專利名稱：一種用于從生物材料中直接擴增dna片段的方法及試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物學與基因工程領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及一種從微量生物樣品中擴增目標基因組DNA片段的方法。進一步，本發(fā)明涉及基于本方法的試劑盒及其試劑組成和操作方法。
背景技術(shù)：
DNA是遺傳信息的載體，是最重要的生物信息分子。隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展，基因組DNA抽提技術(shù)和PCR擴增技術(shù)已經(jīng)成為分子生物學研究的基礎(chǔ)，也是基因組DNA及其相關(guān)研究中最重要的一個環(huán)節(jié)。DNA存在于各種生物的細胞核、線粒體、葉綠體中，也可以以游離狀態(tài)存在于某些細胞的細胞質(zhì)中。DNA作為重要的遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)具有三個重要特性(1)同一個體的一致性，也就是說同一生物體的各個部分體細胞的DNA組成是相似的。根據(jù)DNA這個特性，可對物種進行鑒定，如DNA條碼技術(shù)。DNA條碼是一段能夠高效鑒定物種的DNA標準區(qū)域，通過此項新技術(shù)可以準確快速的鑒定新物種。( 不同個體之間高度的特異性，每個個體的DNA 都不會完全相同；根據(jù)這一特性可以進行法醫(yī)個體識別，如DNA指紋識別。DNA指紋是指個體間特異的DNA多態(tài)性，其個體識別能力類似于手指指紋識別，每個個體之間都是高度特異的?？捎脕磉M行個人識別鑒定。(3)DNA的恒定性，DNA作為一種穩(wěn)定的遺傳物質(zhì)，在生物體中具有穩(wěn)定性，不受年齡和營養(yǎng)條件等因素的影響。雖然DNA十分穩(wěn)定，能在細胞分裂時精確地復制自己，但這種隱定性是相對的。在一定的條件下基因也可以從原來的存在形式突然改變成另一種新的存在形式，就是在一個位點上，突然出現(xiàn)了一個新基因，代替了原有基因，從而會產(chǎn)生一種新的性狀，也可能引起某種病變。根據(jù)這一特性可以通過檢測DNA來預測或診斷疾病。以上所述DNA應用通常都涉及以下幾步第一，樣品采集；第二，設(shè)計合成相應的引物；第三，PCR擴增；第四，篩選和比對。其中就應用到了基因組DNA抽提和目的片段PCR 擴增這兩項最基本也是最重要的分子生物學實驗技術(shù)。常規(guī)的DNA抽提方法通常包含三個步驟，第一步是樣品裂解，通過一些離液劑(異硫氰酸胍、鹽酸胍)或是離子去污劑(SDS、 CTAB)將細胞裂解，使DNA游離出來，分布在混合液中。第二步是DNA純化，借助有機溶劑或是吸附柱將蛋白、酚類物質(zhì)和糖類物質(zhì)等雜質(zhì)與基因組DNA分離。第三步為DNA的沉淀富集，通過乙醇或異丙醇使DNA聚集，再過水或是TE (IOmM Tris-HCl，ImM EDTA, pH8. 0)進行溶解或洗脫。由于各種分子生物研究的方式和目的不同，所以對基因組的質(zhì)量要求也不同。對于一些微量樣品，尤其是一些比較珍貴的樣品，如果用常規(guī)方法進行DNA抽提，少量的DNA會在一步一步的操作過程中損失，最后就很難得到用于下一步實驗的DNA。所以針對不同的研究要求，選擇最合適的實驗方法可使研究工作者在最短的時間內(nèi)獲得最真實最理想的結(jié)果。目前國內(nèi)外市場上開發(fā)出了多種商品化的DNA抽提純化試劑盒。根據(jù)純化方法可以分為以下幾種(1)有機溶劑純化方法，這是最經(jīng)典的一種核酸抽提純化的技術(shù)；(2)鹽析純化法，是一種經(jīng)濟且毒性較小的種核酸抽提純化方法。( 玻璃珠純化法，是早期核酸抽提試劑盒中常用的一種方法，不過由于存在玻璃珠殘留等問題，已經(jīng)逐漸被其他方法所取代。(4)吸附柱純化法，是利用一種特殊的玻璃纖維膜對核酸進行吸附的方法，操作簡單適合高通量核酸抽提。( 磁珠純化法，是利用納米級磁性微粒與核酸發(fā)生吸附反應，磁珠可在磁場的作用下發(fā)生聚集和分散，使核酸的分離純化實現(xiàn)自動化的一種方法。