一種測(cè)定腦脈利顆粒包結(jié)物中丹參酮ⅱa含量的高效液相色譜方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物的檢測(cè)方法，具體地說涉及一種測(cè)定腦脈利顆粒包結(jié)物中丹參麗 IIA含量的高效液相色譜方法。 技術(shù)背景
[0002] 丹參麗IIA是腦脈利顆粒中重要的成分，出了測(cè)定腦脈利顆粒中其它的重要成 分，丹參麗IIA也是一個(gè)非常重要的檢測(cè)指標(biāo)，因此需要制定一個(gè)準(zhǔn)確，有效的方法來測(cè)定 其含量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于建立一種可W快速準(zhǔn)確地測(cè)定腦脈利顆粒包結(jié)物中丹參麗IIA 含量的高效液相色譜方法。
[0004] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0005] 色譜柱；W十八烷基娃焼鍵合硅膠為填充劑；柱填料粒徑為5μm，柱長(zhǎng)為250mm。 [000引流動(dòng)相；W甲醇-水為流動(dòng)化甲醇-水的體積比為77:23~87:13，
[0007]流速；0. 8 ~1. 2ml/min[000引柱溫；25~35°C [000引 檢測(cè)波長(zhǎng)；270±5nm;
[0010]進(jìn)樣量；5 ~20μ1。
[0011] 優(yōu)選色譜條件；W十八烷基娃焼鍵合硅膠為填充劑；W甲醇-水為流動(dòng)相，甲 醇-水的體積比為82:18,檢測(cè)波長(zhǎng)為270皿;流速為1.Oml/min，進(jìn)樣量為5μ1。
[0012] 樣品溶液的制備：取丹參麗IIA對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每 1ml中約含丹參麗IIA6μg的溶液，作為對(duì)照品溶液
[0013] 取本品約50mg，精密稱定，置20ml容量瓶中，加甲醇超聲提取20分鐘并定容，過 濾，作為包結(jié)物中丹參麗IIA總含量的待測(cè)溶液。
【附圖說明】
[0014] 圖1為腦脈利包結(jié)物中含丹參麗IIA的樣品色譜圖
[0015] 圖2為丹參麗II A對(duì)照品圖
[0016] 圖3為丹參麗II A標(biāo)準(zhǔn)品的工作曲線圖 實(shí)施例
[0017] 下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但實(shí)施例并不限制本發(fā)明的保護(hù)范 圍。
[0018] 主要儀器及色譜條件：島津（泉LC-20AT，檢測(cè)器SPD-20A，自動(dòng)進(jìn)樣器
[0019] SU-20A，工作站；LC Solution)高效液相色譜儀。
[0020] 色譜柱；W十八烷基娃焼鍵合硅膠為填充劑的色譜柱
[0021] 試藥；甲醇（色譜純）；水為Millipore18. 2ΜΩ超純水，其他試劑分析純。
[0022] 實(shí)施例1色譜條件的選擇
[0023] 1. 1波長(zhǎng)的選擇
[0024] 取標(biāo)準(zhǔn)品溶液，W流動(dòng)相為空白校正液，照紫外-可見分光光度法（中國(guó)藥典2010 年版二部附錄IVA)于190-400nm處進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示，供試品溶液在270nm處有最大吸 收峰，因此將270 +5nm確定為檢測(cè)波長(zhǎng)。
[00巧]1. 2方法的篩選試驗(yàn)
[0026] 本試驗(yàn)通過調(diào)整流動(dòng)相的組成及比例，流速，柱溫等，來篩選本試驗(yàn)的色譜方法， 具體方案見表1。
[0027] 表1方法的篩選方案
[0028]
[0029] 精密稱定包結(jié)物50mg，置于20ml量瓶中，用甲醇超聲20min，定容，過濾。注入液 相色譜儀，記錄色譜圖。
[0030] 表2方法的篩選試驗(yàn)結(jié)果
[0031]
陽〇3引結(jié)果表明，方案1-9的色譜條件下，丹參麗IIA和其它峰的分離度都在胃1. 5W上， 丹參麗IIA的峰形好，可W用于測(cè)定丹參麗IIA的含量。
[0033] 實(shí)施例2溶液穩(wěn)定性結(jié)果
[0034] 稱取包結(jié)物約50mg，精密稱定，置20ml容量瓶中，加甲醇超聲提取20分鐘并定容， 0. 22μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液；用實(shí)施例1中方案1的條件，分別在0小時(shí)、2小 時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、8小時(shí)、10小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)注入液相色譜儀，記錄色譜圖；考察峰面 積變化。
[0035] 表3溶液穩(wěn)定性結(jié)果
[0036]
[0037] 結(jié)果顯示，采用方案1得到的結(jié)果表明含丹參麗IIA的包結(jié)物樣品溶液在此條件 下穩(wěn)定性好。
[003引實(shí)施例3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
[0039] 色譜條件：同實(shí)施例1中方案1所述的色譜條件。
