一種快速測定維生素d3含量的色譜方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種快速測定維生素D3含量的色譜方法，運用高效液相色譜法(HPLC) 測定維生素D3含量的方法，通過對色譜條件的巧妙優(yōu)化，最終達到快速而準(zhǔn)確地對復(fù)雜組分樣品中維生素D3含量的測定。該色譜方法包括以下步驟: （1）對照品溶液的制備；（2）樣品處理；（3）液相色譜條件：色譜柱：硅膠柱，50×4.6mm，2.7μm；流速：2ml/min；流動相：將異丙醇與正己烷按照異丙醇：正己烷=0.5：99.5的體積比混合均勻；檢測波長：264nm；進樣量：75μl。該色譜方法能夠簡便、快速、準(zhǔn)確的測定維生素D3含量，縮短分析時間，減少溶劑使用量，降低分析成本。
【專利說明】-種快速測定維生轟D3含量的色譜方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種運用高效液相色譜法（HPLC)測定維生素D3含量的方法，通過對 色譜條件的巧妙優(yōu)化，最終達到快速而準(zhǔn)確地對復(fù)雜組分樣品中維生素D3含量的測定。

【背景技術(shù)】
[0002] 維生素D3是維生素D類，是類固醇衍生物，目前認(rèn)為它也是一種類固醇激素。主 要幫助巧、磯的吸收，使血漿巧和血漿磯的水平達到飽和程度；促進生長和骨骼巧化，促進 牙齒健全；維持血液中巧樣酸鹽的正常水平；防止氨基酸通過腎臟損失。體內(nèi)的膽固醇可 變?yōu)?-脫氨膽固醇，儲存在皮下，在陽光及紫外線照射下可轉(zhuǎn)變成維生素D3,但是住在寒 冷地帶、皮膚顏色較深或長期處于室內(nèi)的人群都可能得不到充足的陽光照射，而無法滿足 維生素D3吸收的要求。所W人體需要補充維生素D3。但據(jù)研究人員估計，長期每天攝入 0.025克維生素D對人體有害?？赡茉斐傻暮蠊牵簮阂?、頭痛、腎結(jié)石、肌肉萎縮、關(guān)節(jié)炎、 關(guān)節(jié)異常巧化、動脈硬化、高血壓、高血巧、食欲不振、輕微中毒、腹瀉、口渴，體重減輕，多尿 及夜尿等癥狀。嚴(yán)重中毒時則會損傷腎臟，使軟組織巧日也、血管、支氣管、胃、腎小管等）巧 化。所W任何補充劑中的維生素D3含量測定就顯得尤為重要。
[0003] 在已知的維生素D3含量的測定方法中，主要是HPLC法，但是存在提取次數(shù)多，損 失量大，分析時間長等缺陷。隨著科技的不斷發(fā)展，速度和成本控制已是企業(yè)生存的關(guān)鍵。 為了提高檢測速度，很多企業(yè)選擇超高效液相色譜儀（UHPLC)，但是成本卻非常高。為了解 決該一難題，本發(fā)明通過對色譜條件的優(yōu)化，運用普通高效液相色譜儀就能快速而準(zhǔn)確的 分析維生素D3的含量。本發(fā)明不僅縮短了分析時間，同時也減少了溶劑用量降低了分析成 本。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于對常用色譜條件進行優(yōu)化，提供了一種簡便、快速、準(zhǔn)確的測定 維生素D3含量的方法，縮短分析時間，減少溶劑使用量，最終達到降低分析成本。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種快速測定維生素D3含量的色譜方法，包括W下步驟： (1) 對照品溶液的配制： 采用USP標(biāo)準(zhǔn)品作為維生素D3對照品，精密稱定一定量的維生素D3對照品，用正己 焼溶解，配制成濃度為45-55mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，每次試驗前用正己焼稀釋儲備液，配制 成濃度為0. 45-0. 55 y g/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； (2) 樣品處理： 取若干樣品磨成細(xì)粉，精密稱取一定量細(xì)粉于一蹤色容量瓶中，加二甲亞諷，塞緊瓶 塞；上述溶液于超聲水浴機中6(TC下強烈超聲約45分鐘，取出冷卻至室溫；再加入正己焼， 強烈振搖，再加18%NaCl溶液，充分振搖5分鐘，待靜置分層后，輕輕吸取上層液體于50mL 離也管中，高速離也15分鐘；取正己焼層上清液注入液相色譜儀； (3)液相色譜條件： 色譜柱：娃膠柱，50 X 4. 6mm，2. 7 y m ; 流速：2ml/min ; 流動相：將異丙醇與正己焼按照異丙醇；正己焼=0. 5 ;99. 5的體積比混合均勻； 檢測波長；264nm ; 進樣量；75iil。
