專利名稱：截短側(cè)耳素的發(fā)酵方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種截短側(cè)耳素的發(fā)酵方法。
背景技術(shù)：
目前生產(chǎn)沃尼妙林中間體——截短側(cè)耳素發(fā)酵生產(chǎn)工藝中，各廠都 是采取補料分批發(fā)酵法，即液氮冷凍管菌種接種至試管斜面，經(jīng)15天 培養(yǎng)，將生長好的斜面菌種接入搖瓶，經(jīng)8-9天搖床震蕩培養(yǎng)，再接入 種子罐，通常采用二級種子罐培養(yǎng)，需要四天時間，接入發(fā)酵罐以后， 根據(jù)菌體生長代謝的需要，不斷補入葡萄糖、豆油、堿、水等物料，發(fā)
酵300小時左右，效價在9000-10000u/ml放罐，發(fā)酵液供截短側(cè)耳素 提取。分批發(fā)酵法發(fā)酵罐利用率低，發(fā)酵罐利用率只有75%左右，菌種 的生產(chǎn)能力沒有得到充分發(fā)揮。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種可以有效提高發(fā)酵罐利用率、菌種的生 產(chǎn)能力的截短側(cè)耳素的發(fā)酵方法。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是
一種截短側(cè)耳素的發(fā)酵方法，其特征是包括將菌種接種至試管斜
面，經(jīng)15天培養(yǎng)后，將生長好的斜面菌種接入搖瓶，經(jīng)8 9天搖床震 蕩培養(yǎng)后再接入種子罐，接入種子罐的接種量為發(fā)酵罐液體容量的15 。％，經(jīng)三級培養(yǎng)后自發(fā)酵，發(fā)酵30 50小時至還原糖降至1.0%時，連續(xù)流加30% 40%V/V的葡萄糖液，使發(fā)酵液中葡萄糖含量為0.8 1.0%，，并用NaOH溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵液PH值至6.8 7.0;發(fā)酵至120 150
小時時，觀察菌絲生長狀況，當菌絲美蘭染色由深變淡時，補入發(fā)酵罐 液體容量1.0%的玉米漿及發(fā)酵罐液體容量0.2%的豆餅粉，發(fā)酵時間為 210 230小時，發(fā)酵至效價為9000 10000u/ml，發(fā)酵液體積達發(fā)酵罐 液體容量的70% 80%時，放出相當于發(fā)酵罐液體容量100%的發(fā)酵液， 再補入發(fā)酵罐液體容量1.0%的玉米漿及發(fā)酵罐液體容量0.2%的豆餅 粉，及發(fā)酵罐液體容量8.8%的無菌水，并連續(xù)流加30% 40%V/V的 葡萄糖液，使發(fā)酵液中葡萄糖含量為0.5 0.8%,，并用NaOH溶液調(diào)節(jié) 發(fā)酵液PH值至6.8 7.0;發(fā)酵時間為240 260小時，至效價在9500 10500時，再次放出相當于發(fā)酵罐液體容量10%的發(fā)酵液，并補入相當 于發(fā)酵罐液體容量10%的無菌水，并連續(xù)流加30。％ 40%V/V的葡萄 糖液，使發(fā)酵液中葡萄糖含量為0.4 0.6%，，并用NaOH溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵 液PH值至6.8 7.0;發(fā)酵至270 290小時時，放出相當于發(fā)酵罐液體 容量10%的發(fā)酵液，再補入發(fā)酵罐液體容量1.0%的玉米漿及發(fā)酵罐液 體容量0.2%的豆餅粉，及發(fā)酵罐液體容量8.8%的無菌水，并連續(xù)流加 30X 40XV/V的葡萄糖液，使發(fā)酵液中葡萄糖含量為0.4 0.6%,，并 用NaOH溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵液PH值至6.8 7.0;發(fā)酵至300-320小時，效 價達10000-11000u/ml，發(fā)酵體積為發(fā)酵罐液體容量的75-80%，發(fā)酵指 數(shù)為0. 036十億/nAh。
