專利名稱：深層與淺層靜態(tài)偶聯(lián)發(fā)酵生產(chǎn)高纖椰果的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種深層與淺層靜態(tài)偶聯(lián)發(fā)酵生產(chǎn)高 纖椰果的方法。
背景技術(shù)：
醋酸菌在以椰子水為主要原料的培養(yǎng)液中靜態(tài)發(fā)酵，液體表面形成富含纖維素的凝膠膜狀物稱為高纖椰果，英文名稱為"natadecoco"。高纖椰果富含 細菌纖維素，具有很高的持水性和彈性，口感爽滑，咀嚼性好，可作為一種優(yōu) 良的高纖維食品，具有減肥、清腸胃、防便秘等保健功能，在中國、日本、菲 律賓和印度尼西亞等國家十分暢銷。高纖椰果原產(chǎn)于菲律賓，現(xiàn)在東南亞各國 均有生產(chǎn)，而我國海南省已有高纖椰果生產(chǎn)廠家近100家。高纖椰果生產(chǎn)是產(chǎn)膜醋酸菌好氧發(fā)酵生產(chǎn)細菌纖維素的過程，國內(nèi)外許多 研究人員已對其發(fā)酵條件進行了大量研究。研究表明，在高纖椰果發(fā)酵過程中， 氣流與攪拌都會影響細菌纖維素凝膠膜的完整性。采用深層液體動態(tài)發(fā)酵(通 氣或攪拌等)，發(fā)酵液中易形成絮狀菌團，深層發(fā)酵階段的終點不易確定，且 分裝發(fā)酵淺盤時各盤菌體濃度不均勻，從而導(dǎo)致各發(fā)酵盤的發(fā)酵時間差別較 大，難以應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。為了獲取高相對分子量纖維素的椰果產(chǎn)品，并使 凝膠膜完整而不分層，宜采用淺盤進行淺層液體靜態(tài)發(fā)酵進行生產(chǎn)。但是，淺 盤液體發(fā)酵存在發(fā)酵條件不易控制，占地面積大，單位面積廠房產(chǎn)能低，且現(xiàn) 有淺盤發(fā)酵法的發(fā)酵周期較長，容易污染雜菌等缺點?？s短淺層液體靜態(tài)發(fā)酵 周期、提高發(fā)酵效率和防止雜菌污染等仍是高纖椰果發(fā)酵生產(chǎn)中急需解決的關(guān) 鍵問題。發(fā)明內(nèi)容針對現(xiàn)有高纖椰果發(fā)酵生產(chǎn)中存在淺層液體靜態(tài)發(fā)酵周期長等問題，本發(fā) 明的目的在于提供一種深層與淺層靜態(tài)偶聯(lián)發(fā)酵生產(chǎn)高纖椰果的方法，該方法 縮短了淺層液體靜態(tài)發(fā)酵周期，提高單位面積廠房的發(fā)酵效率，并降低雜菌污
染機會。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)一種深層與淺層靜態(tài)偶聯(lián)發(fā)酵生產(chǎn) 高纖椰果的方法，包括如下步驟(1) 深層靜態(tài)發(fā)酵將發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)過加熱滅菌并冷卻至28 32i:后，接入木醋桿菌，所述木 醋桿菌接種量為0.025 10.0%(體積百分比)，在發(fā)酵罐中進行深層靜態(tài)發(fā)酵， 在發(fā)酵過程中，在發(fā)酵液面的空間連續(xù)通入無菌空氣，并控制發(fā)酵溫度為28 32°C，深層靜態(tài)發(fā)酵終點為發(fā)酵液的濕菌體濃度達到2.0 3.0g/L。(2) 淺層靜態(tài)發(fā)酵將步驟(1)中得到的濕菌體濃度為2.0 3.0g/L的發(fā)酵液分裝到經(jīng)過滅菌 處理的淺層容器中，進行淺層靜態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵過程中控制溫度26 34°C，淺 層容器中的凝膠膜厚度達到產(chǎn)品規(guī)格厚度(厚度為3 24mm)時結(jié)束發(fā)酵， 即得到高纖椰果。