(6)離子交換介質(zhì)純化方法，采用了一種新型的離子交換柱。在特定條件下，使DNA能在離心過柱的瞬間結(jié)合到DNA純化柱上，獲得的核酸純度較高。以上幾種商品化的DNA抽提純化試劑盒都有各自的優(yōu)勢，不過，獲得質(zhì)量較高的基因組DNA的前提是需要一定起始量的樣品。如果樣品量非常少，如小米粒大小的動物組織，就不適合選用以上的抽提方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供了一種快速而簡便的方法及試劑盒，從來源不同的微量樣品中快速提取基因組DNA，用于PCR擴增或以PCR擴增為基礎(chǔ)的相關(guān)檢測。本發(fā)明首先提供了一種生物樣本DNA抽提用試劑盒，包括1.裂解液 a 裂解液a為含有下列溶質(zhì)的水溶液50-70% PEG200 (v/v)、20_40mM KOH,裂解液酸堿度為pH13. 2-13. 8，優(yōu)選 pH 13.5-13.8。優(yōu)選的，裂解液a 含 60% PEG200、20mM KOH, ρΗ13· 5。2.裂解液 b:裂解液b為含有下列溶質(zhì)的水溶液5% -10% chelex-100(wt% )。優(yōu)選的，裂解液b 含 10% chelex-100。3.裂解液 c:裂解液c為含有下列溶質(zhì)的水溶液5% -10% chelex-100,1-2%TritonX-100 (wt % )。優(yōu)選的，裂解液c 含 10% chelex-100, lwt% ~2wt% TritonX-100。4.中和液為 pH6. 8-7. 5 的 190-210mmol/L Tris-HCl 緩沖液。較佳的，為 pH6. 8-7. 5 的 200mmol/L Tris-HCl 緩沖液。進一步的，chelex-100購自 Bio-Rad 公司。進一步的，所述試劑盒中還包括2 X Taq PCR混合液。所述2 X Taq PCR 混合液的配方為2 X PCR Buffer ；3_5mM MgSO4 ；0. 1-0. 2mM dNTP ；0.1-0.25U/μ L Taq DNA polymerase ；2XLoading Buffer。其中，PCRBuffer、Loading Buffer 均為常規(guī)。本發(fā)明的試劑盒可用于從樣品中提取DNA或用于擴增樣本DNA片段。本發(fā)明進一步提供了一種利用前述試劑盒從生物樣品中提取DNA的方法，包括下列步驟1.選擇前述試劑盒中合適的裂解液與樣本混合裂解樣本；2.將步驟1獲得的混合液直接去除細胞碎片獲得樣本DNA。進一步的，步驟1中
當所述生物樣本選自動物組織、植物組織、細菌和酵母時，選用裂解液a。該裂解液的裂解條件為將樣本與裂解液混合均勻后，在65°C下，裂解5-20分鐘。當所述生物樣本選自抗凝血液、血斑、凝固血塊、細胞和口腔拭子時，選用裂解液 b。該裂解液的裂解條件為將樣本與裂解液混合均勻后，在56°C下，裂解30分鐘，100°C煮沸8分鐘。當所述生物樣本選自帶毛囊的發(fā)根時，選用裂解液c和蛋白酶K(ProteinaseK)15 該裂解液的裂解條件為將樣本與裂解液和蛋白酶K混合均勻后，在56°C下，裂解30分鐘， 100°C煮沸8分鐘，裂解液和!Proteinase K的混合體積比一般為8-12 1。步驟1中，樣本與裂解液的混合比例為樣本體積裂解液體積=0. 05-0. 1 1。當步驟1選用裂解液a時，在步驟1將樣本裂解后步驟2去除細胞碎片前還包括將樣本裂解后的混合液直接采用所述試劑盒中的中和液中和。進一步的，樣本裂解后的混合液與中和液的混合比例為樣本裂解后的混合液體積中和液體積=1 1。中和條件可為將樣本裂解后的混合液與中和液混合均勻后，在室溫下，中和1-2 分鐘。步驟2中，去除細胞碎片可采用常規(guī)方法如離心等方法去除。采用本發(fā)明試劑盒所獲得的樣本DNA可直接用于PCR擴增。對與含有2XTaq PCR混合液的試劑盒，在采用前述方法獲得樣本DNA后，將獲得的樣本DNA與所述2XTaq PCR混合液以1_2 5的體積比混合。所得的混合液只需再加入適量引物和水即可進行PCR擴增。本發(fā)明還公開了一種利用本發(fā)明的試劑盒從生物材料中直接擴增DNA片段的方法，為先采用前述從樣品中提取DNA的方法獲得樣本DNA，而后將所獲得的樣本DNA與 2XTaq PCR混合液、適量引物和水混合后進行PCR擴增。