本申請(qǐng)要求享有2014年11月14日提交的、屬于本申請(qǐng)人的、序列號(hào)為62/079783的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)，該臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)?jiān)诖送ㄟ^(guò)引用全文并入。

本發(fā)明的領(lǐng)域是用于食物不耐受(foodintolerance)的敏感度測(cè)試(sensitivitytest)，且尤其涉及測(cè)試且可能地排除所選擇的作為用于被診斷為或疑似罹患腸易激綜合征的患者的誘發(fā)食物(triggerfood)的食物項(xiàng)目(fooditem)。

背景技術(shù)：

本背景描述包括可以用于理解本發(fā)明的信息。本背景并不是承認(rèn)本文提供的任何信息是現(xiàn)有技術(shù)或與目前要求保護(hù)的本發(fā)明相關(guān)，或不承認(rèn)具體或隱含引用的出版物是現(xiàn)有技術(shù)。

食物敏感度，尤其當(dāng)其與腸易激綜合征(ibs)有關(guān)時(shí)，通常表現(xiàn)出慢性腹痛、不舒服、胃氣脹和/或排便習(xí)慣變化且在醫(yī)學(xué)界還未得到充分了解。更通常地，ibs通過(guò)排除可能具有類(lèi)似癥狀或重疊癥狀的其他病理?xiàng)l件(如細(xì)菌或原生動(dòng)物感染、乳糖不耐受癥等)來(lái)進(jìn)行診斷。然而，就誘發(fā)癥狀的食譜項(xiàng)目而言，ibs是非常多樣的，且還未獲知幫助識(shí)別具有合理的確定程度的誘發(fā)食物項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試，使這樣的患者通常要進(jìn)行反復(fù)試驗(yàn)。

雖然有一些市售的測(cè)試和實(shí)驗(yàn)室來(lái)幫助識(shí)別誘發(fā)食物，但是這些實(shí)驗(yàn)室的測(cè)試結(jié)果的質(zhì)量通常較差，如消費(fèi)者權(quán)益保護(hù)組織(如http://www.which.co.uk/news/2008/08/food-allergy-tests-could-risk-your-health-154711/)所報(bào)道的。更顯著地，與這些測(cè)試和實(shí)驗(yàn)室相關(guān)的問(wèn)題是高的假陽(yáng)性率、高的假陰性率、高的患者內(nèi)變化性以及實(shí)驗(yàn)之間的變化性，使得這樣的測(cè)試幾乎是無(wú)用的。類(lèi)似地，另外不確定的且高度變化的測(cè)試結(jié)果也在其他地方有所報(bào)道(alternativemedicinereview，第9卷，第2期，2004:第198-207頁(yè))，且作者推斷這可能是因?yàn)槭澄锓磻?yīng)和食物敏感度經(jīng)由許多不同的機(jī)理發(fā)生。例如，并不是所有的ibs患者顯示出對(duì)食物a的陽(yáng)性響應(yīng)，且并不是所有的ibs患者顯示出對(duì)食物b的陰性響應(yīng)。因而即使ibs患者顯示出對(duì)食物a的陽(yáng)性響應(yīng)，從患者的食譜中剔除食物a也可能不會(huì)減輕患者的ibs癥狀。換句話(huà)說(shuō)，還未充分確定目前可用的測(cè)試中所采用的食物樣本是否基于使對(duì)那些食物樣本的敏感度與ibs相關(guān)的高的可能性被合適地選擇。

許多人努力來(lái)選擇食物項(xiàng)目或變應(yīng)原以包括在用于免疫測(cè)定測(cè)試的測(cè)試板(testpanel)中。例如，cousins的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第2007/0122840號(hào)公開(kāi)了選擇了29種被包括在用于elisa測(cè)定的測(cè)試板中的食物變應(yīng)原。這29種食物變應(yīng)原是基于在具有更大組的食物變應(yīng)原的初步試驗(yàn)中igg陽(yáng)性的頻率來(lái)選擇。然而，cousins未能教導(dǎo)選定抗原的任何量化和/或統(tǒng)計(jì)分析且因此未能提供任何選擇的基本原理。當(dāng)然，cousin選擇了29種用于測(cè)試板的食物變應(yīng)原的方法已經(jīng)受到了批評(píng)，因?yàn)槠溥x擇是相當(dāng)隨意的。例如，croft在題目為“iggfoodantibodiesandirritatingthebowel”(gastroenterology出版，第128卷，第4期，第1135–1136頁(yè))的文章中批評(píng)到cousin的方法還不清楚被測(cè)量的食物抗體的數(shù)量和范圍是否類(lèi)似于或完全不同于非ibs患者或非食物不耐受患者，因?yàn)槠淙狈?duì)照(正常的或非ibs對(duì)照受治療者)。因而，至少是不清楚cousin在關(guān)于假陽(yáng)性率和假陰性率結(jié)果方面是否獲得了任何改進(jìn)。

關(guān)于另一個(gè)例子，stierstorfer的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第2011/0306898號(hào)公開(kāi)了選擇41種食物物質(zhì)作為對(duì)皮膚貼劑的測(cè)試材料。這41種食物物質(zhì)基于食物物質(zhì)中包含的化合物(如香草醛、肉桂醛、山梨酸等)被選擇。對(duì)ibs患者或ibs疑似患者針對(duì)變應(yīng)性接觸性生皮炎來(lái)測(cè)試食物物質(zhì)。然而，stierstorfer也未能公開(kāi)假陽(yáng)性或假陰性食物變應(yīng)原如何被排除和食物變應(yīng)原是否基于igg陽(yáng)性結(jié)果中的性別分層被選擇。

本文中的所有出版物通過(guò)引用被并入到以下程度：好像每一個(gè)單獨(dú)的出版物或?qū)＠暾?qǐng)被具體地且單獨(dú)地表示為通過(guò)引用被并入。如果并入的參考文獻(xiàn)中的術(shù)語(yǔ)的定義或應(yīng)用與本文提供的該術(shù)語(yǔ)的定義不一致或相反，那么以本文提供的該術(shù)語(yǔ)的定義適用為準(zhǔn)，而參考文獻(xiàn)中的該術(shù)語(yǔ)的定義并不適用。

因而，即使本領(lǐng)域已知用于食物敏感度的各種測(cè)試，所有或幾乎所有這些測(cè)試存在一種或多種不足。因此，仍存在對(duì)用于食物敏感度測(cè)試的改進(jìn)的組合物、設(shè)備以及方法的需求，尤其是確認(rèn)且可能地排除確認(rèn)為或疑似罹患ibs的患者的誘發(fā)食物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的主題是提出了一種用于測(cè)試被診斷為或疑似罹患腸易激綜合征的患者的食物不耐受的系統(tǒng)和方法。本發(fā)明的一個(gè)方面是一種用于測(cè)試被診斷為或疑似罹患腸易激綜合征的患者的食物不耐受的測(cè)試試劑盒。該測(cè)試試劑盒包括耦合到可單獨(dú)尋址的各固相載體(solidcarrier)的多個(gè)不同的食物制備物。多個(gè)不同的食物制備物具有由原始p值確定的平均判別p值≤0.07，或由fdr多重校正的p值確定的平均判別p值≤0.10。

