專利名稱：活性生物復(fù)合劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明活性生物復(fù)合劑及其制備方法，涉及的是含有酵母菌和灰色鏈霉球菌的活性生物復(fù)合劑，特別涉及的是用以降解環(huán)境中天然有機污染物的活性生物復(fù)合劑。
背景技術(shù)：
已知國際上興起的生物加強(投放)工藝，其原理是利用生物培養(yǎng)的方法，選擇單一菌種，制備成含菌量較高的液體制劑，投放到工程界面中，用以強化生物降解的力量。但其制備成本高、產(chǎn)能低、液體菌劑在工程界面中有效期短、穩(wěn)定性差、另儲存條件苛刻、工程應(yīng)用運耗過大。缺乏產(chǎn)業(yè)化前景，最致命的缺陷是液體菌劑的菌種自然屬性絲毫不變，無法從根本上解決耐污性弱、環(huán)境耐受性差和分解速率低的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服上述缺陷，提供一種制造成本低，產(chǎn)能高，有效期長，穩(wěn)定性強，儲存條件簡易，運輸方便，不同菌種可復(fù)合配伍一體，耐污性跨度大，環(huán)境耐受彈性強，分解速率高的工業(yè)級馴化型固體活性生物復(fù)合劑。其特征在于其原、輔料用量(按成份百分比)①清酒酵母菌液0.3-0.8％(含菌量4×107-4×1012)②灰色鏈霉球菌液 0.3-0.8％(含菌量4×107-4×1012)③米糠60-90％④水 余量培養(yǎng)液配方組合(按成份百分比)硝酸鉀0.5-1.5％磷酸二氫鉀0.25-0.75％硫酸鎂0.25-0.75％硫酸亞鐵 0.0005-0.0015％可溶性淀粉1-3％瓊脂粉1-3％麥芽汁90-98％活性生物復(fù)合劑的制備 清酒酵母菌種的制備液體培養(yǎng)基的制備采用麥芽汁培養(yǎng)基為營養(yǎng)源，在0.15mpa，121℃，15′滅菌備用；三角瓶菌種的制備取斜面菌種在無菌環(huán)境中接入含有已滅菌麥芽培養(yǎng)基的三角瓶中，在34℃，振率100-200次/min，培養(yǎng)48h；生產(chǎn)菌種的制備按3％接種量將三角瓶菌種液接入含有液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在35℃，風(fēng)比為1∶1(V/V)，液量為1/3的條件下進行48h發(fā)酵，然后再按上述條件補加1/3液體培養(yǎng)基再進行48h發(fā)酵中止。
灰色鏈霉球菌種的制備液體培養(yǎng)基的制備按培養(yǎng)液配方組合配制而成，并在0.15mpa，121℃，15′滅菌備用；三角瓶菌種的制備取斜面菌種在無菌環(huán)境中接入含有已滅菌的液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在34℃，振率100-200次/min，培養(yǎng)48h；生產(chǎn)菌種的制備按3％接種量將三角瓶菌種液接入含有液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在35℃，通風(fēng)比為1∶1(V/V)，裝液量為1/3的條件下進行48h發(fā)酵，然后在上述條件下補加1/3液體培養(yǎng)基，繼續(xù)48h發(fā)酵，中止。
