高效快速測定復(fù)雜組分中b族維生素含量的色譜分析方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明涉及一種高效快速測定復(fù)雜組分中B族維生素含量的色譜分析方法，特別 一種運用高效液相色譜法（HPLC)高效快速測定復(fù)雜組分中維生素B1、維生素B2、維生素 B6、煙酰胺的方法。具體通過對色譜條件的巧妙選擇優(yōu)化，實現(xiàn)對復(fù)雜組分樣品中維生素 B1、維生素B2、維生素B6、煙酰胺的分離和含量的準確測定。
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【背景技術(shù)】
[0004] B族維生素也叫乙族維生素，也叫維他命B、維生素B族或維生素B復(fù)合群，主要包 括維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素B12、煙酸、泛酸、葉酸等。B族維生素是維持人體 正常機能與代謝活動不可或缺的水溶性維生素，它們推動體內(nèi)代謝，把糖、脂肪、蛋白質(zhì)等 轉(zhuǎn)化成熱量。如果缺少維生素B，則細胞功能馬上降低，引起代謝障礙，這時人體會出現(xiàn)怠滯 和食欲不振。B族維生素廣泛存在于米糠、麩皮、酵母、動物的肝臟、粗糧蔬菜等食物中，但 由于食用方法不對，幾乎攝取不到。而人體卻無法自行制造合成維生素B，所以必須額外補 充。
[0005] 目前B族維生素的測定方法已有微生物分析法和高效液相色譜法，微生物法測定 結(jié)果不太準確，且費時費力，操作復(fù)雜，對人員技術(shù)要求高；而目前的高效液相色譜法一般 存在峰型不好，主峰難以分開，分離度達不到要求等情況，且分析時間過長。為了解決這一 難題，本發(fā)明通過對色譜條件的優(yōu)化，運用普通高效液相色譜儀就能快速而準確的同時分 析多種B族維生素，包括維生素B1、維生素B2、維生素B6、煙酰胺的含量。而且本發(fā)明不僅 縮短了分析時間，同時也減少了溶劑用量降低了分析成本。
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種高效快速測定復(fù)雜組分中B族維生素含 量的色譜分析方法，其可以簡便、快速、準確的測定B族維生素(包括維生素B1、維生素B2、 維生素B6、煙酰胺含量)，縮短分析時間，減少溶劑使用量，降低分析成本。
[0008] 本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案來解決上述技術(shù)問題的：一種高效快速測定復(fù)雜組分 中B族維生素含量的色譜分析方法，其特征在于，所述高效快速測定復(fù)雜組分中B族維生素 含量的色譜分析方法包括以下步驟： 第一步、試液的配制 萃取溶液：稱取無水檸檬酸或一水檸檬酸，加水溶解，再加含2, 6-二叔丁基甲酚的二 甲基亞砜溶液，混勻； 正己烷磺酸鈉溶液：稱取正己烷磺酸鈉，加水溶解稀釋； 第二步、對照品溶液的配制 精密稱取對照品維生素B1、維生素B2、維生素B6、煙酰胺至100ml容量瓶中，用萃取溶 液溶解，冷卻至室溫后用萃取溶液稀釋至刻度； 第三步、樣品溶液的制備 精密稱取樣品適量，置125ml棕色具塞錐形瓶中，加萃取溶液，超聲溶解，必要時置于 70°C水浴中振搖；吸取上層液體于一離心管中，高速離心；取上清液經(jīng)0.45 ym濾膜過濾； 第四步、液相色譜條件 色譜柱：C18 柱 50X4.6mm，2.7ym 流動相：A :7. 2mmol/l正己烷磺酸鈉：冰醋酸98. 65:1. 35 ; B :甲醇； 流動相A、B在5min內(nèi)按特定的梯度程序進行； 流速：1. 〇ml/min ; 檢測波長：280nm ; 進樣量：3 y 1 ; 柱溫：30°C ; 通過樣品與對照品的保留時間和溶液峰面積關(guān)系計算樣品中維生素B1、維生素B2、維 生素B6、煙酰胺的含量。