本發(fā)明的另一個(gè)方面包括一種用于測(cè)試被診斷為或疑似罹患腸易激綜合征的患者的食物不耐受的方法。該方法包括使食物制備物與被診斷為或疑似罹患腸易激綜合征的患者的體液接觸的步驟。體液與性別確認(rèn)相關(guān)聯(lián)。特別優(yōu)選地，接觸步驟在允許來(lái)自體液的igg結(jié)合到食物制備物的至少一種組分的條件下進(jìn)行。該方法繼續(xù)測(cè)量結(jié)合到食物制備物的至少一種組分的igg的步驟以獲得信號(hào)，且隨后比較信號(hào)與使用性別確認(rèn)得到的食物制備物的性別分層的參考值以獲得結(jié)果。接著，該方法還包括利用該結(jié)果更新或生成報(bào)告的步驟。

本發(fā)明的另一個(gè)方面包括一種生成被診斷為或疑似罹患腸易激綜合征的患者的食物不耐受的測(cè)試的方法。該方法包括獲得多個(gè)不同的食物制備物的測(cè)試結(jié)果的步驟。測(cè)試結(jié)果是基于被診斷為或疑似罹患腸易激綜合征的患者的體液和未被診斷為或不是疑似罹患腸易激綜合征的對(duì)照組的體液。該方法還包括針對(duì)每一個(gè)不同的食物制備物，根據(jù)性別對(duì)測(cè)試結(jié)果分層的方法的步驟。隨后，該方法繼續(xù)以下步驟：針對(duì)每一個(gè)不同的食物制備物，將用于男性患者和女性患者的不同的分界值(cutoffvalue)分配給預(yù)定的百分位數(shù)排名。

本發(fā)明其它方面包括耦合到可單獨(dú)尋址的各固相載體的多個(gè)不同的食物制備物在診斷腸易激綜合征中的用途。多個(gè)不同的食物制備物基于它們的由原始p值確定的平均判別p值≤0.07，或由fdr多重校正的p值確定的平均判別p值≤0.10來(lái)選擇。

本發(fā)明主題的各種目的、特征、方面和優(yōu)點(diǎn)將從以下對(duì)優(yōu)選實(shí)施方案以及附圖的詳細(xì)描述中變得更加明顯，其中相同的附圖標(biāo)記表示相同的部件。

附圖說(shuō)明

表1顯示了食物項(xiàng)目的列表，食物制備物可以由這些食物項(xiàng)目制備。

表2顯示了根據(jù)雙尾fdr多重校正的p值排名的食物的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

表3顯示了根據(jù)食物和性別的elisa得分的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

表4顯示了用于預(yù)定的百分位數(shù)排名的食物的分界值。

圖1a圖示了用白小麥測(cè)試的男性ibs患者和對(duì)照的elisa信號(hào)得分。

圖1b圖示了用白小麥測(cè)試的超過(guò)第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)的男性ibs受治療者的百分?jǐn)?shù)分布。

圖1c圖示了用白小麥測(cè)試的女性的信號(hào)分布以及由女性對(duì)照群體確定的第95百分位數(shù)分界。

圖1d圖示了用白小麥測(cè)試的超過(guò)第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)的女性ibs受治療者的百分?jǐn)?shù)分布。

圖2a圖示了用可可測(cè)試的男性ibs患者和對(duì)照的elisa信號(hào)得分。

圖2b圖示了用可可測(cè)試的超過(guò)第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)的男性ibs受治療者的百分?jǐn)?shù)分布。

圖2c圖示了用可可測(cè)試的女性的信號(hào)分布以及由女性對(duì)照群體確定的第95百分位數(shù)分界。

圖2d圖示了用可可測(cè)試的超過(guò)第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)的女性ibs受治療者的百分?jǐn)?shù)分布。

圖3a圖示了用黑麥測(cè)試的男性ibs患者和對(duì)照的elisa信號(hào)得分。

圖3b圖示了用黑麥測(cè)試的超過(guò)第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)的男性ibs受治療者的百分?jǐn)?shù)分布。

圖3c圖示了用黑麥測(cè)試的女性的信號(hào)分布以及由女性對(duì)照群體確定的第95百分位數(shù)分界。

圖3d圖示了用黑麥測(cè)試的超過(guò)第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)的女性ibs受治療者的百分?jǐn)?shù)分布。

圖4a圖示了用黑茶測(cè)試的男性ibs患者和對(duì)照的elisa信號(hào)得分。

圖4b圖示了用黑茶測(cè)試的超過(guò)第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)的男性ibs受治療者的百分?jǐn)?shù)分布。

圖4c圖示了用黑茶測(cè)試的女性的信號(hào)分布以及由女性對(duì)照群體確定的第95百分位數(shù)分界。

圖4d圖示了用黑茶測(cè)試的超過(guò)第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)的女性ibs受治療者的百分?jǐn)?shù)分布。

圖5a-5b圖示了ibs受治療者的根據(jù)第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)被確認(rèn)為誘發(fā)食物的食物的數(shù)量的分布。

表5顯示了ibs患者和對(duì)照的具有基于第90百分位數(shù)的陽(yáng)性結(jié)果的數(shù)量的原始數(shù)據(jù)。

表6顯示出匯總了表5所示的ibs患者群體的原始數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

表7顯示出匯總了表5所示的對(duì)照群體的原始數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

表8顯示出匯總了表5所示的ibs患者群體的原始數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)對(duì)數(shù)變換所變換的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

表9顯示出匯總了表5所示的對(duì)照群體的原始數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)對(duì)數(shù)變換所變換的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

表10顯示出比較了ibs樣本與非ibs樣本之間的陽(yáng)性食物的幾何平均數(shù)的獨(dú)立t檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

表11顯示出比較了ibs樣本與非ibs樣本之間的陽(yáng)性食物的幾何平均數(shù)的mann-whitney檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

圖6a圖示了表5所示數(shù)據(jù)的箱形圖和須形圖。

圖6b圖示了表5所示數(shù)據(jù)的缺口箱形(notchedbox)圖和須形圖。

圖7圖示了對(duì)應(yīng)于表12中所示的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)的roc曲線(xiàn)。

表12顯示了表5-11中所示的數(shù)據(jù)的接受者工作特征(roc)曲線(xiàn)分析的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

表13顯示出從陽(yáng)性食物的數(shù)量預(yù)測(cè)女性患者中的ibs狀態(tài)的性能指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

表14顯示出從陽(yáng)性食物的數(shù)量預(yù)測(cè)男性患者中的ibs狀態(tài)的性能指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

具體實(shí)施方式

發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)食物測(cè)試中采用的用于確認(rèn)被診斷為或疑似罹患ibs的患者的誘發(fā)食物的食物制備物并不具有同樣良好的預(yù)測(cè)性和/或不與ibs/ibs癥狀相關(guān)聯(lián)。的確，多種實(shí)驗(yàn)已經(jīng)揭示出在非常廣泛的食物項(xiàng)目中，某些食物項(xiàng)目是高度預(yù)測(cè)性的/與ibs高度相關(guān)聯(lián)，而另一些食物項(xiàng)目與ibs的統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)并不顯著。

