一種Cortactin蛋白的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥診斷試劑領(lǐng)域，具體涉及一種涉及Cortactin蛋白的應(yīng)用，特別 是涉及Cortactin蛋白作為乳腺癌轉(zhuǎn)移EMT相關(guān)標(biāo)志物用于制備乳腺癌轉(zhuǎn)移診斷試劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 乳腺癌是女性第二大發(fā)病率的惡性腫瘤，乳腺癌轉(zhuǎn)移是致死的主要原因。通常， 乳腺癌轉(zhuǎn)移是不可治愈的。在臨床中，乳腺癌轉(zhuǎn)移的診斷多需要借助影像學(xué)檢查或醫(yī)生觸 診，而在乳腺癌轉(zhuǎn)移的早期，很難使用現(xiàn)有的設(shè)備和方法進(jìn)行診斷，現(xiàn)有技術(shù)下也沒(méi)有特異 性和敏感性均達(dá)到要求的診斷標(biāo)志物。目前臨床使用的乳腺癌分子標(biāo)志物如ER、PR、Her2、 Ki67、P53、CK5/6、T0PII等在乳腺癌早期和乳腺癌轉(zhuǎn)移階段的表達(dá)均未有顯著差異。因此， 現(xiàn)有的乳腺癌診斷標(biāo)志物并不能診斷或預(yù)測(cè)乳腺癌轉(zhuǎn)移的發(fā)生和風(fēng)險(xiǎn)。
[0003] 皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT)，是指上皮細(xì)胞通過(guò)特定程序轉(zhuǎn)化為具有間質(zhì)表型細(xì) 胞的生物學(xué)過(guò)程。在胚胎發(fā)育、慢性炎癥、組織重建、癌癥轉(zhuǎn)移和多種纖維化疾病中發(fā)揮了 重要作用，其主要的特征有細(xì)胞黏附分子（如E-鈣黏蛋白）表達(dá)的減少、細(xì)胞角蛋白細(xì)胞 骨架轉(zhuǎn)化為波形蛋白（Vimentin)為主的細(xì)胞骨架及形態(tài)上具有間充質(zhì)細(xì)胞的特征等。乳 腺癌轉(zhuǎn)移與EMT的發(fā)生機(jī)制與微環(huán)境密不可分，其特異性標(biāo)志物對(duì)于臨床有著極高的預(yù)后 和治療價(jià)值。但是目前，乳腺癌EMT研宄的證據(jù)和手段仍不完整，不具備尋找新的EMT靶點(diǎn) 的條件。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明中的Cortactin是指皮層肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，是一種微絲骨架結(jié)合蛋白。 可作為Src激酶直接磷酸化的底物受到酪氨酸磷酸化信號(hào)通路的調(diào)控，從而成為信號(hào)通路 與細(xì)胞骨架重要的聯(lián)系分子。Cortactin與肌動(dòng)蛋白纖絲的側(cè)面相結(jié)合，并直接參與皮層 細(xì)胞骨架的組建，它可以通過(guò)影響細(xì)胞運(yùn)動(dòng)前沿微絲骨架重組從而提高細(xì)胞迀移的能力。 (Weaver, A. Μ. , Cortactin and tumor invasiveness. Cancer Lett, 2008. 265 (2):p. 14.)本 發(fā)明的目的是提供一種Cortactin蛋白在制備乳腺癌轉(zhuǎn)移診斷試劑中的應(yīng)用，為乳腺癌復(fù) 發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估提供有力的工具。
[0005] 進(jìn)一步的，上述應(yīng)用中，Cortactin蛋白可作為乳腺癌轉(zhuǎn)移EMT相關(guān)標(biāo)志物，用于 診斷與EMT相關(guān)的乳腺癌轉(zhuǎn)移。
[0006] 進(jìn)一步的，上述應(yīng)用中，Cortactin蛋白可以作為乳腺癌轉(zhuǎn)移診斷試劑反應(yīng)底物， 用于診斷與EMT相關(guān)的乳腺癌轉(zhuǎn)移。本發(fā)明所述的診斷檢測(cè)可以采用常規(guī)的技術(shù)方法，如 利用抗原抗體反應(yīng)的原理制備Cortactin蛋白抗體，利用抗體檢測(cè)人體內(nèi)Cortactin蛋白 水平，或者利用Cortactin蛋白檢測(cè)人體內(nèi)Cortactin蛋白抗體的水平。本發(fā)明所述的診 斷檢測(cè)樣本可以選擇血漿、血清或體液等。
[0007] 本發(fā)明是建立在人乳腺癌細(xì)胞株在活體內(nèi)自然發(fā)生的EMT過(guò)程上。本發(fā)明以具有 人源性乳腺微環(huán)境的活體動(dòng)物模型為基礎(chǔ)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，該動(dòng)物模型具有人源性乳腺微環(huán)境， 能夠較好的模擬臨床。通過(guò)在人源性乳腺微環(huán)境的活體動(dòng)物模型中提取背景高度一致的 細(xì)胞系進(jìn)行高通量蛋白組學(xué)對(duì)比實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)Cortactin蛋白可用作乳腺癌轉(zhuǎn)移EMT相關(guān)標(biāo) 志物，然后使用細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)、動(dòng)物模型、以及臨床標(biāo)本檢測(cè)等方法，證明Cortactin 可以調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞株EMT的狀態(tài)，Cortactin的調(diào)節(jié)可以影響乳腺癌細(xì)胞株的轉(zhuǎn)移效率， Cortactin表達(dá)與EMT相關(guān)的乳腺癌轉(zhuǎn)移高度相關(guān)。
