專利名稱：：絲狀菌孢子的制造方法及植物病害防治方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及與植物病害的防治相關(guān)的4支術(shù)。更詳細地說，涉及可以形成足以作為青霉屬菌的微生物農(nóng)藥或材料的實用化的充分量的孢子的技術(shù)。
背景技術(shù)：
：化學(xué)農(nóng)藥是對于植物的病蟲害防治的一種不可或缺的手段，為穩(wěn)定的食物生產(chǎn)作出了很大的貢獻。但是，近年來逐漸出現(xiàn)了由于化學(xué)農(nóng)藥的大量施用而產(chǎn)生的抗藥性病蟲害的發(fā)生或環(huán)境負荷的問題。以此為背景，近年來利用設(shè)想對環(huán)境的負荷比上述化學(xué)農(nóng)藥更低的樣i生物的，也被稱為"生物農(nóng)藥(Biologicalagrochemicals)"的生物防治的研究取得進展，其部分已經(jīng)實現(xiàn)了實用化。作為被期望用于上述生物農(nóng)藥的微生物，已知有例如青霉屬菌等絲狀菌。其中，作為青霉屬菌的完全世代的黃藍狀菌屬(Talaromyces屬)，已經(jīng)作為草莓炭疽病或白粉病用的農(nóng)藥用殺菌劑被利用(黃藍狀菌(Talaromycesflavus)水合劑，農(nóng)林水產(chǎn)省第20659號)。專利文獻1公開了對草莓炭疽菌具有拮抗作用的黃藍狀菌。另外，專利文獻2中公開了作為對芒果炭疽病具有拮抗作用的微生物擴展青霉(Penicilliumexpansum),專利文獻3公開了對灰霉菌顯示防治效果的沙門柏干酪青霉(Penicilliumcamemberti)。利用這些青霉屬菌作為微生物農(nóng)藥或材料時，可使用通過一般的液體培養(yǎng)得到的培養(yǎng)菌絲體。但是由于菌絲體與耐久性的孢子相比缺乏生存性，因而實用性不夠。因此期待一種可以大量且低廉地生產(chǎn)耐久性的孢子的技術(shù)。目前以來，作為絲狀菌的孢子形成方法，可進行固體培養(yǎng)或液體培養(yǎng)。在進行固體培養(yǎng)的情況下，使用米、麥、玉米等谷物類，或者麩子等來源于谷物的固體成分等，但對固體培養(yǎng)進行滅菌需要很長時間，同時也難以進行無菌管理，另外也難以控制培養(yǎng)過程中的溫度、水分、pH等的環(huán)境因素。另外，這些固體成分與孢子間的分離很困難，且培養(yǎng)時間也長，培養(yǎng)成本也高。另一方面，液體培養(yǎng)由于可利用許多的通用性培養(yǎng)裝置，因而具有滅菌容易，且培養(yǎng)中溫度、氧氣供給量、pH等的環(huán)境控制也容易這樣的優(yōu)點，但存在孢子形成困難的問題。為解決該問題，出現(xiàn)了例如使用半乳糖和/或果糖作為碳源的方法(參見專利文獻4),使用鎂鹽和/或鉀鹽作為培養(yǎng)基成分的方法(參見專利文獻5),添加果糖0.1~5%、氯化4丐0.01~0.5%、谷氨酸0.01-0.5%的絲狀菌的液體培養(yǎng)方法(參見專利文獻6)。另外，作為對絲狀菌的孢子形成有效的培養(yǎng)基，有人報導(dǎo)了在糖蜜5~20g/l、玉米漿(CSL)10-25g/1、氯化鈉5~15g/l、石危酸釣0.1~0.5g/l、石岸酸二氫鉀0.001~0.01g/l、碌l酸4美7水合物0.001~0.01g/l、石危酸銅0.001~0.005g/l、硫酸鐵0.0009~0.005g/l中含有消泡劑或瓊脂等固化劑的培養(yǎng)基(參見專利文獻7)等。進而，已知添加鈣鹽對于青霉屬菌的孢子的形成有效(參見非專利文獻l)。專利文獻1:特開平10-229872號公才艮專利文獻2:特開2001-39810號7>才艮專利文獻3:特開2004-231626號公才艮專利文獻4:特開平9-322759號公報專利文獻5:特開平11-276158公報專利文獻6:特開2000-201669號/>報專利文獻7:UnitedStatePatent6593127號公報非專利文獻1:Trans.Br.Mycol.Soc.,80(2),pp319-325,198
