專利名稱：一種截短側耳素晶體的制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥中間體制備技術領域，特別是涉及ー種泰妙菌素合成中間體截短側耳素晶體的制備方法。
背景技術：
截短側耳素(Pleuromutilin)是由側耳菌(Pleurotus mutilus)和帕氏側耳菌產生的一類廣譜的ニ萜烯類抗生素，是合成延胡索酸泰妙菌素的前體。它具有良好的抗菌活性，能夠有效抑制大部分革蘭陽性菌以及部分革蘭氏陰性菌，被廣泛用于獸藥臨床中。近年 來，研究人員對截短側耳素(Γ14位進行結構修飾，獲得了對細菌和支原體的抑菌活性有所增強的衍生物，如泰妙菌素，沃尼妙林，瑞他莫林等。因此，對截短側耳素進行提取純化是生產上述產品的關鍵步驟。目前，截短側耳素的獲得大多是采用將發(fā)酵液中的截短側耳素提取純化，然后經離心得到截短側耳素產品。有關文獻以及公開的專利報道的提取截短側耳素的方法還有如下幾種(I)干菌絲采用MIBK (甲基異丁基甲酮)浸取，處理得粗品；粗品用甲醇溶解，濃縮洗滌最后得截短側耳素成品；(2)干菌絲直接采用MIBK萃取，濃縮，濃縮液直接轉入泰妙菌素合成；(3)菌絲干燥過濾后，用醋酸丁酯萃取，濃縮結晶至截短側耳素成品；(4)采取甲醇或こ醇提取，濃縮，降溫結晶至成品。上述エ藝均較為簡単，但是最終所獲得的產品雜質含量較高，純度較低，對后エ序產品影響較大。

發(fā)明內容
針對上述延胡索酸泰妙菌素的中間體產品雜質含量較高，檢測困難等諸多問題，本發(fā)明提供一種制備方法簡單，產品收率高，純度高，容易實現的截短側耳素晶體的制備方法。本發(fā)明所采用的技術方案如下
ー種截短側耳素晶體的制備方法，其特征是將截短側耳素干菌絲用丙酮浸提，浸提液濃縮至基本無丙酮，待有晶體析出時降溫結晶、離心、真空干燥至干燥失重低于1%，得截短側耳素粗品，然后將粗品用甲醇溶液溶解，活性炭脫色，濃縮至有晶體析出時降溫結晶，離心分離，用冷石油醚洗滌，真空干燥至干燥失重低于1%，得截短側耳素晶體。其中截短側耳素晶體粗品提取包括以下步驟
(1)浸提
將截短側耳素干菌絲用丙酮浸取兩次，浸取后離心分離，將兩次所得的浸取液合并。第一次浸提每Ig截短側耳素干菌絲加入5 7L的丙酮，浸提時間為3 4小時；第二次浸提每Ig截短側耳素干菌絲加入2 4L的丙酮，浸提時間為I小時；
(2)濃縮
浸提液轉入真空濃縮器，在5(T60°C以下真空攪拌至基本無丙酮，真空度控制在-O. 04 -O. 06MPa ；
(3)降溫結晶、離心、干燥
將濃縮液轉入結晶罐，緩慢降溫至(T5°C，此時析出大量黃色結晶顆粒，繼續(xù)保溫5小吋，充分結晶后，離心分離，5(T55°C真空干燥至干燥失重低于1%，得截短側耳素粗品。截短側耳素晶體制備包括如下步驟
(1)溶解
將截短側耳素粗品用甲醇溶解，加入甲醇的體積為粗品質量的4飛倍，加熱至溶解完
全；
(2)脫色
向溶解液中加入粗品重量的廣2%的活性炭，脫色O. 5^1小時，過濾；
(3)濃縮
將濾液轉入真空濃縮器，真空濃縮蒸發(fā)至原體積的3(Γ40%，此時有晶體析出；
(4)降溫結晶，分離，用冷石油醚洗滌，干燥
