一種系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷標(biāo)志的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及疾病的診斷技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷標(biāo)志及其 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE)是一種彌漫性、全身性自身免疫病。它有多種臨床癥狀，會(huì) 牽涉到皮膚粘膜、骨骼肌肉、腎臟及中樞神經(jīng)系統(tǒng)性疾病，有時(shí)還會(huì)引發(fā)肺、心臟等多個(gè)其 他器官和系統(tǒng)功能紊亂，SLE好發(fā)于青年女性，發(fā)病高峰為15~40歲，男女發(fā)病比例為1 :9 左右，盡管研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)病有一定的家庭聚集傾向，但是其發(fā)病機(jī)制并非單一的遺傳因素。 目前系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病機(jī)制尚不明確。
[0003] 研究發(fā)現(xiàn)，在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的血清中，可檢測(cè)到多種自身抗體和免疫學(xué)異 常。目前對(duì)于系統(tǒng)性紅斑狼瘡的檢測(cè)也通常借助于一些輔助檢查，如常規(guī)檢查中的血常規(guī)、 尿常規(guī)等以及免疫系統(tǒng)的檢查和自身抗體的檢查可以做出診斷。目前參照的標(biāo)準(zhǔn)仍然是 1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的的系統(tǒng)性紅斑狼瘡分類標(biāo)準(zhǔn)。但是，該標(biāo)準(zhǔn)對(duì)早期、不典型病 例容易漏診，因此繼續(xù)發(fā)現(xiàn)一種新的診斷標(biāo)志物來作為這種疾病早期診斷和后期治療的指 導(dǎo)。
[0004] 蛋白質(zhì)糖基化修飾是一種最普遍和最多變的翻譯后修飾，是特異糖鏈在細(xì)胞內(nèi)質(zhì) 網(wǎng)中添加到蛋白質(zhì)上形成寡糖鏈的過程，具有酶定向和位點(diǎn)特異性。根據(jù)與蛋白質(zhì)部分連 接方式的不同，蛋白質(zhì)糖基化修飾分為N-糖基化和0-糖基化兩種形式。N-糖鏈一般分為 高甘露糖型、復(fù)雜型和雜合型三種。多年來，人們已對(duì)多種蛋白的糖基化修飾進(jìn)行了廣泛深 入的研究，并清楚地認(rèn)識(shí)到蛋白糖基化修飾在很多疾病的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色，例 如肝細(xì)胞癌中甲胎蛋白的高巖藻糖基化等。
[0005] 免疫球蛋白是可溶性血清糖蛋白，可為高等脊椎動(dòng)物提供針對(duì)已暴露抗原的長(zhǎng)期 保護(hù)。IgG是血清中含量最多的免疫球蛋白種類，占人血清免疫球蛋白的80%，是再次免疫 應(yīng)答后形成抗體的主要組分，在機(jī)體中發(fā)揮重要作用。糖基化在免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)和功能 中扮演著重要角色。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提出血清抗體中高甘露糖型N糖鏈水平可作為系統(tǒng)性紅斑狼 瘡（SLE)的診斷標(biāo)志，并具體提出用于特異性檢測(cè)該診斷標(biāo)志物的試劑在制備用于系統(tǒng)性 紅斑狼瘡的診斷和/或預(yù)后評(píng)估的診斷工具中的應(yīng)用；本發(fā)明所提出的系統(tǒng)性紅斑狼瘡的 診斷標(biāo)志的水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生密切相關(guān)，可用于系統(tǒng)性紅斑狼瘡的早期診斷和 /或預(yù)后評(píng)估，進(jìn)而用于指導(dǎo)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的治療。
[0007] 具體地，一方面，本發(fā)明提供了一種特異性檢測(cè)血清抗體中高甘露糖型N糖鏈水 平的試劑在制備用于系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷和/或預(yù)后評(píng)估的診斷工具中的應(yīng)用。
[0008] 上述應(yīng)用中，作為優(yōu)選，所述血清抗體為血清IgG型抗體。
[0009] 作為優(yōu)選，所述高甘露糖型N糖鏈為結(jié)構(gòu)式分別如I、II和III所示糖鏈的任意一 種或幾種的混合物；