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在以絲狀菌作為微生物農(nóng)藥或材料而實用化時，存在根據(jù)現(xiàn)有的培養(yǎng)方法仍然難以得到足夠量的孢子形成量的技術(shù)問題。而且，由于BSE問題等，對于使用的培養(yǎng)基成分的碳源或氮源，希望由來源于動物的培養(yǎng)基成分置換成安全的來源于植物的培養(yǎng)基成分。因此，本發(fā)明的目的在于提供一種可形成足以作為微生物農(nóng)藥或材料的實用化的充分量的絲狀菌孢子，并且安全的技術(shù)。解決技術(shù)問題的手段本發(fā)明人針對液體培養(yǎng)生產(chǎn)用作微生物農(nóng)藥或材料的絲狀菌的孢子的技術(shù)，進行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過使用適合的來源于植物的成分作為培養(yǎng)基的碳源或氮源，并且向其中添加合適的無機成分，可以生產(chǎn)足以作為用于植物病害防治的微生物農(nóng)藥或材料的實用化的充分量的孢子。首先，本發(fā)明提供絲狀菌孢子的制造方法。該制造方法中，由于可利用許多的通用性培養(yǎng)裝置，因而具有滅菌容易，且培養(yǎng)中溫度、氧氣供給量、pH等的環(huán)境控制也容易等優(yōu)點，因此選擇液體培養(yǎng)。然后，在該液體培養(yǎng)基中，作為碳源和氮源，含有玉米漿或來源于大豆的胨，且來源于碳源和氮源的無機成分的量，由目標絲狀菌的液體培養(yǎng)時的孢子形成個數(shù)來判斷，當(dāng)不足必需量時，首先可使其含有氯化鈣，進而如有必要，使其含有硫酸鎂，在此基礎(chǔ)上如還有必要，使其含有磷酸氫二鉀，采用這種液體培養(yǎng)基培養(yǎng)絲狀菌，形成孢子。作為碳源和氮源的上述玉米漿或上述來源于大豆的胨，使其在液體培養(yǎng)基中含有0.1~10%,進而作為無機成分的上述氯化鈣，使其含有0.2~5.0%,優(yōu)選0.4~3.5%。此時作為無才幾成分，在不過量的程度以內(nèi)，也可加入碌u酸鎂、石壽酸氫二鉀。用于補充而不至于不足培養(yǎng)基中的鎂鹽、鉀鹽的必需量。這時，希望添加至含有硫酸鎂0.001~10%,優(yōu)選0.005~5.0%。另外希望添加至含有石舞酸氬二鐘0.001~0.3%,優(yōu)選0.05~0.2%。上述絲狀菌是青霉(Penicillium)屬的絲狀菌，作為一合適例，可采用Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)或黃藍狀菌。對于上述兩種菌，在判斷來源于碳源和氮源的無機成分的量滿足必需量時，液體培養(yǎng)時的孢子形成個數(shù)為約108個以上在孢子制造上是有效的。因此，當(dāng)液體培養(yǎng)時的孢子形成個數(shù)低于約108個時，希望在液體培養(yǎng)基中，作為無機成分首先添加氯化鈣，必要時添加硫酸鎂，更有必要時添加磷酸氬二鐘。下面，本發(fā)明提供一種將通過使用含有玉米漿或來源于大豆的胨作為碳源和氮源、且至少含有氯化朽作為無機成分的液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)絲狀菌而形成的孢子進行回收，使該孢子接觸植物體的植物病害防治方法。此外，所謂"接觸"，是指廣義地含有向植物體散布、浸漬、混合、涂布等方法，另外也可以是將上述孢子在土壤中混合、灌注后，播種植物體種子使其"接觸"，不能狹義地解釋。此時，作為無機成分，在不過量的程度以內(nèi)，也可在上述液體培養(yǎng)基中加入磷酸氫二鉀、硫酸鎂。用于補充而不至于不足培養(yǎng)基中的鎂鹽、鉀鹽的必需量。這時，希望添加至含有石危酸鎂0.001~10%,優(yōu)選0.005-5.0%。