多潛能成體祖細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)特性及其用圖
【專利說明】
[0001] 本申請(qǐng)是國際申請(qǐng)日為2006年11月9日、國際申請(qǐng)?zhí)枮镻CT/US2006/043804、進(jìn) 入國家階段的申請(qǐng)?zhí)枮?00680050862. 9、發(fā)明名稱為"多潛能成體祖細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)特性 及其用途"的PCT申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
[0002] 相關(guān)申請(qǐng)的引用
[0003] 本申請(qǐng)是2005年11月9日提交的美國申請(qǐng)系列號(hào)11/269,736的部分繼續(xù)申 請(qǐng)；11/269, 736是2005年6月13日提交的美國申請(qǐng)系列號(hào)11/151,689的部分繼續(xù)申請(qǐng)； 11/151，689是2004年10月11日提交的美國申請(qǐng)系列號(hào)10/963,444(放棄）的部分繼 續(xù)申請(qǐng)；10/963, 444是2002年2月1日提交的美國申請(qǐng)系列號(hào)10/048,757的部分繼續(xù) 申請(qǐng)；10/048, 757是2000年8月4日提交的、2001年2月15日用英語以WO 01/11011公 布的 PCT/US00/21387 的美國國家階段申請(qǐng)；PCT/US00/21387 根據(jù) 35U.S.C. § 119(e)要 求1999年8月5日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)60/147,324和1999年11月10日提交的 美國臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)60/164, 650的優(yōu)先權(quán)，是2003年8月11日提交的美國申請(qǐng)系列號(hào) 10/467,963的部分繼續(xù)申請(qǐng)；10/467, 963是2002年2月14日提交的、2002年8月22日用 英語以WO 02/064748公布的PCT/US02/04652的美國國家階段申請(qǐng)；PCT/US02/04652根據(jù) 35U.S.C. § 119(e)要求2001年2月14日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)60/268,786、2001年 2月15日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)60/269, 062、2001年8月7日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)系 列號(hào)60/310, 625和2001年10月25日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)60/343, 836的優(yōu)先權(quán)， 所有這些申請(qǐng)和公開說明書都通過引用整體結(jié)合到本文中，且本申請(qǐng)要求所有這些申請(qǐng)和 公開說明書的全部優(yōu)先權(quán)。
技術(shù)領(lǐng)域
[0004] 本發(fā)明的領(lǐng)域是多潛能成體祖細(xì)胞（"MAPCs"）的免疫調(diào)節(jié)和這些細(xì)胞在主要治 療和輔助治療中用于調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的用途。
【背景技術(shù)】
[0005] 包括骨髓移植物在內(nèi)的器官移植物的治療應(yīng)用從一開始就在穩(wěn)步增加。它已成為 包括但不限于血液疾病、免疫疾病和惡性疾病的多種疾病的重要治療選擇。