甚至更意想不到的是，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)除了食物項(xiàng)目的高度變化外，測(cè)試中對(duì)于響應(yīng)的性別差異性在測(cè)定食物項(xiàng)目與ibs的關(guān)聯(lián)性方面也發(fā)揮著重要作用。因此，基于發(fā)明人的發(fā)現(xiàn)和另外的設(shè)想，現(xiàn)在提供了在選擇因ibs癥候和癥狀的減輕而能夠被排除的食物項(xiàng)目方面具有明顯更高的預(yù)測(cè)能力的測(cè)試試劑盒和方法。

以下討論提供了本發(fā)明主題的多個(gè)示例性實(shí)施方案。盡管每個(gè)實(shí)施方案都表示本發(fā)明要素的單一組合，但本發(fā)明主題被認(rèn)為包括所公開(kāi)要素的所有可能的組合。因此，如果一個(gè)實(shí)施方案包括要素a、b和c，并且第二實(shí)施方案包括要素b和d，則即使未明確地公開(kāi)，本發(fā)明的主題也被認(rèn)為包括a、b、c或d的其他剩余組合。

在一些實(shí)施方案中，用于描述并要求保護(hù)本發(fā)明的某些實(shí)施方案的表達(dá)量或范圍的數(shù)字被理解為在某些情形中由術(shù)語(yǔ)“約”修飾。因此，在一些實(shí)施方案中，書(shū)面描述和所附權(quán)利要求中描述的數(shù)值參數(shù)是近似值，可以根據(jù)特定實(shí)施方案尋求獲得的期望性質(zhì)變化。在一些實(shí)施方案中，數(shù)值參數(shù)應(yīng)該根據(jù)所報(bào)告的有效數(shù)字的位數(shù)且通過(guò)應(yīng)用常規(guī)的舍入技術(shù)來(lái)解釋。盡管這樣，描述本發(fā)明某些實(shí)施方案的寬范圍的數(shù)值范圍和參數(shù)是近似值，而具體實(shí)施例中描述的數(shù)值被盡可行地精確報(bào)告。本發(fā)明的一些實(shí)施方案中提出的數(shù)值可以包含從它們各自的測(cè)試測(cè)量中存在的標(biāo)準(zhǔn)偏差所無(wú)法避免的某些誤差。除非上下文做出相反表示，本文描述的所有范圍應(yīng)該被解釋為包括它們的端點(diǎn)且開(kāi)放式范圍應(yīng)該被解釋為僅包括商業(yè)上可實(shí)施的值。類(lèi)似地，所有列出的值應(yīng)該被認(rèn)為包括中間值，除非上下文做出相反表示。

如在本文的說(shuō)明書(shū)和貫穿下面的權(quán)利要求中所使用的，除非上下文另有明確規(guī)定，否則“一個(gè)(a)”、“一個(gè)(an)”和“該(the)”的含義包括復(fù)數(shù)指代。此外，如本文的說(shuō)明書(shū)中所使用的那樣，除非上下文另有明確規(guī)定，否則“在…內(nèi)(in)”的含義包括“在…內(nèi)(in)”和“在…上(on)”。

本文描述的所有方法可以以任何合適的順序被執(zhí)行，除非本文另外表示或另外與上下文明顯矛盾的。關(guān)于本文中某些實(shí)施方案提供的任何和所有示例或示例性語(yǔ)言(例如“諸如”)的使用僅旨在更好地說(shuō)明本發(fā)明，并且不對(duì)所要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍構(gòu)成限制。說(shuō)明書(shū)中的任何語(yǔ)言不應(yīng)被解釋為表示對(duì)本發(fā)明的實(shí)踐必不可少的、任何非要求保護(hù)的要素。

本文公開(kāi)的本發(fā)明的可選要素或?qū)嵤┓桨傅姆纸M不應(yīng)被解釋為限制性的。每個(gè)組成員可以單獨(dú)地或與組中的其他成員或本文中找到的其它要素的任何組合被引用和要求保護(hù)。出于簡(jiǎn)潔和/或可專(zhuān)利性的原因，組中的一個(gè)或多個(gè)成員可被包括在組中或從組中刪除。當(dāng)發(fā)生任何此類(lèi)包括或刪除時(shí)，本說(shuō)明書(shū)被視為包括經(jīng)修改的組，從而滿(mǎn)足所附權(quán)利要求中使用的所有馬庫(kù)什組合的書(shū)面描述。

在一個(gè)特別優(yōu)選的方面中，發(fā)明人因此設(shè)想了適用于測(cè)試患者的食物不耐受的測(cè)試試劑盒或測(cè)試板，其中患者被診斷為或疑似罹患腸易激綜合征。更優(yōu)選地，這樣的測(cè)試試劑盒或板將包括多個(gè)不同的食物制備物(如，原始的或處理過(guò)的提取物，優(yōu)選具有任選的共溶劑的含水提取物，其可以被或可以不被過(guò)濾)，這些食物制備物被偶聯(lián)至可單獨(dú)尋址的各固相載體(如，呈陣列或微孔板的形式)，其中不同的食物制備物具有由原始p值確定的平均判別p值≤0.07，或由fdr多重校正的p值確定的平均判別p值≤0.10。正如本文中使用的，處理過(guò)的提取物包括由經(jīng)過(guò)機(jī)械或化學(xué)改性的(如切碎的、加熱的、沸騰的、發(fā)酵的、煙熏的等)的食物項(xiàng)目制成的食物提取物。

在一些實(shí)施方案中，用于描述并要求保護(hù)本發(fā)明的某些實(shí)施方案的表達(dá)成分的量、性質(zhì)諸如濃度、反應(yīng)條件等的數(shù)字被理解為在某些情形中由術(shù)語(yǔ)“約”修飾。因此，在一些實(shí)施方案中，書(shū)面描述和所附權(quán)利要求中描述的數(shù)值參數(shù)是近似值，可以根據(jù)特定實(shí)施方案尋求獲得的期望性質(zhì)變化。在一些實(shí)施方案中，數(shù)值參數(shù)應(yīng)該根據(jù)所報(bào)告的有效數(shù)字的位數(shù)且通過(guò)應(yīng)用常規(guī)的舍入技術(shù)來(lái)解釋。盡管這樣，描述本發(fā)明某些實(shí)施方案的寬范圍的數(shù)值范圍和參數(shù)是近似值，而具體實(shí)施例中描述的數(shù)值被盡可行地精確報(bào)告。本發(fā)明的一些實(shí)施方案中提出的數(shù)值可以包含某些誤差，從它們各自的測(cè)試測(cè)量中存在的標(biāo)準(zhǔn)偏差所無(wú)法避免的。類(lèi)似地，除非上下文做出相反表示，本文描述的所有范圍應(yīng)該被解釋為包括它們的端點(diǎn)且開(kāi)放式范圍應(yīng)該被解釋為僅包括商業(yè)上可實(shí)施的值。類(lèi)似地，所有列出的值應(yīng)該被認(rèn)為包括中間值，除非上下文做出相反表示。

