專利名稱：多潛能細(xì)胞的處理的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及處理多潛能細(xì)胞的方法，其中通過用GSK-;3B酶活性抑制劑處理多潛 能細(xì)胞，該多潛能細(xì)胞可在培養(yǎng)物中有效擴(kuò)增和分化。
背景技術(shù)：
由于I型糖尿病細(xì)胞替代療法的進(jìn)步和可移植胰島的不足，人們已重點(diǎn)關(guān)注于開 發(fā)適于移植的胰島素生成細(xì)胞或β細(xì)胞來源。一種方法是從多潛能細(xì)胞(例如胚胎干細(xì) 胞)產(chǎn)生功能性β細(xì)胞。在脊椎動(dòng)物的胚胎發(fā)育中，多能干細(xì)胞可在稱為原腸胚形成的過程中產(chǎn)生包括三 個(gè)胚層(外胚層、中胚層和內(nèi)胚層)的一組細(xì)胞。諸如例如甲狀腺、胸腺、胰腺、腸和肝臟之 類的組織將從內(nèi)胚層，經(jīng)由中間階段發(fā)育而來。該過程中的中間階段是形成定形內(nèi)胚層。定 形內(nèi)胚層細(xì)胞可表達(dá)多種標(biāo)志物，例如HNF-3 3、GATA-4、Mixll、CXCR4和S0X-17。定形內(nèi)胚層分化成胰腺內(nèi)胚層導(dǎo)致形成胰腺。胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞可表達(dá)胰-十二 指腸同源盒基因PDX-1。在不存在PDX-I時(shí)，胰腺形成腹胰芽和背胰芽后不再發(fā)育。因此， PDX-I的表達(dá)標(biāo)志著胰腺器官形成中的關(guān)鍵步驟。除了其他細(xì)胞類型，成熟的胰腺還包括外 分泌組織和內(nèi)分泌組織。外分泌和內(nèi)分泌組織來自胰腺內(nèi)胚層的分化。產(chǎn)生足夠量的細(xì)胞物質(zhì)用于移植需要可在培養(yǎng)物中有效擴(kuò)增并有效分化成所關(guān) 注的組織(例如功能性β細(xì)胞)的細(xì)胞物質(zhì)來源。當(dāng)前培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞的方法很復(fù)雜，它們需要使用外源因子或化學(xué)成分確定的培 養(yǎng)基，以便細(xì)胞在不喪失其多潛能性的情況下分化。此外，胚胎干細(xì)胞的分化通常導(dǎo)致細(xì)胞 在培養(yǎng)物中擴(kuò)增減少。例如，Cheon等人(BioR印rod DOI :10. 1095/biolreprod. 105. 046870,2005 年 10
月19日)公開了一種無飼養(yǎng)細(xì)胞的無血清培養(yǎng)系統(tǒng)，其中胚胎干細(xì)胞維持在補(bǔ)充有能引發(fā) 胚胎干細(xì)胞自我更新的不同生長(zhǎng)因子的未經(jīng)調(diào)理的血清替代(SR)培養(yǎng)基中。又如，US20050233446公開了一種用于培養(yǎng)干細(xì)胞，包括未分化的靈長(zhǎng)類原始干細(xì) 胞的限定培養(yǎng)基。在溶液中，此培養(yǎng)基較于在培養(yǎng)的干細(xì)胞基本上是等滲的。在給定的培養(yǎng) 物中，特定的培養(yǎng)基包含基礎(chǔ)培養(yǎng)基和各為一定量的bFGF、胰島素和抗壞血酸，所述bFGF、 胰島素和抗壞血酸為支持胚性干細(xì)胞進(jìn)行基本上非分化性生長(zhǎng)所必需。又如，W02005086845公開了維持未分化干細(xì)胞的方法，所述方法包括使干細(xì)胞暴 露于量足以將細(xì)胞維持在未分化狀態(tài)的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β (TGFi3)蛋白家族的成員、成纖 維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)蛋白家族的成員或煙酰胺(NIC)，維持足夠的時(shí)間以實(shí)現(xiàn)所需的結(jié)^ ο已知糖原合成酶激酶-3(GSK-3)的抑制劑可促進(jìn)成體干細(xì)胞的增殖和擴(kuò)增。例如， Tateishi 等人(Biochemical and Biophysical ResearchCommunications (2007) 352 635)顯示，抑制GSK-3可增強(qiáng)從新生兒或成人心臟回收并具有間質(zhì)特征的人心臟干細(xì)胞 (hCSC)的生長(zhǎng)和存活。
例如，Rulifson等人(PNAS 144，6247-6252，(2007))聲稱 “Wnt 信號(hào)傳導(dǎo)可刺激
胰島β細(xì)胞增殖”。又如，W02007016485報(bào)道，添加GSK-3抑制劑至非胚胎干細(xì)胞(包括專能 (multipotent)成體祖細(xì)胞)可導(dǎo)致在擴(kuò)增期間維持多潛能表型，并導(dǎo)致更強(qiáng)的分化響應(yīng)。又如，US2006030042利用通過添加Wnt或GSK-3的小分子抑制劑來抑制GSK-3的 方法，來在不使用飼養(yǎng)細(xì)胞層的情況下維持胚胎干細(xì)胞。又如，W02006026473報(bào)道添加GSKIB抑制劑，通過轉(zhuǎn)錄激活c_myc和穩(wěn)定c_myc 蛋白來使多潛能細(xì)胞保持穩(wěn)定。又如，W02006100490報(bào)道使用含有GSK-3抑制劑和gpl30激動(dòng)劑的干細(xì)胞培養(yǎng)基 來維持多能干細(xì)胞(包括小鼠或人胚胎干細(xì)胞)的自我更新群體。又如，Sato等人(Nature Medicine (2004) 10 :55-63)表明，用特異性藥理性化合 物抑制GSK-3可維持胚胎干細(xì)胞的未分化表型以及維持多潛能狀態(tài)特異性轉(zhuǎn)錄因子例如 0ct-3/4、Rex-I 禾口 Nanog 的表達(dá)。又如，Maurer 等人(Journal of Proteome Research (2007) 6 :1198-1208)表明，用 GSK-3抑制劑處理成體神經(jīng)元干細(xì)胞可顯示出神經(jīng)元分化的增強(qiáng)，特別是通過促進(jìn)β-連 環(huán)蛋白靶基因的轉(zhuǎn)錄和使凋亡降低。又如，Gregory 等人(Annals of the New York Academy of Sciences (2005) 1049 97-106)報(bào)道，GSK-3B的抑制劑可增強(qiáng)體外成骨作用。又 如，F(xiàn)eng 等 人(Biochemical and Biophysical Research Communcations (2004) 324 :1333-1339)表明，胚胎干細(xì)胞向造血分化與Wnt/ β -連環(huán)蛋白 途徑的下調(diào)相關(guān)，其中Wnt是GSK3的天然抑制劑。因此，仍然非常需要開發(fā)用于處理多能干細(xì)胞而使得多能干細(xì)胞可被擴(kuò)增以滿足 當(dāng)前臨床需要，同時(shí)保持分化為胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞、胰腺激素表達(dá)細(xì)胞或胰腺激素分泌細(xì)胞 的潛能的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了通過用GSK-;3B酶活性抑制劑處理多潛能細(xì)胞而使多潛能細(xì)胞擴(kuò)增 和分化的方法。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了使多潛能細(xì)胞擴(kuò)增和分化的方法，該方法包括如 下步驟a.培養(yǎng)多潛能細(xì)胞，以及b.用GSKIB酶活性抑制劑處理所述多潛能細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施例中，所述多潛能細(xì)胞分化成可表達(dá)定形內(nèi)胚層譜系特征性標(biāo)志物的 細(xì)胞。多潛能細(xì)胞可以是人胚胎干細(xì)胞，或者它們可以是根據(jù)60/913475中公開的方法 衍生自人胚胎干細(xì)胞的表達(dá)多潛能標(biāo)志物的細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施例中，GSK-3B酶活性抑制劑是式(I)化合物
1權(quán)利要求