另外希望添加至含有磷酸氬二鉀0.001~0.3%,優(yōu)選0.05-0.2%。此外，上述本發(fā)明中，所謂"玉米漿(CornSteepLiquor:簡稱CSL),是指制糖(玉米淀粉)制造過程中產(chǎn)生的有機副產(chǎn)物。所謂"來源于大豆的胨"，是將大豆蛋白質(zhì)通過蛋白質(zhì)分解酶或酸部分地水解而得到的產(chǎn)物，以寡肽、氨基酸為主要成分。它們中的任何一種，在絲狀菌的培養(yǎng)中都作為供給碳源和氮源的有機成分而發(fā)揮作用。發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明的方法培養(yǎng)青霉屬絲狀菌，可大量且低廉地產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)一般液體培養(yǎng)中難以形成的絲狀菌孢子。用本方法得到的孢子，作為微生物農(nóng)藥和生物材料有用。另外由于未使用任何動物性的有機成分來培養(yǎng)，因而無BSE問題，是安全的。具體實施例方式下面，對于本發(fā)明的實施方式進行說明。此外本發(fā)明并不狹義地限定于以下說明的實施方式或?qū)嵤├?。首先，本發(fā)明中作為絲狀菌孢子的液體培養(yǎng)所采用的碳源和氮源，使用玉米漿、或者來源于大豆的胨。根據(jù)情況也可以使用上述兩種?？梢允褂么蠖狗刍螯S豆面等，但會導(dǎo)致其與培養(yǎng)后孢子的分離變得困難。另外動物性胨得不到充分的孢子形成量。對于"玉米漿"沒有特別限定，但可適當(dāng)使用例如昭和產(chǎn)業(yè)公司制、北海道糖業(yè)公司制、日本食品化工公司制、Oriental酵母公司制(乂/k卩7AST、095MPE等)等。對于"來源于大豆的胨"也沒有特別限定，但可使用例如日本制藥公司制Polypeptone-S等。玉米漿或來源于大豆的胨的合適的添加量為0.1%~10%、優(yōu)選0.5~10%、更優(yōu)選1~5%。添加過量的量，會增加不溶物的沉淀，與孢子的分離變得困難。本發(fā)明中，僅僅添加玉米漿或來源于大豆的胨，就可生產(chǎn)充分量的孢子，但通常也可進一步添加一般使用的碳源。例如可進一步添加葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、甘油、淀粉、來源于甘蔗或甜菜的廢糖蜜等。其中，主要基于價格便宜的理由，希望采用廢糖蜜。例如當(dāng)利用甜菜糖蜜時，可以使用添加了0.5°/。~10%的培養(yǎng)基。本發(fā)明中除了上述碳源和氮源，還加入碳酸或磷酸等的鹽類、鉀、鈉、鐵、鎂等的金屬鹽作為無機成分?；谇嗝箤倬鲋车谋匦枰氐睦碛?，特別優(yōu)選磷酸氬二鉀和硫酸鎂。進而，作為促進孢子形成的成分，添加4丐鹽。作為該釣鹽，主要基于溶解度的考慮，優(yōu)選氯化鈣。作為氯化鈣濃度，為0.2~5.0%,優(yōu)選0.4~3.5%。添加過量的氯化4丐，會增加不溶物的沉淀，與孢子的分離變得困難。此外，可自由地向培養(yǎng)基中添加各種表面活性劑作為消泡劑。通過在培養(yǎng)溫度為2(TC~40°C、優(yōu)選25。C~35°C,培養(yǎng)基的初始pH為4.0~8.0、優(yōu)選5.0~7.0,液體振蕩培養(yǎng)、基于發(fā)酵罐的通氣攪拌培養(yǎng)等需氧條件下來進行培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)束后，首先利用漂白棉、紗布或者玻璃棉等過濾培養(yǎng)物，除去菌絲。然后，將得到的濾液離心分離，分離孢子。加水離心分離，進行洗滌。多次重復(fù)進行這些工序，回收洗滌的孢子。另外，洗滌水可以使用離子交換水、蒸餾水、使用各種濾膜調(diào)配的純水、自來水等。