為了更好地實現(xiàn)本發(fā)明，步驟(1)中發(fā)酵培養(yǎng)基中包括椰子水(椰子破 殼取水)，所述椰子水的體積百分比為20 100%;所述發(fā)酵培養(yǎng)基配制時需 調(diào)節(jié)pH為3.5 5.5。步驟(1)中無菌空氣的通入量為(0.01x發(fā)酵容積)L/min以上，連續(xù)通 入無菌空氣使發(fā)酵罐內(nèi)壓力達到0.01 0.02MPa (表壓)，以防雜菌污染。步驟(1)深層靜態(tài)發(fā)酵時間為84 132h，具體時間與接種量、終點濕菌 體濃度有關(guān)。步驟(2)中濕菌體濃度采用離心稱重法測定在100mL發(fā)酵液中加入 O.lg纖維素酶(〉15 Wmg)，恒溫5(TC振蕩2h，充分水解后，補充蒸餾水， 使體積至100mL，得到水解液，然后將10mL水解液于4000r/min離心20min， 對沉淀物進行稱重，并計算出沉淀物濃度G, (g/L);同時，稱取0.1g纖維素 酶(〉15u/mg)加到100mL蒸餾水中，經(jīng)振蕩使其混合均勻，以同樣方法測 定出沉淀物濃度G2 (g/L);最后，可計算出濕菌體濃度為(GrG2) (g/L)。步驟(2)中淺層容器的裝液高度為30mm以下，具體裝液高度需根據(jù)產(chǎn) 品規(guī)格而定。特別優(yōu)選，步驟(2)中淺層靜態(tài)發(fā)酵時間40 192h，則淺層容 器中的凝膠膜厚度達到產(chǎn)品規(guī)格厚度，具體時間需根據(jù)產(chǎn)品規(guī)格而定，凝膠膜 厚度愈大，淺層靜態(tài)發(fā)酵周期愈長。根據(jù)發(fā)酵罐具有占地面積小、發(fā)酵條件易控制、不易污染雜菌等優(yōu)點，本
發(fā)明巧妙地將發(fā)酵罐與淺層容器結(jié)合起來，采用了深層液體靜態(tài)發(fā)酵和淺層液 體靜態(tài)發(fā)酵的偶聯(lián)工藝進行生產(chǎn)高纖椰果。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點和有益效果-(1) 本發(fā)明與深層液體動態(tài)發(fā)酵(通氣或攪拌等)相比，本發(fā)明在發(fā)酵 罐深層發(fā)酵階段采用靜態(tài)發(fā)酵工藝，解決了在動態(tài)發(fā)酵存在的問題，其發(fā)酵終點為發(fā)酵液的濕菌體濃度達到2.0 3.0g/L，且發(fā)酵過程中不需往發(fā)酵液中通氣和攪拌，能耗低，操作簡單。(2) 本發(fā)明與現(xiàn)有淺層靜態(tài)發(fā)酵法相比，當淺層容器與裝液高度相同時，本發(fā)明中淺層靜態(tài)發(fā)酵的初始菌體濃度較大，且細胞己經(jīng)處于代謝細菌纖維素 階段，在淺層靜態(tài)發(fā)酵階段形成凝膠膜的時間較早，因而生成同樣厚度凝膠膜的發(fā)酵周期較短，其淺層靜態(tài)發(fā)酵周期縮短了 20 40% (不同規(guī)格產(chǎn)品縮短 幅度不同)；淺層靜態(tài)發(fā)酵周期縮短幅度顯著，使淺層靜態(tài)發(fā)酵設(shè)備的利用率 大幅度提高，可顯著提高單位空間發(fā)酵房的產(chǎn)能；在深層靜態(tài)發(fā)酵過程中不易 被雜菌污染，而淺層靜態(tài)發(fā)酵周期明顯縮短，有利于降低高纖椰果發(fā)酵生產(chǎn)的 染菌率，從而有利于提高產(chǎn)品得率，降低生產(chǎn)成本。


圖1為本發(fā)明的工藝流程示意圖。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例及附圖對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方 式不限于此。 實施例1菌種木醋桿菌AcetobacterXylimum 1.1812 (購于中科院微生物研究所) (1)種子擴大培養(yǎng)培養(yǎng)基配制蔗糖2g，酵母膏0.4g， NH4C10.4g， MgS04.7H20 0.02 g， CaCl2 0.02 g， NaAC0.01g， FeS04 0.5 mg，椰子水20mL (海南文昌的新鮮 椰子，破殼取水)，用自來水定容至100mL，調(diào)節(jié)pH5.0，裝入500mL三角瓶， 用8層紗布包扎瓶口， 12rC滅菌20min，冷卻至28 32。