基于牛血清白蛋白-納米鉑/鉍的硫離子檢測試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及以牛血清白蛋白-納米鉑/鉍為模擬過氧化物酶的硫離子快速含量測定方法及試劑盒，屬于分析化學(xué)和納米技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著工業(yè)科技的飛速發(fā)展，環(huán)境問題變得越發(fā)嚴重。硫化物是造紙、石化、皮革等行業(yè)常見的化工原料和化學(xué)污染物，對水生態(tài)系統(tǒng)和人類健康均產(chǎn)生危害。在酸性條件下，硫化物轉(zhuǎn)變?yōu)榱蚧瘹洌晌：毎?、氧化酶，造成細胞組織缺氧，甚至危及生命。同時硫化氫還腐蝕金屬設(shè)備和管道，并可被微生物氧化成硫酸，加劇腐蝕性。硫化物易溶于水，因此，硫化物還是水體污染的重要指標之一，水體又與人們的日常生活緊密相關(guān)，所以建立一種快速、簡易、實用的方法對于水體中的硫離子進行檢測非常必要。目前，硫化物的檢測方法主要包括電化學(xué)、色譜等。然而，這些方法需要復(fù)雜的樣品預(yù)處理過程，處理過程相對費時，費用相對較大。
[0003]近年來基于鉑納米材料的生物傳感器得到了廣泛的關(guān)注，這些材料的模擬過氧化物酶催化活性高，催化效果好，抗干擾能力強，因此能夠應(yīng)用于各種生物檢測領(lǐng)域，更重要的是這些材料大多可提供肉眼識別信號的比色法檢測，具有簡單，快速，適用于實時和現(xiàn)場檢測等優(yōu)點。
[0004]本發(fā)明利用牛血清白蛋白-納米鉑/鉍與硫離子相互作用后其模擬過氧化物酶活性的變化，通過牛血清白蛋白-納米鉑/鉍催化過氧化氫氧化3，3 ’，5，5 ’ -四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽顯色，提供了一種快速、簡便、靈敏的硫離子檢測新方法及試劑盒檢測試劑盒。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的一個目的是利用牛血清白蛋白-納米鉑/鉍與硫離子相互作用后其模擬過氧化物酶活性的變化，通過牛血清白蛋白-納米鉑/鉍催化過氧化氫氧化3，3 ’，5，5 ’ -四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽顯色，提供了一種快速、簡便、靈敏的硫離子檢測新方法。
[0006]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
本發(fā)明所述的基于牛血清白蛋白-納米鉑/鉍的硫離子測定方法，其特征是在硫離子溶液中加入牛血清白蛋白-納米鉑/鉍溶液，混合后室溫靜置，在混合溶液中加入過氧化氫，3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽，含有乙二胺四乙酸的磷酸鹽緩沖溶液，混合后37°(:溫度溫浴，根據(jù)652 nm處的吸光度得到硫離子濃度;所述的牛血清白蛋白-納米鉑/鉍是由如下方法制備的:在5 mL濃度為50 mg/mL的牛血清白蛋白水溶液中加入5 mL濃度為16 mmol/L氯鉑酸溶液和0.5 11^濃度為1.5 mol/L氫氧化鈉溶液，混勻后水浴80 °C下反應(yīng)2 h，反應(yīng)后溶液裝入截止分子量為3k的超濾管，6000 r/min離心超濾，并水洗3次，得到牛血清白蛋白-納米鉑水溶液，將牛血清白蛋白-納米鉑水溶液冷凍干燥得到牛血清白蛋白-納米鉑粉末，在0.6 mL濃度為23.8 mg/mL的牛血清白蛋白-鈾水溶液中加入0.6 1^濃度為0.5 mmol/L的硝酸祕溶液和1.8 mL濃度為10 mmol/L，pH=7的磷酸鹽緩沖液，混勻后水浴80 °C下反應(yīng)2.5 h，反應(yīng)后溶液裝入截止分子量為3k的超濾管，6000 r/min離心超濾，并水洗3次，得到牛血清白蛋白-納米鉑/鉍的水溶液，將牛血清白蛋白-納米鉑/鉍水溶液冷凍干燥得到牛血清白蛋白-納米鉑/鉍粉末。
[0007]所述的牛血清白蛋白-納米鉑/鉍與硫離子相互作用后其模擬過氧化物酶活性降低，催化過氧化氫氧化3，3 ’，5，5 ’ -四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽顯色能力下降，催化反應(yīng)產(chǎn)物在652nm處的吸光度減小。
[0008]所述的基于牛血清白蛋白-納米鈾/祕的硫離子測定方法，其特征是在0.4mL硫離子溶液中加入0.01 mL濃度為4.76 mg/mL的牛血清白蛋白-納米鉑/鉍溶液，混合后在室溫放置2分鐘，在混合溶液中加入I mL濃度為2 mol/L的過氧化氫，0.2 mL濃度為16 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽，2.39 mL含有乙二胺四乙酸的濃度為100 mmol/L，pH=5的磷酸鹽緩沖溶液，所述緩沖溶液中乙二胺四乙酸的濃度為4 mmol/L，混合后37°C溫浴10分鐘，測定652 nm波長處的吸光度，隨著硫離子濃度的增大，吸光度逐漸減小。