[0006] 遺憾的是，移植的治療用途往往會(huì)被移植物所引起的不利免疫應(yīng)答造成復(fù)雜化、 致使無效或妨礙實(shí)施。移植療法所碰到的最為突出的不良反應(yīng)有（i)宿主抗移植物反應(yīng) ("HVG")(有免疫能力的宿主對(duì)移植物的排斥）和（ii)移植物抗宿主?。?GVHD")(主 要出現(xiàn)在免疫缺損的（immunocompromised)宿主中的過程，當(dāng)該宿主被移植物的免疫活性 細(xì)胞識(shí)別為非己時(shí)出現(xiàn)）。
[0007] 當(dāng)然，可通過完美地匹配供體和宿主避免宿主中的移植排斥。但是，除了自體同 源組織外，只有完全相同的雙胞胎可預(yù)期是真正同基因的。某個(gè)體供體（donor)和另一個(gè) 體宿主/接受者（host/recipient)之間的完美匹配事實(shí)上是不存在的。因此，自體同源 (autologous)組織的使用是獲得完美匹配的唯一另外途徑。遺憾的是，宿主組織通常不適 合，或者沒有在有需要前進(jìn)行分離。對(duì)移植療法的需求往往其實(shí)是替代宿主中的受損組織。 因此，同基因組織的使用雖然是解決宿主對(duì)移植組織的不利應(yīng)答問題的有效辦法，但在實(shí) 際應(yīng)用中通常沒有用。
[0008] 如果不可能做到同基因（syngeneic)匹配，那么可通過使異基因的供體和宿主盡 可能緊密地匹配來減輕移植療法中出現(xiàn)的不利免疫作用。血液和/或組織分型被用來匹配 供體和宿主，以提供最高的治療成功可能性。但是，即使是異基因（allogeneic)組織的最 緊密匹配也不能防止出現(xiàn)嚴(yán)重HVG，因此移植療法涉及到免疫抑制和免疫抑制藥物的使用， 這在下文中有論述。
[0009] 另一已實(shí)行的避免移植療法中的HVG并發(fā)癥的方法，是使接受宿主的免疫系統(tǒng) 失效。這已通過使用放射療法和/或免疫抑制性化學(xué)療法和/或抗體療法來實(shí)現(xiàn)。所 產(chǎn)生的對(duì)宿主免疫應(yīng)答的抑制往往能很有效地幫助移植物（如骨髓）在宿主中建系 (establishment)。但是，免疫切除（immunoablation)或抑制會(huì)損及宿主的免疫防御。這 會(huì)導(dǎo)致宿主在稍有暴露于傳染原后就變得十分易受感染。所產(chǎn)生的感染是移植患者中致病 率或死亡率的主要原因。
[0010] 損及宿主免疫系統(tǒng)還會(huì)產(chǎn)生或加劇移植療法中碰到的另一嚴(yán)重問題一一移植物 抗宿主?。?GVHD")。當(dāng)供體組織含有能將接受者的MHC蛋白識(shí)別為非己的免疫活性細(xì)胞 時(shí)，會(huì)出現(xiàn)GVHD。這會(huì)激活T細(xì)胞，使T細(xì)胞分泌出細(xì)胞因子如IL-2(白介素2)、IFN((干 擾素 γ)和TNFa (腫瘤壞死因子α)。這些信號(hào)會(huì)引發(fā)對(duì)包括皮膚、胃腸道、肝臟和淋巴器 官在內(nèi)的接受者靶標(biāo)的免疫攻擊（Ferrara和Deeg，1991) ?GVHD在骨髓移植中特別成問題， 已證實(shí)它在骨髓移植中主要是由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)（Grebe和Streilein，1976)。實(shí)際上，大 約有50%的骨髓移植患者會(huì)發(fā)展急性GVHD。這些患者中有許多人會(huì)死亡（15% -45% )。
[0011] 還存在著作為原發(fā)病變和作為其它病變和/或其治療的繼發(fā)作用而發(fā)生的其它 免疫系統(tǒng)功能異常（dysfunction)、紊亂（disorder)和疾病（disease)。這些包括腫瘤、骨 髓病變、血液病變、自身免疫疾病和一些炎性疾病，這在下文中進(jìn)一步論述。這些紊亂和疾 病的主要療法和輔助療法，如HVG和GVHD的主要療法和輔助療法，往往涉及到免疫抑制藥 物的使用。所有現(xiàn)行的療法都有缺點(diǎn)和副作用。
[0012] 免痔抑制藥物