本發(fā)明可以有效提高發(fā)酵罐利用率、菌種的生產(chǎn)能力。截短側(cè)耳素 發(fā)酵菌種屬擔(dān)子菌綱側(cè)耳菌屬(pleurotusmutilus)，截短側(cè)耳素是脂溶性化合物，存在于菌絲體內(nèi)。采用補料并定時放料分批發(fā)酵法菌體的 平均生產(chǎn)速率比一般的補料分批發(fā)酵提高10.0%，從而使罐批產(chǎn)量增 加，主要是由于中間帶放料使菌體代謝盡可能處于原有的平衡狀態(tài)，使 菌體比生產(chǎn)速率增加，相應(yīng)地增加了比生產(chǎn)速率及生產(chǎn)速率。因在整個 發(fā)酵過程中空氣不斷通過發(fā)酵液帶走發(fā)酵液中的水分，水分在不斷蒸 發(fā)，取無菌樣和測生化樣減少少量體積，因此在每次帶放料后除補充同 體積的新鮮培養(yǎng)基或水以外，發(fā)酵過程中蒸發(fā)的水分和取樣減少的體積 主要由流加的糖液、調(diào)PH的堿液及菌體對基質(zhì)氧化及產(chǎn)物合成產(chǎn)生的 水來補充的，因調(diào)PH的堿液用量及菌體對基質(zhì)氧化及產(chǎn)物合成產(chǎn)生的 水很少，所以發(fā)酵液減少的體積主要由流加的糖液中的水來補充的。蒸 發(fā)量與通氣量成正比，與空氣密度成正比，與空氣濕度成反比，所以蒸 發(fā)量受季節(jié)影響較大，冬季由于空氣濕度的較低，流加糖的濃度通常在
30%左右，夏季為40%，同時也要根據(jù)發(fā)酵液的體積、泡沫狀況及菌 體濃度，實時補入無菌水，使發(fā)酵液體積維持在75-80%。本發(fā)明效 價可達10000-11000u/ml，發(fā)酵體積75-80%,罐利用率可達95-105%， 發(fā)酵指數(shù)由0. 025十億/m3. h提高到0. 036十億/m3. h。
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明。
具體實施例方式
一種截短側(cè)耳素的發(fā)酵方法，包括將菌種接種至試管斜面，經(jīng)15 天培養(yǎng)后，將生長好的斜面菌種接入搖瓶，經(jīng)8 9天搖床震蕩培養(yǎng)后 再接入種子罐，接入種子罐的接種量為發(fā)酵罐液體容量的15%,經(jīng)三級 培養(yǎng)后自發(fā)酵，發(fā)酵30 50小時至還原糖降至1.0%時，連續(xù)流加30X 40XV/V的葡萄糖液，使發(fā)酵液中葡萄糖含量為0.8 1.0°/。,，并用 NaOH溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵液PH值至6.8 7.0;發(fā)酵至120 150小時時，觀 察菌絲生長狀況，當菌絲美蘭染色由深變淡時，補入發(fā)酵罐液體容量1.0 %的玉米漿及發(fā)酵罐液體容量0.2%的豆餅粉，發(fā)酵時間為210 230小 時，發(fā)酵至效價為9000 10000u/ml，發(fā)酵液體積達發(fā)酵罐液體容量的 70% 80%時，放出相當于發(fā)酵罐液體容量10%的發(fā)酵液，再補入發(fā)酵 罐液體容量1.0%的玉米漿及發(fā)酵罐液體容量0.2%的豆餅粉，及發(fā)酵罐 液體容量8.8。^的無菌水，并連續(xù)流加30X 40Q^V/V的葡萄糖液，使 發(fā)酵液中葡萄糖含量為0.5 0.8%,，并用NaOH溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵液PH值 至6.8 7.0;發(fā)酵時間為240 260小時，至效價在9500 10500時，再 次放出相當于發(fā)酵罐液體容量10%的發(fā)酵液，并補入相當于發(fā)酵罐液體 容量10%的無菌水，并連續(xù)流加30% 40%V/V的葡萄糖液，使發(fā)酵 液中葡萄糖含量為0.4 0.6%,，并用NaOH溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵液PH值至 6.8 7.0;發(fā)酵至270 2卯小時時，放出相當于發(fā)酵罐液體容量10%的 發(fā)酵液，再補入發(fā)酵罐液體容量1.0%的玉米漿及發(fā)酵罐液體容量0.2。％ 的豆餅粉，及發(fā)酵罐液體容量8.8%的無菌水，并連續(xù)流加30% 40% V/V的葡萄糖液，使發(fā)酵液中葡萄糖含量為0.4 0.6%，，并用NaOH溶 液調(diào)節(jié)發(fā)酵液PH值至6.8 7.0;發(fā)酵至300-320小時，效價達 10000-11000u/ml，發(fā)酵體積為發(fā)酵罐液體容量的75-80%，發(fā)酵指數(shù)為 0. 036十億/m3. h。