C后接入一環(huán)活化好 的斜面菌種(用常規(guī)接種環(huán)接種)，置于振蕩培養(yǎng)箱上恒溫3(TC、 150r/min振 蕩培養(yǎng)12h，得到種子液。 (2) 深層靜態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基配制蔗糖3000 g，酵母膏600 g， NH4C1 600 g， MgS04'7H20 30 g， CaCl2 30 g， NaAC15g， FeSO40.75g，椰子水30 L (海南文昌的新鮮椰子，破 殼取水)，用自來水定容至150L，調(diào)節(jié)pH3.5，裝入200L發(fā)酵罐，121。C滅菌 20min，冷卻至28 32。C后接入上述三角瓶培養(yǎng)成熟的100mL種子液(接種 量為0.067%)，進行深層靜態(tài)發(fā)酵。發(fā)酵過程中，在發(fā)酵液面的空間連續(xù)通入 無菌空氣，無菌空氣流量為4L/min左右，使發(fā)酵罐內(nèi)壓力為0.01 0.02MPa (表壓)，以防雜菌污染；同時，溫度控制為28 32"。發(fā)酵108h，濕菌體濃 度達到2.1g/L。濕菌體濃度采用離心稱重法測定取發(fā)酵液100mL放入250mL三角瓶中， 加入O.lg纖維素酶(〉15u/mg)，恒溫5(TC振蕩2h，充分水解后，補充蒸餾 水，使體積恢復(fù)至lOOmL，然后準確吸取10mL水解液放入離心管，于4000r/min 離心20min，棄去上清液，用濾紙吸干離心管壁水珠，對沉淀物進行稱重，并 計算出沉淀物濃度G, (g/L);同時，稱取O.l g纖維素酶(〉15u/mg)加到 100mL蒸餾水中，經(jīng)振蕩使其混合均勻，以同樣方法測定出沉淀物濃度G2 (g/L);最后，可計算出濕菌體濃度為(G,-G2) (g/L)。(3) 淺層靜態(tài)發(fā)酵 將上述深層靜態(tài)發(fā)酵液分裝到經(jīng)過滅菌處理的淺層容器發(fā)酵盤(長度x寬度x高度二300mmx220mmx65mm)中，裝液高度為8mm，用無菌的、透氣的 防菌紙膜覆蓋發(fā)酵盤口并扎好，置于潔凈的發(fā)酵房內(nèi)靜止發(fā)酵。發(fā)酵過程中， 控制發(fā)酵房溫度為26 34°C ，發(fā)酵40h可得厚度為3mm的高纖椰果。實施例2菌種木醋桿菌Acetobacter Xylimum 1.1812(1)種子擴大培養(yǎng) 培養(yǎng)基配制蔗糖5g，酵母膏0.3g， NH4C10.8g， MgS(V7H20 0.04 g， CaCl20.04g， NaAC0.02g， FeSO41.0mg，椰子水80mL (海南文昌的新鮮椰 子，破殼取水)，用自來水定容至200mL，調(diào)節(jié)pH5.5，裝入1000mL三角瓶， 用8層紗布包扎瓶口， 12rC滅菌20min，冷卻至28 32。C后接入一環(huán)活化好 的斜面菌種(用常規(guī)接種環(huán)接種)，置于振蕩培養(yǎng)箱上恒溫3(TC、 150r/min振 蕩培養(yǎng)16h，得到種子液。(2) 深層靜態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基配制蔗糖20kg，酵母膏1.2kg， NH4C13.2kg， MgS04'7H20 160 g， CaCl2160g， NaAC80g， FeS044g，椰子水320 L (海南文昌的新鮮椰子， 破殼取水)，用自來水定容至799.8L，調(diào)節(jié)pH5.5，裝入1000L發(fā)酵罐，121°C 滅菌20min，冷卻至28 32。C后接入上述三角瓶培養(yǎng)成熟的200mL種子液(接 種量為0.025%)，進行深層靜態(tài)發(fā)酵。