將濃縮液轉入結晶罐，緩慢降溫到(T5°C，析出白色晶體，保溫反應5小吋，充分結晶，用離心機離心分離，加入晶體質量10倍的冷石油醚洗滌，6(T70°C真空干燥至干燥失重低于1%，得截短側耳素晶體。與現有技術相比，本發(fā)明的有益效果如下
(O國內丙酮的市場價格為6 7元/kg，而MIBK的市場價格為60 70元/kg，醋酸丁酯的市場價格為9 10元/kg，本發(fā)明采用丙酮浸提制備截短側耳素粗品代替了原有エ藝的MIBK或醋酸丁酯浸提制備粗品，大大降低了溶劑的使用成本，提高了企業(yè)的經濟效益。同時，采用MIBK或醋酸丁酯浸提，其提取收率為80 90% ;而采用丙酮，其提取收率>90%，詳細數據見實施例。(2)本發(fā)明提取純化工藝條件溫和，容易實現，易于操作。(3)本發(fā)明采用的溶媒較少，操作簡單，不僅降低了雜質的引入，使產品純度高于98%，而且很大程度上降低了能耗，減少了溶媒回收的困難，減少了廢物的排放。(4)本發(fā)明是環(huán)保型的提取純化工藝，所采用的溶媒可以循環(huán)利用，對環(huán)境影響較小，有一定的發(fā)展前景。
具體實施例方式下面用實例予以說明本發(fā)明，應該理解的是，實例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。本發(fā)明的范圍與核心內容依據權利要求書加以確定。實施例I截短側耳素粗品提取
(I)浸堤向每克截短側耳素干菌絲中加入5L的丙酮，緩慢攪拌，浸提3小時后，用離心機離心，離心處理后的菌絲再用3L的丙酮二次浸提，浸提I小時后，離心，合并兩次浸提液并轉入真空濃縮器。(2)濃縮浸提液轉入真空濃縮器后，在5(T60°C攪拌，濃縮蒸發(fā)至基本無丙酮，當有晶體析出吋，將濃縮液迅速轉入結晶罐。(3)結晶在緩慢攪拌的條件下，以5 8°C /h的速度緩慢降溫，降至(T5°C，保溫反應5小吋，晶體完全析出。離心，5(T55°C真空干燥至干燥失重低于1%，得截短側耳素粗品。離心液再次濃縮、降溫結晶、干燥得截短側耳素粗品，合并兩次所得粗品，回收丙酮，循環(huán)使用。截短側耳素晶體制備
(1)溶解加入粗品質量4倍的甲醇，加熱攪拌，使截短側耳素粗品完全溶解；
(2)脫色向溶解液中加入粗品重量的廣2%的活性炭，脫色反應O.5小時，過濾，將脫色液轉入真空濃縮器；
(3)濃縮將溶液真空濃縮，濃縮蒸發(fā)至原體積的40%，此時開始有晶體析出，迅速轉入結晶te ；
(4)結晶緩慢攪拌，并以5l°C/h的速度緩慢降溫至(T5°C，此時析出大量晶體，保溫反應5小吋，直至結晶完全，離心，加入晶體質量10倍的冷石油醚洗滌，6(Γ70で真空干燥至干燥失重低于1%，得截短側耳素成品。離心液重復濃縮，降溫結晶等操作，合并兩次所得的截短側耳素晶體?；厥杖苊郊跋礈煲?，循環(huán)使用。最終提取收率達90%，產品純度99. 1%。實施例2
方法步驟同實施例1，不同的是溶媒加入量不同，數據如下
截短側耳素粗品提取
向每克截短側耳素干菌絲中加入6L的丙酮，緩慢攪拌，浸提3小時后，用離心機離心，離心處理后的菌絲再用3L的丙酮二次浸提，浸提I小時后，離心，合并兩次浸提液并轉入真空濃縮器。濃縮和結晶同實施例I。截短側耳素晶體制備