這種用于從生物材料中直接擴增 DNA片段的方法操作過程簡單，僅僅分為裂解、稀釋/中和和擴增三步反應。本發(fā)明的發(fā)明要點之一在于提供了三種裂解液，對不同的生物樣品提供了三種裂解方法。一是，通過裂解液a中強堿作用使微量樣品快速裂解。再經(jīng)過簡單的中和、離心等過程從微量的生物樣品中獲得可以直接用于PCR擴增的DNA。二是通過裂解液b中的chelex-100樹脂催化DNA釋放，去除有螯合作用的多價金屬離子。三是裂解液b中的 chelex-100樹脂在蛋白酶K的輔助下裂解樣品，再通過簡單的離心過程去使chelex-100沉降在離心管底部。作為進一步的改進，本發(fā)明還使用了 2XTaq PCR混合液。經(jīng)過優(yōu)化的2XTaqPCR 混合液使PCR擴增更穩(wěn)定，大大節(jié)省了研究工作者的寶貴時間，同時也減少了 PCR擴增過程中的假陽性及假陰性等現(xiàn)象。使用2XTaq PCR混合液，無需自己配制PCR反應體系，大大縮短了操作時間，也最大限度降低樣品間的污染。本發(fā)明的優(yōu)點本發(fā)明的試劑盒穩(wěn)定性好，整個操作過程中不需要使用酚、氯仿等有毒的有機溶劑，使用安全。操作非常方便，把復雜的基因組DNA抽提和PCR擴增變得簡單化，僅僅分為裂解、稀釋/中和和擴增三步反應，全過程可在20分鐘之內(nèi)完成。非常適合多個微量樣品的同時提取。
本發(fā)明的幾種裂解液供實驗者選擇，針對不同的微量樣品可以選擇合適的裂解液。這使得本發(fā)明的試劑盒適用范圍非常廣，可用于動物、植物、微生物以及臨床樣品DNA 的快速PCR擴增，可從細菌、動物組織、植物組織、真菌、血液、唾液和毛發(fā)等多種樣品中分離DNA。獲得的上清液可直接用于PCR擴增。本發(fā)明提供2XTaq PCR 混合液，包括 2XiTaq DNA Polymerase，2XPCRBuffer， 2XdNTP，2XMg2+，只需加入適量引物、模板和水即可進行PCR擴增。大大簡化了 PCR操作， 使操作更加快捷，也減少了 PCR操作過程中可能導致的污染，使PCR的重復性更好。本發(fā)明的樣本基因組DNA的抽提全過程將常規(guī)的三步抽提合并為一步，并且不涉及樣品的轉(zhuǎn)移，僅在一個離心管內(nèi)完成，避免微量樣品的損失。此外，操作多個樣品DNA抽提時，常會因為移液器的重復使用或是氣溶膠等原因造成樣品間交叉污染，干擾后續(xù)的實驗，而采用本發(fā)明不僅不涉及到上清的轉(zhuǎn)移，還避免了操作多個樣品時管與管之間的交叉污染問題，獲得的DNA可以作為PCR擴增的模板。


圖1為實施例1中以不同裂解液獲得的DNA為模板PCR擴增結(jié)果M 為 DL2000 DNA Marker1-2 裂解液 a-13-4:裂解液 a-25-6 裂解液 a-37-8 裂解液 a-4圖2為實施例1中以不同方法獲得DNA為模板的PCR擴增結(jié)果1-3為使用本發(fā)明裂解液a_2獲得的DNA為模板4-6為使用常規(guī)植物基因組DNA抽提試劑盒獲得的DNA為模板圖3為實施例2中以不同裂解液獲得的DNA為模板PCR擴增結(jié)果M 為 DL2000 DNA Marker1-3 裂解液 b-14-6 裂解液 b-2圖4為實施例2中以不同方法獲得DNA為模板的PCR擴增結(jié)果1-2為使用本發(fā)明獲得的DNA為模板3-4為使用常規(guī)血液基因組DNA抽提試劑盒獲得的DNA為模板
圖5為實施例3中以不同裂解液獲得的DNA為模板PCR擴增結(jié)果M 為 DL2000 DNA Marker1-2 裂解液 c-13-4 裂解液 c-2圖6為實施例4 PCR擴增的結(jié)果(植物)M 為 DL2000 DNA Marker1-5為使用本發(fā)明獲得的DNA為模板-為陰性對照圖7為實施例4 PCR擴增的結(jié)果(抗凝血液)
M 為 DL2000 DNA Marker1-5為使用本發(fā)明獲得的DNA為模板-為陰性對照圖8為實施例4 PCR擴增的結(jié)果(毛發(fā))M 為 DL2000 DNA Marker1-4為使用本發(fā)明獲得的DNA為模板-為陰性對照