[0013] 已作出大量的努力，來開發(fā)出治療這些免疫系統(tǒng)功能異常從而改善或消除它們 的有害作用，而又不引起另外的有害副作用的藥物。在這個(gè)目標(biāo)上已獲得一定的進(jìn)步，已 有多種藥物被開發(fā)出并用于預(yù)防和/或治療這些功能異常。更為有效的這些藥物的引入 標(biāo)志著移植療法的醫(yī)學(xué)實(shí)踐的巨大進(jìn)步；但是，這些藥物沒有一個(gè)是理想的。確實(shí)，目前 可供在移植療法中臨床使用的免疫抑制藥物沒有一個(gè)是完全有效的。所有的藥物都有嚴(yán) 重的缺點(diǎn)和不利的副作用，這在下文中有概述。有關(guān)評(píng)論參見Farag(2004)，" Chronic graft-versus-host disease ：where do we go from here ?， " Bone Marrow Transplantation33 :569_577〇
[0014] 主要用于治療炎癥和炎性疾病的皮質(zhì)類固醇已知具有免疫抑制性，被許多人認(rèn)為 是HVG和GVHD的最佳主要治療藥。它們至少部分上通過抑制某些涉及T細(xì)胞激活和T細(xì) 胞依賴性免疫應(yīng)答的細(xì)胞因子基因的表達(dá)，來抑制T細(xì)胞增殖和T細(xì)胞依賴性免疫應(yīng)答。
[0015] 環(huán)胞菌素是HVG和GVHD的免疫抑制和預(yù)防的最常用藥物之一。它一般具有強(qiáng)烈 免疫抑制性。雖然它能有效地減少移植患者中的不利免疫反應(yīng)，但它也會(huì)極大地削弱免疫 系統(tǒng)，使得患者高度易受感染。因此，患者更容易受病原體暴露所感染，沒有什么能力對(duì)感 染作出有效的免疫應(yīng)答。因而即使是溫和的病原體也會(huì)威脅生命。環(huán)胞菌素還會(huì)引起多種 其它不想要的副作用。
[0016] 甲氨喋呤單獨(dú)或與其它藥物組合在一起，也廣泛用于HVG和GVHD的預(yù)防和治療。 研宄已證實(shí)，就算它能有效，它顯然也不比環(huán)胞菌素有效。和環(huán)胞菌素一樣，甲氨喋呤也會(huì) 引起多種副作用，其中一些副作用對(duì)患者健康可能有害。
[0017] FK-506是大環(huán)內(nèi)酯樣化合物。與環(huán)胞菌素相似，它也衍自真菌來源。環(huán)胞菌素 和FK-506的免疫抑制作用相似。它們通過與它們各自的細(xì)胞質(zhì)受體蛋白（即親環(huán)蛋白和 FK-結(jié)合蛋白）形成異型二聚復(fù)合物來阻斷T細(xì)胞激活的早期事件。這然后會(huì)抑制鈣調(diào)磷 酸酶的磷酸酶活性，從而最終抑制核調(diào)節(jié)蛋白和T細(xì)胞激活基因的表達(dá)。
[0018] 已被用于免疫抑制的其它藥物包括抗胸腺細(xì)胞球蛋白、硫唑嘌呤和環(huán)磷酰胺。它 們被證明并不有利。雷帕霉素也已被用于阻斷T細(xì)胞激活的免疫應(yīng)答，它是另一種能干 擾T細(xì)胞對(duì)IL-2的應(yīng)答的大環(huán)內(nèi)酯樣化合物。RS-61443這種霉酚酸衍生物已被發(fā)現(xiàn)能抑 制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中的同種異體移植物排斥。咪唑立賓是一種咪唑核苷，能以類似于硫唑嘌呤和 RS-61443的方式阻斷嘌呤生物合成途徑和抑制促細(xì)胞分裂原刺激的T細(xì)胞和B細(xì)胞增殖。 脫氧精胍菌素是精胍菌素的合成類似物，已發(fā)現(xiàn)它能在臨床前移植模型中發(fā)揮免疫抑制特 性。抗代謝物布喹那鈉是二氫乳清酸脫氫酶的抑制劑，能通過對(duì)嘧啶合成的抑制阻斷尿苷 和胞苷兩種核苷的形成。黃連素及其藥理上可耐受的（pharmacologically tolerable)鹽 已被用作免疫抑制劑，用來治療諸如風(fēng)濕病的自身免疫疾病，用來治療過敏癥和用來預(yù)防 移植排斥。據(jù)報(bào)道，黃連素能抑制B細(xì)胞抗體產(chǎn)生和通常能抑制體液免疫應(yīng)答，但不會(huì)影響 T細(xì)胞繁殖。參見日本專利07-316051和美國專利6, 245, 781。
