù)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。激酶控制著很多細(xì)胞進(jìn)程，如新陳代謝、轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞周期、細(xì)胞支架重排以及細(xì)胞的活動、凋亡和分化等，從而與人類疾病如癌癥、慢性炎癥有著密切關(guān)系，在過去的幾十年中成為人們競相追逐的熱門藥物靶點。大多數(shù)激酶靶點與癌癥相關(guān)，激酶功能的失調(diào)也與諸如免疫、神經(jīng)、代謝、傳染方面的疾病有關(guān)聯(lián)，因而人們?nèi)计鹆税l(fā)展小分子激酶抑制劑治療此系列疾病的興趣。
[0003]布魯頓酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine kinase,Btk)是屬于Tec家族的一類非受體酪氨酸激酶，在除了 T細(xì)胞、自然殺手細(xì)胞和漿細(xì)胞外的所有造血細(xì)胞中都有表達(dá)。Btk對B細(xì)胞的生長、分化和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有非常重要的作用。Btk的表達(dá)被認(rèn)為是B細(xì)胞增殖和存活的關(guān)鍵條件。人體內(nèi)的Btk的基因變異可以導(dǎo)致循環(huán)系統(tǒng)B淋巴細(xì)胞的缺失，因為不能產(chǎn)生全部種類的免疫球蛋白，故不能增加人的體液免疫反應(yīng)。這種基本的免疫缺陷被稱為X相關(guān)的丙血球缺乏癥(XLA)。
[0004]Btk在細(xì)胞內(nèi)被活化的分子機理目前還沒有被完全闡明。一般認(rèn)為，翻譯后修飾和亞細(xì)胞的定位在其中發(fā)揮了重要作用。在穩(wěn)定狀態(tài)，Btk主要處于胞質(zhì)中，B細(xì)胞受體一旦參與信號啟動，Btk就會轉(zhuǎn)移至細(xì)胞膜被上游Src家族激酶Blk、Lyn和Fyn激活，它的位于激酶結(jié)構(gòu)域的Tyr551會被上游激酶Lyn磷酸化,隨后Btk會發(fā)生一個包含SH3結(jié)構(gòu)域上的Tyr223的自磷酸化過程。隨后，Btk通過與其銜接蛋白B細(xì)胞鏈接蛋白(BLNK)的緊密協(xié)作，磷酸化底物蛋白磷脂酶C Y2 (PLC Y 2)，從而引發(fā)鈣離子的調(diào)動，轉(zhuǎn)錄因子NF-κ B的活化和MAP激酶信號通路。
[0005]B細(xì)胞抗原受體(BCR)信號通道的活化對于B細(xì)胞惡性腫瘤和自身免疫疾病的激活和維持其著重要作用。在人和鼠的突變實驗中，已經(jīng)證實Btk對于BCR信號通道非常關(guān)鍵。因此，Btk對于B細(xì)胞的選擇性抑制來講是一個特別有吸引力的激酶靶點。另有證據(jù)證實BCR信號通路在非霍奇金淋巴瘤(NHL)腫瘤細(xì)胞的生長方面扮演重要角色。最近，Btk被確定是子型的彌散大B細(xì)胞淋巴瘤存活的信號激酶。
[0006]B淋巴酪氨酸激酶(B lymphoid tyrosine kinase, Blk)是與B淋巴細(xì)胞發(fā)育、分化以及信號有關(guān)的非受體酪氨酸激酶。B細(xì)胞受體信號通道(BCR)需要幾種酪氨酸激酶、磷酸酯酶以及相應(yīng)的共同受體之間的緊密配合。抗原結(jié)合在B細(xì)胞抗原受體(BCR)上可以觸發(fā)信號，最終導(dǎo)致B細(xì)胞活化。Blk在通過表面免疫球蛋白的信號轉(zhuǎn)遞中以及幫助pro-B到 pre-B的過渡中扮演了重要角色，并在B細(xì)胞受體的生長阻滯以及凋亡中起著相應(yīng)作用。Blk聯(lián)同F(xiàn)yn和Lyn對于前B細(xì) 胞受體(pre-BCR)介導(dǎo)的NF- κ B的活化起著關(guān)鍵作用。