具體實施例方式下面對本發(fā)明的實施例作詳細說明本實施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，旨在進一步舉例說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明所要保護的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等分子克隆實驗室手冊(New York =Cold Spring Harbor LaboratoryPress, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實施例1(1)實施例1中采用的溶液A.樣品裂解液a，所述樣品裂解液配方為裂解液a-Ι 70% PEG200 ；20mM KOH, pH 13. 5 ；裂解液a-2 60% PEG200 ；20mM KOH, pH 13. 5 ；裂解液a-3 60% PEG200 ；40mM KOH, pH 13. 8 ；裂解液a-4 50% PEG200 ；20mM KOH，pH 13. 5.B.中和液，配方如下200mM Tris-HCl (pH 值 6. 8-7. 5).
C. 2 X Taq PCR混合液，所述配方如下2 X PCR Buffer ；3mM MgSO4 ；0. 2mM dNTP ；0.IU/μ L Taq DNA polymerase ；2 X Loading Buffer.D. 2 XPCR Buffer,所述配方如下40mM Tris-HCl, pH = 8. 825 °C ；20mM(NH4)2S04 ；20mM KCl ；0. 2% Trtion X-100 ；0. 2mg/mL BSA.Ε. 2 X Loading Buffer，所述配方如下8% Glycerol ；0. 05% Bromophenol Blue.
⑵提取煙草的基因組DNA。1.取直徑為0. 5-0. 7cm大小的植物葉片，加入1. 5ml離心管中用研磨棒充分研磨， 用研磨棒進行研磨。加入^(^!^裂解液！，震蕩混勻力日！水浴〗。!^!!。2.水浴后向離心管中加入100 μ L中和液，震蕩混勻。3.離心12，OOOrpm室溫離心5min去除不溶的組織碎片。4.取上清液作為模板直接用于PCR檢測。(3) PCR 反應將上述獲取的模板進行PCR擴增，上下游引物按煙草質(zhì)體全基因設(shè)計，上游引物為 5，-TGTCACTCAACGACGGAACCT-3，，下游引物為 5，-TTGGCATTGGAAGCACATCAC-3，。所擴增的目的片段大小為667bp。PCR反應體系為2 X Taq PCR混合液10 μ L，上下游引物各1 μ L，模板DNA2 μ L，無菌水6 μ L。PCR擴增條件為95°C預變性5分鐘，94°C 30秒，58°C 30秒，72°C 45秒，進行35 個循環(huán)。72°C最終延伸10分鐘。PCR擴增結(jié)束后，通過1 %瓊脂糖電泳對PCR擴增結(jié)果進行檢測，結(jié)果如圖所示。(4)常規(guī)基因組DNA抽提與PCR擴增使用常規(guī)的植物DNA抽提試劑盒從相同的樣品中抽提基因組，并在相同的條件下進行PCR擴增。PCR擴增結(jié)束后，通過1 %瓊脂糖電泳對PCR擴增結(jié)果進行檢測，結(jié)果如圖所示。實施例2(1)實施例2中采用的溶液A.樣品裂解液b，所述樣品裂解液配方為裂解液b-Ι 5% chelex-100(chelex_100 購自 sigma 公司)裂解液b-2:10% chelex-100(chelex-100 購自 sigma 公司)B. 2 X Taq PCR混合液，配方如下2 X PCR Buffer ；3mM MgSO4 ；0. 2mM dNTP ；0. IU/μ L Taq DNA polymerase ；2 X Loading Buffer.其中所使用的2XPCR Buffer和6XLoading Buffer與實施例1中完全相同。( 提取微量血液的基因組DNA。1.取5-10 μ L抗凝全血加到1. 5ml離心管中，加入500 μ 1無菌水，劇烈振蕩。12，OOOrpm離心2min，棄上清，收集沉淀。2.沉淀中加入100 μ L裂解液2，56°C水浴30min, 100°C煮沸8min。3. 12，OOOrpm離心!3min，上清液用于PCR反應。(3) PCR 反應將上述獲取的模板進行PCR擴增，上下游引物按人類8號染色體基因設(shè)計，上游引物為 5，-CCATCTCCCATCAGGCAGTATCC-3，，下游引物為 5，-CTTCCAGAAACTTCCACCCAGCA-3，。所擴增的目的片段大小為678bp。