[0019] 這些免疫抑制藥物無論是單獨(dú)使用還是與其它藥劑組合使用，沒有一個(gè)是完全有 效的。它們?nèi)慷纪ǔ?huì)讓患者仍易發(fā)生HVG和GVHD，削弱患者抵抗感染的能力。這使得 他們更易受感染，在發(fā)生感染時(shí)更不能抗擊感染。此外，所有這些藥物都會(huì)引起嚴(yán)重副作 用，包括例如胃腸毒性、腎臟毒性、高血壓、骨髓抑制、肝臟毒性、高血壓和牙齦肥大等等。它 們沒有一個(gè)證明是完全可接受或有效的治療藥?？傊?，鑒于這些缺點(diǎn)，對(duì)于不利免疫系統(tǒng)功 能異常和/或應(yīng)答如HVG和GVHD，目前還沒有完全令人滿意的基于藥物的治療。
[0020] -直認(rèn)為，可以開發(fā)出沒有這些缺點(diǎn)的更具特異性的免疫抑制類型。例如，能 特異性抑制或消除同種異體反應(yīng)性（alloreactive)T細(xì)胞的藥劑，將能有效抵抗HVG和 GVHD (至少對(duì)于異基因移植物），而又不會(huì)出現(xiàn)全身性攻擊和損及免疫系統(tǒng)的藥劑所會(huì)出 現(xiàn)的不利副作用。但是，至今還沒有開發(fā)出這種藥劑。
[0021] 局限干細(xì)胞（restricted stem cell)在移植中的用涂
[0022] 干細(xì)胞代替免疫抑制劑來使用或與免疫抑制劑一起來使用，最近受到了關(guān)注。在 這個(gè)領(lǐng)域已有一些鼓舞人心的觀察結(jié)果。近年來已分離和表征了多種干細(xì)胞。它們既有分 化潛力高度局限、在培養(yǎng)物中生長的能力有限的干細(xì)胞，也有分化潛力明顯不受局限、在培 養(yǎng)物中生長的能力無限的干細(xì)胞。前者通常更容易衍生，可從多種成體組織獲得。后者須衍 自生殖細(xì)胞和胚胎，被稱為胚胎干（"ES"）細(xì)胞、胚胎生殖（"EG"）細(xì)胞和生殖細(xì)胞。胚 胎干（"ES"）細(xì)胞具有無限的自我更新能力，能分化成所有的組織類型。ES細(xì)胞衍自胚泡 的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)。胚胎生殖（"EG"）細(xì)胞衍自著床后胚胎（post-implantation embryo)的原 始生殖細(xì)胞。衍自成體組織的干細(xì)胞其價(jià)值有限，因?yàn)樗鼈兙哂忻庖咴?，分化潛力有限?在培養(yǎng)中繁殖的能力有限。ES、EG和生殖細(xì)胞沒有這些缺點(diǎn)，但它們有在異基因宿主中形 成畸胎瘤的明顯傾向，這引起了對(duì)它們?cè)卺t(yī)學(xué)治療中的用途的高度關(guān)注。因此，盡管它們的 廣泛分化潛力是有利的，但對(duì)它們?cè)谂R床應(yīng)用中的有用性存在著悲觀看法。衍自胚胎的干 細(xì)胞還遭到倫理爭議，這些爭議會(huì)妨礙它們?cè)谥委熂膊∩系氖褂谩?br>[0023] -些試圖尋找ES、EG和生殖細(xì)胞的替代物的努力，投向了衍自成體組織的細(xì)胞。 雖然成體干細(xì)胞在哺乳動(dòng)物的大多數(shù)組織中都已鑒定出，但它們的分化潛力有局限，比ES、 EG和生殖細(xì)胞的分化潛力要窄得多。的確，許多這種細(xì)胞只能產(chǎn)生一種或少數(shù)幾種分化細(xì) 胞類型，且許多其它細(xì)胞局限于單一胚胎譜系。
[0024] 例如，造血干細(xì)胞只能分化形成造血譜系的細(xì)胞，神經(jīng)干細(xì)胞只分化成神經(jīng)外胚 層起源的細(xì)胞，間充質(zhì)干細(xì)胞（"MSCs"）則限于間充質(zhì)起源的細(xì)胞。出于上述的與ES、EG 和生殖細(xì)胞有關(guān)的限制、風(fēng)險(xiǎn)和爭議的原因，很大一部分的涉及干細(xì)胞在移植療法中的用 途的工作都采用MSCs。最近幾年的結(jié)果似乎表明，MSCs的同種異體移植物（allograft)并 不產(chǎn)生HVG免疫反應(yīng)，這種反應(yīng)是當(dāng)其它組織在異基因個(gè)體之間移植時(shí)總能看到的一種應(yīng) 答。此外，結(jié)果提示MSCs至少在一些情況下會(huì)削弱淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答。