1.一種使多潛能細(xì)胞擴(kuò)增和分化的方法，所述方法包括如下步驟a.培養(yǎng)多潛能細(xì)胞，以及b.用GSK-;3B酶活性抑制劑處理所述多潛能細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述多潛能細(xì)胞是胚胎干細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述多潛能細(xì)胞是衍生自胚胎干細(xì)胞的表達(dá)多潛 能標(biāo)志物的細(xì)胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述表達(dá)多潛能標(biāo)志物的細(xì)胞可表達(dá)至少一種 選自如下的多潛能標(biāo)志物ABCG2、cripto、R)xD3、連接蛋白43、連接蛋白45、0ct4、S0X-2、 Nanog、hTERT、UTF-1、ZFP42、SSEA-3、SSEA-4、Tra 1-60 和 Tra 1-81。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述多潛能細(xì)胞分化成表達(dá)定形內(nèi)胚層譜系特征 性標(biāo)志物的細(xì)胞。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中將所述多潛能細(xì)胞用GSKjB酶活性抑制劑處理約 1至約72小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中將所述多潛能細(xì)胞用GSKjB酶活性抑制劑處理約 12至約48小時(shí)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中將所述多潛能細(xì)胞用GSKjB酶活性抑制劑處理約 48小時(shí)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述GSKIB酶活性抑制劑以約IOOnM至約100μ M的濃度使用。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述GSK-;3B酶活性抑制劑以約1μ M至約10 μ M 的濃度使用。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述GSK-;3B酶活性抑制劑以約ΙΟμΜ的濃度使用。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述GSKjB酶活性抑制劑是式(I)化合物
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中R1是苯基；取代的苯基，其中所述苯基取代基選 自Cp5烷基、鹵素、硝基、三氟甲基和腈；或嘧啶基。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中&是苯基；取代的苯基，其中所述苯基取代基選 自CV5烷基、鹵素、硝基、三氟甲基和腈；或任選被Cy烷基取代的嘧啶基，并且R1和&中的 至少一者是嘧啶基。
15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中民是氫；2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基；CV5 烷氧羰基；芳氧羰基；芳基CV5烷氧羰基；芳基。烷基；取代的芳基CV5烷基，其中一個(gè)或 多個(gè)芳基取代基獨(dú)立地選自Cp5烷基、C"烷氧基、鹵素、氨基、CV5烷基氨基和二 Cp5烷基氨基；鄰苯二甲酰亞胺基CV5烷基；氨基C"烷基；二氨基CV5烷基；琥珀酰亞胺基C"烷基； (V5烷基羰基；芳基羰基；CV5烷基羰基Ci_5烷基和芳氧羰基Ci_5烷基。
16.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中R4是-(A)-(CH2)q-X。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中A是乙烯撐基、亞乙炔基或
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中&選自氫、CV5烷基、苯基和苯基CV5烷基。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中q為0-9。
20.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中X選自氫；羥基；乙烯基；取代的乙烯基，其中 一個(gè)或多個(gè)乙烯基取代基各自獨(dú)立地選自氟、溴、氯和碘；乙炔基；取代的乙炔基，其中所 述乙炔基取代基選自氟、溴、氯和碘；Cp5烷基；取代的(V5烷基，其中一個(gè)或多個(gè)烷基取代 基各自選自Ci_5烷氧基、三鹵代烷基、鄰苯二甲酰亞胺基和氨基；C3_7環(huán)烷基；Ci_5烷氧基；取 代的(V5烷氧基，其中所述烷基取代基選自鄰苯二甲酰亞胺基和氨基；鄰苯二甲酰亞胺基 氧基；苯氧基；取代的苯氧基，其中一個(gè)或多個(gè)苯基取代基各自選自(V5烷基、鹵素和Cp5烷 氧基；苯基；取代的苯基，其中一個(gè)或多個(gè)苯基取代基各自選自Cp5烷基、鹵素和C"烷氧 基；芳基C"烷基；取代的芳基Cp5烷基，其中一個(gè)或多個(gè)芳基取代基各自選自Cp5烷基、鹵 素和Ci_5烷氧基；芳氧基CV5烷基氨基；CV5烷基氨基；二 CV5烷基氨基；腈；肟；芐氧基亞 胺基；Cp5烷氧基亞胺基；鄰苯二甲酰亞胺基；琥珀酰亞胺基；烷基羰氧基；苯基羰氧基； 取代的苯基羰氧基，其中一個(gè)或多個(gè)苯基取代基各自選自Cu烷基、鹵素和CV5烷氧基；苯 基Cp5烷基羰氧基，其中一個(gè)或多個(gè)苯基取代基各自選自CV5烷基、鹵素和Cp5烷氧基；氨基 羰氧基；Cp5烷基氨基羰氧基；二 (V5烷基氨基羰氧基；Cp5烷氧羰氧基；取代的(V5烷氧羰 氧基，其中一個(gè)或多個(gè)烷基取代基各自選自甲基、乙基、異丙基和己基；苯氧基羰氧基；取 代的苯氧基羰氧基，其中一個(gè)或多個(gè)苯基取代基各自選自CV5烷基、C1^5烷氧基和鹵素；(V5 烷硫基；取代的(V5烷硫基，其中所述烷基取代基選自羥基和鄰苯二甲酰亞胺基；Cp5烷基 磺?；?；苯基磺?；蝗〈谋交酋；渲幸粋€(gè)或多個(gè)苯基取代基各自選自溴、氟、氯、C1-5烷氧基和三氟甲基；前提條件是，如果A是
21.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中R1是取代的苯基并且&是嘧啶-3-基。
22.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中R1是4-氟苯基。
23.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中民是氫、芳基Cp5烷基或取代的芳基Cp5烷基。
24.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中民是氫或苯基Cp5烷基。
25.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中A是亞乙炔基且q為0_5。
26.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中X是琥珀酰亞胺基、羥基、甲基、苯基、C1^5烷基 磺?；?、c3_6環(huán)烷基、Ci_5烷基羰氧基、Ci_5烷氧基、苯基羰氧基、Ci_5烷基氨基、二 Ci_5烷基氨 基或月青。
27.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述式I化合物是4-(4-氟苯基)-2-(4-羥基 丁炔-1-基)-1-(3-苯丙基)-5" (4-吡啶基)咪唑。
28.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述GSKjB酶活性抑制劑是式(II)化合物
29.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R選自Ra、-(V8烷基-Ra、_C2_8烯基-Ra、-Q-8炔基-Ra和氰基。
30.根據(jù)權(quán)利要求四所述的方法，其中Ra選自環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基。
31.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R1選自氫、-CV8烷基-R5、-C2_8烯基-R5、-C2_8 炔基-R5、-C (0) - (C1^8)烷基-R9、-C (0)-芳基-R8、-C (0) -0- (C1^8)烷基-R9、-C (0) -0-芳 基-R8、-C (0) -NH ((V8 烷基-R9)、-C (0) -NH (芳基-R8)、-C (0) -N (C1^8 烷基-R9) 2、-SO2- (C1^8) 烷基-R9、-SO2-芳基-R8、-環(huán)烷基-R6、-雜環(huán)基-R6、-芳基-R6和-雜芳基-R6 ；其中雜環(huán) 基和雜芳基通過雜環(huán)基或雜芳基環(huán)碳原子與1位氮雜吲哚氮原子連接。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中R5是1至2個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取 代基氫、-O-(CV8)烷基、-O-(C1^8)烷基-OH、-O-(C1^8)烷基-O-(Cb)烷基、-O-(C1^8) 烷基-NH2、-O-(Ch)烷基-MKCV8 烷基)、-O-(Cb)烷基-Nd8 烷基)2、-O-(CV8)烷 基-S-(CV8)烷基、-O-(Cp8)烷基-SO2-(Ch8)烷基、-O-(CV8)烷基-SO2-NH2、-O-(Cp8)烷 基-SO2-MKCV8 烷基)、-O-(CV8)烷基-SO2-N(。