[0009] 優(yōu)選地，所述高效快速測定復(fù)雜組分中B族維生素含量的色譜分析方法通過對照 品的保留時間對樣品進行定性，外標法計算樣品中B族維生素的含量，該計算公式為如下 式：
其中，A樣：為樣品溶液中B族維生素峰面積；C標：為標準工作溶液的濃度，mg/mL ;A 標：為標準工作溶液中B族維生素峰面積；W樣：為樣品稱重，g。
[0010] 優(yōu)選地，所述高效快速測定復(fù)雜組分中B族維生素含量的色譜分析方法對照品溶 液的配制為：精密稱取對照品維生素B1、維生素B2、維生素B6、煙酰胺至100ml容量瓶中， 用萃取溶液溶解，冷卻至室溫后用萃取溶液稀釋至刻度。
[0011] 優(yōu)選地，所述第三步中的樣品為固體樣品則需先用研缽及研杵研磨成細粉后使 用，若樣品為液體樣品則直接取用，若樣品為膠囊樣品則取若干膠囊的內(nèi)容物，研磨混合均 勻后使用。
[0012] 優(yōu)選地，所述高效快速測定復(fù)雜組分中B族維生素含量的色譜分析方法適用于含 維生素B1、維生素B2、維生素B6、煙酰胺的片劑、硬膠囊、粉劑、軟膠囊、滴劑、丸劑、軟糖及 飲料，產(chǎn)品是保健食品、藥品、普通食品或預(yù)混料。
[0013] 本發(fā)明的積極進步效果在于：本發(fā)明以二甲基亞砜溶劑溶解樣品，二甲基亞砜是 萬能溶劑，能使復(fù)雜樣品中所有B族維生素包括維生素B1、維生素B2、維生素B6、煙酰胺徹 底溶解出來。而且在優(yōu)化的色譜條件下樣品的雜質(zhì)峰干擾很少，更重要的是本發(fā)明采用5cm C18柱代替?zhèn)鹘y(tǒng)的25cm C18柱，在5min之內(nèi)按特定的梯度程序很好的完成4種維生素的完 全分離，本發(fā)明提高檢測準確度和檢測速度，減少了溶劑用量，且分離度，回收率等良好。本 發(fā)明提供了一種簡便、快捷、準確測定復(fù)雜組分中B族維生素包括維生素B1、維生素B2、維 生素B6、煙酰胺含量的液相色譜分析方法。檢測產(chǎn)品可以是保健食品、藥品、普通食品或預(yù) 混料，適用范圍廣，實用性強。
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【附圖說明】
[0015] 圖1為現(xiàn)有高效液相色譜法對第一實施例中標準品測定的結(jié)果。
[0016] 圖2為現(xiàn)有高效液相色譜法對第一實施例中樣品測定的結(jié)果。
[0017] 圖3為應(yīng)用本發(fā)明方法對第一實施例中的標準品測定的結(jié)果。
[0018] 圖4為應(yīng)用本發(fā)明方法對第一實施例中的樣品測定的結(jié)果。
[0019] 圖5為應(yīng)用本發(fā)明方法對第二實施例中的標準品測定的結(jié)果。
[0020] 圖6為應(yīng)用本發(fā)明方法對第二實施例中的樣品測定的結(jié)果。
[0021] 圖7為應(yīng)用本發(fā)明方法對第三實施例中的標準品測定的結(jié)果。
[0022] 圖8為應(yīng)用本發(fā)明方法對第三實施例中的樣品測定的結(jié)果。
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【具體實施方式】
[0024] 下面通過實施例對發(fā)明作進一步詳細的說明，分別以常規(guī)劑型：片劑、粉劑、軟膠 囊為例。
[0025] 第一實施例： 江蘇艾蘭得營養(yǎng)品有限公司生產(chǎn)的兒童多維營養(yǎng)素片樣品中維生素B1、維生素B2、維 生素B6、煙酰胺含量的測定。本發(fā)明所用試劑及配制：無水檸檬酸或一水檸檬酸：分析純； 2, 6-二叔丁基甲酚：分析純；二甲基亞砜：色譜純；正己烷磺酸鈉：色譜純；冰醋酸：分析 純；甲醇：色譜純。第一實施例的具體步驟如下： 第一步：萃取溶液，稱取10. 〇g無水檸檬酸或11. 〇g-水檸檬酸，加l〇〇ml水溶解，再加 含0. 2% 2, 6-二叔丁基甲酚（BH