[0025] 雖然這些結(jié)果直接提示到，MSCs可能可用于減少通常會(huì)伴隨異基因移植出現(xiàn)的 HVG和/或GVHD，但所觀察到的MSCs的免疫抑制作用是高度劑量依賴性的，且需要相對(duì)較 高的劑量才觀察到免疫抑制作用。事實(shí)上，在體外混合淋巴細(xì)胞測定中，淋巴細(xì)胞增殖的 下降只有在MSCs與淋巴細(xì)胞之比為I : 10或以上時(shí)才"明顯"。此外，隨著MSCs的劑量 下降，所觀察到的抑制作用也下降和變得不可觀察，在低于1 : 100的比例下MSCs的存 在實(shí)際上似乎刺激T細(xì)胞的增殖。在促細(xì)胞分裂原刺激的淋巴細(xì)胞增殖測定中也觀察到 相同的劑量效應(yīng)。有關(guān)評(píng)論參見 Ryan et al. (2005)" Mesenchymal stem cells avoid allogeneic rejection(間充質(zhì)干細(xì)胞能避免異基因排斥），"T. Inflammation 2:8; Le Blanc(2003)''Immunomodulatory effects of fetal and adult mesenchymal stem cells(胎兒和成體間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用），"Cytotherapy 5(6) :485-489和 Jorgensen et al. (2003)''Engineering mesenchymal stem cells for immunotherapy (X 程化間充質(zhì)干細(xì)胞用于免疫療法），"Gene Therapy 10:928-931。另外的結(jié)果在下文中 總結(jié)。
[0026] 例如，Bartholomew和他的同事發(fā)現(xiàn)，狒狒MSCs不刺激異基因淋巴細(xì)胞在體外增 殖，且在體外混合淋巴細(xì)胞測定中MSCs減少了促細(xì)胞分裂原刺激的淋巴細(xì)胞的增殖超過 50%。他們進(jìn)一步證實(shí)，MSCs的體內(nèi)給予延長了皮膚移植物存活期（相對(duì)于對(duì)照）。體外 結(jié)果和體內(nèi)結(jié)果要求高劑量的MSCs:對(duì)于體外結(jié)果要求其與淋巴細(xì)胞之比為1 : 1。就 實(shí)際而言，為在人體內(nèi)接近這種比例所要求的MSCs的量可能高得難以達(dá)到。這會(huì)限制 MSCs 的應(yīng)用。參見 Bartholomew et al. (2002) :"Mesenchymal stem cells suppress lymphocyte proliferation in vitro and prolong skin graft survival in vivo (間充 質(zhì)干細(xì)胞能在體外抑制淋巴細(xì)胞增殖和在體內(nèi)延長皮膚移植物存活期），"Experimental Hematology30 :42-48〇
[0027] Maitra和他的同事研宄了人MSCs和異基因人臍帶血細(xì)胞共輸注到亞致死福射的 NOD-SCID小鼠后，前者對(duì)后者的移入（engraftment)的作用。他們發(fā)現(xiàn)，在體外增殖測定 中，人MSCs促進(jìn)了移入，不刺激異基因 T細(xì)胞。他們還發(fā)現(xiàn)，人MSCs抑制了促細(xì)胞分裂原 對(duì)異基因人T細(xì)胞的體外激活。這些作用是劑量依賴性的，需要相對(duì)較高的比例才能抑制。 (Maitra et al. (2004)Bone Marrow Transplantation33 :597-604)〇
[0028] 最近，Le Blanc他的同事報(bào)道說，通過給予"第三方單倍同一性（third party haploidentical) "MSCs，成功地治療了一名患有通常致命的IV級(jí)急性GVHD的患者。該患 者是患有處于第三好轉(zhuǎn)期（third remission)的急性淋巴母細(xì)胞性白血病的9歲男孩。最 初，該患者用放射和環(huán)磷酰胺進(jìn)行治療，然后給予在HLA-A、HLA-B和HLA-DRbetal基因座處 與他自己的細(xì)胞完全相同的血細(xì)胞。這些細(xì)胞獲自不相關(guān)的雌性供體。盡管進(jìn)行了積極的 治療，包括給予了多種免疫抑制劑，但到移植后70天時(shí)，患者還是發(fā)展了 IV級(jí)急性GVHD。 他常常遭受侵入性細(xì)菌、病毒和真菌感染的折磨。
