本發(fā)明屬于面粉中過氧化苯甲酰的檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種可視化檢測面粉中過氧化苯甲酰的方法及檢測管。
背景技術(shù)：
面粉是人們?nèi)粘Ｉ攀辰Y(jié)構(gòu)中的主要原料之一。為了提高其表觀品質(zhì)，以往面粉生產(chǎn)企業(yè)廣泛使用過氧化苯甲酰作為面粉增白改良劑。雖然過氧化苯甲酰是一種在化工行業(yè)廣泛使用的氧化劑，但是在增白過程中不僅面粉中的胡蘿卜素、維生素e等營養(yǎng)成分遭到破壞，而且殘留的過氧化苯甲酰在面食加熱時會產(chǎn)生苯自由基、苯、苯酚、聯(lián)苯等，具有潛在的安全隱患。長期食用會造成苯慢性中毒，引發(fā)多種疾病。自2011年5月1日起，我國衛(wèi)生部已禁止在面粉生產(chǎn)中添加過氧化苯甲酰。從保障人體健康角度考慮，為面粉生產(chǎn)部門及消費者提供一種檢測過氧化苯甲酰含量的傳感器具有十分重要的意義。
在目前已經(jīng)公布檢測過氧化苯甲酰的相關(guān)專利中，一種基于熒光猝滅法檢測小麥粉中過氧化苯甲酰的方法（201510008418.1）需要使用熒光光譜儀獲得熒光強度；一種快速無損檢測面粉中過氧化苯甲酰含量的方法及應(yīng)用（201510477873.6）需要使用近紅外光譜儀，獲取樣品近紅外光譜曲線；藍色納米銀溶膠分光光度法測定過氧化苯甲酰（201410202426.5）需要使用分光光度計獲得體系光譜圖；一種小麥粉中過氧化苯甲酰的檢測方法（201410367346.5）需要使用高效液相色譜儀檢測，以保留時間定性，以外標(biāo)法定量。這些方法都需要專門的儀器、專門的人員和專業(yè)的操作技能來實現(xiàn)檢測，不利于廣泛的應(yīng)用和推廣。其中，色譜法需要先將過氧化苯甲酰還原成苯甲酸，再用大型昂貴的精密儀器檢測，雖然準(zhǔn)確度高，但不適于現(xiàn)場檢測，難以得到廣泛推廣。而已有的分光光度法操作步驟繁雜、干擾因素多、顯色變化單一、分辨率低且需要專業(yè)人員進行分析，無法實現(xiàn)對食品樣品中過氧化苯甲酰的現(xiàn)場可視化檢測。
已有的檢測過氧化苯甲酰的裝置（201410076153.4）采用的是氧化碘化鉀生成碘單質(zhì)再與淀粉作用，生成有色物質(zhì)，再通過電腦讀取色度值換算成過氧化苯甲酰濃度。整體操作還是比較復(fù)雜；還有快速檢測試劑盒（201110436046.4）采用的是制備熒光探針再與過氧化苯甲酰反應(yīng)生成熒光物質(zhì)，最終還是需要儀器來實現(xiàn)檢測；試紙方法（201110162397.0）采用的是氧化碘生成的碘淀粉反應(yīng)，雖然實現(xiàn)了便攜式，操作簡便，但僅僅依靠碘淀粉顯色的深淺，在顏色區(qū)分度上還有欠缺。因此，研制用于面粉樣品中過氧化苯甲酰的可視化、便攜式、高分辨率的檢測方法具有重要的現(xiàn)實意義。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)不足，提供一種可視化檢測面粉中過氧化苯甲酰的方法及檢測管。本發(fā)明不需要昂貴的儀器設(shè)備，無需專業(yè)人員操作即可通過凝膠管顏色的變化判斷過氧化苯甲酰的濃度，可以實現(xiàn)對面粉中過氧苯甲酰的現(xiàn)場可視檢測。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
一種可視化檢測面粉中過氧化苯甲酰的方法，先合成au@ag核-殼結(jié)構(gòu)納米棒，并以瓊脂糖凝膠作為載體，在過氧化苯甲酰的存在下，發(fā)生顯色反應(yīng)，殼層的銀單質(zhì)被刻蝕，使得au納米棒的縱向局域表面等離子吸收峰（lspr）發(fā)生變化，從而產(chǎn)生不同的顏色變化；再利用au納米棒的縱向lspr變化與過氧化苯甲酰的濃度呈正相關(guān)的關(guān)系，通過顏色的變化來指示過氧化苯甲酰濃度的變化，實現(xiàn)面粉中過氧化苯甲酰的可視化檢測。
所述au@ag核-殼結(jié)構(gòu)納米棒的制備方法，具體包括以下步驟：
（1）au納米棒溶液的合成；
