專利名稱：一種與巨細(xì)胞病毒具有特異性的巨細(xì)胞抗體適配子及構(gòu)成的生物芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體的說，涉及一種與巨細(xì)胞病毒具有特異性的巨細(xì)胞抗體適配子及構(gòu)成能在孕婦早期檢測是否感染巨細(xì)胞的生物芯片。
背景技術(shù)：
出生缺陷給家庭、國家和社會帶來極大的精神及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前，臨床對胎兒的先天性缺陷尚無有效的治療方法。出生缺陷疾病預(yù)防的方法中，孕前期的一級預(yù)防最為有效。 巨細(xì)胞是一組孕期感染的病原微生物，能通過胎盤或產(chǎn)道引起宮內(nèi)感染，導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎或胎兒生長遲緩、先天畸形、新生兒期感染及嬰、幼兒生長發(fā)育障礙。我國每年約有沈，000個巨細(xì)胞病毒感染患兒出生，平均每小時就有3個，因此，巨細(xì)胞病毒篩查是孕前感染性疾病檢查的重要內(nèi)容。但是，據(jù)統(tǒng)計資料顯示，我國目前診斷臨床普遍采用ELISA法、金標(biāo)法等檢測孕齡婦女血清TOX-IgG和CMV-IgG的水平，假陽性率較高，不能為臨床提供準(zhǔn)確的診斷依據(jù)。SELEX技術(shù)，又指數(shù)富集配體的系統(tǒng)進(jìn)化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)是20世紀(jì)90年代發(fā)展起來的一項組合化學(xué)技術(shù)。DNA 配體與RNA配體的篩選過程雖然有一點(diǎn)不同，但一般都包括以下幾個步驟(1)通過人工合成，建立dsDNA隨機(jī)序列庫。( 與靶物質(zhì)反應(yīng)，篩選出相互結(jié)合的靶物質(zhì)-核酸復(fù)合體。(3)將篩選到的蛋白-核酸復(fù)合物分離，得到的核酸進(jìn)行PCR擴(kuò)增，變性成單鏈以準(zhǔn)備進(jìn)行下一輪篩選，篩選的次數(shù)由文庫的類型和每次循環(huán)所得特異性序列的富集程度決定。(4)經(jīng)過若干輪篩選得到的、能高度結(jié)合靶物質(zhì)的核酸配體可以進(jìn)行測序并用于各種研究工作。具有庫容量大，靶分子范圍廣，親和力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用十分廣泛。與傳統(tǒng)檢測技術(shù)中的抗體相比，寡核苷酸適配子還具與靶分子結(jié)合力更強(qiáng)、穩(wěn)定性好、精確性高、重復(fù)性好、 可反復(fù)使用、可長期保存、可進(jìn)行精確的位點(diǎn)修飾、篩選期更短等優(yōu)勢，是一種高效、快速的檢測手段。近年來表面等離子體共振(surface ρlasmon resonance, SPR)技術(shù)因其具有實時監(jiān)測反應(yīng)動態(tài)過程、靈敏度較高、無需標(biāo)記、無背景干擾、成本低廉等特點(diǎn)，被認(rèn)為是生物分子檢測的理想檢測器件，已經(jīng)成為臨床實驗診斷領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。基本原理是一種物理光學(xué)現(xiàn)象。表面等離子體(SP)是沿著金屬和電介質(zhì)間界面?zhèn)鞑サ碾姶挪ㄐ纬傻?。?dāng)平行表面的偏振光以稱之為表面等離子體共振角入射在界面上，發(fā)生衰減全反射時，入射光被耦合入表面等離子體內(nèi)，光能大量被吸收，在這個角度上由于表面等離子體共振引起界面反射光顯著減少。由于SPR對金屬表面電介質(zhì)的折射率非常敏感，不同電介質(zhì)其表面等離子體共振角不同。同種電介質(zhì)，其附在金屬表面的量不同，則SPR的響應(yīng)強(qiáng)度不同。基于這種原理的生物傳感器通常將一種具特異識別屬性的分子即配體固定于金屬膜表面，監(jiān)控溶液中的被分析物與該配體的結(jié)合過程。在復(fù)合物形成或解離過程中，金屬膜表面溶液的折射率發(fā)生變化，隨即被SPR生物傳感器檢測出來。