專利名稱：：一種快速檢測抑菌物質(zhì)活性的微孔板生物檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域抑菌物質(zhì)產(chǎn)生菌株的選育，特別涉及一種快速檢測抑菌物質(zhì)抑菌活性的微孔板檢測方法。
背景技術(shù)：
：抑菌物質(zhì)可以從環(huán)境中分離得到的天然菌株包括原核生物、真核生物產(chǎn)生，或者基因工程菌通過發(fā)酵產(chǎn)生或從天然產(chǎn)物中直接提取，目前，通常用高效液相色譜法和生物檢測法對其進(jìn)行檢測。高效液相色譜法常用于準(zhǔn)確定量樣品的濃度，而不能直接得到反映樣品抑菌活性高低的最小抑菌濃度(MIC)。此外，該法對設(shè)備和耗材的要求比較高、分析時間長、不適合大規(guī)模樣品的檢測。生物檢測法是利用抑菌物質(zhì)與敏感菌之間的拮抗作用，主要的方法有濾紙片法、管碟法和比濁法。濾紙片法是將經(jīng)過高溫滅菌的濾紙浸入含有抑菌物質(zhì)的待測樣品液中，瀝干溶劑后平貼于涂有指示菌的平板上，培養(yǎng)一定時間后與對照組比較測定抑菌圈的大小，從而確定抑菌物質(zhì)的含量。管碟法是將無菌不銹鋼小杯置于事先涂有指示菌的平板中，并向杯中加入一定量測試液，培養(yǎng)一定時間后，與對照組比較，確定抑菌物質(zhì)含量。這兩種方法都是通過抑菌圈的大小來反映抑菌物質(zhì)活性的高低，操作過程繁瑣、每次平板上測定的樣品數(shù)目有限，一般為4-10個，在大規(guī)模樣品處理時容易受人為因素的影響，靈敏度和可靠性較差。比濁法是將待測樣品加入指示菌的液體培養(yǎng)集中，培養(yǎng)一定時間后測定培養(yǎng)液濁度值的大小，并與對照組進(jìn)行比較以確定其含量。該方法需要對每個樣品分別檢測，耗時較長、且存在著樣品加入和檢測時間不同帶來的誤差，也不適合大批量樣品的快速檢測。因此，有必要建立一種快速、簡便、準(zhǔn)確測量的新方法對抑菌物質(zhì)的活性進(jìn)行檢測。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種快速檢測抑菌物質(zhì)抑菌活性的微孔板檢測方法。該方法是利用待測樣品對敏感指示菌具有較高的抑菌特性，以具有良好標(biāo)準(zhǔn)化和平行化特點的微孔板作為高通量的檢測平臺，將敏感菌指示液和待測樣品在微孔中充分混合并培養(yǎng)適宜的時間后，通過酶標(biāo)儀測定微孔板各孔中培養(yǎng)液濁度的變化對樣品的抑菌活性進(jìn)行快速檢測。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種快速檢測抑菌物質(zhì)活性的微孔板生物檢測方法，其檢測方法的步驟是(1).將經(jīng)過活化培養(yǎng)的敏感指示菌制成濃度為10s-10、fU/mL菌懸液；(2).將菌懸液接種到無菌的敏感菌液體培養(yǎng)基中，制成濃度為104-1()8cfU,/mL敏感菌指示液；(3).利用多道移液器，向微孔板各孔中加入100-750pL敏感菌指示液，培養(yǎng)0-12h后，通過多道移液器繼續(xù)加入5-50pL待測的抑菌物質(zhì)，并反復(fù)抽吸使之與敏感菌指示液充分混合；(4).培養(yǎng)4-24h后，用酶標(biāo)儀在550nm660nm下檢測各孔中培養(yǎng)液的OD值，并計算出各孔中樣品的抑菌率。而且，所述敏感指示菌是原核生物，或真核生物。而且，所述敏感指示菌的原核生物是大腸桿菌(escherchiacoli)、枯草芽包桿菌(bacillussubtilis)、金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus銅綠假單胞菌(pseudomonasaruginosa)或結(jié)核桿菌(corynebacteriumtuberclousis)，所述敏感指示菌的真核生物是酵母菌(saccharomyces或念珠菌(monilia)。而且，所述微孔板各孔的容量為300-100(HiL，微孔形狀為方形或圓形，孔底形狀為平底或圓底，為96孔板，或者是48孔板、24孔板。而且，所述敏感指示液加入到微孔板后的培養(yǎng)方式和其與待測樣品在各孔中充分混合后的培養(yǎng)方式可以是靜置培養(yǎng)，或者振蕩培養(yǎng)。