（2）au@ag核-殼結(jié)構(gòu)納米棒的合成：
（a）取步驟（1）合成的au納米棒溶液，離心20min（轉(zhuǎn)速為12000rpm）后去除上清液，再加入去離子水，置于32℃水浴中超聲混勻；
（b）取步驟（a）得到的au納米棒溶液超聲10s后，分別加入二乙醇胺-乙酸緩沖液（dea-ac）、agno3溶液和抗壞血酸溶液（aa），將溶液混勻10s后，放置32℃水浴中30min后，離心20min（轉(zhuǎn)速為12000rpm），除去上清液后，再加去離子水，得au@ag核-殼結(jié)構(gòu)納米棒溶液；所述au納米棒溶液、二乙醇胺-乙酸緩沖液和抗壞血酸溶液的體積比為10:5:3:30；所述的二乙醇胺-乙酸緩沖液的配制方法為：取4.8ml二乙醇胺到100ml燒杯中，加入40ml水，混合均勻，然后用乙酸溶液調(diào)節(jié)使溶液的ph等于10.3，然后定容至50ml，混勻備用。
步驟（1）所述au納米棒溶液的合成具體包括以下步驟：
如上所述的可視化檢測面粉中過氧化苯甲酰的凝膠檢測管的制備方法：先配置瓊脂糖凝膠溶液，然后將au@ag核-殼結(jié)構(gòu)納米棒溶液加入到瓊脂糖凝膠溶液中，混勻，最后再取混合液移液到檢測管的管蓋中，在室溫下冷卻成型后，封裝儲存；所述au@ag核-殼結(jié)構(gòu)納米棒溶液與瓊脂糖凝膠溶液的體積比為12:1。
所述凝膠檢測管用于面粉中過氧化苯甲酰的可視化檢測，其使用方法步驟如下：
（c）標(biāo)準(zhǔn)比色卡的制備：將不同濃度過氧化苯甲酰的乙醇溶液加入到凝膠檢測管中，放置于室溫或是4℃下儲存，25分鐘后拍照，得出凝膠顏色隨過氧化苯甲酰濃度的變化的比色卡；
（d）實際樣的檢測：稱取1g面粉，加入5ml乙醇溶液，振蕩3分鐘后離心并過濾，將1ml面粉提取液加入到凝膠檢測管中，反應(yīng)25分鐘后與標(biāo)準(zhǔn)比色卡顏色進行比較，判斷面粉中過氧化苯甲酰的濃度。
本發(fā)明的有益效果在于：采用au@ag核-殼結(jié)構(gòu)納米棒作為顯色體，體系顏色變化更豐富，顏色變化的分辨率更高。該方法不需要昂貴的儀器設(shè)備，無需專業(yè)人員操作即可通過凝膠管顏色的變化判斷過氧化苯甲酰的濃度，可以實現(xiàn)對面粉中過氧苯甲酰的現(xiàn)場可視檢測。
具體實施方式
以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明，但本發(fā)明不僅僅限于這些實施例。
實施例1
1.au納米棒溶液的合成：
2.au@ag核-殼結(jié)構(gòu)納米棒的合成：
（a）取4ml合成的au納米棒溶液，在12000rpm下離心20min后去除3ml上清液，再加入3ml去離子水，置于32℃水浴中超聲混勻；
（b）取1ml步驟（a）得到的au納米棒超聲10s后，分別加入500μldea-ac、300μlagno3、3mlaa溶液，將溶液混勻10s后，放置32℃水浴中30min后，在12000rpm下離心20min，除去上清液后，再加去離子水至總體積為3ml，即可得到au@ag核-殼結(jié)構(gòu)納米棒溶液，置于冰箱中（4℃）封口保存。
3.au@ag核-殼結(jié)構(gòu)納米棒分光光度法檢測過氧化苯甲酰乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液：
取au@ag核-殼結(jié)構(gòu)納米棒溶液，用水稀釋后，加入ctab溶液，再加入100μl不同濃度的過氧化苯甲酰乙醇溶液（0μmol/l、5μmol/l、10μmol/l、20μmol/l、40μmol/l、60μmol/l、80μmol/l、100μmol/l、200μmol/l），混勻。過氧化苯甲酰的濃度與溶液顏色的變化對應(yīng)關(guān)系如表一所示；溶液在560nm處的吸收峰逐漸紅移至640nm。
表一
實施例2
1.基于au@ag核-殼結(jié)構(gòu)納米棒溶液的分光光度法檢測普通面粉中的過氧化苯甲酰：