發(fā)酵過程中，在發(fā)酵液面的空間連續(xù)通 入無菌空氣，無菌空氣流量為20L/min左右，使發(fā)酵罐內(nèi)壓力為0.01 0.02MPa (表壓)，以防雜菌污染；同時，溫度控制為28 32匸。發(fā)酵132h，濕菌體濃 度達到3.0g/L。(3) 淺層靜態(tài)發(fā)酵 將上述深層靜態(tài)發(fā)酵液分裝到經(jīng)過滅菌處理的淺層容器發(fā)酵盤(長度x寬度x高度二300mmx220mmx65mm)中，裝液高度為8mm，用無菌的、透氣的 防菌紙膜覆蓋發(fā)酵盤口并扎好，置于潔凈的發(fā)酵房內(nèi)靜止發(fā)酵。發(fā)酵過程中， 控制發(fā)酵房溫度為26 34°C ，發(fā)酵52h可得厚度為5mm的高纖椰果。實施例3菌種木醋桿菌Acetobacter Xylimum 1.1812(1) 種子擴大培養(yǎng)種子培養(yǎng)采用"斜面一三角瓶一種子罐"的擴大培養(yǎng)流程，具體如下(a) 培養(yǎng)基配制NH4C10.4g， MgS04.7H20 0.02 g， CaCl20.02 g，椰子 水100mL (海南文昌的新鮮椰子，破殼取水)，調(diào)節(jié)pH5.5，裝入500 mL三角 瓶，用8層紗布包扎瓶口， 12rC滅菌20min，冷卻至28 32。C后接入一環(huán)活 化好的斜面菌種(用常規(guī)接種環(huán)接種)，置于振蕩培養(yǎng)箱上恒溫3(TC、 150r/min 振蕩培養(yǎng)12h，得到種子液。(b) 培養(yǎng)基配制NH4C130g， MgS04'7H20 1.5 g， CaCl2 1.5 g，椰子水 7.5L (海南文昌的新鮮椰子，破殼取水)，調(diào)節(jié)pH5.0，裝入IOL發(fā)酵罐(種 子罐)，12rC滅菌20min，冷卻至28 32。C后接入步驟(a)中三角瓶培養(yǎng)成 熟的100mL種子液，進行通氣攪拌培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，溫度控制為28 3(TC， 攪拌轉(zhuǎn)速控制為300r/min，通氣量控制為0.15 0.25vvm，培養(yǎng)12h，得到種 子液。(2) 深層靜態(tài)發(fā)酵
培養(yǎng)基配制NH4C1 2.8 kg， MgS04.7H20 140 g， CaCl2 140 g，椰子水700L (海南文昌的新鮮椰子，破殼取水)，調(diào)節(jié)pH4.5，裝入1000L發(fā)酵罐，121°C 滅菌20min，冷卻至28 32。C后接入步驟(b)中種子罐培養(yǎng)成熟的7.5L種子 液(接種量為1.06%)，進行深層靜態(tài)發(fā)酵。發(fā)酵過程中，在發(fā)酵液面的空間 連續(xù)通入無菌空氣，無菌空氣流量為20L/min左右，使發(fā)酵罐內(nèi)壓力為0.01 0.02MPa (表壓)，以防雜菌污染；同時，溫度控制為28 32。C。發(fā)酵124h， 濕菌體濃度達到3.0g/L。 (3)淺層靜態(tài)發(fā)酵將上述深層靜態(tài)發(fā)酵液分裝到經(jīng)過滅菌處理的淺層容器發(fā)酵盤(長度x寬 度x高度二300mmx220mmx65mm)中，裝液高度為14mm，用無菌的、透氣 的防菌紙膜覆蓋發(fā)酵盤口并扎好，置于潔凈的發(fā)酵房內(nèi)靜止發(fā)酵。發(fā)酵過程中， 控制發(fā)酵房溫度為26 34°C，發(fā)酵84h可得厚度為10mm的高纖椰果。實施例4菌種木醋桿菌Acetobacter Xylimum 1.1812(1) 種子擴大培養(yǎng)培養(yǎng)基配制蔗糖50 g， NH4C1 8 g， MgS04'7H20 0.8 g， CaCl2 0.8 g， NaAC 0.2 g，椰子水1600mL (海南文昌的新鮮椰子，破殼取水)，用自來水定容至 2000mL，調(diào)節(jié)pH5.0，分裝到10個1000 mL三角瓶中，每個三角瓶裝200mL 培養(yǎng)基，用8層紗布包扎瓶口， 12rC滅菌20min，冷卻至28 32。