該孢子顯示與由馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)等固體培養(yǎng)基得到的孢子相同的保存性、防治效果，可作為生物農(nóng)藥、生物材料而使用。此外，本發(fā)明中可作為培養(yǎng)對象的絲狀菌，例如為青霉屬菌絲狀菌。該青霉屬菌絲狀菌，沒有特別限定，例如可列舉Eupenicilliumsp.B隱408(FERMBP-08517)、Talaromycessp.B畫422(FERMBP畫08516)、Penicilliumsp.B-453(FERMBP-08515)、黃藍狀菌、擴展青霉、沙門柏干酪青霉等。優(yōu)選Eupenicilliumsp.B畫408(FERMBP-08517)、Talaromycessp.B國422(FERMBP-08516)、Penicilliumsp.B-453(FERMBP-08515)、黃藍狀菌，但更優(yōu)選Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)或黃藍狀菌。Eupenicilliumsp.B-408(FERMBP-08517)、Talaromycessp.B隱422(FERMBP畫08516)、Penicilliumsp.B畫453(FERMBP畫08515)保藏于獨立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所特許生物保藏中心(郵政編碼305-8566日本國茨i成縣筑波市東l丁目1番地1中央代6)。實施例l實施例l中，對于菌孢子的培養(yǎng)，考察改變液體培養(yǎng)基的組成時的培養(yǎng)孢子數(shù)的不同。另外，實驗例1至3是本發(fā)明涉及的絲狀菌孢子的制造方法。(實驗例l)將組成為玉米漿(Oriental酵母公司制)3%、磷酸氬二鉀0.1%、硫酸鎂7水合物0.05%、氯化鉀2水合物1%(pH7.0)的培養(yǎng)基50ml分注于:300ml的三角燒瓶中進行滅菌(120°C、20分鐘)。在PDA培養(yǎng)基中向前培養(yǎng)的Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)、或黃藍狀菌中加入滅菌水，調(diào)配至孢子濃度為lxl()S個/ml。在上述液體培養(yǎng)基中接種0.5ml的Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)孢子液、或黃藍狀菌孢子液，再在振蕩培養(yǎng)機(150rpm、25°C)中培養(yǎng)7天。培養(yǎng)結(jié)束后，利用血細胞計算盤測定孢子數(shù)。另外，黃藍狀菌是從市售的農(nóng)藥制劑分離而使用的。(實驗例2)將組成為玉米漿(昭和產(chǎn)業(yè)公司制)3%、甜菜糖蜜(北海道糖業(yè)公司制)0.5%、磷酸氳二鉀0.1%、硫酸鎂7水合物0.05%、氯化《丐2水合物l%(pH7.0)的培養(yǎng)基50ml分注于300ml的三角燒瓶中進行滅菌(12(TC、20分鐘)。接種0.5ml的根據(jù)實施例l調(diào)配的Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)孢子液、或黃藍狀菌孢子液，再在振蕩培養(yǎng)機(150rpm、25。C)中培養(yǎng)7天。培養(yǎng)結(jié)束后，利用血細胞計算盤測定孢子數(shù)。(實驗例3)將組成為來源于大豆的胨(Peptone-S、日本制藥公司制)3%、磷酸氫二鉀0.1%、硫酸鎂7水合物0.05%、氯化釣2水合物1%(pH7.0)的培養(yǎng)基50ml分注于300ml的三角燒瓶中進行滅菌(120°C、20分鐘)。接種0.5ml的根據(jù)實施例l調(diào)配的Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)孢子液、或黃藍狀菌孢子液，再在振蕩培養(yǎng)機(150rpm、25°C)中培養(yǎng)7天。