活性生物復(fù)合劑的制備分別將清酒酵母菌種、灰色鏈霉球菌種兩種菌液按0.5∶0.5∶1000比例混伴于米糠中，并保持濕度為30％-70％，堆料覆蓋發(fā)酵，當(dāng)堆溫＞20℃，移至發(fā)酵槽繼續(xù)發(fā)酵，并輕微通風(fēng)10min/10h，于12h翻堆一次，同時控制堆溫在50-70℃，濕度在30-60％，發(fā)酵7d后進入靜止?fàn)顟B(tài)，發(fā)酵7d，然后攤平料堆降溫，在堆溫降至20℃以下時，濕度降至14-16％時進行包裝成品。實施該技術(shù)后明顯優(yōu)點是克服了利用生物培養(yǎng)的實驗方法制備成本高、產(chǎn)能低、液體菌劑的有效期短、穩(wěn)定性差、儲存條件苛刻、工程應(yīng)用運耗過大。是其利用的菌種仍是土著菌，自然屬性絲毫不變，缺乏產(chǎn)業(yè)化前景的缺陷。以米糠為主要菌劑為載體，選用清酒酵母和灰色鏈霉球菌為主發(fā)酵劑的可以降解環(huán)境中天然有機污染物的活性生物復(fù)合劑，它是采用生物液態(tài)發(fā)酵和固態(tài)發(fā)酵技術(shù)培養(yǎng)清酒酵母和灰色鏈霉球菌生物制劑，制造成本低，產(chǎn)能高，穩(wěn)定性強，儲存條件簡易，運輸方便、不同菌種可復(fù)合配伍一體，耐污性跨度大，環(huán)境耐受彈性強，分解速率高的工業(yè)級馴化型固體活性生物復(fù)合劑，從根本上解決耐污性弱、環(huán)境耐受性和分解速率低的問題。
具體實施例方式以下用高氏一號配方為例對本發(fā)明作進一步描述其原、輔料用量(按成份百分比)1、清酒酵母菌液6％(含菌量4×1010)2、灰色鏈霉球菌液 6％(含菌量4×1010)3、米糠 85％4、水余量高氏一號培養(yǎng)基配方組合(％)硝酸鉀 1.0％磷酸二氫鉀 0.5％硫酸鎂 0.5％硫酸亞鐵 0.001％可溶性淀粉 2％瓊脂粉 2％麥芽汁 94％活性生物復(fù)合劑的制備
①清酒酵母菌種的制備首先取940ml麥芽汁培養(yǎng)基和940ml高氏一號培養(yǎng)基分裝100ml/250三角瓶各9瓶于0.15mpa，121℃，15′滅菌備用。
②三角瓶菌種的制備分別選取清酒酵母和灰色鏈霉球菌各3支斜面種子，其中清酒酵母菌種接入含有麥芽汁培養(yǎng)基的三角瓶中，灰色鏈霉球菌接入含有高氏一號培養(yǎng)基的三角瓶中。
③分別在旋轉(zhuǎn)式搖床上培養(yǎng)48h，其條件為T＝34℃，轉(zhuǎn)速為200y/min，下床備用。
④生產(chǎn)菌種的制備分別將兩種菌液各9瓶在無菌條件下接入兩個12L發(fā)酵罐中，其中清酒酵母菌液接入含有麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，裝液量3L，灰色鏈霉球菌接入含有高氏一號培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，裝液量3L。
⑤兩種菌液發(fā)酵罐培養(yǎng)條件為T＝35℃，通風(fēng)比1∶1(V/V)48h后，分別補麥芽汁培養(yǎng)基和高氏一號培養(yǎng)基各3L，然后在培養(yǎng)條件不變的情況下繼續(xù)發(fā)酵48h中止。
⑥活性生物復(fù)合劑的制備按前述菌種制備工藝要求，將已制好的生產(chǎn)菌種分別各取0.5kg，加入1000kg含有20％左右水分的米糠中伴勻，堆料覆蓋發(fā)酵，當(dāng)堆溫達到20℃以上時，每隔10h，輕微通風(fēng)10min，每12h翻堆一次，控制堆溫在50-70℃，濕度在60％左右，發(fā)酵7d，然后進入靜態(tài)發(fā)酵7d，最后攤平料堆降溫，當(dāng)溫度降至20℃以下，濕度降至14-16％左右時，即可包裝為成品。達到耐污性跨度CODcr 10mg/L-10000mg/L；耐溫性跨度-5℃-90℃；耐酸性跨度pH3-10；耐氧性跨度富氧，缺氧，無氧界面皆能生存；分解速率高于土著菌5-40倍；降解性能最終降解可將污染有機物降解成CO2、H2O和無機灰質(zhì)。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明活性生物復(fù)合劑及其制備方法，其特征在于其原、輔料用量(按成份百分比)清酒酵母菌液 0.3-0.8％(含菌量4×107-4×1012)灰色鏈霉球菌液 0.3-0.8％(含菌量4×107-4×1012)米糠 70-90％水 余量培養(yǎng)液配方組合(按成份百分比)硝酸鉀0.5-1.5％磷酸二氫鉀0.25-0.75％硫酸鎂0.25-0.75％硫酸亞鐵 0.0005-0.0015％可溶性淀粉1-3％瓊脂粉1-3％麥芽汁90-98％以上原料均為市售。