卜8 烷基)2、-O-C(O) H、-O-C(O)-(C1^8)烷 基、-O-C(0) -NH2、-O-C(0) -NH(C1^8 烷基)、-O-C(0) -N(C1^8 烷基)2、_0_(C1^8)烷基-C(0) H、-O-(C1-S)烷基-C(O)-(CV8)烷基、-O-(C1-S)烷基-CO2H、-O-(CB)烷基-C(O)-O-(CV8) 烷基、-O-(C1^8)烷基-C(O)-NH2、-O-(C1^8)烷基-(:(0)-^((^8 烷基)、-O-(Ch8)烷 基-C(O)-N((V8 烷基)2、-C(O)H、-C(O)-(C1^8)烷基、-CO2H, -C(O)-O-(C1^8)烷基、-C (0)-NH2, -C(NH)-NH2, -C(O)-NH(C1^8 烷基)、-C(O)-N(C1^8 烷基)2、_SH、-S-(C1^8)烷 基、-S-(C1-S)燒基-S-(C1-s)燒基、(C^8)燒基-0-((^-8)燒基、(C^8)燒基-0-((^-8) 烷基-OH、-S- (Cp8)烷基-O- (CV8)烷基-NH2、-S" (Cp8)烷基-0- (C1^8)烷基-NH (C1^8 烷 基)、-S- (U 烷基-0- (CV8)烷基-N ((V8 烷基)2、-S- (CV8)烷基-NH ((V8 烷基)、-SO2- (CV8) 烷基、-SO2-NH2、-SO2-NH ((V8 烷基)、-SO2-N (C1^8 烷基)2、-N-R7、氰基、(鹵素)“、羥基、硝基、 氧代基、-環(huán)烷基-R6、-雜環(huán)基-R6、-芳基-R6和-雜芳基-R6。
33.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中R6是1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的與碳 或氮原子連接的取代基氫、-CV8烷基、-c2_8烯基、-c2_8炔基、-C(O)H, -C(O)-(CV8)烷 基、-C02H、-C (0) -ο- (C1-s)烷基、-C (0) -NH2、-C (NH) -NH2、-C (0) -NH (C1^8 烷基)、-C (0) -N (C1^8) 烷基)2、-SO2-(C1^8)烷基、-SO2-NH2、-SO2-NH(Cb 烷基)、-SO2-N((^8 烷基)2、-(C1^8)烷基-N-R7、-((V8)烷基 _(鹵素)n -(C1^8)烷基-0H、-芳基-R8、-((V8)烷基-芳基-R8 和-(C1J烷基-雜芳基-R8 ；前提條件是，當(dāng)R6與碳原子連接時(shí)，R6進(jìn)一步選自-C"烷氧 基、"(C1^8)烷氧基_(鹵素)i_3、_SH、-S-(CV8)烷基、-N-R7、氰基、鹵素、羥基、硝基、氧代基 和-雜芳基-R8。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中R7是2個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基 S、"C1^ 焼基、_C2_8 烯基、_C2_8 炔基、-(Cb)烷基 H-(CB)烷基-O-(CV8)烷基、-(Cb) 烷基-NH2、- (CV8)烷基-NH ((V8 烷基)、-(CV8)烷基-N (C1^8 烷基)2、- (CV8)烷基-S- (C1^8) 烷基、-C(O) H、-C(O)-(CV8)烷基、-C(O)-O-(CV8)烷基、-C (O)-NH2、-C(O)-賺“燒 基)、-C (O)-N((V8 烷基)2、-SO2-(C1^8)烷基、-SO2-NH2、-SO2-NH(Cp8 烷基)、-SO2-N((^8 烷 基)2、-C(N)-NH2、_ 環(huán)烷基-R8,-(C1^8)烷基-雜環(huán)基-R8,-芳基-R8,-(C1^8)烷基-芳基-R8 和-(C1J烷基-雜芳基-R8。
35.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中R8是1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的與碳或氮 原子連接的取代基氫、-Cp8烷基、-((V8)烷基_(鹵素)和-(C1J烷基-0H;前提條件 是，當(dāng)R8與碳原子連接時(shí)，R8進(jìn)一步選自-C^8烷氧基、-ΝΗ2、-ΝΗ((ν8烷基)、-N^8烷基)2、 氰基、鹵素、-(C1J烷氧基_(鹵素)、羥基和硝基。
36.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中R9是1至2個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基 氫、-C^8烷氧基、-NH2CNHd8烷基)、-NOV8烷基)2、氰基、(鹵素)…羥基和硝基。
37.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R2是1個(gè)選自如下基團(tuán)的與碳或氮原子 連接的取代基氫、-C1^8 烷基-R5、-C2_8 烯基-R5、-C2_8 炔基-R5、-C (0) H、-C (0) - (C1^8) 烷基-R9、-C(O)-NH2、-C(O)-MKCV8 烷基-R9)、-C(O) -N (C1^8 烷基-R9) 2、-C(O) -NH (芳 基-R8)、-C(O)-環(huán)烷基-R8、-C(O)-雜環(huán)基-R8、-C(O)-芳基-R8、-C(O)-雜芳 基-R8、-CO2H, -C(O)-O-(C1-S)烷基-R9、-C(O)-O-芳基-R8、-SO2-(C1^8)烷基-R9、-SO2-芳 基-R8、-環(huán)烷基-R6、-芳基-R6和-((V8)烷基-N-R7 ；前提條件是，當(dāng)R2與碳原子連接時(shí)， R2進(jìn)一步選自-C"烷氧基-R5、-N-R7、氰基、鹵素、羥基、硝基、氧代基、-雜環(huán)基-R6和-雜 芳基-R6。
38.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R3是1至3個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的與 碳原子連接的取代基氫、-CV8烷基-R10、-C2_8烯基-R10、-C2_8炔基-R10、-CV8烷氧 基-R10、-C (0) H、-C (0) - (U 烷基-R9、-C (0) -NH2, -C (0) -NH (C1^8 烷基-R9)、-C (0) -N (C1^8 烷基-R9) 2、-C (0)-環(huán)烷基-R8、-C (0)-雜環(huán)基-R8、-C (0)-芳基-R8、-C (0)-雜芳基-R8、-C ( NH) -NH2, -CO2H, -C (0) -0- (C1^8)烷基-R9、-C (0) -0-芳基-R8、-SO2- (C1^8)烷基-R9、-SO2-芳 基-R8、-N-R7、氰基、鹵素、羥基、硝基、-環(huán)烷基-R8、-雜環(huán)基-R8、-芳基-R8和-雜芳基-R8。
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中Rltl是1至2個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基 氫、-ΝΗ2、-ΝΗ((ν8烷基)、-Ν((^_8烷基)2、氰基、(鹵素)μ、羥基、硝基和氧代基。
40.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R4是1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的與 碳原子連接的取代基氫、-CV8烷基-R10、-C2_8烯基-R10、-C2_8炔基-R10、-CV8烷氧 基-R1。、-C (0) H、-C (0) - (CV8)烷基-R9、-C (0) -NH2、-C (0) -NH (C1^8 烷基-R9)、-C (0) -N (C1^8 烷 基-R9) 2、_C (0)-環(huán)烷基-R8、-C (0)-雜環(huán)基-R8、-C (0)-芳基-R8、-C (0)-雜芳基-R8、-C (NH) -NH2,-CO2H,-C (0) -0- (Cb)烷基-R9、-C (0) -0-芳基-R8、-SH、_S- (C1^8)烷基-Rici、-SO2- (C1^8) 烷基-R9、-SO2-芳基-R8、-SO2-NH2, -SO2-NH (CB 烷基-R9)、-SO2-N (Cb 烷基-R9) 2、-N-R7、氰基、鹵素、羥基、硝基、-環(huán)烷基-R8、-雜環(huán)基-R8、-芳基-R8和-雜芳基-R8。
41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中Rltl是1至2個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基 氫、-ΝΗ2、-ΝΗ((ν8烷基)、-Ν((^8烷基)2、氰基、(鹵素)μ、羥基、硝基和氧代基。
42.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中Y和Z獨(dú)立地選自0、S、(H、0H)和(H、H)；前提 條件是，Y和Z其中一者是0而另一者選自0、S、(H、0H)和(H、H)；以及其可藥用鹽。