雖然并不限制本發(fā)明的主題，但是食物制備物將通常由通常已知或疑似為誘發(fā)ibs的癥候或癥狀的食物得到。特別合適的食物制備物可以通過(guò)下面概括的實(shí)驗(yàn)過(guò)程來(lái)確認(rèn)。因而，應(yīng)理解，食物項(xiàng)目不需要被限制到本文描述的項(xiàng)目，而是所有項(xiàng)目可以被設(shè)想，且它們可以通過(guò)本文提供的方法被確認(rèn)。因此，示例性的食物制備物包括由可可、茶(如綠茶、黑茶等)、麥片、卷心菜、牛奶、洋蔥(如黃洋蔥、白洋蔥、maui洋蔥等)、蜂蜜、黑麥、玉米、酵母、小麥(如紅小麥、白小麥等)、大豆、雞蛋、金槍魚(yú)、檸檬、菠蘿、黃瓜、柑橘、大比目魚(yú)、胡桃、葡萄柚、蔗糖、雞肉、藍(lán)莓或蝦(如美國(guó)海灣白蝦、泰國(guó)蝦、虎蝦等)制備的至少兩個(gè)、至少四個(gè)、至少八個(gè)或至少十二個(gè)食物制備物。另外設(shè)想的食物制備物由蟹(如珍寶蟹、藍(lán)蟹、阿拉斯加帝王蟹等)、大麥、草莓、豬肉、稻米(如棕色、白色等)、牛肉、腰果、鱈魚(yú)、馬鈴薯、白芝麻、花椰菜、杏仁、火雞、扇貝和/或鮭魚(yú)制備。仍另外特別設(shè)想的食物項(xiàng)目和食物添加劑列在表1中，食物制備物可以由這些食物項(xiàng)目和食物添加劑制備。

使用來(lái)自被診斷為或疑似罹患腸易激綜合征的患者的體液和來(lái)自健康的對(duì)照組個(gè)體(即未被診斷為或不是疑似罹患腸易激綜合征的那些人)的體液，可以確認(rèn)許多額外的食物項(xiàng)目。優(yōu)選地，這樣確認(rèn)的食物項(xiàng)目將具有高的判別能力且因此具有由原始p值確定的p值≤0.15，更優(yōu)選≤0.10以及最優(yōu)選≤0.05，和/或由錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率(fdr)多重校正的p值確定的p值≤0.10，更優(yōu)選≤0.08以及最優(yōu)選≤0.07。

因此，如果板具有多種食物制備物，設(shè)想多個(gè)不同的食物制備物具有由原始p值確定的平均判別p值≤0.05，或由fdr多重校正的p值確定的平均判別p值≤0.08，或甚至更優(yōu)選具有由原始p值確定的平均判別p值≤0.025，或由fdr多重校正的p值確定的平均判別p值≤0.07。在另外優(yōu)選的方面中，應(yīng)理解，fdr多重校正的p值可以根據(jù)年齡和性別中的至少一個(gè)來(lái)校正，且最優(yōu)選根據(jù)年齡和性別兩者來(lái)校正。另一方面，如果測(cè)試試劑盒或板被分層以與單個(gè)性別一起使用，還設(shè)想在測(cè)試試劑盒或板中，當(dāng)針對(duì)單個(gè)性別被校正時(shí)，多個(gè)不同的食物制備物中的至少50％(且更通常70％或全部)具有由原始p值確定的平均判別p值≤0.07，或由fdr多重校正的p值確定的平均判別p值≤0.10。此外，應(yīng)理解，其他分層(如飲食偏好、種族、居住地、遺傳傾向性或家族史等)也被設(shè)想，且phosita將被易于評(píng)價(jià)為合適的分層選擇。

本文中對(duì)值的范圍的敘述僅僅意在作為落在該范圍內(nèi)的每個(gè)單獨(dú)值的簡(jiǎn)略說(shuō)法。除非另有說(shuō)明，否則將在一定范圍內(nèi)每個(gè)單獨(dú)的值并入本說(shuō)明書(shū)中，如同在本文中單獨(dú)列舉一樣。本文所述的所有方法可以以任何合適的順序進(jìn)行，除非本文另有說(shuō)明或者與上下文明顯矛盾。關(guān)于本文中某些實(shí)施方案提供的任何和所有示例或示例性語(yǔ)言(例如“諸如”)的使用僅旨在更好地說(shuō)明本發(fā)明，并且不對(duì)所要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍構(gòu)成限制。說(shuō)明書(shū)中的任何語(yǔ)言不應(yīng)被解釋為表示對(duì)本發(fā)明的實(shí)踐必不可少的、任何非要求保護(hù)的要素。

當(dāng)然，應(yīng)注意，特定格式的測(cè)試試劑盒或板可以顯著變化且設(shè)想的格式包括微孔板、微流體設(shè)備、浸量尺、膜結(jié)合陣列等。因此，耦合食物制備物的固相載體可以包括多壁板的孔、微流體設(shè)備、(如顏色編碼的或磁性的)珠，或吸附膜(如硝化纖維素或微孔/納米孔聚合物膜)、化學(xué)傳感器或電傳感器(如印刷的銅傳感器或微芯片)。在一些實(shí)施方案中，還設(shè)想用于分子吸收和通過(guò)光檢測(cè)器(如表面等離子體共振等)的信號(hào)檢測(cè)的合適的固相載體可以被使用。

因此，發(fā)明人還設(shè)想一種測(cè)試被診斷為或疑似罹患腸易激綜合征的患者的食物不耐受的方法。更通常地，這樣的方法將包括使食物制備物與被診斷為或疑似罹患腸易激綜合征的患者的體液(如全血、血漿、血清、唾液或糞便懸液)接觸的步驟，且其中體液與性別確認(rèn)相關(guān)聯(lián)。如前所述，接觸步驟優(yōu)選地在允許來(lái)自體液的igg(或ige或iga或igm)結(jié)合到食物制備物的至少一種組分的條件下進(jìn)行，且結(jié)合到食物制備物的組分的igg隨后被量化/測(cè)量以獲得信號(hào)。最優(yōu)選地，該信號(hào)隨后與使用性別確認(rèn)得到的食物制備物的性別分層的參考值(如至少第90百分位數(shù)的值)比較以獲得結(jié)果，該結(jié)果隨后用于更新或生成報(bào)告。優(yōu)選地，報(bào)告可以作為單個(gè)測(cè)定結(jié)果的集合結(jié)果來(lái)生成。