C后接入一 環(huán)活化好的斜面菌種(用常規(guī)接種環(huán)接種)，置于振蕩培養(yǎng)箱上恒溫30°C、 150r/min振蕩培養(yǎng)16h，得到種子液。(2) 深層靜態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基配制蔗糖20 kg， NH4C1 3.2 kg， MgS04'7H20 160 g， CaCl2 160 g， NaAC 80 g，椰子水638L (海南文昌的新鮮椰子，破殼取水)，用自來水定容 至798L，調(diào)節(jié)pH5.0，裝入1000L發(fā)酵罐，12rC滅菌20min，冷卻至28 32°C 后接入上述三角瓶培養(yǎng)成熟的2000mL種子液(接種量為0.25%)，進行深層 靜態(tài)發(fā)酵。發(fā)酵過程中，在發(fā)酵液面的空間連續(xù)通入無菌空氣，無菌空氣流量 為2L/min左右，使發(fā)酵罐內(nèi)壓力為0.01 0.02MPa (表壓)，以防雜菌污染； 同時，溫度控制為28 32'C。發(fā)酵100h，濕菌體濃度達到2.2g/L。(3) 淺層靜態(tài)發(fā)酵 將上述深層靜態(tài)發(fā)酵液分裝到經(jīng)過滅菌處理的淺層容器發(fā)酵盤(長度x寬度x高度二300mmx220mmx65mm)中，裝液高度為19mm，用無菌的、透氣 的防菌紙膜覆蓋發(fā)酵盤口并扎好，置于潔凈的發(fā)酵房內(nèi)靜止發(fā)酵。發(fā)酵過程中， 控制發(fā)酵房溫度為26 34°C，發(fā)酵120h可得厚度為15mm的高纖椰果。實施例5菌種木醋桿菌Acetobacter Xylimum 1.1812(1) 種子擴大培養(yǎng)種子培養(yǎng)采用"斜面一三角瓶一種子罐"的擴大培養(yǎng)流程，具體如下(a) 培養(yǎng)基配制蔗糖14 g，酵母膏0.1 g， NH4C1 0.8 g， MgS04'7H20 0.04 g， CaCl2 0.04 g， NaAC0.02g， FeSO41.0mg，椰子水lOOmL (海南文昌的新 鮮椰子，破殼取水)，用自來水定容至200mL，調(diào)節(jié)pH5.5，裝入1000 mL三 角瓶，用8層紗布包扎瓶口， 12rC滅菌20min，冷卻至28 32。C后接入一環(huán) 活化好的斜面菌種(用常規(guī)接種環(huán)接種)，置于振蕩培養(yǎng)箱上恒溫3(TC、 150r/min振蕩培養(yǎng)16h，得到種子液。(b) 培養(yǎng)基配制蔗糖5586g，酵母膏40g， NH4C1320g， MgS04'7H20 16 g， CaCl216g， NaAC8g， FeSO40.4g，椰子水39.9L (海南文昌的新鮮椰 子，破殼取水)，用自來水定容至79.8L，調(diào)節(jié)pH5.5，裝入100L發(fā)酵罐，121°C 滅菌20min，冷卻至28 32X:后接入上述三角瓶培養(yǎng)成熟的200mL種子液(接 種量為0.25%)，進行通氣攪拌培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，溫度控制為3(TC，攪拌轉(zhuǎn) 速控制為300r/min，通氣量控制為0.10 0.25vvm，培養(yǎng)12h，得到種子液。(2) 深層靜態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基配制蔗糖50.4kg，酵母膏0.36kg， NH4C12.88kg， MgS04'7H20 144g， CaCl2144g， NaAC 72 g， FeS043.6g，椰子水360L (海南文昌的新鮮 椰子，破殼取水)，用自來水定容至720L，調(diào)節(jié)pH5.5，裝入1000L發(fā)酵罐， 121'C滅菌20min，冷卻至28 32'C后接入上述種子罐培養(yǎng)成熟的80L種子液 (接種量為10%)，進行深層靜態(tài)發(fā)酵。發(fā)酵過程中，在發(fā)酵液面的空間連續(xù) 通入無菌空氣，無菌空氣流量為20L/min左右，使發(fā)酵罐內(nèi)壓力為0.01 0.02MPa (表壓)，以防雜菌污染；同時，溫度控制為28 32°C。發(fā)酵84h， 濕菌體濃度達到2.0g/L。(3) 淺層靜態(tài)發(fā)酵