而且，所述抑菌物質(zhì)是從環(huán)境中分離得到的天然菌株包括原核生物、真核生物產(chǎn)生，或基因工程菌通過發(fā)酵產(chǎn)生；或從天然產(chǎn)物中直接提取。而且，所述產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的原核生物是細(xì)菌(bacteria)、放線菌streptomyces)、禾占細(xì)菌(myxobacteria(3)或假單胞菌(pseudomonas)，所述產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的真核生物的是霉菌(mould)、念珠菌(monilia)或酵母菌(saccharomyces)，所述的天然抑菌物質(zhì)為天然產(chǎn)物中提取，例如黃酮類物質(zhì)，殼聚糖類物質(zhì)。而且，所述抑菌率的計算公式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>式中ODB:空白對照孔的吸光值，微孔內(nèi)裝有無菌的敏感菌液體培養(yǎng)基；ODR:菌液對照孔的吸光值，微孔內(nèi)裝有無菌的加入一定敏感指示菌的敏感菌液體培養(yǎng)基；OD:樣品測定孔的吸光值。本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是l.本發(fā)明檢測方法操作簡單，借助于多道移液器和酶標(biāo)儀等多孔道檢測器，可對大量樣品進(jìn)行快速檢測；高度平行化、標(biāo)準(zhǔn)化的檢測條件能有效的消除樣品加入和檢測時間不同帶來的誤差，克服了現(xiàn)有生物檢測方法步驟繁瑣、受人為因素干擾較大的缺點，2.本發(fā)明檢測方法表現(xiàn)出良好的精密度和準(zhǔn)確度，是一種與高效液相色譜法有類似的分析精度但能更直觀反映樣品抑菌活性的檢測方法。3.本發(fā)明檢測方法還能推廣到抑菌物質(zhì)產(chǎn)生菌的高通量篩選工作中，可大大提高篩選效率，加快新物質(zhì)開發(fā)的速度，大量節(jié)省試劑和降低設(shè)備成本。此外，根據(jù)需要，本發(fā)明的檢測裝置還可以采用機械手臂，實現(xiàn)高通量篩選。圖1是本發(fā)明微孔板生物檢測法測定抑菌物質(zhì)活性的流程圖；圖2是本發(fā)明實施例3的納他霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。具體實施例方式下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明進(jìn)一步說明；下述實施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實施例來限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明所使用的菌種中大腸埃希氏菌(五sc/2m'c/^co/OCICC10003購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，多粘類芽孢桿菌(戶"em'6""7/附1.541、地衣芽包桿菌(S"c飾s歸gm》m/501.521、金黃色葡萄球菌(S鄉(xiāng)/y^/ococcw51m^ew)1.89、八抱裂殖酵母(^Sc/zfeosacc/wromyceso"wpon/s)2.1636購自中國普通微生物菌種保藏管理中心。褐黃孢鏈霉菌(&m;3tow_yce;ygz7vo5porei/s)ATCC13326購自美國菌種保藏中心。培養(yǎng)基包括LB培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、YEPD培養(yǎng)基均參照培養(yǎng)基手冊配置(AtlasRM，ParkLC(2000)HandbookofMicrobiologicalMedia,CRCPress，Inc.,CorporateBlvd.,N.W.，BocaRaton,Florida33431)。下面通過三個實施例進(jìn)行詳細(xì)敘述實施例l:對多粘類芽孢桿菌(i^e"/^c///^po/少m^;ra)1.541發(fā)酵液中的抑菌物質(zhì)一多粘菌素E進(jìn)行快速檢測。