取au@ag核-殼結(jié)構(gòu)納米棒溶液，用水稀釋后，加入ctab溶液，再加入100μl含有不同濃度的過氧化苯甲酰普通面粉的提取液（0mg/kg、20mg/kg、40mg/kg、60mg/kg、80mg/kg、100mg/kg），混勻。過氧化苯甲酰的濃度與溶液顏色的變化對應(yīng)關(guān)系如表二所示；其溶液在560nm處的吸收峰逐漸紅移至610nm。
表二
2.凝膠檢測管的制備：
凝膠檢測管制備：300μl的au@ag核-殼結(jié)構(gòu)納米棒溶液加入到瓊脂糖凝膠溶液中，凝膠水浴控制溫度在40℃?；靹蚝螅?00μl混合液到檢測管的蓋子里。放置5min后凝膠凝固，蓋上蓋子，在常溫下儲存。凝膠顯紫紅色。
實施例3
1.凝膠檢測管檢測過氧化苯甲酰的標(biāo)準(zhǔn)比色卡的制作：
取不同濃度的1ml過氧化苯甲酰的乙醇溶液（0μmol/l、20μmol/l、40μmol/l、60μmol/l、80μmol/l、100μmol/l、200μmol/l）分別加入到凝膠檢測管中，蓋上蓋子，倒置后再放置于室溫下，反應(yīng)25min后，正置凝膠檢測管，并打開蓋子拍照，得出過氧化苯甲酰的濃度與凝膠顏色的變化對應(yīng)關(guān)系。制作凝膠測試管檢測過氧化苯甲酰的標(biāo)準(zhǔn)比色卡。
2.凝膠檢測管檢測高筋面粉中過氧化苯甲酰：
采用加標(biāo)法檢測高筋面粉中過氧化苯甲酰。稱取1g高筋面粉，加入不同質(zhì)量的過氧化苯甲酰，使面粉里的過氧化苯甲酰質(zhì)量濃度分別為0mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg、60mg/kg、80mg/kg、100mg/kg，再加入5ml乙醇，振蕩后離心并過濾，取1ml提取液加入到凝膠檢測管，倒置凝膠檢測管，反應(yīng)25min后，正置凝膠檢測管，打開檢測管，觀察到凝膠顏色產(chǎn)生變化。過氧化苯甲酰的濃度與凝膠顏色的變化對應(yīng)關(guān)系如表三所示。
表三
3.凝膠檢測管檢測普通面粉中過氧化苯甲酰：
采用加標(biāo)法檢測普通面粉中過氧化苯甲酰。稱取1g普通面粉，加入不同質(zhì)量的過氧化苯甲酰使面粉里的過氧化苯甲酰質(zhì)量濃度分別為0mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg、60mg/kg、80mg/kg、100mg/kg，再加入5ml乙醇，振蕩后離心并過濾，取1ml提取液加入到凝膠檢測管，倒置凝膠檢測管，反應(yīng)25min后，正置凝膠檢測管，打開檢測管，觀察到凝膠顏色產(chǎn)生變化。過氧化苯甲酰的濃度與凝膠顏色的變化對應(yīng)關(guān)系如表四所示。
表四
4.凝膠檢測管檢測蕎麥粉中過氧化苯甲酰：
采用加標(biāo)法檢測蕎麥粉中過氧化苯甲酰。稱取1g蕎麥粉，加入不同質(zhì)量的過氧化苯甲酰，使面粉里的過氧化苯甲酰質(zhì)量濃度分別為0mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg、60mg/kg、80mg/kg、100mg/kg，再加入5ml乙醇，振蕩后離心并過濾，取1ml提取液加入到凝膠檢測管，倒置凝膠檢測管，反應(yīng)25min后正置凝膠檢測管，打開檢測管，觀察到凝膠顏色產(chǎn)生變化。過氧化苯甲酰的濃度與凝膠顏色的變化對應(yīng)關(guān)系如表五所示。
表五
5.凝膠檢測管檢測糯米粉中過氧化苯甲酰：
采用加標(biāo)法檢測糯米粉中過氧化苯甲酰。稱取1g糯米粉，加入不同質(zhì)量的過氧化苯甲酰，使面粉里的過氧化苯甲酰質(zhì)量濃度分別為0mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg、60mg/kg、80mg/kg、100mg/kg，再加入5ml乙醇，振蕩后離心并過濾，取1ml提取液加入到凝膠檢測管，倒置凝膠檢測管，反應(yīng)25min后正置凝膠檢測管，打開檢測管，觀察到凝膠顏色產(chǎn)生變化。過氧化苯甲酰的濃度與凝膠顏色的變化對應(yīng)關(guān)系如表六所示。
表六
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。