將上述深層靜態(tài)發(fā)酵液分裝到經(jīng)過滅菌處理的淺層容器發(fā)酵盤(長度x寬度x高度二300mmx220mmx65mm)中，裝液高度為30mm，用無菌的、透氣 的防菌紙膜覆蓋發(fā)酵盤口并扎好，置于潔凈的發(fā)酵房內(nèi)靜止發(fā)酵。發(fā)酵過程中， 控制發(fā)酵房溫度為26 34°C ，發(fā)酵192h可得厚度為24mm的高纖椰果。對比實施例現(xiàn)有的淺層靜態(tài)發(fā)酵法菌種木醋桿菌Acetobacter Xylimum 1.1812(1) 種子擴大培養(yǎng)培養(yǎng)基配制蔗糖14g，酵母膏0.1g， NH4C10.8g， MgS04'7H20 0.04 g， CaCl2 0.04 g， NaAC0.02g， FeSO41.0mg，椰子水lOOmL (海南文昌的新鮮 椰子，破殼取水)，用自來水定容至200mL，調(diào)節(jié)pH5.0，裝入1000 mL三角 瓶，用8層紗布包扎瓶口， 12rC滅菌20min，冷卻至28 32。C后接入一環(huán)活 化好的斜面菌種(用常規(guī)接種環(huán)接種)，置于振蕩培養(yǎng)箱上恒溫3(TC、 150r/min 振蕩培養(yǎng)12h，然后置于培養(yǎng)箱中恒溫3(TC靜止培養(yǎng)24h，得到種子液。(2) 淺層靜態(tài)培養(yǎng)培養(yǎng)基配制蔗糖125 g，酵母膏0.9 g， NH4C1 7.1 g， MgS04'7H20 0.36 g， CaCl2 0.36 g, NaAC0.18g， FeS048.9mg，椰子水890mL (海南文昌的新鮮 椰子，破殼取水)，用自來水定容至1780mL，調(diào)節(jié)pH4.0， 121'C滅菌20min， 趁熱裝入無菌的發(fā)酵盤(長度x寬度x高度二300mmx220mmx65mm)，用無菌 的、透氣的防菌紙膜覆蓋發(fā)酵盤口并扎好，冷卻至26 34。C后接入上述三角 瓶培養(yǎng)成熟的200mL種子液(接種量為10.1%)，接種后發(fā)酵盤裝液高度為 30mm，置于潔凈的發(fā)酵房內(nèi)靜止發(fā)酵。發(fā)酵過程中，控制發(fā)酵房溫度為26 34°C ，發(fā)酵288h可得厚度為24mm的高纖椰果。本實施例與實施例5對比，說明采用本發(fā)明的方法，淺層發(fā)酵周期縮短了 96h，縮短幅度為33.3%。
權(quán)利要求
1、一種深層與淺層靜態(tài)偶聯(lián)發(fā)酵生產(chǎn)高纖椰果的方法，其特征在于包括如下步驟(1)深層靜態(tài)發(fā)酵將發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)過加熱滅菌并冷卻至28～32℃后，接入木醋桿菌，所述木醋桿菌接種量為0.025～10.0％，在發(fā)酵罐中進行深層靜態(tài)發(fā)酵，在發(fā)酵過程中，在發(fā)酵液面的空間連續(xù)通入無菌空氣，并控制發(fā)酵溫度為28～32℃，深層靜態(tài)發(fā)酵終點為發(fā)酵液的濕菌體濃度達到2.0～3.0g/L；(2)淺層靜態(tài)發(fā)酵將步驟(1)中得到的濕菌體濃度為2.0～3.0g/L的發(fā)酵液分裝到經(jīng)過滅菌處理的淺層容器中，進行淺層靜態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵過程中控制溫度26～34℃，淺層容器中的凝膠膜厚度達到3～24mm時結(jié)束發(fā)酵，即得到高纖椰果。