43.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中R選自Ra、-(V4烷基-Ra、_C2_4烯基-Ra、-Q-4炔 基-Ra和氰基。
44.根據(jù)權(quán)利要求四所述的方法，其中Ra選自雜環(huán)基、芳基和雜芳基。
45.根據(jù)權(quán)利要求四所述的方法，Ra選自二氫-吡喃基、苯基、萘基、噻吩基、吡咯基、 咪唑基、吡唑基、吡啶基、氮雜吲哚基、吲唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、二苯并呋喃基和二 苯并噻吩基。
46.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R1選自氫、-CV4烷基-R5、-C2_4烯基-R5、-C2_4 炔基-R5、-C (0) - (Ch)燒基-R9、-C (0)-芳基-R8、-C (0) _0_ (C1^4)烷基-R9、-C (0) _0_ 芳 基-R8、-C (0) -NH ((V4 烷基-R9)、-C (0) -NH (芳基-R8)、-C (0) -N (C1^4 烷基-R9) 2、-SO2- (C1^4) 烷基-R9、-SO2-芳基-R8、-環(huán)烷基-R6、-雜環(huán)基-R6、-芳基-R6和-雜芳基-R6 ；其中雜環(huán) 基和雜芳基通過雜環(huán)基或雜芳基環(huán)碳原子與1位上的氮雜吲哚氮原子連接。
47.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R1選自氫、-CV4烷基-R5、-芳基-R6和-雜芳 基-R6 ；其中雜芳基通過雜芳基環(huán)碳原子與1位上的氮雜吲哚氮原子連接。
48.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R1選自氫、-CV4烷基-R5和-萘基-R6。
49.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中R5是1至2個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取 代基氫、-O-(CV4)烷基、-O-(Ch)烷基 _0H、-O-(C1^4)烷基-O-(Ch)烷基、"O-(C1^4) 烷基-NH2、-O-(Ch)烷基-NH((V4 烷基)、-O-(C1^4)烷基-N(C1^4 烷基)2、-O-(CV4)烷 基-S-(CV4)烷基、-O-(Cp4)烷基-SO2-(Ch)烷基、-O-(CV4)烷基-SO2-NH2、-O-(Cp4)烷 基-SO2-MKCh 烷基)、-O-(CV4)烷基 _S02_N((^4 烷基)2、-O-C(O) H、-O-C(O)-(C1^4)烷 基、-O-C(0) -NH2、-O-C(0) -NH(C1^4 烷基)、-O-C(0) -N(C1^4 烷基)2、_0_(C1^4)烷基-C(0) H、-O-(Ch)烷基-C(O)-(Ch)烷基、"O-(C1^4)烷基-CO2H、-O-(C1^4)烷基-C(0) _0_OV4) 烷基、-O-(Ch)烷基-C(O)-NH2、-O-(C1^4)烷基-C(O) -NH (C1^4 烷基)、-O-(Ch)烷 基-C(O)-N((V4 烷基)2、-C(O)H、-C(O)-(C1^4)烷基、-CO2H, -C(O)-O-(C1^4)烷基、-C (0)-NH2, -C(NH)-NH2, -C(O)-NH(C1^4 烷基)、-C(O)-N^4 烷基)2、_SH、-S-(C1^4)烷 基、-S-(Cp4)焼基-S-(Cu )燒基、-S-(Ch)燒基-O-(Ch)燒基、"S" (C1^4)燒基-O-(CV4) 烷基-OH、-S- (Ch)烷基-0- (CV4)烷基-NH2、_S_ (C1^4)烷基 _0_ (C1^4)烷基-NH (C1^4 烷 基)、-S- (Ch)烷基-0- (CV4)烷基-N (C1^4 烷基)2、_S_ (C1^4)烷基-NH (C1^4 烷基)、-SO2- (C1^4) 烷基、-SO2-NH2、-SO2-NH ((V4 烷基)、-SO2-N (C1^4 烷基)2、-N-R7、氰基、(鹵素)“、羥基、硝基、 氧代基、-環(huán)烷基-R6、-雜環(huán)基-R6、-芳基-R6和-雜芳基-R6。
50.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中R5是1至2個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基 氫、-O-(C1^4)烷基、-N-R7、羥基和-雜芳基-R6。
51.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中R5是1至2個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基 氫、-O-(Cy)烷基、-N-R7、羥基、-咪唑基-R6、-三唑基-R6和-四唑基-R6。
52.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中R6是1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的與碳或氮原 子連接的取代基氫、-(V4烷基、_C2_4烯基、_C2_4炔基、-C(O)H、-C(O)-(CV4)烷 基、-C02H、-C (0) -ο- (Ch)烷基、-C (0) -NH2、-C (NH) -NH2、-C (0) -NH (C1^4 烷基)、-C (0) -N (C1^4) 烷基)2、-SO2-(Ch)烷基、-SO2-NH2、-SO2-NH(CH 烷基)、-SO2-N((^4 烷基)2、-(C1^4)烷 基-N-R7、-((V4)烷基-(鹵素)n -(C1^4)烷基-0H、-芳基-R8、-((V4)烷基-芳基-R8 和-(Cy)烷基-雜芳基-R8 ；前提條件是，當(dāng)R6與碳原子連接時(shí)，R6進(jìn)一步選自-Cy烷氧 基、"(C1^4)烷氧基_(鹵素)i_3、_SH、-S-(CV4)烷基、-N-R7、氰基、鹵素、羥基、硝基、氧代基 和-雜芳基-R8。
53.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中R6是氫。
54.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中R7是2個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基 氫、- "Ci-4 焼基、_C2—4 烯基、_C2_4炔基、-(CH)烷基H-(CH)烷基_0_(C 1—4)焼基、~ (Ch) 烷基-NH2、- (Ch)烷基-NH (C1^4 烷基)、-(C1^4)烷基-N (C1^4 烷基)2、- (C1^4)烷基 _S_ (C1^4) 烷基、-C(O) H、-C(O)-(CV4)烷基、-C(O)-O-(Ch)烷基、-C (O)-NH2、-C (O)-NH (C"燒 基)、-C (O)-N((V4 烷基)2、-SO2-(Ch)烷基、-SO2-NH2、-SO2-MKCH 烷基)、-SO2-MCH 烷 基)2、-C(N)-NH2、_環(huán)烷基-R8A-(Ch)烷基-雜環(huán)基-R8,-芳基-R8,-(C1^4)烷基-芳基-R8 和U烷基-雜芳基-R8。
55.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中R7是2個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基 氫、-Cp4 烷基、-C(O)H、-C(O)-(Ch)烷基、"C(O)-O-(C1^4)烷基、-SO2-NH2, -SO2-NH((^4 烷 基)和-SO2-N((V4 烷基)2。
56.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中R8是1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的與碳或氮 原子連接的取代基氧、-Ch烷基、-((V4)烷基_(鹵素)Η和-(CH)烷基-0H;前提條件 是，當(dāng)R8與碳原子連接時(shí)，R8進(jìn)一步選自-Ch烷氧基、-ΝΗ2、_ΝΗ((ν4烷基)、-N((^4烷基)2、 氰基、鹵素、-(Cy)烷氧基_(鹵素)、羥基和硝基。
57.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中R8是氫。
58.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中R9是1至2個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基 氫、-C^4烷氧基、-NHy-NHOV4烷基)、-NOV4烷基)2、氰基、(鹵素)H、羥基和硝基。
59.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中R9是氫。