更通常地，這樣的方法將不會(huì)被限制到單個(gè)食物制備物，而是將采用多個(gè)不同的食物制備物。如前所述，合適的食物制備物可以使用下面描述的各種方法被確認(rèn)，然而，尤其優(yōu)選的食物制備物包括可可、茶(如綠茶、黑茶等)、麥片、卷心菜、牛奶、洋蔥(如黃洋蔥、白洋蔥、maui洋蔥等)、蜂蜜、黑麥、玉米、酵母、小麥(如紅小麥、白小麥等)、大豆、雞蛋、金槍魚(yú)、檸檬、菠蘿、黃瓜、柑橘、大比目魚(yú)、胡桃、葡萄柚、蔗糖、雞肉、藍(lán)莓或蝦(如美國(guó)海灣白蝦、泰國(guó)蝦、虎蝦等)。另外設(shè)想的食物制備物由蟹(如珍寶蟹、藍(lán)蟹、阿拉斯加帝王蟹等)、大麥、草莓、豬肉、稻米(如棕色、白色等)、牛肉、腰果、鱈魚(yú)、馬鈴薯、白芝麻、花椰菜、杏仁、火雞、扇貝和/或鮭魚(yú)，和/或表1的項(xiàng)目制備。正如上面還注意到的，通常優(yōu)選至少一些或所有的不同的食物制備物具有由原始p值確定的平均判別p值≤0.07(或≤0.05，或≤0.025)，和/或由fdr多重校正的p值確定的平均判別p值≤0.10(或≤0.08，或≤0.07)。

雖然優(yōu)選食物制備物由作為粗提取物，或粗過(guò)濾的提取物的單個(gè)食物項(xiàng)目來(lái)制備，但是設(shè)想食物制備物可以由多個(gè)食物項(xiàng)目的混合物(如包括檸檬、柑橘和酸橙的柑橘屬的混合物、包括藍(lán)蟹、帝王蟹以及珍寶蟹的蟹類(lèi)的混合物、包括白小麥和紅小麥的小麥的混合物、包括美國(guó)海灣白蝦、泰國(guó)蝦以及虎蝦的蝦的混合物等)來(lái)制備。在一些實(shí)施方案中，還設(shè)想食物制備物可以由純化的食物抗原或重組體食物抗原來(lái)制備。

正如通常優(yōu)選地，食物制備物被固定到固體表面上(通常以可尋址的方式)，設(shè)想測(cè)量結(jié)合到食物制備物的組分的igg或其他類(lèi)型的抗體的步驟經(jīng)由免疫測(cè)定測(cè)試(如elisa測(cè)試、抗體捕捉酶免疫測(cè)定、其他類(lèi)型的抗體捕捉測(cè)定等)來(lái)進(jìn)行。

從不同的角度看，發(fā)明人還設(shè)想一種生成用于被診斷為或疑似罹患腸易激綜合征的患者的食物不耐受的測(cè)試的方法。由于測(cè)試被應(yīng)用于已經(jīng)被診斷為或疑似罹患腸易激綜合征的患者，因而作者并不設(shè)想該方法具有對(duì)ibs的初步診斷目的。相反，該方法用于確認(rèn)已經(jīng)被確診的或疑似的ibs患者中的誘發(fā)食物項(xiàng)目。這樣的測(cè)試通常將包括獲得不同食物制備物的一個(gè)或多個(gè)測(cè)試結(jié)果(如elisa、抗體捕捉酶免疫測(cè)定)的步驟，其中測(cè)試結(jié)果基于被診斷為或疑似罹患腸易激綜合征的患者的體液(如血液、唾液、糞便懸液)和未被診斷為或不是疑似罹患腸易激綜合征的對(duì)照組的體液。更優(yōu)選地，針對(duì)每一種不同的食物制備物，測(cè)試結(jié)果被根據(jù)性別分層，針對(duì)每一種不同的食物制備物，用于男性患者和女性患者的不同的分界值(如用于男性患者和女性患者的分界值具有至少10％(絕對(duì)值)的差)被分配給預(yù)定的百分位數(shù)排名(如第90百分位數(shù)或第95百分位數(shù))。

正如前面注意到的，且雖然不限于本發(fā)明的主題，但是設(shè)想不同的食物制備物包括由選自由可可、茶(如綠茶、黑茶等)、麥片、卷心菜、牛奶、洋蔥(黃洋蔥、白洋蔥、maui洋蔥等)、蜂蜜、黑麥、玉米、酵母、小麥(如紅小麥、白小麥等)、大豆、雞蛋、金槍魚(yú)、檸檬、菠蘿、黃瓜、柑橘、大比目魚(yú)、胡桃、葡萄柚、蔗糖、雞肉、藍(lán)莓或蝦(如美國(guó)海灣白蝦、泰國(guó)蝦、虎蝦等)組成的組的食物項(xiàng)目制備的至少兩個(gè)(或六個(gè)、或十個(gè)、或十五個(gè))食物制備物。另外設(shè)想的食物制備物由蟹(如珍寶蟹、藍(lán)蟹阿拉斯加帝王蟹等)、大麥、草莓、豬肉、稻米(如棕色、白色等)、牛肉、腰果、鱈魚(yú)、馬鈴薯、白芝麻、花椰菜、杏仁、火雞、扇貝和/或鮭魚(yú)，和/或表1中的項(xiàng)目制備。在另一方面，如果新的食物項(xiàng)目被測(cè)試，則應(yīng)理解，不同的食物制備物包括由不是可可、茶(如綠茶、黑茶等)、麥片、卷心菜、牛奶、洋蔥(如黃洋蔥、白洋蔥、maui洋蔥等)、蜂蜜、黑麥、玉米、酵母、小麥(如紅色、白色等)、大豆、雞蛋、金槍魚(yú)、檸檬、菠蘿、黃瓜、柑橘、大比目魚(yú)、胡桃、葡萄柚、蔗糖、雞肉、藍(lán)莓或蝦(如美國(guó)海灣白蝦、泰國(guó)蝦、虎蝦等)的食物項(xiàng)目制備的食物制備物。不考慮食物項(xiàng)目的具體選擇，然而通常優(yōu)選，不同的食物制備物具有由原始p值確定的平均判別p值≤0.07(或≤0.05，或≤0.025)，或由fdr多重校正的p值確定的平均判別p值≤0.10(或≤0.08，或≤0.07)。示例性的方面和方案以及考慮被提供給在下面的實(shí)驗(yàn)描述中。

因而，應(yīng)理解，通過(guò)具有本文描述的高置信度檢驗(yàn)系統(tǒng)，可以顯著降低假陽(yáng)性率和假陰性率，且尤其是如果檢驗(yàn)系統(tǒng)和方法是針對(duì)性別差異被性別分層的或校正的(如下顯示)。因此，這樣的優(yōu)勢(shì)還未被認(rèn)識(shí)到且期望本文提供的系統(tǒng)和方法將會(huì)顯著增強(qiáng)用于被診斷為或疑似罹患ibs的患者的食物敏感度測(cè)試的預(yù)測(cè)能力。

實(shí)驗(yàn)

用于產(chǎn)生食物制備物的一般方案：市售的由各種生鮮食物的可食用部分制備的食物提取物(可從biomericainc.,17571vonkarmanave,irvine,ca92614獲得)用于按照制造商的說(shuō)明書(shū)來(lái)制備elisa板。