[0009]所述的基于牛血清白蛋白-納米鈾/祕的硫離子測定方法，其特征是檢測線性范圍為0.08?4 ymol/L，檢測限為50 nmol/L。
[0010]本發(fā)明采用以下具體技術(shù)方案:
(一)牛血清白蛋白-納米鉑/鉍的制備:
在5 mL濃度為50 mg/mL的牛血清白蛋白水溶液中加入5 mL濃度為16 mmol/L氯鉑酸溶液和0.5 11^濃度為1.5 mol/L氫氧化鈉溶液，混勻后水浴80 °C下反應(yīng)2 h。反應(yīng)后溶液裝入截止分子量為3k的超濾管，6000 r/min離心超濾，并水洗3次，得到牛血清白蛋白-納米鉑水溶液，將牛血清白蛋白-納米鉑水溶液冷凍干燥得到牛血清白蛋白-納米鉑粉末。在0.6 mL濃度為23.8 mg/mL的牛血清白蛋白-鉑水溶液中加入0.6 mL濃度為0.5 mmol/L的硝酸鉍溶液和1.8 mL濃度為10 mmol/L，pH=7的磷酸鹽緩沖液，混勻后水浴80 °(:下反應(yīng)2.5 h，反應(yīng)后溶液裝入截止分子量為3k的超濾管，6000 r/min離心超濾，并水洗3次，得到牛血清白蛋白-納米鉑/鉍的水溶液。將牛血清白蛋白-納米鉑/鉍水溶液冷凍干燥得到牛血清白蛋白-納米鉑/鉍粉末。制備過程中使用的所有玻璃器皿均經(jīng)過王水浸泡，并用雙蒸水徹底清洗，晾干。
[0011](二)硫離子的測定
在0.4 mL硫離子標準溶液中加入0.01 mL技術(shù)方案(一)制備的濃度為4.76 mg/mL的牛血清白蛋白-納米鉑/祕水溶液，混合后在室溫放置2分鐘，在混合溶液中加入I mL濃度為2mol/L的過氧化氫，0.2 mL濃度為16 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽，2.39 mL含有4 mmo 1/L乙二胺四乙酸的濃度為100 mmol/L，pH=5的磷酸鹽緩沖溶液，混合后37°C溫浴1分鐘，測定652 nm波長處的吸光度。
[0012]本發(fā)明的另一個目的在于提供一種基于牛血清白蛋白-納米鉑/鉍的硫離子檢測試劑盒。試劑盒中包括提供牛血清白蛋白-納米鉑/鉍溶液(a液)，過氧化氫溶液(b液)，3，
3’，5，5 ’ -四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽溶液(c液)，硫化鈉溶液(標準液)。
[0013]為了實現(xiàn)上述檢測方法的目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
本發(fā)明所述的一種基于牛血清白蛋白-納米鉑/鉍的硫離子檢測試劑盒，其特征是試劑盒中有牛血清白蛋白-納米鉑/鉍溶液、過氧化氫溶液、3，3’，5，5’_四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽溶液和硫化鈉溶液，所述的牛血清白蛋白-納米鉑/鉍溶液作為a液，過氧化氫溶液作為b液，3，3’，5，5 ’ -四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽溶液作為c液，硫化鈉溶液作為標準液。
[0014]上述a液中含有濃度為0.02 mg/mL的牛血清白蛋白-納米鉑/鉍溶液，所述的牛血清白蛋白-納米鉑/鉍溶液是用含有4 mmol/L乙二胺四乙酸的濃度為100 mmol/L，pH=5的磷酸鹽緩沖液配制而成的;13液中含有濃度為2 mol/L的過氧化氫水溶液;c液中含有濃度為16mmol/L的3，3 ’，5，5 ’ -四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽水溶液;標準液中含有濃度為0.8，I，3，5，10，
20.40ymol/L的硫化鈉溶液。
[0015]所述牛血清白蛋白-納米鈾/祕是由如下方法制備而成的:在5mL濃度為50 mg/mL的牛血清白蛋白水溶液中加入5 mL濃度為16 mmol/L氯鉑酸溶液和0.5 11^濃度為1.5mol/L氫氧化鈉溶液，混勻后水浴80 °C下反應(yīng)2 h，反應(yīng)后溶液裝入截止分子量為3k的超濾管，6000 r/min離心超濾，并水洗3次，得到牛血清白蛋白_納米鉑水溶液，將牛血清白蛋白_納米鉑水溶液冷凍干燥得到牛血清白蛋白-納米鉑粉末，在0.6 mL濃度為23.8 mg/mL的牛血清白蛋白-鉑水溶液中加入0.6 mL濃度為0.5 mmol/L的硝酸鉍溶液和1.8 mL濃度為10mmol/L，pH=7的磷酸鹽緩沖液，混勻后水