60.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R2是1個(gè)選自如下基團(tuán)的與碳或氮原子 連接的取代基氫、-Ch 烷基-R5、_C2_4 烯基-R5、-C2_4 炔基-R5、-C (0) H、-C (0) - (C1^4) 烷基-R9、-C(O)-NH2、-C(O)-MKCV4 烷基-R9)、-C(O) -N^4 烷基-R9) 2、-C(O) -NH (芳 基-R8)、-C(O)-環(huán)烷基-R8、-C(O)-雜環(huán)基-R8、-C(O)-芳基-R8、-C(O)-雜芳 基-R8、-CO2H, -C(O)-O-(Ch)烷基-妒、-C(O)-O-芳基-R8、-SO2-(C1^4)烷基-R9、-SO2-芳 基-R8、-環(huán)烷基-R6、-芳基-R6和-((V4)烷基-N-R7 ；前提條件是，當(dāng)R2與碳原子連接時(shí)， R2進(jìn)一步選自-Ch烷氧基-R5、-N-R7、氰基、鹵素、羥基、硝基、氧代基、-雜環(huán)基-R6和-雜 芳基-R6。
61.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中R2是1個(gè)選自如下基團(tuán)的與碳或氮原子連接的 取代基氫、-Ch 烷基-R5、-C2_4 烯基-R5、-C2_4 炔基-R5A-CO2^-C(O)-O-(CV4)烷基-R9、-環(huán) 烷基-R6、-芳基-R6和-((V4)烷基-N-R7 ；前提條件是，當(dāng)R2與氮原子連接時(shí)，不形成季銨 鹽；并且，前提條件是，當(dāng)R2與碳原子連接時(shí)，R2進(jìn)一步選自-Cy烷氧基-R5、-N-R7、氰基、 鹵素、羥基、硝基、氧代基、-雜環(huán)基-R6和-雜芳基-R6。
62.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R2是1個(gè)選自如下基團(tuán)的與碳或氮原子連接的 取代基氫、-Cy烷基-R5和-芳基-R6 ；前提條件是，當(dāng)R2與氮原子連接時(shí)，不形成季銨鹽； 并且，前提條件是，當(dāng)R2與碳原子連接時(shí)，R2進(jìn)一步選自-N-R7、鹵素、羥基和-雜芳基-R6。
63.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R3是1至3個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的與 碳原子連接的取代基氫、-Ch烷基-R10、_C2_4烯基-R10、_C2_4炔基-R10、-C1^4烷氧 基-R10、-C (0) H、-C (0) - (Ch)烷基-R9、-C (0) -NH2, -C (0) -NH (C1^4 烷基-R9)、-C (0) -N (C1^4 烷基-R9) 2、-C (0)-環(huán)烷基-R8、-C (0)-雜環(huán)基-R8、-C (0)-芳基-R8、-C (0)-雜芳基-R8、-C ( NH) -NH2, -CO2H, -C (0) -0- (C1^4)烷基-R9、-C (0) -0-芳基-R8、-SO2- (C1^8)烷基-R9、-SO2-芳 基-R8、-N-R7, -((V4)烷基-N-R7、氰基、鹵素、羥基、硝基、-環(huán)烷基-R8、-雜環(huán)基-R8、-芳 基-R8和-雜芳基-R8。
64.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R3是1個(gè)選自如下基團(tuán)的與碳原子連接 的取代基氫、-Ch 烷基-R1(l、_C2_4 烯基-R1(l、-C2_4 炔基-R1(l、-C1^4 烷氧基-R1(l、-C (0) H、-CO2H, -NH2、-NH ((V4烷基)、-N ((^4烷基)2、氰基、鹵素、羥基和硝基。
65.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中R3是1個(gè)選自如下基團(tuán)的與碳原子連接的取代 基氫、-Ch烷基-R10、-NH2, .(CH烷基)、-N(C1^4烷基)2、鹵素和羥基。
66.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R4是1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的與 碳原子連接的取代基氫、-Ch烷基-R10、_C2_4烯基-R10、_C2_4炔基-R10、-C1^4烷氧 基-R1。、-C (0) H、-C (0) - (CV4)烷基-R9、-C (0) _NH2、-C (0) -NH (C1^4 烷基-R9)、-C (0) -N (C1^4 烷 基-R9) 2、_C (0)-環(huán)烷基-R8、-C (0)-雜環(huán)基-R8、-C (0)-芳基-R8、-C (0)-雜芳基-R8、-C (NH) -NH2,-CO2H,-C (0) -0- (Ch)烷基-R9、-C (0) _0_ 芳基-R8、-SH、_S- (C1^4)烷基-Rici、-SO2- (C1^4) 烷基-R9、-SO2-芳基-R8、-SO2-NH2, -SO2-MKCH 烷基-R9)、-SO2-MCh 烷基-R9) 2、-N-R7、氰 基、鹵素、羥基、硝基、-環(huán)烷基-R8、-雜環(huán)基-R8、-芳基-R8和-雜芳基-R8。
67.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R4是1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的與碳原子 連接的取代基氧、-C1^4 烷基-R1(l、_C2_4 烯基-R1(l、_C2_4 炔基-R1(l、-Ch 烷氧基-R1(l、-C(O) H、-CO2H, -NH2, -NH((V4烷基)、-N^4烷基)2、氰基、鹵素、羥基、硝基、-環(huán)烷基、-雜環(huán) 基、-芳基和-雜芳基。
68.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R4是1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的與碳原子 連接的取代基氫、CV4烷基-R1(l、Ch烷氧基-R1(l、-NH2, -NHd4烷基)、_N((V4烷基)2、鹵 素和羥基。
69.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中R4是1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的與碳原子 連接的取代基氫、CV4烷基-Rltl、Ci_4烷氧基-R1(l、-NHp-NHd4烷基)、_N((V4烷基)2、氯、 氟和羥基。
70.根據(jù)權(quán)利要求38和41所述的方法，其中Rltl是1至2個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取 代基氫、-NH2, -NH(C1^4烷基)、-N(C1^4烷基)2、氰基、(鹵素)η、羥基、硝基和氧代基。
71.根據(jù)權(quán)利要求38和41所述的方法，其中Rltl是1至2個(gè)獨(dú)立地選自氫和(鹵素)i_3 的取代基。
72.根據(jù)權(quán)利要求38和41所述的方法，其中Rltl是1至2個(gè)獨(dú)立地選自氫和(氟)3的 取代基。
73.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中Y和Z獨(dú)立地選自0、S、(H、0H)和(H、H)；前提條件是，Y和ζ其中一者是0而另一者選自0、S、(H、0H)和(H、H)。
74.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中Y和Z獨(dú)立地選自0和(H、H)；前提條件是，Y 和Z其中一者是0而另一者選自0和(H、H)。
75.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中Y和Z獨(dú)立地選自0。
76.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中所述式II化合物是3-[1-(3_羥丙基)-1Η-吡 咯并[2,3-b]吡啶-3-基]-4-[2-(三氟甲基)苯基]-IH-吡咯-2，5-二酮。
77.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中所述式II化合物是3-[1-(3_羥丙基)-1Η-吡 咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-4-(1-甲基-IH-吡唑-3-基)-IH-吡咯-2，5-二酮。
78.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中所述式II化合物是3-[1-(3_羥基-丙 基)-IH-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-4-吡嗪-2-基-吡咯-2，5-二酮。