對(duì)于一些食物提取物，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)由產(chǎn)生食物提取物的特定過(guò)程制備的食物提取物比市售的食物提取物在檢測(cè)ibs患者的升高的igg反應(yīng)性方面提供了更優(yōu)異的結(jié)果。例如，對(duì)于谷物和堅(jiān)果，優(yōu)選產(chǎn)生食物提取物的三步過(guò)程。第一步是脫脂步驟。在此步驟中，通過(guò)使谷物和堅(jiān)果的粉末與非極性溶劑接觸并收集殘余物來(lái)提取谷物和堅(jiān)果中的脂質(zhì)。然后，通過(guò)使脫脂的谷物或堅(jiān)果粉末與升高的ph接觸以獲得混合物并從該混合物除去固體以獲得液體提取物來(lái)提取該粉末。一旦產(chǎn)生液體提取物，則添加水性制劑來(lái)穩(wěn)定該液體提取物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，水性制劑包括糖醇、金屬螯合劑、蛋白酶抑制劑、礦物鹽以及20-50mm的4-9ph的緩沖液的緩沖液組分。此制劑允許-70℃下長(zhǎng)期存儲(chǔ)和多次凍融而不會(huì)損失活性。

對(duì)于另一個(gè)實(shí)施例，對(duì)于肉類(lèi)和魚(yú)，優(yōu)選產(chǎn)生食物提取物的兩步過(guò)程。第一步是提取步驟。在此步驟中，通過(guò)在高沖擊壓力處理器中，在水性緩沖制劑中乳化生的、未蒸煮的肉類(lèi)或魚(yú)來(lái)產(chǎn)生源自生的未蒸煮的肉類(lèi)或魚(yú)的提取物。接著，除去固體材料以獲得液體提取物。一旦產(chǎn)生液體提取物，則添加水性制劑來(lái)穩(wěn)定該液體提取物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，水性制劑包括糖醇、金屬螯合劑、蛋白酶抑制劑、礦物鹽以及20-50mm的4-9ph的緩沖液的緩沖液組分。此制劑允許-70℃下長(zhǎng)期存儲(chǔ)和多次凍融而不會(huì)損失活性。

對(duì)于另外的實(shí)施例，對(duì)于水果和蔬菜，優(yōu)選產(chǎn)生食物提取物的兩步過(guò)程。第一步是提取步驟。在此步驟中，使用提取器(如原汁榨汁機(jī)等)以粉碎食物和提取汁液來(lái)產(chǎn)生源自水果或蔬菜的液體提取物。接著，除去固體材料以獲得液體提取物。一旦產(chǎn)生液體提取物，則添加水性制劑來(lái)穩(wěn)定該液體提取物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，水性制劑包括糖醇、金屬螯合劑、蛋白酶抑制劑、礦物鹽以及20-50mm的4-9ph的緩沖液的緩沖液組分。此制劑允許-70℃下長(zhǎng)期存儲(chǔ)和多次凍融而不會(huì)損失活性。

elisa板的封閉：為了優(yōu)化信噪，用專(zhuān)賣(mài)的封閉緩沖液來(lái)封閉板。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，封閉緩沖液包括20-50mm的4-9ph的緩沖液、動(dòng)物源的蛋白以及短鏈醇。包括幾種商用制備物的其他封閉緩沖液也被嘗試使用，但未能提供足夠的信噪和所要求的低的測(cè)定變化性。

elisa制備和樣本測(cè)試：將食物抗原制備物按照制造商的說(shuō)明書(shū)固定到各微量測(cè)試孔上。為了測(cè)定，使食物抗原與患者的血清中存在的抗體反應(yīng)，且通過(guò)洗滌步驟除去過(guò)量的血清蛋白。為了檢測(cè)igg抗體結(jié)合，使酶標(biāo)記的抗igg抗體共軛物與抗原-抗體復(fù)合物反應(yīng)。通過(guò)添加與偶聯(lián)酶反應(yīng)的底物來(lái)顯現(xiàn)顏色。測(cè)量顏色強(qiáng)度且與對(duì)特定食物抗原是特異性的igg抗體的濃度成正比。

確定按照區(qū)分ibs與對(duì)照受治療者的elisa信號(hào)的能力的順序排名的食物列表的方法：從初始選擇中(如，100種食物項(xiàng)目或150種食物項(xiàng)目，或甚至更多)，可以因預(yù)期群體的低消耗而在分析之前排除一些樣本。此外，特定的食物項(xiàng)目可以被用作更大范圍的同屬的食物組的代表，如果現(xiàn)有測(cè)試已經(jīng)確立了同屬組內(nèi)的不同物質(zhì)之間的相關(guān)性(最優(yōu)選兩個(gè)性別，但也適合于單個(gè)性別的相關(guān)性)尤其如此。例如，泰國(guó)蝦可以被去掉，而支持美國(guó)海灣白蝦作為“蝦”食物組的代表，或帝王蟹可以被去掉而支持珍寶蟹作為“蟹”食物組的代表。在另外優(yōu)選的方面中，最終的列表食物不到50種食物項(xiàng)目，且更優(yōu)選等于或少于40種食物項(xiàng)目。

由于最終選擇的用于食物不耐受小組的食物將不會(huì)對(duì)特定的性別是特異性的，因而需要性別-中立的食物列表。由于所觀察的樣本是性別失衡的(如，對(duì)照：22％的女性，ibs：64％的女性)，則通過(guò)使用雙樣本t檢驗(yàn)來(lái)對(duì)針對(duì)性別的信號(hào)得分建模型并存儲(chǔ)殘余物供進(jìn)一步的分析來(lái)消除完全因性別引起的elisa信號(hào)幅度的差。對(duì)于每一種受測(cè)試的食物，采用具有50,000重抽樣的對(duì)雙樣本t檢驗(yàn)的排列檢驗(yàn)(permutationtest)來(lái)比較ibs與對(duì)照之間的殘余信號(hào)得分。薩特思韋特(satterthwaite)近似被用于分母自由度以解釋方差齊性的缺乏，且雙尾排列的(2-tailedpermuted)p值代表每一種食物的原始p值。比較中的錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率(fdr)由任何可接受的統(tǒng)計(jì)程序(如benjamini-hochberg、族系錯(cuò)誤率(fwer)、每次比較錯(cuò)誤率(pcer)等)來(lái)校正。

根據(jù)食物的雙尾fdr多重校正的p值來(lái)對(duì)食物排名。具有等于或小于期望的fdr閾值的校正p值的食物被認(rèn)為在ibs中比在對(duì)照受治療者中具有明顯更高的信號(hào)得分，且因此被認(rèn)為是包括在食物不耐受小組中的候選者。表2提供了代表統(tǒng)計(jì)程序的結(jié)果的典型結(jié)果。此處，食物的排名是根據(jù)經(jīng)fdr校正的雙尾排列t檢驗(yàn)的p值。