培養(yǎng)結(jié)束后，利用血細胞計算盤測定孢子數(shù)。(比較實驗例l)將組成為甜菜糖蜜(北海道糖業(yè)公司制)0.75%、玉米漿(昭和產(chǎn)業(yè)公司制)2%、氯化鈉1%、硫酸《丐0.025%、磷酸氫二鉀0.0006%、硫酸鎂7水合物0.0005%、硫酸銅0.0001%、硫酸鐵0.0002%(pH7.0)的培養(yǎng)基50ml分注于300ml的三角燒瓶中進行滅菌(12CTC、20分鐘)。接種0.5ml黃藍狀^孢子液:再在振蕩培養(yǎng)機(150rpm、25°C)中培養(yǎng)7天。"培^結(jié)束后，利用血細胞計算盤測定孢子數(shù)。(比較實驗例2)將組成為半乳糖2%、氯化釣2水合物2.5%、硝酸鈉0.6°/。、磷酸氬二鉀0.15%、硫酸鎂7水合物0.05%(pH7.0)的培養(yǎng)基50ml分注于300ml的三角燒瓶中進行滅菌(120°C、20分鐘)。接種0.5ml的根據(jù)實施例l調(diào)配的Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)孢子液、或黃藍狀菌孢子液，再在振蕩培養(yǎng)機(150rpm、25°C)中培養(yǎng)7天。培養(yǎng)結(jié)束后，利用血細胞計算盤測定孢子數(shù)。(比較實驗例3)將組成為果糖1%、脫脂奶粉2%、氯化釣2水合物0.2%、谷氨酸0.1%(pH7.0)的培養(yǎng)基50ml分注于300ml的三角燒瓶中進行滅菌(12(TC、20分鐘)。接種0.5ml的根據(jù)實施例l調(diào)配的Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)孢子液、或黃藍狀菌孢子液，再在振蕩培養(yǎng)機(150rpm、25。C)中培養(yǎng)7天。培養(yǎng)結(jié)束后，利用血細胞計算盤測定孢子數(shù)。(比較實驗例4)將組成為馬鈴薯葡萄糖肉湯(Difco公司制)2.4%(pH7.0)的培養(yǎng)基50ml分注于300ml的三角燒瓶中進行滅菌(120°C、20分鐘)。接種0.5ml的才艮據(jù)實施例l調(diào)配的Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)孢子液、或黃藍狀菌孢子液，再在振蕩培養(yǎng)機(150rpm、25°C)中培養(yǎng)7天。培養(yǎng)結(jié)束后，利用血細胞計算盤測定孢子數(shù)。(比較實驗例5)將組成為復(fù)合胨(日本制藥公司制)3%、磷酸氫二鉀0.1%、硫酸鎂7水合物0.05%、氯化鈣2水合物1%(pH7.0)的培養(yǎng)基50ml分注于300ml的三角燒瓶中進行滅菌(120°C、20分鐘)。接種0.5ml的根據(jù)實施例l調(diào)配的Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)孢子液、或黃藍狀菌孑包子液，再在振蕩培養(yǎng)機(150rpm、25°C)中培養(yǎng)7天。培養(yǎng)結(jié)束后，利用血細胞計算盤測定孢子數(shù)。上述實驗例l~3、及比較實驗例l~5所得到的培養(yǎng)液中的孢子濃度如以下的"表r所示。[表l]<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由上述"表r的結(jié)果可清楚地看到，對于任意一種菌，實施例i3中的孢子生產(chǎn)量都要顯著地比比較實驗例i~5的孢子生產(chǎn)量多。此外，使用Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)時的比較實施例4、5、及使用黃藍狀菌時的比較實施例l、4、5中，孢子形成困難，呈菌絲狀(參見表l)。實施例2實施例2中，考察本發(fā)明的絲狀菌孢子的制造方法中所使用的最佳氯化鈣濃度。