79.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述式II化合物是3- ，4-二甲氧基-嘧 啶-5-基)-4-[1-(3-羥基-丙基)-IH-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-吡咯-2，5- 二酮。
80.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中所述式II化合物是4-{3-[4-(2，4_二甲 氧基-嘧啶-5-基)-2，5- 二氧代-2，5- 二氫-IH-吡咯-3-基]-吡咯并[2，3-b]吡 啶-1-基}_ 丁腈。
81.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中所述式II化合物是4-{3-[4-(1_甲基-IH-吡 唑-3-基)-2，5- 二氧代-2，5- 二氫-IH-吡咯-3-基]-吡咯并[2，3-b]吡啶-1-基} -丁腈。
82.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中所述式II化合物是3- ，4-二甲氧基-嘧 啶-5-基)-4-(1-苯乙基-IH-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基)-吡咯-2，5-二酮。
83.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中GSKjB酶活性抑制劑是式(III)化合物
84.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中A和E獨(dú)立地選自氫取代的碳原子和氮原子；其中I獨(dú)立地選自IH-吲哚、IH-吡咯并[2，3-b]吡啶、IH-吡唑并[3，4-b]吡啶
85.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中Z選自0 ；或者，Z選自二氫，其中每個(gè)氫原子通 過單鍵連接。
86.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中R4和R5獨(dú)立地選自任選被氧代基取代的C^8 焼基、C2—8 烯基和 炔基。
87.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中&選自-CV8烷基-、-C2_8烯基-、-C2_8 炔基-、-O-(Cp8)烷基-0-、-0-(C2_8)烯基-0-、-0-(C2_8)炔基-0-、-C(O)-(C1^8)烷 基-C(0)-(其中上述烷基、烯基和炔基連接基團(tuán)中任一者是直鏈碳鏈，任選被1至4個(gè)獨(dú) 立地選自如下基團(tuán)的取代基取代C"烷基、CV8烷氧基、C"烷氧基(Cp8)烷基、羧基、羧基 (C1^8)烷基、-C (0)0-(U烷基、-Ch烷基-C (0)0-(U烷基、氨基(被獨(dú)立地選自氫和CV4 烷基的取代基取代)、氨基(Ci_8)烷基(其中氨基被獨(dú)立地選自氫和CV4烷基的取代基取 代)、鹵素、(鹵素)h(Ch8)烷基、(鹵素)h(Ch8)烷氧基、羥基、羥基(C1^8)烷基和氧代基； 并且，其中上述烷基、烯基和炔基連接基團(tuán)中任一者任選被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立地選自如下基 團(tuán)的取代基取代雜環(huán)基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基(Ci_8)烷基、芳基(CV8)烷基、雜芳基(CV8) 烷基、螺環(huán)烷基和螺雜環(huán)基(其中上述環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基取代基中任一者任選 被1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基取代Ci_8烷基、CV8烷氧基、Ci_8烷氧基(Ci_8)烷 基、羧基、羧基(CV8)烷基、氨基(被獨(dú)立地選自氫和CV4烷基的取代基取代)、氨基(CV8)烷 基(其中氨基被獨(dú)立地選自氫和Ch烷基的取代基取代)、鹵素、(鹵素)(C1^8)烷基、(鹵 素)h(CV8)烷氧基、羥基和羥基(CV8)烷基；并且，其中上述雜環(huán)基取代基中任一者任選被 氧代基取代))、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基、雜芳基(其中環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基任選被 1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基取代而_8烷基、Ci_8烷氧基、Ci_8烷氧基(Ci_8)烷基、 羧基、羧基(CV8)烷基、氨基(被獨(dú)立地選自氫和CV4烷基的取代基取代)、氨基(CV8)烷基 (其中氨基被獨(dú)立地選自氫和Ch烷基的取代基取代)、鹵素、(鹵素)h(Ch8)烷基、(鹵 素)m(Ch8)烷氧基、羥基和羥基(Ci_8)烷基；并且，其中雜環(huán)基任選被氧代基取代)、-(o-(c H2)卜6)。-5-0-、-0- (CH2) ^6-O- (CH2) h-O-、-。- (CH2) ^6-O- (CH2) ^6-O- (CH2)卜廠。-、-(O- (CH2)卜6) 0_5 -NR6-、-O- (CH2) ^6-NR6- (CH2) ^6-O-, -O- (CH2) ^6-O- (CH2) ^6-NR6-, - (O- (CH2)卜6) 0_5-S_、-O- (CH 2) !_6-S- (CH2) ^6-0-,-0- (CH2) ^6-O- (CH2) h-S-、-NR6-、-M6-NR7-、-M6- (CH2) ^6-NR7-,-NR6- (CH2 )h-NR7- (CH2) h-NR8-、-NR6-C (O) -、-C (O) -NR6-、-C (O) - (CH2) 0_6-NR6- (CH2) Q_6-C (O) -、-NR6- (C H2) 0_6-C (O) - (CH2) h-C (O) - (CH2)。_6-NR7-、-NR6-C (O) -NR7-、-NR6-C (NR7) -NR8-、-O- (CH2) ^6-NR6 -(CH2) ^6-S-,-S- (CH2) h-NR6- (CH2) ^6-O-,-S- (CH2) ^6-NR6- (CH2) ^6-S-,-NR6- (CH2) ^6-S- (CH2) ^ 6-殿7-和-S02-(其中&為和1 8獨(dú)立地選自氫、Ci_8烷基、Ci_8烷氧基(C1J烷基、羧基(CV8) 烷基、氨基(CV8)烷基(其中氨基被獨(dú)立地選自氫和CV4烷基的取代基取代)、羥基(CV8)烷 基、雜環(huán)基(CV8)烷基、芳基(Ci_8)烷基和雜芳基(Ci_8)烷基(其中上述雜環(huán)基、芳基和雜芳 基取代基任選被1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基取代(V8烷基、CV8烷氧基、Ci_8烷氧 基(CV8)烷基、羧基、羧基(CV8)烷基、氨基(被獨(dú)立地選自氫和Ci_4烷基的取代基取代)、氨 基(Ci_8)烷基(其中氨基被獨(dú)立地選自氫和Ch烷基的取代基取代)、鹵素、(鹵素)(CV8) 烷基、(鹵素)m(Ch8)烷氧基、羥基和羥基(CV8)烷基；并且，其中雜環(huán)基任選被氧代基取 代))；前提條件是，如果A和E選自氫取代的碳原子，則民選自-c2_8炔基-、-O-(CV8)烷 基-ο-、-ο-(c2_8)烯基-ο-、-O-(C2_8)炔基-O-、-C(O)-(CV8)烷基-C(O)-(其中上述烷基、 烯基和炔基連接基中任一者是直鏈碳鏈，任選被1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基取 代而_8烷基、Ci_8烷氧基、Ci_8烷氧基(Ci_8)烷基、羧基、羧基(U烷基、-C(O)O-(CV8)烷 基、-CV8烷基-C(O) O-(Ci_8)烷基、氨基(被獨(dú)立地選自氫和Ci_4烷基的取代基取代)、氨基((V8)烷基(其中氨基被獨(dú)立地選自氫和Ci_4烷基的取代基取代)、鹵素、(鹵素)H(CV8)烷 基、(鹵素)M(Ch8)烷氧基、羥基、羥基(Ci_8)烷基和氧代基；并且，其中上述烷基、烯基和炔 基連接基團(tuán)中任一者任選被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基取代雜環(huán)基、芳基、 雜芳基、雜環(huán)基(Ch8)烷基、芳基(Ci_8)烷基、雜芳基(Ci_8)烷基、螺環(huán)烷基和螺雜環(huán)基(其 中上述環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基取代基中任一者任選被1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基 團(tuán)的取代基取代而_8烷基、Ci_8烷氧基、CV8烷氧基(Ci_8)烷基、羧基、羧基(Ci_8)烷基、氨基 (被獨(dú)立地選自氫和CV4烷基的取代基取代)、氨基(Ci_8)烷基(其中氨基被獨(dú)立地選自氫 和Ch烷基的取代基取代)、鹵素、(鹵素)(CV8)烷基、(鹵素)(CV8)烷氧基、羥基和羥 基(Ci_8)烷基；并且，其中上述雜環(huán)基取代基任選被氧代基取代))、環(huán)烷基(其中環(huán)烷基任 選被1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基取代烷基、CV8烷氧基、Ci_8烷氧基(Ch8) 烷基、羧基、羧基(Ci_8)烷基、氨基(被獨(dú)立地選自氫和Ci_4烷基的取代基取代)、氨基(CV8) 烷基(其中氨基被獨(dú)立地選自氫和CV4烷基的取代基取代)、鹵素、(鹵素)H(Ch8)烷基、 (鹵素)H (CV8)烷氧基、羥基和羥基(C1-S)烷基)、-(0- (CH2) H-0-、-O- (CH2) ^6-O- (CH2) H-O-、-。