權(quán)利要求
1、一種截短側(cè)耳素的發(fā)酵方法，其特征是包括將菌種接種至試管斜面，經(jīng)15天培養(yǎng)后，將生長好的斜面菌種接入搖瓶，經(jīng)8～9天搖床震蕩培養(yǎng)后再接入種子罐，接入種子罐的接種量為發(fā)酵罐液體容量的15％，經(jīng)三級培養(yǎng)后自發(fā)酵，發(fā)酵30～50小時至還原糖降至1.0％時，連續(xù)流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使發(fā)酵液中葡萄糖含量為0.8～1.0％，，并用NaOH溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵液PH值至6.8～7.0；發(fā)酵至120～150小時時，觀察菌絲生長狀況，當菌絲美蘭染色由深變淡時，補入發(fā)酵罐液體容量1.0％的玉米漿及發(fā)酵罐液體容量0.2％的豆餅粉，發(fā)酵時間為210～230小時，發(fā)酵至效價為9000～10000u/ml，發(fā)酵液體積達發(fā)酵罐液體容量的70％～80％時，放出相當于發(fā)酵罐液體容量10％的發(fā)酵液，再補入發(fā)酵罐液體容量1.0％的玉米漿及發(fā)酵罐液體容量0.2％的豆餅粉，及發(fā)酵罐液體容量8.8％的無菌水，并連續(xù)流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使發(fā)酵液中葡萄糖含量為0.5～0.8％，，并用NaOH溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵液PH值至6.8～7.0；發(fā)酵時間為240～260小時，至效價在9500～10500時，再次放出相當于發(fā)酵罐液體容量10％的發(fā)酵液，并補入相當于發(fā)酵罐液體容量10％的無菌水，并連續(xù)流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使發(fā)酵液中葡萄糖含量為0.4～0.6％，，并用NaOH溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵液PH值至6.8～7.0；發(fā)酵至270～290小時時，放出相當于發(fā)酵罐液體容量10％的發(fā)酵液，再補入發(fā)酵罐液體容量1.0％的玉米漿及發(fā)酵罐液體容量0.2％的豆餅粉，及發(fā)酵罐液體容量8.8％的無菌水，并連續(xù)流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使發(fā)酵液中葡萄糖含量為0.4～0.6％，，并用NaOH溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵液PH值至6.8～7.0；發(fā)酵至300-320小時，效價達10000-11000u/ml，發(fā)酵體積為發(fā)酵罐液體容量的75-80％，發(fā)酵指數(shù)為0.036十億/m3.h。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種截短側(cè)耳素的發(fā)酵方法，采用補料帶放料分批發(fā)酵法，種子罐菌種培養(yǎng)由二級改為三級。本發(fā)明可以有效提高發(fā)酵罐利用率、菌種的生產(chǎn)能力。
文檔編號C12R1/645GK101319234SQ20081002297
公開日2008年12月10日 申請日期2008年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月4日
發(fā)明者冒永松, 沈春梅, 賈永飛, 陳劍慧, 韓勤更 申請人:江蘇賽奧生化有限公司