檢測方法是用接種環(huán)從多粘菌素E產(chǎn)生菌-多粘類芽孢桿菌(戶aem力a"7/M;w/少m少xa)1.541斜面(斜面培養(yǎng)基(g/L):葡萄糖1.0，(NH4)2S041.0，檸檬酸鈉1.0，KH2P041.0，MgS040.125，瓊脂15)上取一環(huán)接種至含30mL種子培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)基(g/L):葡萄糖25，牛肉膏5，酵母膏5，NaC12.5，KH2PO40.8，K2HP040.8,MgS040.125)的250mL三角瓶中，200r/min，30。C搖床培育24h，然后以5%的接種量將種子培養(yǎng)液接種至30mL發(fā)酵培養(yǎng)基(發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L):可溶性淀粉50，葡萄糖15，(麗4)2SO410，MgSO40.25，KH2P040.8，NaCl1.0，CaC03IO)的250mL三角瓶中，30°C，300r/min條件下進(jìn)行發(fā)酵。分別取培養(yǎng)24h和32h的發(fā)酵液各10ml,用1M的硫酸將其pH調(diào)至2.0左右，于4800r/min下離心10min，采用4M的NaOH將所得上清液pH值調(diào)回7.0左右，經(jīng)無菌水稀釋20倍后得到多粘菌素E的待測樣品。采用液體活化法，將敏感指示菌大腸埃希氏菌(^&c/^nV^Vco//)CICC10003接種于LB液體培養(yǎng)基，36t下培養(yǎng)至OD值達(dá)到0.40.6(濃度為10、fWniL)，再以10。/。的接種量加入到LB液體培養(yǎng)基，制成濃度為106cfo/mL的敏感菌指示液。微孔板檢測過程平底24微孔板(容積1000yL)上，取3個微孔作為空白對照孔，每孔加入700IXL無菌的LB液體培養(yǎng)基。另取3個微孔作為菌液對照孔，每孔加入700iiL敏感菌指示液。其余微孔作為樣品測定孔，每孔先加入700HL敏感菌指示液，36'C下100r/min培養(yǎng)6h后再分別加入40PL多粘菌素E待測樣品(每個樣品加到3個微孔中作為平行樣)，用8道移液器抽吸數(shù)次使之充分混勻，于36"C下100r/min培養(yǎng)6h后，放入酶標(biāo)儀，600nm下測定微孔中培養(yǎng)液的OD值。采用的公式是抑菌率％=0Dr—00xl000DR-0DB式中ODB:空白對照孔的吸光值；ODR:菌液對照孔的吸光值；OD:樣品測定孔的吸光值。由此計算出樣品的抑菌率。在同一微孔板上除了有加入樣品液的微孔外，還有加有多粘菌素E標(biāo)準(zhǔn)液的微孔，用于建立微孔板生物檢測多粘菌素E方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線。實驗結(jié)果表明，多粘菌素E濃度在0.331.67mg/L范圍內(nèi)與抑菌率呈良好的線性關(guān)系，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=42.58x-9.50，相關(guān)系數(shù)R2=0.9894。利用上述標(biāo)準(zhǔn)曲線計算待測樣品中多粘菌素E的含量，并與樣品的HPLC法和管碟法進(jìn)行比較，結(jié)果見表1。由表1可知，微孔板生物檢測法的結(jié)果具有較好的平行性，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于4%;與HPLC法相比，二者測定結(jié)果的最大相對偏差小于4%，表現(xiàn)出較好的準(zhǔn)確度和精確度。而管碟法的平行性較差，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均超過10%，與HPLC法相比，二者測定結(jié)果的相對偏差均達(dá)到了7%以上。表i多粘類芽孢桿菌發(fā)酵液中抑菌物質(zhì)的測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例2:對地衣芽孢桿菌(Ba"7/^/^zem/om^)1.521發(fā)酵液中的抑菌物質(zhì)-桿菌肽進(jìn)行快速檢測。