加入粗品質量4倍的甲醇，加熱攪拌，使截短側耳素粗品完全溶解；其它如脫色、濃縮、結晶同實施例I。最終提取收率達90%以上，產品純度98%。實施例3
方法步驟同實施例1，不同的是溶媒加入量不同，數據如下
截短側耳素粗品提取
浸堤向每克截短側耳素干菌絲中加入6L的丙酮，緩慢攪拌，浸提3小時后，用離心機離心，離心處理后的菌絲再用4L的丙酮二次浸提，浸提I小時后，離心，合并兩次浸提液并 轉入真空濃縮器。濃縮和結晶同實施例I。截短側耳素晶體制備
溶解加入粗品質量5倍的甲醇，加熱攪拌，使截短側耳素粗品完全溶解；其它如脫色、濃縮、結晶同實施例I。最終提取收率達90%以上，產品純度98. 8%。實施例4
方法步驟同實施例1，不同的是溶媒加入量不同，數據如下
截短側耳素粗品提取浸堤向每克截短側耳素干菌絲中加入7L的丙酮，緩慢攪拌，浸提3小時后，用離心機離心，離心處理后的菌絲再用2L的丙酮二次浸提，浸提I小時后，離心，合并兩次浸提液并轉入真空濃縮器。濃縮和結晶同實施例I。截短側耳素晶體制備
溶解加入粗品質量5倍的甲醇，加熱攪拌，使截短側耳素粗品完全溶解；其它如脫色、濃縮、結晶同實施例I。最終提取收率達90%以上，產品純度98. 2%。實施例5
方法步驟同實施例1，不同的是浸提時間不同，數據如下
截短側耳素粗品提取
浸堤向每克截短側耳素干菌絲中加入5L丙酮，緩慢攪拌，浸提4小時后，用離心機離心，離心處理后的菌絲再用3L的丙酮二次浸提，浸提2小時后，離心，合并兩次浸提液并轉入真空濃縮器。濃縮和結晶同實施例I。截短側耳素晶體制備方法步驟相同，最終提取收率達90%以上，產品純度98. 9%。對比例采用MIBK(甲基異丁基甲酮)提取截短側耳素 截短側耳素粗品提取
(I)浸堤向每克截短側耳素干菌絲中加入5L的MIBK，緩慢攪拌，浸提3小時后，用離心機離心，離心處理后的菌絲再用3L的MIBK 二次浸提，浸提I小時后，離心，合并兩次浸提液并轉入真空濃縮器。(2)濃縮浸提液轉入真空濃縮器后，在5(T60°C攪拌，濃縮蒸發(fā)至基本無MIBK，當有晶體析出吋，將濃縮液迅速轉入結晶罐。(3)結晶在緩慢攪拌的條件下，以5 8°C /h的速度緩慢降溫，降至(T5°C，保溫反應5小吋，晶體完全析出。離心，5(T55°C真空干燥至干燥失重低于1%，得截短側耳素粗品。離心液再次濃縮、降溫結晶、干燥得截短側耳素粗品。截短側耳素晶體制備
(I)溶解加入粗品質量4倍的甲醇，加熱攪拌，使截短側耳素粗品完全溶解。(2)脫色向溶解液中加入粗品質量的f 2%的活性炭，脫色反應O. 5小時，過濾，將脫色液轉入真空濃縮器。(3)濃縮將溶液真空濃縮，濃縮蒸發(fā)至原體積的40%，此時開始有晶體析出，迅速轉入結晶 ；
(4)結晶緩慢攪拌，并以5l°C /h的速度緩慢降溫至(T5°C，此時析出大量晶體，保溫反應5小時，直至結晶完全，離心，加入晶體質量IO倍的冷石油醚洗滌，6(T70°C真空干燥至 干燥失重低于1%，得截短側耳素成品。離心液重復濃縮，降溫結晶等操作，合并兩次所得的截短側耳素晶體。最終提取收率達90%，產品純度97%。
權利要求
1.一種截短側耳素晶體的制備方法，其特征是將截短側耳素干菌絲用丙酮浸提，浸提液濃縮至基本無丙酮，待有晶體析出時降溫結晶、離心、干燥至干燥失重低于1%，得截短側耳素粗品，然后將粗品用甲醇溶液溶解，活性炭脫色，濃縮至有晶體析出時降溫結晶，離心分離，用冷石油醚洗滌，干燥至干燥失重低于1%，得截短側耳素晶體。