采用與實施例i的實驗例l相同的方法，僅將氯化釣2水合物的濃度改變?yōu)?.1%、0.5%、3.0%,考察培養(yǎng)的Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)孢子數(shù)。結(jié)果如表2所述。[表2]<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實施例3實施例3中，考察本發(fā)明的絲狀菌孢子的制造方法中孢子數(shù)隨培養(yǎng)時間的變4匕。將組成為玉米漿(日本食品化工公司制)3%、磷酸氫二鉀0.1%、硫酸鎂7水合物0.05%、氯化釣2水合物1%(pH7.0)的培養(yǎng)基2L分注于3L的發(fā)酵罐中進行滅菌U20。C、60分鐘)。在三角燒瓶中接種0.1%的前培養(yǎng)的Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)培養(yǎng)液，使用同樣的培養(yǎng)基在攪拌速度300rpm、溫度25。C、通氣量0.5vvm下進行5天的培養(yǎng)。經(jīng)時取樣，利用血細胞計算盤測定孢子數(shù)。孢子數(shù)隨培養(yǎng)時間的變化如圖l所示。由該圖l所示的結(jié)果可知，培養(yǎng)3天的孢子數(shù)幾乎達到lxl()S個/ml。實施例4實施例4使用上述實施例3所用的培養(yǎng)基，進行孢子的生存性的確認。將實施例4中使用的組成的培養(yǎng)基50ml分注于300ml的三角燒瓶中進行滅菌U20。C、20分鐘)。在PDA培養(yǎng)基中接種0.5ml的前培養(yǎng)的Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)孢子液，再在振蕩培養(yǎng)機(150rpm、25°C)中培養(yǎng)7天。培養(yǎng)結(jié)束后，利用漂白棉過濾培養(yǎng)液除去菌絲。將得到的濾液進行離心分離，收集孢子。加蒸餾水離心分離，進行洗滌。重復(fù)操作2次，回收洗滌的孢子，在自來水中調(diào)配，以使顯微鏡下計數(shù)的孢子數(shù)約為2xl()S個/ml。用于比較的固體培養(yǎng)基中形成的孢子，使用在PDA培養(yǎng)基中、25。C下、培養(yǎng)10天的孢子。向培養(yǎng)皿中加入蒸餾水用筆記錄表面后，進行與液體培養(yǎng)的情況相同的操作，調(diào)配同樣濃度的孢子液。保持在5。C、2(TC下，測定3個月后的活菌數(shù)。得到的結(jié)果如下列"表3"所示。—述21————__—___________———_______——.——,?！猘20。C下保存35。C下j呆存3個A^、、調(diào)配后的活菌數(shù)。丄。J^丄個月后的活菌B422孢子液，、月后的活菌數(shù)處(CFU/ml),、數(shù)(CFU/ml)z、(CFU/ml)由液體培養(yǎng)基1.4x1081.7x1081.2x108的調(diào)配由固體培養(yǎng)基的調(diào)配1.5x1080.8x1081.6x108由上述"表3"所示的結(jié)果可知，液體培養(yǎng)得到的孢子顯示與固體培養(yǎng)基中得到的孢子相同的生存性。實施例5孢子:和固體培養(yǎng)孢子液的對稻惡苗病的防治效果。、^將與實施例3同樣得到的Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)液體培養(yǎng)孢子液和固體培養(yǎng)孢子液在5。C下保存1個月后用于本實驗。將稻惡苗病多發(fā)農(nóng)場中自然感染的水稻罹病種子(2001年產(chǎn)、品種短銀坊主)以浴比1:1的比例浸漬于調(diào)配的Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)孢子液中24小時，然后在15。