用接種環(huán)從桿菌肽產(chǎn)生菌—地衣芽孢桿菌1.521斜面(斜面培養(yǎng)基(g/L):蛋白胨l、牛肉膏l(xiāng)、NaCl05、瓊脂2.2)上取一環(huán)接種至含30mL種子培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)基(g/L):黃豆餅粉2、淀粉1、CaCO30.5)的250mL三角瓶中，240r/min，37C搖床培育16h，然后以5%的接種量將種子培養(yǎng)液接種至裝有30mL發(fā)酵培養(yǎng)基(發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L):豆粕10、淀粉4、(NH4)2SO40.1、CaC030.6、MgSO4.7H2O0.002、MnS04.H20O.OOl)的250mL三角瓶中，37°C，240r/min條件下進(jìn)行發(fā)酵，分別取培養(yǎng)32h、40h和48h的發(fā)酵液各5mL，3000r/min離心10min，再用細(xì)菌過濾器抽濾除菌，所得上清液用水稀釋20倍即為待測樣品。采用固體斜面活化法，將敏感指示菌金黃色葡萄球菌(&"http://^/oco"船m^ew)1.89接種于牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基上，37。C下培養(yǎng)24h后，用無菌水刮下，充分振蕩，所得菌懸液用無菌水稀釋至106cfb/mL，以1%的接種量接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，制成濃度為104cfb/mL的敏感菌指示液。微孔板檢測過程在圓底48微孔板(容積500uL)上，取4個微孔作為空白對照孔，每個微孔內(nèi)分別裝有350iiL無菌的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基。另取4個微孔作為菌液對照孔，每個微孔內(nèi)分別裝有350uL敏感菌指示液。其余微孔作為樣品測定孔，每孔先加入350uL敏感菌指示液，37°C下靜置培養(yǎng)12h后，再分別加入20"L桿菌肽待測樣品(每個樣品加到4個微孔中作為平行樣)，用8道移液器抽吸數(shù)次使之充分混勻，于37。C下靜置培養(yǎng)20h后，放入酶標(biāo)儀，600nm下測定微孔中培養(yǎng)液的OD值，并計算出各孔中樣品的抑菌率(公式同實施例1)。在同一微孔板上除了有加入樣品液的微孔外，還有加有桿菌肽標(biāo)準(zhǔn)液的微孔，用于建立微孔板生物檢測桿菌肽方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線。實驗結(jié)果表明，桿菌肽濃度在0.562.32U/mL范圍內(nèi)與抑菌率呈良好的線性關(guān)系，建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為7=43.24乂-10.39，相關(guān)系數(shù)R2=0.9873。利用上述標(biāo)準(zhǔn)曲線計算待測樣品中桿菌肽的含量，并與樣品的HPLC法和管碟法進(jìn)行比較，結(jié)果見表2。由表2可知，微孔板生物檢測法的結(jié)果具有較好的平行性，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于4%;與HPLC法相比，二者測定結(jié)果的最大相對偏差小于4%，表現(xiàn)出較好的準(zhǔn)確度和精確度。而管碟法的平行性較差，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均超過10%;與HPLC法相比，二者測定結(jié)果的最大相對偏差達(dá)到9%。表2地衣芽孢桿菌發(fā)酵液中抑菌物質(zhì)的5則定結(jié)果HPLC法微孔板生物測定法(u/mL)管碟法(u/mL)(u/mL)測定值相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(％)相對偏差(％)測定值相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(％)相對偏差(％)13.3313.8513.3313.7413.691.652.4215.3614.8411.9216.0312.469.0618.2618.039.0217.7317.943.16-0.4421.4118.3015.9919.6212.123.1227.1626.6227.6525.5025.453.98-3.1527.8925.9122.0623.9810.05-8.10實施例3:對褐黃孢鏈霉菌(S化e;toW2;;cesgz7wsjcwew;s)ATCC13326發(fā)酵液中的抑菌物質(zhì)一納他霉素進(jìn)行快速檢測。