[0007]表皮生長因子受體(Epidermal Growth Factor Receptor, EGFR)是上皮生長因子(EGF)細(xì)胞增殖和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的受體。EGFR屬于ErbB受體家族的一種，也被稱作HER1、ErbBl,突變或過表達(dá)一般會引發(fā)腫瘤。EGFR 二聚后可以激活它位于細(xì)胞內(nèi)的激酶通路，包括Tyr992、Tyrl045、Tyrl068、Tyrll48和Tyrll73等激活位點。這個自磷酸化可以引導(dǎo)下游的磷酸化，包括MPAK、Akt和JNK通路，誘發(fā)細(xì)胞增殖。
[0008]研究表明在許多實體腫瘤中存在EGFR的高表達(dá)或異常表達(dá)。EGFR與腫瘤細(xì)胞的增殖、血管生成、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及細(xì)胞凋亡的抑制有關(guān)。其可能機制有=EGFR的高表達(dá)引起下游信號傳導(dǎo)的增強；突變型EGFR受體或配體表達(dá)的增加導(dǎo)致EGFR的持續(xù)活化；自分泌環(huán)的作用增強；受體下調(diào)機制的破壞；異常信號傳導(dǎo)通路的激活等。EGFR的過表達(dá)在惡性腫瘤的演進(jìn)中起重要作用，膠質(zhì)細(xì)胞、腎癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等組織中都有EGFR的過表達(dá)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明提供了一種式(I)的化合物，或其藥用可接受的鹽:
[0010]
【權(quán)利要求】
1.一種式(I)的化合物，或其藥用可接受的鹽:
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，或可藥用可接受的鹽，其中 X選自甲基，三氟甲基，和氯，R為三氟甲基或氯， W選自哌嗪，哌啶，和-N (CH3) (CH2) 2NH-，
L 選自-(CH2) mNHC (O) (CH2) n-，- (CH2) mNHC (O) NH (CH2) n-，
-(CH2)mOC(O) (CH2)n-, -NHC(O) (CH2)mNHC(O) (CH2)n-,和
-C(O)NH(CH2)mNHC(O) (CH2)n-, 其中 m, η彼此獨立地、相同地或不同地選自整數(shù)0-10， Y選自 B0DIPY493/503， BODIPY FL, BODIPY R6G, B0DIPY530/550, BODIPY TMR,B0DIPY558/568, B0DIPY564/570, B0DIPY576/589, B0DIPY581/591, BODIPY TR。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，或可藥用接受的鹽，其中 X為甲基或氯， R為三氟甲基或氯， W為哌嗪或哌啶，
L 為-(CH2) mNHC (O) (CH2) n-或-NHC (O) (CH2) mNHC (O) (CH2) n-
其中 m，η彼此獨立地、相同地或不同地選自整數(shù)1-4，
Y為 BODIPY FL0
4.一種化合物:

5.一種藥物組合物，其中包括權(quán)利要求1-4中任一項的化合物和藥用可接受的賦形劑。
6.權(quán)利要求1-4中任一項的化合物或權(quán)利要求5中的藥用組合物用于體外標(biāo)記、分離包含Btk, Blk，或EGFR的蛋白。
7.權(quán)利要求1-4中任一項的化合物或權(quán)利要求5中的藥用組合物用于體外標(biāo)記表達(dá)Btk，Blk，或EGFR的細(xì)胞或組織。
8.權(quán)利要求1-4中任一項的化合物或權(quán)利要求5中的藥用組合物用于評估一種Btk抑制劑，或一種Blk抑制劑，或一種EGFR抑制劑在哺乳動物中的藥效。
【文檔編號】C12Q1/48GK103694268SQ201310689503
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月16日
【發(fā)明者】李錫濤 申請人:李錫濤