[0006] 更進一步地，通過樣品與對照品的保留時間和溶液峰面積關(guān)系計算樣品中維生素 D3的含量，該計算公式為：

【權(quán)利要求】
1. 一種快速測定維生素D3含量的色譜方法，其特征在于：包括以下步驟： (1) 對照品溶液的配制： 采用USP標(biāo)準(zhǔn)品作為維生素D3對照品，精密稱定一定量的維生素D3對照品，用正己 烷溶解，配制成濃度為45-55mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，每次試驗前用正己烷稀釋儲備液，配制 成濃度為〇.45-0. 55 ii g/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； (2) 樣品處理： 精密稱取一定量樣品于一棕色容量瓶中，加二甲亞砜，塞緊瓶塞；將上述溶液于超聲 水浴機中60°C下強烈超聲約45分鐘，取出冷卻至室溫；再加入正己烷，強烈振搖，再加 18%NaCl溶液，充分振搖5分鐘，待靜置分層后，輕輕吸取上層液體于50mL離心管中，高速離 心15分鐘；取正己烷層上清液注入液相色譜儀； (3) 液相色譜條件： 色譜柱：娃膠柱，50X4. 6mm，2. 7ym; 流速：2ml/min； 流動相：將異丙醇與正己烷按照異丙醇：正己烷=〇. 5 :99. 5的體積比混合均勻； 檢測波長：264nm; 進樣量：75iU。
2. 如權(quán)利要求1所述的快速測定維生素D3含量的色譜方法，其特征在于： 通過對照品的保留時間對樣品進行定性，外標(biāo)法計算樣品中維生素D3的含量，該計算 公式為：
式中A樣：為樣品溶液中維生素D3峰面積； C標(biāo)：為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度，Ug/mL ; A標(biāo)：為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中維生素D3峰面積； W樣：為樣品稱重，g。
3. 如權(quán)利要求1所述的快速測定維生素D3含量的色譜方法，其特征在于：所述的標(biāo)準(zhǔn) 貯備溶液的配制為：精密稱取一定量的維生素D3對照品于一棕色容量瓶中，立即用正己烷 溶解并稀釋至刻度。
4. 如權(quán)利要求1所述的快速測定維生素D3含量的色譜方法，其特征在于：所述的標(biāo)準(zhǔn) 工作溶液的配制為：精密吸取一定量標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液于一棕色容量瓶中，立即用正己烷溶解 并稀釋至刻度。
5. 如權(quán)利要求1所述的快速測定維生素D3含量的色譜方法，其特征在于：所述的步驟 二中的樣品為固體樣品則需先用研缽及研杵研磨成細(xì)粉后使用，若樣品為液體樣品則直接 取用，若樣品為膠囊樣品則取若干膠囊的內(nèi)容物，研磨混合均勻后使用。
6. 如權(quán)利要求1所述的快速測定維生素D3含量的色譜方法，其特征在于：所述的方法 適用于含維生素D3的片劑、硬膠囊、粉劑、軟膠囊、滴劑、丸劑、軟糖及飲料，產(chǎn)品可以是保 健食品、藥品、普通食品或預(yù)混料。
【文檔編號】G01N30/88GK104502501SQ201410823882
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月26日
【發(fā)明者】包亞君, 徐小明, 孫青 , 張沛霞 申請人:江蘇艾蘭得營養(yǎng)品有限公司