檢測方法是用接種環(huán)從納他霉素產(chǎn)生菌一對褐黃孢鏈霉菌ATCCD326斜面(斜面培養(yǎng)基(g/L):葡萄糖10，蛋白胨5，酵母粉3，麥芽浸粉3，瓊脂粉15，pH7.0)上取一環(huán)接種于裝有30mL種子培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)基(g/L):葡萄糖20，蛋白胨6，酵母粉6，NaCllO，pH7.2)的250mL三角瓶中，29°C，200r/min振蕩培養(yǎng)32h，使菌體處于迅速生長期，然后以10%的接種量將種子液接種于裝有50mL發(fā)酵培養(yǎng)基(發(fā)酵培養(yǎng)基g/L:蛋白胨19.5，酵母粉4.5，葡萄糖(50%葡萄糖單獨滅菌)40，pH7.5)的500mL三角瓶中，29°C，200r/min條件下進(jìn)行發(fā)酵，分別取培養(yǎng)40h、50h、60h、70h、80h的發(fā)酵液各lml，加入10ml甲醇，充分振蕩，4000r/min離心，所得上清液用甲醇稀釋5倍即為待測樣品。采用固體斜面活化法，將敏感指示菌八孢裂殖酵母"c/H'^w"cc/^ram;;c"o"osporas)2.1636接種于YEPD斜面培養(yǎng)基上，28'C下培養(yǎng)24h后，用無菌水刮下，充分振蕩，所得菌懸液用無菌水稀釋至5X10^fu/mL，以10%的接種量加入到Y(jié)EPD液體培養(yǎng)基中，制成濃度為5X105cfb/mL的敏感菌指示液。微孔板檢測過程在平底96微孔板(容積330ixL)上，取3個微孔作為空白對照？L，每個微孔內(nèi)分別裝有200PL無菌的YEPD液體培養(yǎng)基。取3個微孔作為菌液對照孔，每個微孔內(nèi)分別裝有200UL敏感菌指示液，其余微孔作為樣品測定孔。每孔先加入200uL敏感菌指示液，再分別加入IOUL納他霉素待測樣品(每個樣品加到3個微孔中作為平行樣)，用8道移液器抽吸數(shù)次使之充分混勻，2纊C下靜置培養(yǎng)10h，放入酶標(biāo)儀，620nm下測定微孔中培養(yǎng)液的OD值，并計算出各孔中樣品的抑菌率(公式同實施例l)。在同一微孔板上除了有加入樣品液的微孔外，還有加入納他霉素標(biāo)準(zhǔn)液的微孔，用于建立微孔板生物檢測納他霉素方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖2為微孔板生物檢測納他霉素的標(biāo)準(zhǔn)曲線。由圖2可知，納他霉素濃度在0.952.14mg/L范圍內(nèi)與抑菌率呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為y=68.50x-52.96，相關(guān)系數(shù)為0.9892。利用上述標(biāo)準(zhǔn)曲線計算待測樣品中納他霉素的含量，并與樣品的HPLC法和管碟法進(jìn)行比較，結(jié)果見下表3。由表3可知，微孔板生物檢測法的結(jié)果具有較好的平行性，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5%;與HPLC法相比，二者測定結(jié)果的最大相對偏差小于3%，表現(xiàn)出較好的準(zhǔn)確度和精確度。而管碟法的平行性較差，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均超過12%，最大的相對偏差接近20%;與HPLC法相比，二者測定結(jié)果的相對偏差在2%-8%左右波動。由表4可知，微孔板生物檢測法具有處理量大、快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點。表3褐黃孢鏈霉菌發(fā)酵液中抑菌物質(zhì)的測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>權(quán)利要求1.一種快速檢測抑菌物質(zhì)活性的微孔板生物檢測方法，其特征在于檢測方法的步驟是(1).將經(jīng)過活化培養(yǎng)的敏感指示菌制成濃度為105-109cfu/mL菌懸液；(2).