值得注意地，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)甚至對(duì)于受測(cè)試的同一個(gè)食物制備物，至少好幾種食物項(xiàng)目的elisa得分顯著變化，且示例性的原始數(shù)據(jù)提供在表3中。因此，正如將容易理解的，如果同樣的分界值被應(yīng)用于男性數(shù)據(jù)和女性數(shù)據(jù)的原始數(shù)據(jù)，則沒(méi)有根據(jù)性別分層的數(shù)據(jù)將喪失重要的解釋能力。為了克服此缺陷，發(fā)明人按照下面的描述根據(jù)性別來(lái)對(duì)數(shù)據(jù)分層。

每一種食物的分界點(diǎn)(cutpoint)選擇的統(tǒng)計(jì)方法：通過(guò)使對(duì)照受治療者中的信號(hào)得分的分布匯總來(lái)確定何種elisa信號(hào)得分將構(gòu)成“陽(yáng)性”響應(yīng)。對(duì)于每一種食物，具有所觀察的得分大于或等于對(duì)照受治療者分布的選定分位數(shù)的ibs受治療者被認(rèn)為是“陽(yáng)性的”。為了減少任一個(gè)受治療者對(duì)分界點(diǎn)確定的影響，每一種食物-特異性的和性別-特異性的數(shù)據(jù)集被自助(bootstrap)重抽樣1000次。在每一次自助重復(fù)中(bootstrapreplicate)，確定對(duì)照信號(hào)得分的第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)。自助樣本中的每一位ibs受治療者與第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)比較以確定他/她是否具有“陽(yáng)性”響應(yīng)。每一種食物和性別的最終的基于第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)的分界點(diǎn)被計(jì)算為整個(gè)1000份樣本中的平均第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)。通過(guò)池化(pooling)整個(gè)食物的數(shù)據(jù)來(lái)計(jì)算每一位ibs受治療者被認(rèn)為對(duì)食物是“陽(yáng)性的”食物的數(shù)量。采用這樣的方法，發(fā)明人現(xiàn)在能夠確認(rèn)預(yù)定的百分位數(shù)排名的分界值，該值在大多數(shù)情形中是顯著不同的，正如可以從表4看到的。

圖1a-1d顯示了相對(duì)于小麥的、血液中的igg響應(yīng)的性別差異的典型示例，其中圖1a顯示了男性的信號(hào)分布以及由男性對(duì)照群體確定的第95百分位數(shù)分界。圖1b顯示了超過(guò)第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)的男性ibs受治療者的百分?jǐn)?shù)分布，而圖1c顯示了女性的信號(hào)分布以及由女性對(duì)照群體確定的第95百分位數(shù)分界。圖1d顯示了超過(guò)第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)的女性ibs受治療者的百分?jǐn)?shù)分布。以同樣的方式，圖2a-2d示例性地描繪了對(duì)可可的不同響應(yīng)，圖3a-3d示例性地描繪了對(duì)黑麥的不同響應(yīng)以及圖4a-4d示例性地描繪了對(duì)黑茶的不同響應(yīng)。圖5a-5b顯示了ibs受治療者的根據(jù)在第90百分位數(shù)(5a)和第95百分位數(shù)(5b)下被確認(rèn)為誘發(fā)食物的食物的數(shù)量的分布。發(fā)明人設(shè)想不考慮特定的食物項(xiàng)目，男性和女性響應(yīng)是顯著不同的。

應(yīng)注意，本領(lǐng)域未提供與ibs有關(guān)的被性別分層的任何可預(yù)測(cè)的食物組。因而，發(fā)現(xiàn)對(duì)性別顯示出不同響應(yīng)的食物項(xiàng)目是出人意料的結(jié)果，顯然，基于所有先前可獲得的技術(shù)也無(wú)法預(yù)期到這樣的結(jié)果。換句話(huà)說(shuō)，基于性別分層選擇食物項(xiàng)目提供了出人意料的技術(shù)效果，使得作為男性或女性ibs患者的誘發(fā)食物的特定食物項(xiàng)目的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性得以顯著改進(jìn)。

igg響應(yīng)數(shù)據(jù)的歸一化：雖然患者的igg響應(yīng)結(jié)果的原始數(shù)據(jù)可以用于比較給定食物間的響應(yīng)強(qiáng)度，但是還設(shè)想患者的igg響應(yīng)結(jié)果被歸一化并被指數(shù)化(indexed)以產(chǎn)生無(wú)量綱的數(shù)值以便比較對(duì)給定食物的相對(duì)響應(yīng)強(qiáng)度。例如，患者的食物特異性的igg結(jié)果(如對(duì)珍寶蟹特異性的igg和對(duì)雞蛋特異性的igg)中的一個(gè)或多個(gè)可以被歸一化為患者的總igg?；颊叩膶?duì)珍寶蟹特異性的igg的歸一化值可以是0.1且患者的對(duì)雞蛋特異性的igg的歸一化值可以是0.3。在此情形中，患者對(duì)雞蛋的響應(yīng)的相對(duì)強(qiáng)度是珍寶蟹的3倍。于是，患者對(duì)雞蛋和珍寶蟹的敏感度可以這樣被指數(shù)化。

在其他實(shí)施例中，患者的食物特異性igg結(jié)果(如對(duì)蝦特異性的igg和對(duì)豬肉特異性的igg)中的一個(gè)或多個(gè)可以被歸一化為患者的食物特異性igg結(jié)果的全局均值?；颊叩氖澄锾禺愋詉gg的全局均值可以通過(guò)患者的食物特異性igg的總量來(lái)測(cè)量。在此情形中，患者對(duì)蝦的特異性igg可以被歸一化為患者的總食物特異性igg(如對(duì)蝦、豬肉、珍寶蟹、雞肉、豌豆等的igg水平的平均值)的平均值。然而，還設(shè)想患者的食物特異性igg的全局均值可以通過(guò)患者的對(duì)特定種類(lèi)的食物的igg水平經(jīng)由多次測(cè)試來(lái)測(cè)量。如果之前已經(jīng)針對(duì)患者測(cè)試了5次對(duì)蝦的敏感度且測(cè)試了7次對(duì)豬肉的敏感度，那么患者的對(duì)蝦或?qū)ωi肉的新的igg值被歸一化為對(duì)蝦的5次測(cè)試結(jié)果的平均值或?qū)ωi肉的7次測(cè)試結(jié)果的平均值?；颊叩膶?duì)蝦特異性的igg的歸一化值可以是6.0且患者的對(duì)豬肉特異性的igg的歸一化值可以是1.0。在此情形中，患者此時(shí)對(duì)蝦的敏感度是對(duì)蝦的平均敏感度的6倍，但具有基本上類(lèi)似的對(duì)豬肉的敏感度。然后，患者對(duì)蝦和豬肉的敏感度可以基于這樣的比較被指數(shù)化。

確定具有構(gòu)成ibs基礎(chǔ)的食物敏感度的ibs患者的子集的方法：雖然懷疑食物敏感度在ibs的癥候和癥狀方面起著重要作用，但是一些ibs患者可能不具有構(gòu)成ibs基礎(chǔ)的食物敏感度。那些患者將不會(huì)獲益于飲食干預(yù)來(lái)治療ibs的癥候和癥狀。為了確定這樣的患者的子集，ibs患者和非ibs患者的體液樣本可以采用使用具有24份食物樣本的測(cè)試設(shè)備進(jìn)行的elisa測(cè)試來(lái)測(cè)試。