C下浸漬4天(浴比1:1),在3(TC下催芽1天后，在裝滿市售的育苗用粒狀培土(商品名〈》島u粒狀培土、林式會社Kureha制)的育苗用箱中每箱播種相當(dāng)于5g干稻殼(1區(qū)域反復(fù)3次)。然后在出芽器中，在3(TC下使其出芽3天，之后在玻璃溫室內(nèi)育苗。播種14天后考察各試驗區(qū)的徒長苗率，求出防治價值。其結(jié)果如下列"表4"所示。另外，防治價值以下列算式1計算。防治價值=(1-(處理區(qū)的徒長苗率+無處理區(qū)的徒長苗率))x100[表4]B422孢子液孢子濃度(個/ml)徒長苗率(%)防治價值lxlOe由液體培養(yǎng)基的調(diào)配由固體培養(yǎng)基的調(diào)配無處理供試稻殼短銀坊主(2001年產(chǎn)、1.54.4100自然感染稻殼)種子處理24小時浸;:漬浸種催芽出芽15。C4天30°C1天30°C1天9996由上述"表4"所示結(jié)果可知，液體培養(yǎng)中得到的孢子顯示與固體培養(yǎng)基中得到的孢子相同的效果(防治價值)。產(chǎn)業(yè)實用性本發(fā)明可以作為制造用于植物病害防治的生物農(nóng)藥或材料中可使用的絲狀菌孢子的技術(shù)、或者植物病害技術(shù)而得到利用。是顯示實施例3的結(jié)果的圖，是顯示孢子數(shù)隨培養(yǎng)時間而變化的圖。權(quán)利要求1、一種絲狀菌孢子的制造方法，其使用含有玉米漿和/或來源于大豆的胨作為碳源和氮源，并且至少含有氯化鈣作為無機成分的液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)絲狀菌而形成孢子。2、如權(quán)利要求1所述的絲狀菌孢子的制造方法，其特征在于上述液體培養(yǎng)基中，作為無機成分，含有磷酸氫二鉀和/或硫酸鎂。3、如權(quán)利要求1或2所述的絲狀菌孢子的制造方法，其特征在于上述液體培養(yǎng)基中，含有0.1~10%的上述玉米漿和/或來源于大豆的胨。4、如權(quán)利要求1至3中任一項所述的絲狀菌孢子的制造方法，其特征在于上述液體培養(yǎng)基中，含有0.2~5.0%的上述氯化鈣。5、如權(quán)利要求1至4中任一項所述的絲狀菌孢子的制造方法，其特征在于上述絲狀菌是青霉(Penicillium)屬的絲狀菌。6、如權(quán)利要求1至4中任一項所述的絲狀菌孢子的制造方法，其特征在于上述絲狀菌是Talaromycessp.B-422(FERMBP-08516)。7、如權(quán)利要求1至4中任一項所述的絲狀菌孢子的制造方法，其特征在于上述絲狀菌是黃藍狀菌。8、一種植物病害防治方法，其特征在于，將通過使用含有玉米漿和/或來源于大豆的胨作為碳源和氮源，并且至少含有氯化釣作為無機成分的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)絲狀菌而形成的孢子回收，再使該孢子與植物體接觸。9、如權(quán)利要求8所述的植物病害防治方法，其特征在于上述液體培養(yǎng)基中，作為無機成分，含有磷酸氫二鉀和/或硫酸鎂。全文摘要本發(fā)明提供一種由液體培養(yǎng)有效地制造一般在液體培養(yǎng)中難以形成的絲狀菌孢子，以及使用通過該方法得到的孢子的植物病害防治技術(shù)。通過使用含有玉米漿和/或來源于大豆的胨作為碳源和氮源，并且至少含有氯化鈣作為無機成分的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)絲狀菌，形成可實用化的充分量的孢子。另外，回收由此得到的絲狀菌孢子，使其與植物體接觸，有效地防治植物病害。文檔編號A01G7/00GK101415331SQ20068005420公開日2009年4月22日申請日期2006年4月11日優(yōu)先權(quán)日2005年4月11日發(fā)明者三宅泰司,佐久間米子,堅石秀明,永塚隆由申請人:株式會社吳羽