將菌懸液接種到無菌的敏感菌液體培養(yǎng)基中，制成濃度為104-108cfu/mL敏感菌指示液；2.根據(jù)權(quán)利要求所述的一種快速檢測抑菌物質(zhì)活性的微孔板生物檢測方法，其特征在于所述敏感指示菌是原核生物，或真核生物。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種快速檢測抑菌物質(zhì)活性的微孔板生物檢測方法，其特征在于所述敏感指示菌的原核生物是大腸桿菌(&c/zerafeco//)、禾古草芽孢桿菌(5"c/〃wsswZ)打7&)、金黃色葡萄球菌(5to//少/ococc附awrews)、銅綠假單胞菌(尸sewcfomo"as"as")或結(jié)核桿菌(Cw7"etoc&nY/wrt^erc/(9ww;s)，所述敏感指示菌的真核生物是酵母菌(Sacc/2ara，cas)或念珠菌(Mom7Za)。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測抑菌物質(zhì)活性的微孔板生物檢測方法，其特征在于所述微孔板各孔的容量為300-1000(iL，微孔形狀為方形或圓形，孔底形狀為平底或圓底，為96孔板，或者是48孔板、24孔板。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測抑菌物質(zhì)活性的微孔板生物檢測方法，其特征在于敏感指示液加入到微孔板后的培養(yǎng)方式和其與待測樣品在各孔中充分混合后的培養(yǎng)方式可以是靜置培養(yǎng)，或者振蕩培養(yǎng)。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測抑菌物質(zhì)活性的微孔板生物檢測方法，其特征在于所述抑菌物質(zhì)是從環(huán)境中分離得到的天然菌株包括原核生物、真核生物產(chǎn)生，或基因工程菌通過發(fā)酵產(chǎn)生；或從天然產(chǎn)物中直接提取。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種快速檢測抑菌物質(zhì)活性的微孔板生物檢測方法，其特征在于所述產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的原核生物是細(xì)菌(^cteWa)、放線菌d印to，cas)、禾占細(xì)菌(Afyxo6Wm'a)或假單胞菌(i^ewc/o附o"as)，所述產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的真核生物的是霉菌(mo"W)、念珠菌(^fom7/")或酵母菌(&cc/2^om;;c^)，所述的天然抑菌物質(zhì)為天然產(chǎn)物中提取，例如黃酮類物質(zhì)，殼聚糖類物質(zhì)。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測抑菌物質(zhì)活性的微孔板生物檢測方法，其特征在于所述抑菌率的計算公式如下抑菌率％=_22!112^><1000DR-0DB式中ODB:空白對照孔的吸光值，微孔內(nèi)裝有無菌的敏感菌液體培養(yǎng)基；ODR:菌液對照孔的吸光值，微孔內(nèi)裝有無菌的加入一定敏感指示菌的敏感菌液體培養(yǎng)基；OD:樣品測定孔的吸光值。全文摘要本發(fā)明涉及一種快速檢測抑菌物質(zhì)抑菌活性的微孔板生物檢測方法，該方法是利用待測樣品對敏感指示菌具有較高的抑菌特性，以具有良好標(biāo)準(zhǔn)化和平行化特點的微孔板作為高通量的檢測平臺，將敏感菌指示液和待測樣品在微孔中充分混合并培養(yǎng)適宜的時間后，通過酶標(biāo)儀測定微孔板各孔中培養(yǎng)液濁度的變化對樣品的抑菌活性進(jìn)行快速檢測。本發(fā)明操作簡單、分析速度快、一次處理量大、結(jié)果可靠性高，克服了現(xiàn)有生物檢測方法步驟繁瑣、受人為因素干擾較大的缺點，是一種與高效液相色譜法有類似的分析精度但能更直觀反映樣品抑菌活性的檢測方法。本發(fā)明還能推廣到抑菌物質(zhì)產(chǎn)生菌的高通量篩選工作。文檔編號C12Q1/18GK101413876SQ200810153179公開日2009年4月22日申請日期2008年11月21日優(yōu)先權(quán)日2008年11月21日發(fā)明者丹劉,峰劉,李建姝,敏王,駱健美申請人:天津科技大學(xué)