[0008] 本發(fā)明通過(guò)對(duì)乳腺癌組織的石蠟標(biāo)本進(jìn)行蛋白Cortactin的檢測(cè)，可對(duì)乳腺癌患 者轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)，Cortactin蛋白的下調(diào)和缺失與乳腺癌轉(zhuǎn)移高風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)；目前臨床 上尚無(wú)成熟的乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白標(biāo)志物的檢測(cè)，Cortactin蛋白的臨床免疫組化檢測(cè)將 為乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估提供有力的工具。
【附圖說(shuō)明】
[0009] 圖1為MDA-MB-231-br銀染二維凝膠電泳圖。
[0010] 圖2為MDA-MB-231銀染二維凝膠電泳圖。
[0011] 圖3為Cortactin表達(dá)進(jìn)行下調(diào)對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的細(xì)胞學(xué)形態(tài)影 響。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 以下通過(guò)實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的具體步驟，但不受實(shí)施例限制。
[0013] 在本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)，除非另有說(shuō)明，一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理 解的含義。
[0014] 下面結(jié)合具體實(shí)施例并參照數(shù)據(jù)進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例只 是為了舉例說(shuō)明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0015] 在以下實(shí)施例中，未詳細(xì)描述的各種過(guò)程和方法是本領(lǐng)域中公知的常規(guī)方法。
[0016] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明。
[0017] 實(shí)施例1 創(chuàng)建具有人源性微環(huán)境的乳腺癌小鼠模型（參照文獻(xiàn)Wang J，Xia TS，Liu XA，Ding Qj Du Qj Yin Hj Wang S. A novel orthotopic and metastatic mouse model of breast cancer in human mammary microenvironment. Breast Cancer Res Treat. 2010Apr ； 120 (2) : 337-44. PMID: 19350386.公開的方法造模）。在移植正常人源性乳腺組織中接種人 乳腺癌細(xì)胞，提高原位成瘤率，檢測(cè)并收集對(duì)側(cè)人源性組織中的轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞及瘤組織。 用于乳腺癌EMT相關(guān)轉(zhuǎn)移蛋白標(biāo)志物的鑒定和提取。造模結(jié)果如表1所示： 表1病理學(xué)檢查MDA-MB-231的原位成瘤和轉(zhuǎn)移成瘤情況
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種Cortactin蛋白的應(yīng)用，其特征在于將Cortactin蛋白用于制備乳腺癌轉(zhuǎn)移診 斷試劑。
2. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于Cortactin蛋白可作為乳腺癌轉(zhuǎn)移EMT相關(guān) 標(biāo)志物，用于診斷與EMT相關(guān)的乳腺癌轉(zhuǎn)移。
3. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于Cortactin蛋白作為乳腺癌轉(zhuǎn)移診斷試劑反 應(yīng)底物用于制備乳腺癌轉(zhuǎn)移診斷試劑。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種Cortactin蛋白的應(yīng)用，將Cortactin蛋白用于制備乳腺癌轉(zhuǎn)移診斷試劑。Cortactin蛋白可作為乳腺癌轉(zhuǎn)移EMT相關(guān)標(biāo)志物，用于診斷與EMT相關(guān)的乳腺癌轉(zhuǎn)移。本發(fā)明通過(guò)在人源性乳腺微環(huán)境的活體動(dòng)物模型中提取背景高度一致的細(xì)胞系進(jìn)行高通量蛋白組學(xué)對(duì)比實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)Cortactin蛋白可用作乳腺癌轉(zhuǎn)移EMT相關(guān)標(biāo)志物，使用細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)、動(dòng)物模型、以及臨床標(biāo)本檢測(cè)等方法，證明Cortactin可以調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞株EMT的狀態(tài)，Cortactin的調(diào)節(jié)可以影響乳腺癌細(xì)胞株的轉(zhuǎn)移效率，Cortactin表達(dá)與EMT相關(guān)的乳腺癌轉(zhuǎn)移高度相關(guān)。
【IPC分類】G01N33-68
【公開號(hào)】CN104655856
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510066650
【發(fā)明人】王水, 查小明, 夏添松, 梁夢(mèng)迪
【申請(qǐng)人】南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院
【公開日】2015年5月27日
【申請(qǐng)日】2015年2月9日