一種藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基及其誘導(dǎo)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培 養(yǎng)基，還涉及一種藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 藏紅花是一種名貴的中草藥，由于其只是柱頭入藥，產(chǎn)量極低，同時(shí)又因?yàn)槠滟Y源 極其有限，但用途廣泛，致使其價(jià)格昂貴，一直被譽(yù)為"植物黃金"，所以對(duì)藏紅花的快速繁 殖研究極其重要。
[0003] 目前藏紅花組織培養(yǎng)誘導(dǎo)階段多是將球莖誘導(dǎo)成愈傷組織再誘導(dǎo)成芽，但是愈傷 組織性狀不穩(wěn)定，且容易褐化，誘導(dǎo)成芽的難道高且時(shí)間長(zhǎng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 基于現(xiàn)有技術(shù)存在上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng) 基，其以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加了 NAA(萘乙酸）、6-BA(6-芐基腺嘌呤）、Na2S2〇3(硫 代硫酸鈉）、蔗糖和瓊脂粉，通過(guò)調(diào)配NAA(萘乙酸)和6-BA(6-芐基腺嘌呤）的用量可以直接 將球莖跳過(guò)愈傷組織階段直接誘導(dǎo)成芽，且添加了Na 2S203(硫代硫酸鈉）可抑制褐化的發(fā) 生，本發(fā)明提供的培養(yǎng)基具有芽誘導(dǎo)率高，褐化低的優(yōu)點(diǎn)。
[0005] -種藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加了 NAA(萘乙酸）、6-BA(6-芐基腺嘌呤）、Na2S203(硫代硫酸鈉）、蔗糖和瓊脂粉。
[0006] 財(cái)4(萘乙酸）的濃度為0.1-0.511^/1、6-84(6-芐基腺嘌呤）的濃度為1-5 11^/1、 Na2S203(硫代硫酸鈉）的濃度為200-800 mg/L、蔗糖的濃度為30-90g/L和瓊脂粉的濃度為5- 8g/L〇
[0007] NAA(萘乙酸）的濃度為0· .2 -0.4mg/L、6-BA(6-芐基腺嘌呤）的濃度為2-4 mg/L、 Na2S203(硫代硫酸鈉）的濃度為400-600 mg/L，蔗糖的濃度為40-70g/L和瓊脂粉的濃度為6-7g/L〇
[0008] 藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值是5.5-6.5。
[0009] -種使用上述藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)方法，其包括以下步驟： 步驟S10:取當(dāng)年生的新鮮藏紅花球莖為外植體，置于_4°C冰箱中低溫春化48小時(shí)，取 出球莖用水沖洗干凈，用濾紙吸干表面水分，備用； 步驟S20:將步驟S10所得的球莖用濃度為75%酒精搖動(dòng)浸泡30秒，取出球莖，用蒸餾水 沖洗3次，再使用1%的HgCl2和5%吐溫60混合液浸泡4分鐘，取出球莖，用蒸餾水沖洗3次，備 用； 步驟S30:將步驟S20所得的球莖用無(wú)菌手術(shù)刀切成0.5-1厘米的小塊，并接種于上述的 藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并放于人工氣候箱中進(jìn)行常規(guī)誘導(dǎo)培養(yǎng)。
[0010] 所述的藏紅花球莖為直徑大于3.2厘米的球莖。
[0011] 步驟S10還包括步驟SI 1，用自來(lái)水沖洗干凈表面泥土、表皮膜和病斑;步驟S12再 用蒸餾水浸泡沖洗1分鐘。
[0012] 本發(fā)明的有益效果是：通過(guò)調(diào)配NAA(萘乙酸）和6-BA(6-芐基腺嘌呤）的用量可以 直接將球莖跳過(guò)愈傷組織階段直接誘導(dǎo)成芽，縮短了整個(gè)組織培養(yǎng)流程所需時(shí)間；添加了 Na2S203(硫代硫酸鈉），Na2S 203(硫代硫酸鈉)具有還原性，可以抑制組培褐化的發(fā)生;吐溫是 一種表面活性劑，外植體消毒時(shí)添加了吐溫可以使HgCl 2的滅菌更徹底。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。
[0014] 實(shí)施例一:配制藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
[0015] 根據(jù)表1所示的MS培養(yǎng)基成分和用量以及表2所示的藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo) 培養(yǎng)基成分和用量，配制本發(fā)明所述的藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
[0016] 用天平稱取MS培養(yǎng)基中的各成分以及NAA(萘乙酸）、6-BA(6-芐基腺嘌呤）、Na2S2〇 3 (硫代硫酸鈉）、蔗糖和瓊脂粉，置于三角瓶中，加入適量蒸餾水，攪拌溶解，并用HCL和Κ0Η調(diào) 節(jié)pH值至6.0,定容至1000mL。將三角瓶封口，置于高壓滅菌鍋中，于121°C滅菌20min，然后 置于超凈工作臺(tái)中自然冷卻，備用。
[00Π ]將冷卻到50-60°C時(shí)將培養(yǎng)基分裝至組織培養(yǎng)瓶中，晾涼，待其凝固后將組織培養(yǎng) 瓶封口，備用。
[0018]表1 MS培養(yǎng)基的成分和用量。
[0019] 表2藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分及用量。
[0020] 實(shí)施例二:藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的測(cè)試。
[0021] 按實(shí)施例一所述的方法配制藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，備用。