[0040] 取丹參麗IIA對(duì)照品適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成每1ml中約含丹參麗 IIA0.Img的溶液，作為膽備液，分別精密量取膽備液0. 06、0. 15、0. 6、1. 5、3. 0ml置10ml 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。照上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。同時(shí)W 濃度與峰面積做線性回歸。
[00川丹參麗IIA在0. 648~32. 4μg/ml的范圍內(nèi)濃度與峰面積線性關(guān)系良好。
[0042]線性回歸方程為；y= 35, 658, 314X-12, 591Y= 0. 9990
[0043] 當(dāng)信噪比為10:1時(shí)，測(cè)得丹參麗IIA的定量限為4. 284ng。
[0044] 結(jié)果表明，在方案1的色譜條件下，線性良好，定量限完全能滿足測(cè)定丹參麗IIA 的要求。
[0045] 實(shí)施例4重復(fù)性試驗(yàn)
[0046] 色譜條件，同實(shí)施例1中方案1所述的色譜條件。
[0047] 取包結(jié)物約50mg，精密稱定，置20ml容量瓶中，加甲醇超聲提取20分鐘并定容， 0. 22μm微孔濾膜過濾，提取6份，作為供試品溶液；注入液相色譜儀，記錄色譜圖；考察峰 面積變化。結(jié)果如下表4。
[0048] 表4含量測(cè)定重復(fù)性考察
[0049]
陽050] 由上述試驗(yàn)結(jié)果可知，6份樣品重復(fù)性RSD小于2%，表明該試驗(yàn)重復(fù)性良好。
[0051] 實(shí)施例5回收率試驗(yàn)
[0052] 色譜條件，同實(shí)施例1中方案1所述的色譜條件。
[0053] 在包結(jié)物樣品中加入一定量的丹參麗IIA，同樣品的提取方法一致提取，再測(cè)定溶 液中丹參麗IIA的量，計(jì)算回收率。
[0054] 對(duì)照品溶液的配制；取包結(jié)物約25mg，另加入對(duì)照品適量，分別為稱樣量中丹參 麗IIA含量的80 %、100 %、120 %，與樣品相同方法用甲醇提取，配制成低、中、高Η種濃度 (各3份）的溶液。注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
[00巧]表5回收率試驗(yàn)結(jié)果
[0056]
[0057] 結(jié)果表明，本方法測(cè)得本品Η個(gè)濃度9份樣品回收率結(jié)果均在95. 0%~105. 0% 范圍內(nèi)，其RSD小于2%，故本測(cè)定方法的準(zhǔn)確度良好。
[005引實(shí)施例6樣品的測(cè)定
[0059] 取本品約50mg，精密稱定，置20ml容量瓶中，加甲醇超聲提取20分鐘并定容，過 濾，作為包結(jié)物中丹參麗IIA總含量（W)的待測(cè)溶液；
[0060] 取丹參麗II A對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1ml中約含丹參麗 IIΛ6l·!邑的溶液，作為對(duì)照品溶液。
[0061] 照上述色譜條件，精密量取上述溶液各5μ1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外 標(biāo)法計(jì)算，即得。
[0062] 表6多批樣品含量及包結(jié)率結(jié)果
[0063]
[0064] 結(jié)果表明，本方法的專屬性強(qiáng)，靈敏度高，精密度好，能準(zhǔn)確測(cè)定丹參麗IIA的含 量。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種采用高效液相色譜法測(cè)定腦脈利顆粒中丹參酮IIA含量的方法，其特征 在于：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水為流動(dòng)相，甲醇-水的體積比為 77:23~87:13，檢測(cè)波長(zhǎng)為 270±511111;流速為0.8~1.21111/1^11，進(jìn)樣量為5~2(^1。2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于甲醇與水的體積比為82:18。3. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于流速為1.Oml/min。4. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于柱溫為25~30°C。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種采用高效液相色譜法測(cè)定腦脈利顆粒包結(jié)物中丹參酮ⅡA含量的方法，所述方法包括以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水為流動(dòng)相，甲醇-水的體積比為77:23~87:13，檢測(cè)波長(zhǎng)為270±5nm；流速為0.8~1.2ml/min。采用該方法可以將丹參酮ⅡA與相鄰的峰進(jìn)行有效分離并能準(zhǔn)確定量。本方法的專屬性強(qiáng)，精密度好，準(zhǔn)確度高，可以快速準(zhǔn)確滴測(cè)定腦脈利顆粒包結(jié)物中丹參酮ⅡA的含量。
【IPC分類】G01N30/02
【公開號(hào)】CN105445386
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410437367
【發(fā)明人】秦引林, 李敬芝
【申請(qǐng)人】南京柯菲平盛輝制藥有限公司, 江蘇柯菲平醫(yī)藥股份有限公司
【公開日】2016年3月30日
【申請(qǐng)日】2014年8月29日