- (CH2) ^6-O- (CH2) ^6-O- (CH2) ^-0-,-(0- (CH2)卜6) ^5-NR6-,-O- (CH2) ^6-NR6- (CH2) ^6-O -、-O- (CH2) ^6-O- (CH2) H-NR6-、- (O- (CH2)卜6) 0_5_S-、-O- (CH2) ^6-S- (CH2) ^6-O-,-O- (CH2) ^6-O -(CH2) H-S-、-NR6-NR7-, -NR6- (CH2) ^6-NR7-, -NR6- (CH2) ^6-NR7- (CH2) ^6-NR8-, -NR9-C (O) -、-C (O) -NR9-、-C (O) - (CH2) Ch5-NR6- (CH2)。_6-C (O) -NR6- (CH2)。_6-C (O) - (CH2) ^6-C (O) - (CH2)。_6-NR7-、-NR6-C (O) -NR7-、-M6-C (NR7) -NR8-^-O- (CH2) ^6-NR6- (CH2) ^6-S-,-S- (CH2) ^6-NR6- (CH2) ^6-O -、-S- (CH2) ^6-NR6- (CH2) ^6-S-和-NR6- (CH2) ^6-S- (CH2) ^6-NR7-(其中 R6、R7 和 & 獨(dú)立地選自 氫、(V8烷基、Cp8烷氧基(CV8)烷基、羧基(Q_8)烷基、氨基(CV8)烷基(其中氨基被獨(dú)立地 選自氫和Cy烷基的取代基取代)、羥基(CV8)烷基、雜環(huán)基(C")烷基、芳基(C")烷基和 雜芳基(CV8)烷基(其中上述雜環(huán)基、芳基和雜芳基取代基任選被1至4個(gè)獨(dú)立地選自如 下基團(tuán)的取代基取代(；_8烷基、Cp8烷氧基、CV8烷氧基(C")烷基、羧基、羧基(C")烷基、 氨基(被獨(dú)立地選自氫和Cy烷基的取代基取代)、氨基(C")烷基(其中氨基被獨(dú)立地選 自氫和C"烷基的取代基取代)、鹵素、(鹵素)"(Cu)烷基、(鹵素)"(Cu)烷氧基、羥基 和羥基(C")烷基；并且，其中雜環(huán)基任選被氧代基取代)；并且，其中&選自CV8烷基、CV8 烷氧基(U烷基、羧基(Cp8)烷基、氨基(CV8)烷基(其中氨基被獨(dú)立地選自氫和CV4烷 基的取代基取代)、羥基(CV8)烷基、雜環(huán)基(CV8)烷基、芳基(C")烷基和雜芳基(C")烷 基(其中上述雜環(huán)基、芳基和雜芳基取代基任選被1至4個(gè)獨(dú)立地選自如下基團(tuán)的取代基 取代烷基、烷氧基、CV8烷氧基(Q_8)烷基、羧基、羧基(Q_8)烷基、氨基(被獨(dú)立地 選自氫和CV4烷基的取代基取代)、氨基(CV8)烷基(其中氨基被獨(dú)立地選自氫和CV4烷基 的取代基取代)、鹵素、(鹵素)H(Ch8)烷基、(鹵素)H(Ch8)烷氧基、羥基和羥基(C1^8)烷 基；并且，其中雜環(huán)基任選被氧代基取代))。
88.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中R1和民獨(dú)立地選自氫、CV8烷基、C2_8烯基、C2_8 炔基(其中烷基、烯基和炔基任選被選自如下基團(tuán)的取代基取代=Ch8烷氧基、烷氧基(CV8) 烷基、羧基、羧基(Ci_8)烷基、氨基(被獨(dú)立地選自氫和Ci_4烷基的取代基取代)、氨基(CV8) 烷基(其中氨基被獨(dú)立地選自氫和CH烷基的取代基取代)、(鹵素)H、(鹵素)H(Ch8)烷 基、(鹵素)H (CV8)烷氧基、羥基、羥基(Ci_8)烷基和氧代基)、Ci_8烷氧基、Ci_8烷氧羰基、 (鹵素)"(Cu)烷氧基、C"烷硫基、芳基、雜芳基(其中芳基和雜芳基任選被選自如下基團(tuán)的取代基取代=Cm烷基、C"烷氧基、烷氧基(C")烷基、羧基、羧基(C")烷基、氨基(被獨(dú) 立地選自氫和Ci_4烷基的取代基取代)、氨基(CV8)烷基(其中氨基被獨(dú)立地選自氫和Ci_4 烷基的取代基取代)、鹵素、(鹵素)M(Ch8)烷基、(鹵素)M(CV8)烷氧基、羥基和羥基(CV8) 烷基)、氨基(被獨(dú)立地選自氫和Ch烷基的取代基取代)、氰基、鹵素、羥基和硝基；以及其 可藥用鹽。
89.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是6，7，9，10，12，13，15， 16-八氫-23H-5J6 :17,22-二次甲基-5H-二吡啶并[2，3_k:3'，2' -q]吡咯并[3，4_n] [1,4,7,10,19]三氧雜二氮雜環(huán)二4^一碳烯-23，25 (24H) - 二酮。
90.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是10，11，13，14，16，17， 19，20，22，23-十氫-9，4 :24，29-二次甲基-IH-二吡啶并[2，3_n:3'，2' _t]吡咯并[3， 4-q] [1，4，7，10，13，22]四氧雜二氮雜環(huán)二十四碳烯_1，3 QH) - 二酮。
91.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是10，11，13，14，16，17， 19，20，22，23，25，26-十二氫-9，4 :27，32-二次甲基-IH-二吡啶并[2，3_q:3'，2' -w]吡 咯并[3,4-t] [1，4，7，10，13，16，25]五氧雜二氮雜環(huán)二十七碳烯_1，3 QH) - 二酮。
92.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是6，7，9，10，12，13_六 氫-20H-5，23 :14,19-二次甲基-5H-二苯并[h，n]吡咯并[3，4_k] [1,4,7,16] 二氧雜二氮 雜環(huán)十八碳烯-20，22 (21H) - 二酮。
93.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是6，7，9，10，12，13，15， 16-八氫-23H-5，26 :17，22-二次甲基-5H-二苯并[k，q]吡咯并[3，4_n] [1,4,7,10,19] 三氧雜二氮雜環(huán)二i^一碳烯-23，25 (24H) - 二酮。
94.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是10，11，13，14，16，17， 19，20，22，23-十氫-9，4 :24，29-二次甲基-IH-二苯并[n, t]吡咯并[3,4-q] [1,4,7,10, 13,22]四氧雜二氮雜環(huán)二十四碳烯-1，3QH)-二酮。
95.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是化合物la。
96.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-[3-[(2_羥基乙 基)甲基氨基]丙基]-IH-吲唑-3-基]-4-[l-(3-吡啶基)-IH-吲哚-3-基]-IH-吡 咯-2，5-二酮。
97.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3，5_二 氯-N-[3-氯-4-[(3，4，12，12a-四氫 _1Η_[1，4]噻嗪并[3，4_c][l，4]苯并二氮雜蕈 -11(6H)_基)羰基]苯基]-苯甲酰胺。
98.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(2_羥基-乙 基)-IH-吲哚-3-基]-4-(1-吡啶-3-基-IH-吲哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮。
99.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3- -甲氧基-苯 基)-4-(1-吡啶-3-基-IH-吲哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮。
100.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是6-[[2-[[442，4-二氯 苯基)-5-甲基-IH-咪唑-2-基)-2-嘧啶基]氨基]乙基]氨基]-3-吡啶甲腈。
101.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-(5-氯-1-甲 基-IH-吲哚-3-基)-4-[1-(3-咪唑-1-基-丙基)-IH-吲唑-3-基]-吡咯_2，5- 二酮。