[0022] 取當(dāng)年生的新鮮、健康的、直徑達(dá)到3.2厘米以上的藏紅花球莖為外植體，置于-4 °C的冰箱中低溫春化48小時(shí)，然后取出球莖用水沖洗干凈，用濾紙吸干表面水分，備用。
[0023] 將上述所得的球莖用濃度為75%酒精搖動(dòng)浸泡30秒，取出球莖，用蒸餾水沖洗3次， 再使用1%的HgCl2和5%吐溫60混合液浸泡4分鐘，取出球莖，用蒸餾水沖洗3次，備用。
[0024] 將上述所得的球莖用無(wú)菌手術(shù)刀切成0.5-1厘米的小塊，并接種于配制好的藏紅 花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每塊外植體間隔1-1.5厘米，并放于人工氣候箱中進(jìn)行常 規(guī)誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境條件是，光照/黑暗時(shí)間：14/10小時(shí)，培養(yǎng)溫度是23°C。
[0025] 培養(yǎng)到30天，分別記錄沒(méi)個(gè)重復(fù)試驗(yàn)的最早出芽時(shí)間，并于第30天時(shí)統(tǒng)計(jì)平均最 早出芽時(shí)間、出芽率和褐化率。
[0026] 使用本發(fā)明提供的藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其平均最早出芽時(shí)間為 9.04天，比對(duì)照組的平均最早出芽時(shí)間早3.21天，且出芽率達(dá)到95.51%，比對(duì)照組高 18.31%，且褐化率低至17.31%，比對(duì)照組的褐化率低20%，很好地縮短了組培時(shí)間和提高了 組培效率。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，其以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基， 并添加了 NAA(萘乙酸）、6-BA(6-芐基腺嘌呤）、Na2S2〇3(硫代硫酸鈉）、蔗糖和瓊脂粉。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，NAA(萘 乙酸）的濃度為〇.1-〇.511^/1、6-84(6-芐基腺嘌呤）的濃度為1-5 11^/1、他232〇3(硫代硫酸 鈉）的濃度為200-800 mg/L、蔗糖的濃度為30-90g/L和瓊脂粉的濃度為5-8g/L。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于，NAA(萘 乙酸）的濃度為〇. .2 -0.4mg/L、6-BA(6-芐基腺嘌呤）的濃度為2-4 mg/L、Na2S2〇3(硫代硫酸 鈉）的濃度為400-600 mg/L，蔗糖的濃度為40-70g/L和瓊脂粉的濃度為6-7g/L。4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3其中之一所述的一種藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征 在于，藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值是5.5-6.5。5. -種使用上述藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)方法，其特征在于，其包括 以下步驟： 步驟S10:取當(dāng)年生的新鮮藏紅花球莖為外植體，置于-4°C冰箱中低溫春化48小時(shí)，取 出球莖用水沖洗干凈，用濾紙吸干表面水分，備用； 步驟S20:將步驟S10所得的球莖用濃度為75%酒精搖動(dòng)浸泡30秒，取出球莖，用蒸餾水 沖洗3次，再使用1%的HgCl2和5%吐溫60混合液浸泡4分鐘，取出球莖，用蒸餾水沖洗3次，備 用； 步驟S30:將步驟S20所得的球莖用無(wú)菌手術(shù)刀切成0.5-1厘米的小塊，并接種于上述的 藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并放于人工氣候箱中進(jìn)行常規(guī)誘導(dǎo)培養(yǎng)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種使用上述藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)方 法，其特征在于，所述的藏紅花球莖為直徑大于3.2厘米的球莖。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種使用上述藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)方 法，其特征在于，步驟S10還包括步驟S11，用自來(lái)水沖洗干凈表面泥土、表皮膜和病斑;步驟 S12再用蒸餾水浸泡沖洗1分鐘。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種藏紅花球莖誘導(dǎo)出芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，其以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加了NAA（萘乙酸）、6-BA（6-芐基腺嘌呤）、Na2S2O3（硫代硫酸鈉）、蔗糖和瓊脂粉，通過(guò)調(diào)配NAA（萘乙酸）和6-BA（6-芐基腺嘌呤）的用量可以直接將球莖跳過(guò)愈傷組織階段直接誘導(dǎo)成芽，且添加了Na2S2O3（硫代硫酸鈉）可抑制褐化的發(fā)生，本發(fā)明提供的培養(yǎng)基具有芽誘導(dǎo)率高，褐化低的優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類】A01H4/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105532465
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610011338
【發(fā)明人】何志鏗
【申請(qǐng)人】佛山市金藍(lán)領(lǐng)教育科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年5月4日
【申請(qǐng)日】2016年1月9日