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種深層與淺層靜態(tài)偶聯(lián)發(fā)酵生產(chǎn)高纖椰果的方 法，其特征在于所述步驟(1)中發(fā)酵培養(yǎng)基中包括椰子水，所述椰子水的體 積百分比為20 100%;所述發(fā)酵培養(yǎng)基配制時調(diào)節(jié)pH為3.5 5.5。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種深層與淺層靜態(tài)偶聯(lián)發(fā)酵生產(chǎn)高纖椰果的方 法，其特征在于所述步驟(1)中連續(xù)通入無菌空氣使發(fā)酵罐內(nèi)壓力達到0.01 0.02MPa。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種深層與淺層靜態(tài)偶聯(lián)發(fā)酵生產(chǎn)高纖椰果的方 法，其特征在于所述步驟(1)深層靜態(tài)發(fā)酵時間為84 132h。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種深層與淺層靜態(tài)偶聯(lián)發(fā)酵生產(chǎn)高纖椰果的方 法，其特征在于所述步驟(2)中濕菌體濃度采用離心稱重法測定在100mL 發(fā)酵液中加入O.l g纖維素酶，恒溫50。C振蕩2h，充分水解后，補充蒸餾水， 使體積至100mL，得到水解液，然后將10mL水解液于4000r/min離心20min， 對沉淀物進行稱重，并計算出沉淀物濃度G, (g/L);同時，稱取0.1g纖維素酶 加到100mL蒸餾水中，經(jīng)振蕩使其混合均勻，以同樣方法測定出沉淀物濃度G2(g/L);最后，計算出濕菌體濃度為(GrG2) (g/L)。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種深層與淺層靜態(tài)偶聯(lián)發(fā)酵生產(chǎn)高纖椰果的方 法，其特征在于所述步驟(2)中淺層容器的裝液高度為30mm以下。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種深層與淺層靜態(tài)偶聯(lián)發(fā)酵生產(chǎn)高纖椰果的方法，其特征在于所述步驟(2)中淺層靜態(tài)發(fā)酵時間為40 192h，。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種深層與淺層偶聯(lián)靜態(tài)發(fā)酵高纖椰果的生產(chǎn)方法，該方法是在發(fā)酵培養(yǎng)基中接入木醋桿菌，進行深層靜態(tài)發(fā)酵；當發(fā)酵液濕菌體濃度達到2.0～3.0g/L時，將發(fā)酵液分裝到經(jīng)過滅菌處理的淺層容器中，淺層容器的裝液高度根據(jù)高纖椰果產(chǎn)品規(guī)格而定，在淺層容器中繼續(xù)進行淺層靜態(tài)發(fā)酵，可獲得符合凝膠膜厚度要求的高纖椰果。本發(fā)明提供的高纖椰果生產(chǎn)方法，使高纖椰果淺層發(fā)酵周期縮短20～40％，可提高淺層發(fā)酵設(shè)備的生產(chǎn)效率，同時有利于降低淺層發(fā)酵過程中的雜菌污染率，應(yīng)用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中可產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟效益。
文檔編號C12N1/20GK101148645SQ20071003007
公開日2008年3月26日 申請日期2007年9月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月4日
發(fā)明者吳永輝, 梁世中, 瑤 王, 王建松, 鄧毛程, 黃廷冠 申請人:鄧毛程