102.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-(5-氯-1-甲基-IH-吲哚-3-基)-4-[1-(3-[1，2，3]三唑-1-基-丙基)-IH-吲唑-3-基]-吡咯_2，5-二酮。
103.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(3_羥基-丙 基)-IH-吡咯并[2，3-b]吡啶-3-基]-4-(1-甲基-IH-吡唑-3-基)-吡咯-2，5- 二酮。
104.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是化合物10a。
105.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(3_羥基-3-甲 基-丁基)-IH-吲唑-3-基]-4-(1-吡啶-3-基-IH-吲哚-3-基)-吡咯_2，5_ 二酮。
106.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(2_羥基-乙 基)-IH-吲唑-3-基]-4-(1-嘧啶-5-基-IH-吲哚-3-基)-吡咯_2，5_ 二酮。
107.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(2_羥基-乙 基)-IH-吲哚-3-基]-4-(1-嘧啶-5-基-IH-吲哚-3-基)-吡咯-2，5- 二酮。
108.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是(11Z)-8，9，10，13， 14，15-六氫-2，6 :17,21-二(次甲基)吡咯并[3，4_h] [1,15,7] 二氧雜氮雜環(huán)二十三碳 烯-22，24(1H，23H)-二酮。
109.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-(5-氯-1-吡 啶-3-基-IH-吲哚-3-基)-4-[1-(3-羥基-丙基)-IH-吲唑-3-基]-吡咯_2，5_ 二酮。
110.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3- -甲氧基-苯 基)-4-[1-(3_甲氧基-丙基)-IH-吡咯并[3，2-c]吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮。
111.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(3_羥基-丙 基)-IH-吲唑-3-基]-4-[1-(四氫-吡喃-4-基)-IH-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮。
112.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是2-{3-[4-(5-氯-1-甲 基-IH-吲哚-3-基)-2，5_ 二氧代-2，5- 二氫-IH-吡咯-3-基]-吲唑-1-基}N_(2_羥 基-乙基)-乙酰胺。
113.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是4-(3-氯-苯 基)-6-(3-二甲基氨基-丙基)-5，6-二氫-4H-2，4，6-三氮雜-環(huán)戊并[c]芴_1，3_ 二酮。
114.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是14-乙基_6，7，9，10， 13，14，15，16-八氫-12扎23!1-5，26 17，22-二次甲基二苯并[k，q]吡咯并[3，4_n] [1,4,7, 10，19] 二氧雜三氮雜環(huán)二i^一碳烯-23，25 (24H) - 二酮。
115.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是14-芐基_6，7，9，10， 13，14，15，16-八氫-12扎23!1-5，26 :17，22_ 二 (次甲基)二苯并[k，q]吡咯并[3，4_n] [1， 4,7,10,19] 二氧雜三氮雜環(huán)二i^一碳烯-23，25 (24H) - 二酮。
116.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-(1-{2-[2-(2_羥 基-乙氧基)-乙氧基]-乙基}-1Η-吲哚-3-基)-4-[1-(2_羥基-乙基)-1Η-吲 哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮。
117.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是6，7，8，9，10，11，12， 13-八氫-8，11-二甲基-5，23 :14,19-二次甲基-20H-二苯并[k，q]吡咯并[3，4_n] [1,4, 7,10]四氮雜環(huán)十八碳烯-20，22 QlH)-二酮。
118.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是7，8，9，10，12，13，16， 17，18，19-十氫-8，17-二甲基-15!1，26!1-5，29:20，25-二次甲基-6!1-二苯并[k, q]吡咯并[3,4-n] [1，4，7，10，19，22] 二氧雜四氮雜環(huán)二十四碳烯，28 (27H) - 二酮。
119.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是14-(2-呋喃基甲 基)-6，7，9，10，13，14，15，16-八氫-12!1，23!1-5，26 :17,22-二 (次甲基)二苯并[k, q]吡 咯并[3,4-n] [1,4,7,10,19] 二氧雜三氮雜環(huán)二4^一碳烯-23，25 (MH)- 二酮。
120.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是14-(2-噻吩基甲 基)-6，7，9，10，13，14，15，16-八氫-12!1，23!1-5，26 :17,22-二 (次甲基)二苯并[k, q]吡 咯并[3,4-n] [1,4,7,10,19] 二氧雜三氮雜環(huán)二4^一碳烯-23，25 Q4H)- 二酮。
121.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是14-(1-萘基甲基)-6， 7，9，10，13，14，15，16-八氫-12扎23!1-5，26 :17，22_ 二 (次甲基)二苯并[k，q]吡咯并[3，4-n][1,4,7,10,19] 二氧雜三氮雜環(huán)二4^一碳烯-23，25 Q4H) - 二酮。
122.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是14-(吡啶-4-基甲 基)-6，7，9，10，13，14，15，16-八氫-12!1，23!1-5，26 :17,22-二 (次甲基)二苯并[k, q]吡 咯并[3，4-n] [1，4，7，10，19] 二氧雜三氮雜環(huán)二4^一碳烯-23，25 (MH) - 二酮。
123.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(2-{2-[2-(1，2， 3,4-四氫-萘-1-基氨基)_乙氧基]-乙氧基}_乙基)-1Η-吲哚-3-基]-4-{1-[2-(1， 2，3，4-四氫-萘-1-基氨基)-乙基]-IH-吲哚-3-基}-吡咯-2，5- 二酮。
124.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[1-(3_二甲基氨 基-苯基)-IH-吲哚-3-基]-4- [1- (2-羥基-乙基)-IH-吲唑-3-基]-吡咯-2，5- 二酮。
125.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是3-[5-氯-1-(6-二甲 基氨基-吡啶-3-基)-IH-吲哚-3-基]-4-[1- (2-羥基-乙基)-IH-吲唑_3_基]-吡 咯-2，5-二酮。
126.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中所述式(III)化合物是5-(5-氯-3-{4-[1-(2-羥基-乙基)-IH-吲唑-3-基]_2，5_二氧代-2,5- 二氫-IH-吡 咯-3-基}_吲哚-1-基)_煙酸甲酯。
全文摘要
本發(fā)明涉及處理多潛能細(xì)胞的方法，其中通過用GSK-3B酶活性抑制劑處理所述多潛能細(xì)胞，所述多潛能細(xì)胞可在培養(yǎng)物中有效擴(kuò)增和分化。
文檔編號(hào)C12N5/0735GK102105580SQ200980124647
公開日2011年6月22日 申請(qǐng)日期2009年4月22日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月24日
發(fā)明者J·E·戴維斯, J·劉 申請(qǐng)人:森托科爾奧索生物科技公司