與傳統(tǒng)的ELISA檢測法相比，Sra生物傳感器具有如下顯著特點(diǎn)(1)實時檢測，能動態(tài)地監(jiān)測生物分子相互作用的全過程；(2)無需標(biāo)記樣品，保持了分子活性；(3)樣品需要量極少；(4)檢測過程方便快捷， 靈敏度高；( 應(yīng)用范圍非常廣泛；(6)高通量、高質(zhì)量的分析數(shù)據(jù)；(7)大多數(shù)情況下， 不需對樣品進(jìn)行預(yù)處理；(8)能檢測混濁的甚至不透明的樣品?，F(xiàn)在已廣泛用于物理量檢測，化學(xué)檢測與生物監(jiān)測。如果能篩選出巨細(xì)胞抗體的適配子，然后將其包被在生物芯片上，再結(jié)合sra生物傳感器進(jìn)行檢測，將非常的快捷和精確。

發(fā)明內(nèi)容
為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的目的之一在于提供一種與巨細(xì)胞病毒結(jié)合力更強(qiáng)、穩(wěn)定性好、精確性高、重復(fù)性好的巨細(xì)胞抗體適配子。本發(fā)明目的之二在于提供一種與巨細(xì)胞病毒具有特異性的巨細(xì)胞抗體適配子所構(gòu)成的生物芯片。本發(fā)明目的是這樣實現(xiàn)的一種與巨細(xì)胞病毒具有特異性的巨細(xì)胞抗體適配子， 其特征在于他具有SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 3的序列之一。
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SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 3的二級構(gòu)象依次分別為
權(quán)利要求
1.一種與巨細(xì)胞病毒具有特異性的巨細(xì)胞抗體適配子，其特征在于他具有SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 3的序列之一。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種與巨細(xì)胞病毒具有特異性的巨細(xì)胞抗體適配子，其特征在于SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 3的二級構(gòu)象依次分別為.G-A-,
3.根據(jù)權(quán)利要求3所述生物芯片，其特征在于所述金膜(2)在包被適配子前，先預(yù)處理，即在1. Omol / L NaOH中浸泡清洗20 min，取出后用去離子水清洗3次，然后放入 Piranha溶液中處理15 min，取出后立即投入無水乙醇中浸泡5 min，氮?dú)獯蹈伞?br> 4.根據(jù)權(quán)利要求3所述生物芯片，其特征在于所述適配子包被在金膜(2)上之前，先預(yù)處理，即先將適配子溶解到PBS緩沖液，95°C變性3 min，迅速冰浴2 min，隨后巰基法進(jìn)行固定。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種與弓形蟲病毒具有特異性的弓形蟲抗體適配子，同時利用該弓形蟲抗體適配子構(gòu)成的的生物芯片。本發(fā)明與傳統(tǒng)檢測技術(shù)中的抗體相比，寡核苷酸適配子還具與靶分子結(jié)合力更強(qiáng)、穩(wěn)定性好、精確性高、重復(fù)性好、可反復(fù)使用、可長期保存、可進(jìn)行精確的位點(diǎn)修飾、篩選期更短等優(yōu)勢；所得到的生物芯片放入SPR生物傳感器檢測，能實現(xiàn)(1)實時檢測、(2)無需標(biāo)記樣品、(3)樣品需要量極少、(4)檢測過程方便快捷,靈敏度高、(5)應(yīng)用范圍非常廣泛、(6)高通量、(7)大多數(shù)情況下、(8)能檢測混濁的甚至不透明的樣品。
文檔編號C12Q1/68GK102242123SQ201110153338
公開日2011年11月16日 申請日期2011年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月9日
發(fā)明者劉星, 姚春艷, 府偉靈 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院