[0029] 在這些明顯可怕的情況下，嘗試了別種血液干細(xì)胞移植。從患者的母親分離了單 倍同一性MSCs，在體外擴(kuò)增（expand)三個(gè)星期。收獲細(xì)胞，以2x IO6個(gè)細(xì)胞/公斤靜脈 內(nèi)給予患者。沒有與MSCs有關(guān)的毒性的跡象，也沒有很大的副作用。在移植后幾天內(nèi)許 多癥狀消退，但殘余疾病仍明顯。用相同的方法再靜脈內(nèi)注射幾次MSCs后，患者的癥狀和 GVHD完全消退?；颊咴跀[脫疾病后一年仍保持無病。根據(jù)作者的經(jīng)驗(yàn)，這個(gè)患者在患上這 么嚴(yán)重的GVHD仍能存活方面是不平常的。Le Blanc等報(bào)道的結(jié)果既有希望又鼓舞人心， 對(duì)開發(fā)出利用干細(xì)胞的有效療法來說應(yīng)該是個(gè)激勵(lì)。Le Blanc et al. (2004) "Treatment of severe acute graft-versus-host disease with third party haploidentical mesenchymal stem cells (用第三方單倍同一"性間充質(zhì)干細(xì)胞治療嚴(yán)重急性移植物抗宿主 病），"Lancet363 ： 1439-41〇
[0030] 盡管如此，這些結(jié)果，包括Le Blanc和他的同事的結(jié)果，揭示了 MSCs的潛在缺點(diǎn)。 細(xì)胞需要與傳統(tǒng)的免疫抑制模式（modality) -起給予，而這會(huì)繼續(xù)產(chǎn)生有害免疫應(yīng)答。 MSCs的劑量要求需要非常高才能有效，這會(huì)造成成本更高、給藥更困難、毒性和其它副作用 的風(fēng)險(xiǎn)更大以及其它缺點(diǎn)。
[0031] 鑒于目前的基于干細(xì)胞的移植相關(guān)療法的這些限制，顯然對(duì)這樣的祖細(xì)胞有強(qiáng) 烈的需求，這種祖細(xì)胞能用于所有的一一或者至少大部分的一一接受宿主，而又不需要宿 主-接受者單倍型匹配。此外，還對(duì)這樣的細(xì)胞有需求，這種細(xì)胞具有較大的"比活性"，使 得它們?cè)谳^低劑量下是治療上有效的，且它們的給予不會(huì)造成在使用MSCs獲得有利結(jié)果 時(shí)要求的高劑量模式所伴隨產(chǎn)生的問題。還有對(duì)這樣的細(xì)胞也有需求，這種細(xì)胞具有幾乎 無限的分化潛力，能形成在目的生物中所出現(xiàn)的細(xì)胞。
[0032] 因此，一直對(duì)這樣的細(xì)胞有需求，這種細(xì)胞具有ES、EG和生殖細(xì)胞的自我更新和 分化能力，但沒有免疫原性；當(dāng)同種移植或異種移植到宿主時(shí)不會(huì)形成畸胎瘤；不會(huì)造成 ES、EG和生殖細(xì)胞所伴隨出現(xiàn)的其它安全問題；保持了 ES、EG和生殖細(xì)胞的的其它優(yōu)點(diǎn)；容 易從易得來源如胎盤、臍帶、臍帶血、血液和骨髓分離；能長時(shí)間安全儲(chǔ)藏；能容易獲得，對(duì) 志愿者、供者或患者沒有風(fēng)險(xiǎn)，無須其他人給予同意；不會(huì)帶來涉及到其獲取和與ES、EG和 生殖細(xì)胞一起運(yùn)用的技術(shù)上和運(yùn)銷上的困難。
[0033] 最近，有一類本文稱之為多潛能成體祖細(xì)胞（"MPCs")的細(xì)胞得到了分離和表 征（參見例如美國專利，該專利7, 015, 037通過引用整體結(jié)合到本文中）。（"MAPCs"也可 稱為"MASCs"）。這些細(xì)胞能提供ES、EG和生殖細(xì)胞的許多優(yōu)點(diǎn)，又沒有它們的許多缺點(diǎn)。 例如，MAPCs能夠進(jìn)行無限期培養(yǎng)而又不失去它們的分化潛力。它們顯示出隨同NOD-SCID 小鼠的多個(gè)發(fā)育譜系的有效、長期的移入和分化，在移入和分化的同時(shí)沒有畸胎瘤形成 (在 ES、EG 和生殖細(xì)胞中常見）的跡象（Reyes，M.