PCR反應體系為2 X Taq PCR混合液10 μ L，上下游引物各1 μ L，模板DNA 4yL，無菌水4 μ L。PCR擴增條件為95°C預變性5分鐘，94°C 30秒，58°C 30秒，72°C 45秒，進行35 個循環(huán)。72°C最終延伸10分鐘。PCR擴增結(jié)束后，通過1 %瓊脂糖電泳對PCR擴增結(jié)果進行檢測，結(jié)果如圖所示。(4)常規(guī)基因組DNA抽提與PCR擴增使用常規(guī)的血液基因組DNA抽提試劑盒從相同的樣品中抽提基因組，并在相同的條件下進行PCR擴增。PCR擴增結(jié)束后，通過1 %瓊脂糖電泳對PCR擴增結(jié)果進行檢測，結(jié)果如圖所示。實施例3(1)實施例3中采用的溶液A.樣品裂解液C，所述樣品裂解液配方為裂解液c_l:10% chelex-100,1% TritonX-IOO ；裂解液c_2:10% chelex-100, 2% TritonX-100.B. 2 X Taq PCR混合液，配方如下2 X PCR Buffer ；3mM MgSO4 ；0. 2mM dNTP ；0. IU/μ L Taq DNA polymerase ；2 X Loading Buffer.其中所使用的2XPCR Buffer和6XLoading Buffer與實施例1中完全相同。(2)提取毛發(fā)的基因組DNA。1.取3-4根帶毛囊的毛發(fā)，取其根部，放入1.5ml離心管中，加入30μ1裂解液c 和 IyL Proteinase K，震蕩，56°C 水浴 30min，100°C 水浴 8min。2. 12，OOOrpm離心!3min，取上清液用于PCR反應。(3) PCR 反應將上述獲取的模板進行PCR擴增，上下游引物按大鼠的Actin基因設(shè)計，上游引物為 5，-GGACTTCAGGGGGAATCACTAT-3，，下游引物為 5，-TCTTTAGGTGTTTCTCAGCCATT-3，。所擴增的目的片段大小為^4bp。PCR反應體系為2XTaq PCR混合液10 μ L，上下游引物各1 μ L，模板DNA4 μ L，無菌水4 μ L。PCR擴增條件為95°C預變性5分鐘，94°C 30秒，56°C 30秒，72°C 30秒，進行35 個循環(huán)。72°C最終延伸10分鐘。PCR擴增結(jié)束后，通過1. 7 %瓊脂糖電泳對PCR擴增結(jié)果進行檢測，結(jié)果如圖所示。實施例4試劑盒的組裝分別將實施例1-3配置的裂解液a_2、b_2、c_l、中和液和2 X Taq PCR混合液密封包裝，置入盒中組裝成試劑盒。分別對組裝好的試劑盒按照相應的操作步驟進行檢測，測試結(jié)果如圖所示。
權(quán)利要求
1.一種生物樣本DNA抽提用試劑盒，包括1)裂解液a裂解液a為含有下列溶質(zhì)的水溶液50-70V% PEG200、20-40mM Κ0Η，裂解液酸堿度為 ρΗ13· 2-13. 8 ；2)裂解液b裂解液b為含有下列溶質(zhì)的水溶液5Wt% -IOwt% chelex-100 ；3)裂解液c裂解液c為含有下列溶質(zhì)的水溶液5wt % -IOwt % chelex-100, Iwt % _2wt % TritonX-IOO ；4)中和液為pH6. 8-7. 5 的 190-210mmol/L Tris-HCl 緩沖液。
2.如權(quán)利要求1所述生物樣本DNA抽提用試劑盒，其特征在于，所述裂解液a酸堿度為 pH 13. 5-13. 8。
3.如權(quán)利要求1所述生物樣本DNA抽提用試劑盒，其特征在于，所述裂解液a含60% PEG200 和 20mM Κ0Η,酸堿度為 pH13. 5。
4.如權(quán)利要求1所述生物樣本DNA抽提用試劑盒，其特征在于，所述裂解液b含10% chelex—lOOo