2.依據(jù)權(quán)利要求1所述的活性生物復(fù)合劑及其制備方法，其特征在于所述的活性生物復(fù)合劑的制備方法①清酒酵母菌種的制備液體培養(yǎng)基的制備配方選用麥芽汁培養(yǎng)基為營養(yǎng)源，在0.15mpa，121℃，15′滅菌備用；三角瓶菌種的制備取斜面菌種在無菌環(huán)境中接入含有已滅菌麥芽培養(yǎng)基的三角瓶中，在34℃，振率100-200次/min，培養(yǎng)48h；生產(chǎn)菌種的制備按3％接種量將三角瓶菌種液接入含有麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在35℃通風(fēng)為1∶1(V/V)裝液量為1/3的條件下進行48h發(fā)酵，然后再按上述條件補加1/3A培養(yǎng)液再進行48h發(fā)酵中止，備用。②灰色鏈霉球菌種的制備液體培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)液配方組合配制而成，并在0.15mpa，121℃，15′滅菌備用；三角瓶菌種的制備取斜面菌種在無菌環(huán)境中接入含有已滅菌的液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在34℃，振率100-200次/min，培養(yǎng)48h；生產(chǎn)菌種的制備按3％接種量將三角瓶菌種液接入含有液體培養(yǎng)液的發(fā)酵罐中，在35℃，通風(fēng)比為1∶1(V/V)，裝液量為1/3的條件下進行48h發(fā)酵，然后在上述條件下補加1/3液體培養(yǎng)液，繼續(xù)48h發(fā)酵，中止。③活性生物復(fù)合劑的制備分別將清酒酵母菌種、灰色鏈霉球菌種兩種菌液按0.5∶1000比例，混伴于米糠中，并保持濕度為30％-70％，堆料覆蓋發(fā)酵，當(dāng)堆溫＞20℃，移至發(fā)酵槽繼續(xù)發(fā)酵，并輕微通風(fēng)10min/10h，于12h翻堆一次，同時控制堆溫在50-70℃，濕度在20-60％，發(fā)酵7d后進入靜止?fàn)顟B(tài)，發(fā)酵7d，然后攤平料堆降溫，在堆溫降至20℃以下時，濕度降至14-16％時進行包裝成品。
全文摘要
本發(fā)明公開了活性生物復(fù)合劑及其制備方法分別將在液體培養(yǎng)液培養(yǎng)的清酒酵母菌種、灰色鏈霉球菌種的菌液按比例混伴于米糠中進行發(fā)酵，制成活性生物復(fù)合劑，以米糠為主要菌劑為載體，選用清酒酵母和灰色鏈霉球菌為主發(fā)酵劑的可以降解環(huán)境中天然有機污染物的活性生物復(fù)合劑，它是采用生物液態(tài)發(fā)酵和固態(tài)發(fā)酵技術(shù)培養(yǎng)清酒酵母和灰色鏈霉球菌生物發(fā)酵劑，制造成本低，產(chǎn)能高，有效期長，穩(wěn)定性強，儲存條件簡易，運輸方便、不同菌種可復(fù)合配伍一體，耐污性跨度大，環(huán)境耐受彈性強，分解速率高的工業(yè)級馴化型固體活性生物復(fù)合劑，從根本上解決耐污性弱、環(huán)境耐受性和分解速率低的問題。
文檔編號C05F11/00GK1978630SQ200610149140
公開日2007年6月13日 申請日期2006年11月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月9日
發(fā)明者馮坤范 申請人:上海玉凰生態(tài)環(huán)境工程有限公司