2.按照權利要求I所述的截短側耳素晶體的制備方法，其特征是上述截短側耳素干菌絲用丙酮浸提兩次，浸取后離心分離，合并兩次所得的浸提液。
3.按照權利要求I或2所述的截短側耳素晶體的制備方法，其特征是上述截短側耳素干菌絲浸提，第一次浸提每Ig截短側耳素干菌絲加入5 7L的丙酮，浸提時間為3 4小時；第二次浸提每Ig截短側耳素干菌絲加入2 4L的丙酮，浸提時間為I小時。
4.按照權利要求I所述的截短側耳素晶體的制備方法，其特征是上述浸提液濃縮采用真空濃縮，控制溫度為5(T60°C，真空度為-0. 04^-0. 06MPa。
5.按照權利要求I所述的截短側耳素晶體的制備方法，其特征是所述浸提液的降溫結晶是將濃縮液轉入結晶罐，緩慢降溫至(T5°C，保溫至晶體完全析出。
6.按照權利要求I所述的截短側耳素晶體的制備方法，其特征是所述粗品離心干燥處理過程是采用離心機離心處理，干燥采用真空烘箱干燥，5(T55°C真空干燥至干燥失重低于1%。
7.按照權利要求I所述的截短側耳素晶體的制備方法，其特征是所述將粗品用甲醇溶液溶解時加入甲醇的體積為粗品質量的4飛倍。
8.按照權利要求I所述的截短側耳素晶體的制備方法，其特征是上述活性炭脫色時活性炭加入質量為粗品質量的廣2%，脫色0. 5^1小時。
9.按照權利要求I所述的截短側耳素晶體的制備方法，其特征是上述粗品溶解液的濃縮采用真空濃縮，控制溫度為6(T70°C，真空度為-0. 04^-0. 06MPa。
10.按照權利要求I所述的截短側耳素晶體的制備方法，其特征是所述粗品濃縮液的降溫結晶是將濃縮液轉入結晶罐，緩慢降溫到(T5°C，保溫至結晶完全。
11.按照權利要求I所述的截短側耳素晶體的制備方法，其特征是所述晶體分離采用離心機分離。
12.按照權利要求I所述的截短側耳素晶體的制備方法，其特征是所述晶體用冷石油醚洗滌，石油醚的加入體積為晶體質量的9 10倍。
13.按照權利要求I所述的截短側耳素晶體的制備方法，其特征是所述晶體干燥采用真空烘箱干燥，6(T70°C真空干燥至干燥失重低于1%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種截短側耳素晶體的制備方法，該制備方法是將截短側耳素干菌絲用丙酮浸提，浸提液濃縮至基本無丙酮，待有晶體析出時降溫結晶、離心、干燥至干燥失重低于1%，得截短側耳素粗品，然后將粗品用甲醇溶液溶解，活性炭脫色，濃縮至有晶體析出時降溫結晶，分離，用冷石油醚洗滌，干燥至干燥失重低于1%，得截短側耳素晶體。本發(fā)明采用丙酮代替甲基異丁基甲酮浸提，不僅降低了生產成本，提高了提取收率，而且減少了溶媒消耗及回收困難的問題，工藝條件溫和，易于實現，降低了環(huán)境污染。在制備過程中，選擇合適的溶媒使用量，減少了截短側耳素雜質的引入，使產品純度達98%以上。
文檔編號C07C67/56GK102633642SQ20121011208
公開日2012年8月15日 申請日期2012年4月17日 優(yōu)先權日2012年4月17日
發(fā)明者周麗娜, 奇乃, 王 義, 趙伯龍 申請人:寧夏泰瑞制藥股份有限公司