和 C. Μ· Verfaillie (2001) Ann N Y Acad Sci. 938 :231-5)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0034] 因此，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供這樣的細(xì)胞，它們（i)不是胚胎 干細(xì)胞、不是胚胎生殖細(xì)胞和不是生殖細(xì)胞；（ii)能分化成內(nèi)胚層、外胚層和中胚層胚胎 譜系中的至少兩個(gè)譜系的每一個(gè)的至少一種細(xì)胞類型；（iii)在引入到非同基因受試者 (subject)中時(shí)不會(huì)引起有害免疫應(yīng)答；和（iv)在引入到受試者中時(shí)能調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。在 這個(gè)方面的某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供這樣的細(xì)胞，它們除去如前所述外，還具有免疫抑 制性。此外，本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案提供這樣的細(xì)胞，它們是具有免疫調(diào)節(jié)特性的前述細(xì) 胞，該免疫調(diào)節(jié)特性可用于治療如排除、防止、改善、減輕、降低、最小化、消除和/或整治宿 主中的有害免疫應(yīng)答和/或過程。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞為此作為主要治 療模式單獨(dú)使用或者與其它治療劑和模式一起使用。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述細(xì) 胞在輔助治療模式中使用，在該模式中它們是作為唯一治療劑使用或者與其它治療劑一起 使用。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞在一種或多種主要治療模式中和在一種或多 種輔助治療模式中，都是單獨(dú)地或者與其它治療劑或模式一起使用。
[0035] 本發(fā)明的細(xì)胞在本文中將作更詳細(xì)的描述，在本文中一般稱為"多潛能成體祖細(xì) 胞"，其英文首字母縮略詞為"MAPC"（單數(shù)）和"MPCs"(復(fù)數(shù)）。應(yīng)認(rèn)識(shí)到，這些細(xì)胞不 是ES、不是EG，也不是生殖細(xì)胞，它們具有分化成三種原始胚層譜系（外胚層、中胚層和內(nèi) 胚層）中的至少兩種的細(xì)胞類型、例如分化成所有三種原始譜系的細(xì)胞的能力。
[0036] 例如，MAPCs能形成以下細(xì)胞及其譜系的其它細(xì)胞：內(nèi)臟（splanchnic)中胚層 細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞、外分泌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、生發(fā)細(xì)胞、生齒細(xì) 胞、內(nèi)臟（visceral)中胚層細(xì)胞、造血細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞、神經(jīng)外 胚層細(xì)胞、上皮細(xì)胞、眼細(xì)胞、胰細(xì)胞和肝細(xì)胞樣細(xì)胞等等。由MAPCs形成的細(xì)胞有造骨細(xì) 胞、成軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、骨豁肌細(xì)胞（skeletal muscle cell)、骨豁肌細(xì)胞（skeletal myocyte)、膽上皮細(xì)胞、胰腺泡細(xì)胞、系膜細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞（cardiac muscle cell)、心肌細(xì)胞（cardiomyocyte)、骨細(xì)胞、血管形成細(xì)胞、少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元（包 括5-羥色胺能、GABA能、多巴胺能神經(jīng)元）、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