5.如權(quán)利要求1所述生物樣本DNA抽提用試劑盒，其特征在于，所述中和液為 pH6. 8-7. 5 的 200mmol/L Tris-HCl 緩沖液。
6.如權(quán)利要求1-5任一權(quán)利要求所述生物樣本DNA抽提用試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括2 X Taq PCR混合液。
7.如權(quán)利要求6所述生物樣本DNA抽提用試劑盒，其特征在于，所述2XTaqPCR混合液的配方為2XPCR Buffer ；3-5mM MgSO4 ；0. 1-0. 2mM dNTP ;0. 1-0. 25U/μ L Taq DNA polymerase ；2XLoading Buffer。
8.如權(quán)利要求1-7任一權(quán)利要求所述試劑盒用于從樣品中提取DNA或用于擴增樣本 DNA片段的用途。
9.一種從生物樣品中提取DNA的方法，包括下列步驟1)選擇權(quán)利要求1-7任一權(quán)利要求所述試劑盒中合適的裂解液與樣本混合裂解樣本；2)將步驟1獲得的混合液直接去除細胞碎片獲得樣本DNA。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述步驟1中當所述生物樣本選自動物組織、植物組織、細菌和酵母時，選用裂解液a ；當所述生物樣本選自抗凝血液、血斑、凝固血塊、細胞和口腔拭子時，選用裂解液b ；當所述生物樣本選自帶毛囊的發(fā)根時，選用裂解液c和蛋白酶K裂解樣本。
11.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，選用裂解液a時，裂解液的裂解條件為將樣本與裂解液混合均勻后，在65°C下，裂解5-20分鐘；選用裂解液b時，裂解液的裂解條件為將樣本與裂解液混合均勻后，在56°C下，裂解30分鐘，100°C煮沸8分鐘；選用裂解液 c時，裂解液的裂解條件為將樣本與裂解液和蛋白酶K混合均勻后，在56°C下，裂解30分鐘，100°C煮沸8分鐘。
12.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，步驟1中，樣本與裂解液的混合比例為樣本體積裂解液體積為0. 05-0. 1:1。
13.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，當步驟1選用裂解液a時，在步驟1將樣本裂解后步驟2去除細胞碎片前還包括將樣本裂解后的混合液直接采用所述試劑盒中的中和液中和。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，中和條件為將樣本裂解后的混合液與中和液混合均勻后，在室溫下，中和1-2分鐘。
15.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，在步驟2獲得樣本DNA后，將獲得的樣本 DNA與所述2 X Taq PCR混合液以1-2 5的體積比混合。
16.一種從生物材料中直接擴增DNA片段的方法，為先采用權(quán)利要求9-14任一權(quán)利要求所述方法獲得樣本DNA，而后將所獲得的樣本DNA與2XTaq PCR混合液、適量引物和水混合后進行PCR擴增。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于從生物材料中直接擴增DNA片段的方法及試劑盒。本發(fā)明的試劑盒包括裂解液a50-70v％PEG200、20-40mM KOH，pH13.2-13.8；裂解液b5wt％-10wt％ chelex-100；裂解液c5wt％-10wt％ chelex-100，1wt％-2wt％ TritonX-100；中和液pH6.8-7.5的190-210mmol/L Tris-HCl緩沖液，還可進一步包含2×Taq PCR混合液。本發(fā)明的試劑盒及方法適用于細菌、動物組織、植物組織、真菌、血液、唾液和毛發(fā)等多種樣品。
文檔編號C12N15/10GK102321618SQ20111029539
公開日2012年1月18日 申請日期2011年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月30日
發(fā)明者張麗娟, 李威, 蘆麗亞 申請人:生工生物工程(上海)有限公司