專利名稱：Cho細胞無血清無蛋白化學(xué)培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物技術(shù)領(lǐng)域，是一種專門針對CHO細胞的無血清無蛋白化學(xué)培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
無血清無蛋白化學(xué)培養(yǎng)基是一種不需要動物血清的人工合成純化學(xué)成分培養(yǎng)基， 通過增加明確的微量化學(xué)成分及生物短肽作為無血清細胞培養(yǎng)基的組分，代替無血清細胞培養(yǎng)基中的蛋白成分，支持培養(yǎng)細胞在無血清無蛋白化學(xué)培養(yǎng)基中的懸浮生長。從而可以避免動物血清在細胞培養(yǎng)過程中帶來的污染和血清不明成分對下游生產(chǎn)造成的不確定影響。中國專利申請?zhí)?00610024459公開了一種無血清動物細胞培養(yǎng)基及其制備方法，中國專利申請?zhí)?0091(^65976公開了一種無血清動物細胞培養(yǎng)基干粉、液體培養(yǎng)基及其制備方法，該兩項專利技術(shù)公開的產(chǎn)品雖然為無血清動物細胞培養(yǎng)基，但是培養(yǎng)基成分并非無蛋白、純化學(xué)成分。CHO細胞(中國倉鼠卵巢細胞)來源于中國倉鼠卵巢。CHO-Kl細胞最早培養(yǎng)于1968 年[Kao.F.T and Park Τ. T . proc. Natl Acad, sci USA 60:1275-1281(1968)].目前已有多種不同亞株及突變株。該細胞株廣泛用于生物蛋白藥物生產(chǎn)。該細胞株可以從ATCC或其他商業(yè)組織獲取。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種CHO細胞無血清無蛋白化學(xué)培養(yǎng)基，其血清蛋白成份由成份明確的微量元素及生物短肽代替，可以在無血清或其它細胞生長因子條件下支持細胞懸浮生長，具有組分明確、無血清無蛋白的優(yōu)點。CHO細胞無血清無蛋白化學(xué)培養(yǎng)基，其特征在于包括5. 029-50. 294g/L的無機鹽、 0. 554-5. 536g/L的氨基酸、0. 006-0. 06g/L的維生素以及2. 612-26. 123g/L微量元素，以及 0. 005-0. 05 mg/L生物短肽A和0. 25-2. 5mg/L生物短肽B，其中生物短肽A的氨基酸排序為脯氨酸-甘氨酸-賴氨酸-半胱氨酸-組氨酸-絲氨酸；生物短肽B為賴氨酸-半胱氨酸-酪氨酸-蘇氨酸-半胱氨酸-亮氨酸。其中無機鹽起到滲透壓調(diào)節(jié)劑的作用，本發(fā)明所采用的無機鹽以及其在培養(yǎng)基的用量如下
權(quán)利要求
1.CHO細胞無血清無蛋白化學(xué)培養(yǎng)基，其特征在于包括5. 029-50. 294g/L的無機鹽、 0. 554-5. 536g/L的氨基酸、0. 006-0. 06g/L的維生素以及2. 612-26. 123g/L微量元素，以及 0. 005-0. 05 mg/L生物短肽A和0. 25-2. 5mg/L生物短肽B，其中生物短肽A的氨基酸排序為脯氨酸-甘氨酸-賴氨酸-半胱氨酸-組氨酸-絲氨酸；生物短肽B為賴氨酸-半胱氨酸-酪氨酸-蘇氨酸-半胱氨酸-亮氨酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CHO細胞無血清無蛋白化學(xué)培養(yǎng)基，其特征在于所述無機鹽以及其在每升培養(yǎng)基的毫克數(shù)如下CaC12(無水) 58.3-582.9 CuS04 · 5H20 0.0006-0. 006 FeS04 · 7H20 0. 21-2. 1 Fe(N03)2 · 9H20 0. 025-0. 25 KCl 155. 3-1553 MgS04(無水) M.41-M4.1 MgC12(無水) 14^9-142.9 NaCl 3490. 7-34907 NaHC03 1218. 9-12189 NaH2P04 · H20 31. 6-316 Na2HP04 (無水)35. 5-354. 9 ZnS04 · 7H20 0.22-2. 2 ；本發(fā)明所采用的氨基酸以及其在每升培養(yǎng)基的毫克數(shù)如下丙氨酸 2. 225-22. 25精氨酸· HCl 73. 5-735天冬氨酸 3. 34-33. 4天冬酰胺· H20 3. 75-37. 5半胱氨酸· HCl · H20 8. 76-87. 6胱氨酸· 2HC1 15. 6-156谷氨酸3. 67-36. 7谷氨酰胺 182. 1-1821甘氨酸9. 17-91. 7組氨酸· HCl · H20 15. 7-157異亮氨酸 27.18-271.8亮氨酸29. 5-295賴氨酸· HCl 45. 6-456蛋氨酸8. 6-86苯丙氨酸 17.7-177脯氨酸8. 62-86. 2絲氨酸13. 1-131蘇氨酸26. 7-267色氨酸4. 5-45酪氨酸· 2Na · 2H20 27. 9-279 纈氨酸26. 4-264 ；本發(fā)明所采用的維生素以及其在每升培養(yǎng)基的毫克數(shù)如下生物素 0. 002-0. 02泛酸鈣1. 09-10. 9葉酸 1. 32-13. 2煙酰胺1. 01-10. 1吡哆酸· Hcl 1. 009-10. 1吡哆醇.Hcl 0.015-0. 15核黃素0. 11-1. 1硫胺素.Hcl 1.09-11維生素 B12 0. 35-3. 5 ；本發(fā)明所采用的微量元素以及其在每升培養(yǎng)基的毫克數(shù)如下 氯化膽堿 4. 48-44. 8 葡萄糖 1572. 35-15723. 5 次黃嘌呤(鈉鹽)1.19-12 i-肌醇 6. 25-62. 5亞油酸0.021-0. 21硫辛酸0.053-0. 53腐胺·:2HC1 0. 04-0. 4丙酮酸(鈉鹽) 27. 胸苷0.18-1. 8pluronicF68 999.9甲醇胺0.005-0. 05精胺0.005-0. 05硫代甘油0.0099-0硫酸鎳0.001-0. 01硫酸錳0.001-0. 01硫酸鋇0.0010-0. 01硝酸銀0.0010-0. 01氯化鋁0.0010-0. 01。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種CHO細胞無血清無蛋白化學(xué)培養(yǎng)基，其特征在于包括5.029-50.294g/L的無機鹽、0.554-5.536g/L的氨基酸、0.006-0.06g/L的維生素以及2.612-26.123g/L微量元素，以及0.005-0.05mg/L生物短肽A和0.25-2.5mg/L生物短肽B，其中生物短肽A的氨基酸排序為脯氨酸-甘氨酸-賴氨酸-半胱氨酸-組氨酸-絲氨酸；生物短肽B為賴氨酸-半胱氨酸-酪氨酸-蘇氨酸-半胱氨酸-亮氨酸。該培養(yǎng)基pH7.1-7.5、滲透壓為280-320mOsm/kg、沒有細菌和真菌生長，能為CHO系列細胞，能提供細胞生長、細胞蛋白表達等的無血清培養(yǎng)環(huán)境的澄清溶液。
文檔編號C12N5/071GK102533634SQ20121004019
公開日2012年7月4日 申請日期2012年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月22日
發(fā)明者唐碧云, 陳文永 申請人:江陰劍橋生物技術(shù)有限公司