[0010] 其中，結(jié)構(gòu)式I為：
[0011] Asn-GlcNAc-GlcNAc-Man-(Man-Man)Man-Man-Man ；
[0012] 結(jié)構(gòu)式II為：
[0013] Asn-GlcNAc-GlcNAc-Man- (Man) 2 (Man) 2G1cNAc (Man) 3 (Man) 2 ；
[0014] 結(jié)構(gòu)式III為：
[0015] Asn-GlcNAc (Fuc) -GlcNAc-Man- (Man) 4 (GlcNAc-Gal) (Man-GlcNAc-Gal)。
[0016] 上述結(jié)構(gòu)式中，Asn表示天冬氨酸，GlcNAc表示葡萄糖胺，Man表示甘露糖，Gal表 示半乳糖，F(xiàn)uc表示巖藻糖。
[0017] 作為優(yōu)選，通過免疫測(cè)定法檢測(cè)血清抗體中高甘露糖型N糖鏈的水平；優(yōu)選地， 所述免疫測(cè)定法為酶免疫測(cè)定法、免疫比濁測(cè)定法、乳膠免疫凝集法、電化學(xué)發(fā)光法或熒光 法；更優(yōu)選地，所述免疫測(cè)定法為酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法。
[0018] 作為優(yōu)選，所述特異性檢測(cè)血清抗體中高甘露糖型N糖鏈水平的試劑包括特異性 識(shí)別高甘露糖型N糖鏈的抗體或配體。
[0019] 更優(yōu)選地，所述抗體為單克隆抗體或抗原結(jié)合片段；最優(yōu)選地，所述抗體為鼠抗人 單克隆抗體。
[0020] 所述診斷工具為診斷試劑、試劑盒、蛋白芯片或免疫檢測(cè)試紙。
[0021] 作為優(yōu)選,通過質(zhì)譜法檢測(cè)血清抗體中高甘露糖型N糖鏈的相對(duì)豐度；這種糖鏈 的鑒定方法需要借助質(zhì)譜儀。
[0022] 上述應(yīng)用中，通過檢測(cè)待測(cè)個(gè)體的血清抗體中高甘露糖型N糖鏈的水平，將其與 相同檢測(cè)條件下的正常個(gè)體的血清抗體中高甘露糖型N糖鏈水平相比的增高，診斷為患有 系統(tǒng)性紅斑狼瘡。
[0023] 另一方面，本發(fā)明提供了一種系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷工具，該診斷工具包括特異 性檢測(cè)血清抗體中高甘露糖型N糖鏈水平的試劑；
[0024] 優(yōu)選地，所述診斷工具為診斷試劑、試劑盒、蛋白芯片或免疫檢測(cè)試紙；
[0025] 優(yōu)選地，所述特異性檢測(cè)血清抗體中高甘露糖型N糖鏈水平的試劑為特異性識(shí)別 高甘露糖型N糖鏈的抗體或配體。
[0026] 本發(fā)明發(fā)明人基于這樣一個(gè)發(fā)現(xiàn)，即血清抗體中高甘露糖型N糖鏈的高水平與系 統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生有關(guān),提出了血清抗體中高甘露糖型N糖鏈水平可作為系統(tǒng)性紅斑狼 瘡的診斷標(biāo)志，用于系統(tǒng)性紅斑狼瘡的早期診斷和/或預(yù)后評(píng)估，進(jìn)而用于指導(dǎo)系統(tǒng)性紅 斑狼瘡的治療。
【附圖說明】
[0027] 圖1是質(zhì)譜檢測(cè)正常個(gè)體和SLE病人血清抗體的N糖鏈；其中，A為正常個(gè)體血清 抗體N糖鏈的一級(jí)質(zhì)譜圖，B為SLE病人血清抗體的N糖鏈一級(jí)質(zhì)譜圖。
[0028] 圖2是圖1中m/z909. 5峰所對(duì)應(yīng)的糖鏈的二級(jí)質(zhì)譜分析圖。
[0029] 圖3是實(shí)施例1中所述三種高甘露糖型N糖鏈在10個(gè)SLE病人和10個(gè)正常對(duì)照 的相對(duì)豐度比較；**表示P〈〇. 001，***表示P〈〇. 005。
[0030] 圖4是質(zhì)譜檢測(cè)正常小鼠和SLE小鼠血清抗體的N糖鏈；其中，A為正常小鼠血清 抗體N糖鏈的一級(jí)質(zhì)譜圖，B為SLE小鼠血清抗體N糖鏈的一級(jí)質(zhì)譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0031] 下面通過具體實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案，這些實(shí)施例僅用于說明的 目的，而不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0032] 實(shí)施例1
[0033] 使用PNGase F酶試劑盒（IBL，德國(guó)），按照廠商提供的試劑盒說明書，提取血清抗 體N糖鏈，并對(duì)血清抗體N糖鏈進(jìn)行一級(jí)及多級(jí)質(zhì)譜分析，其過程如下：
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