表5提供了示例性的原始數(shù)據(jù)。正如應(yīng)該被容易理解的，數(shù)據(jù)表示了基于第90百分位數(shù)值的24份樣本食物中的陽(yáng)性結(jié)果的數(shù)量。從表5顯示的原始數(shù)據(jù)看，計(jì)算了ibs患者和非ibs患者的陽(yáng)性食物數(shù)量的平均偏差和標(biāo)準(zhǔn)偏差。另外，計(jì)算了ibs患者和非ibs患者的具有零陽(yáng)性食物的患者的數(shù)量和百分?jǐn)?shù)。ibs群體中的具有零陽(yáng)性食物的患者的數(shù)量和百分?jǐn)?shù)不到非ibs群體中的約五分之一(分別為6％對(duì)比38％)。因而，可以容易理解，對(duì)零陽(yáng)性食物具有敏感度的ibs患者不可能具有構(gòu)成他們的ibs癥候和癥狀的基礎(chǔ)的食物敏感度。

表6和表7顯示出匯總了表5所示的兩類(lèi)患者群體的原始數(shù)據(jù)的示例性的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)包括正態(tài)性(normality)、算術(shù)平均值、中值、百分位數(shù)以及代表ibs群體和非ibs群體中的陽(yáng)性食物的數(shù)量的平均值和中值的95％置信區(qū)間(ci)。

表8和表9顯示出匯總了表5所示的兩類(lèi)患者群體的原始數(shù)據(jù)的另一個(gè)示例性統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。在表8和9中，原始數(shù)據(jù)通過(guò)對(duì)數(shù)變換進(jìn)行變換以改善數(shù)據(jù)解釋。

表10和表11顯示了獨(dú)立的t檢驗(yàn)(表10，經(jīng)過(guò)對(duì)數(shù)變換的數(shù)據(jù))和mann-whitney檢驗(yàn)(表11)的示例性統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)以比較ibs樣本與非ibs樣本之間的陽(yáng)性食物的數(shù)量的幾何平均值。表10和表11中顯示的數(shù)據(jù)表明ibs群體與非ibs群體之間的食物的陽(yáng)性數(shù)量的幾何平均值的顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在兩種統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)中，顯示了關(guān)于24份食物樣本的陽(yáng)性響應(yīng)的數(shù)量在ibs群體中比在非ibs群體中明顯更高且平均判別p值≤0.001。這些統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)還圖示為圖6a中的箱形圖和須形圖，和圖6b中的缺口箱形圖和須形圖。

表12顯示了表5-11所顯示的數(shù)據(jù)的接受者工作特征(roc)曲線(xiàn)分析的示例性統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)以確定表5中采用的測(cè)試在區(qū)分ibs受治療者與非ibs受治療者方面的診斷能力。當(dāng)采用超過(guò)2種陽(yáng)性食物的分界標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，測(cè)試得到72.4％敏感度和72.2％特異度的數(shù)據(jù)，且具有0.771的曲線(xiàn)下面積(auroc)。roc的p值在<0.0001的p值時(shí)是顯著的。圖7圖示了對(duì)應(yīng)于表12所示的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)的roc曲線(xiàn)。由于ibs群體與非ibs群體之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異是顯著的，當(dāng)測(cè)試結(jié)果被以2個(gè)陽(yáng)性數(shù)量分界時(shí)，患者測(cè)試陽(yáng)性的食物的數(shù)量可以被用作初步臨床診斷ibs的證實(shí)，和食物敏感度是否可以構(gòu)成患者的ibs的癥候和癥狀的基礎(chǔ)的證實(shí)。因此，上述測(cè)試可以被用作另一種“劃入”測(cè)試以添加到目前可用的診斷ibs的臨床標(biāo)準(zhǔn)中。

用于確定每人的稱(chēng)為“陽(yáng)性”食物的數(shù)量的分布的方法：為了確定每人的“陽(yáng)性”食物的數(shù)量分布并測(cè)量診斷性能，用表1中的24種食物項(xiàng)目進(jìn)行分析，這顯示了對(duì)ibs患者的最陽(yáng)性的響應(yīng)。24種食物項(xiàng)目包括可可、黑茶、麥片、卷心菜、牛奶、黃洋蔥、蜂蜜、黑麥、玉米、酵母、白小麥、大豆、雞蛋、金槍魚(yú)、檸檬、菠蘿、黃瓜、柑橘、大比目魚(yú)、胡桃、葡萄柚、蔗糖、雞肉、美國(guó)海灣白蝦。為了減少任一個(gè)受治療者對(duì)此分析的影響，每一種食物特異性的和性別特異性的數(shù)據(jù)集被自助重抽樣1000次。接著，對(duì)于此自助樣本中的每一種食物項(xiàng)目，使用對(duì)照群體的第90百分位數(shù)和第95百分位數(shù)來(lái)確定性別特異性的分界點(diǎn)。一旦確定了性別特異性的分界點(diǎn)，則性別特異性的分界點(diǎn)與所觀察到的對(duì)照和ibs受治療者的elisa信號(hào)得分比較。在此比較中，如果觀察到的信號(hào)等于或大于分界點(diǎn)值，則認(rèn)為是“陽(yáng)性”食物，且如果觀察到的信號(hào)小于分界點(diǎn)值，則認(rèn)為是“陰性”食物。

一旦所有的食物項(xiàng)目被認(rèn)為是陽(yáng)性的或陰性的，則每位受治療者的48次(24種食物×2個(gè)分界點(diǎn))呼叫(call)的結(jié)果被保存在每一個(gè)自助重復(fù)中。然后，對(duì)于每一位受治療者，24次呼叫被采用作為分界點(diǎn)的第90百分位數(shù)來(lái)求和以得到“陽(yáng)性食物(第90)的數(shù)量”，且剩余24次呼叫被采用第95百分位數(shù)來(lái)求和以得到“陽(yáng)性食物(第95)的數(shù)量”。接著，在每一個(gè)重復(fù)中，匯總整個(gè)受治療者的“陽(yáng)性食物(第90)的數(shù)量”和“陽(yáng)性食物(第95)的數(shù)量”以得到如下所述的每個(gè)重復(fù)的描述性統(tǒng)計(jì)量：1)總體平均值等于平均值的平均值；2)總體標(biāo)準(zhǔn)偏差等于標(biāo)準(zhǔn)偏差的平均值；3)總體中值等于中值的平均值；4)總體最小值等于最小值的最小值；以及5)總體最大值等于最大值的最大值。在此分析中，當(dāng)計(jì)算頻率分布和直方圖時(shí)，為了避免非整數(shù)的“陽(yáng)性食物的數(shù)量”，作者假設(shè)相同的原始數(shù)據(jù)集的1000次重復(fù)實(shí)際上是添加到原始樣本中的具有相同尺度的999個(gè)集的新的受治療者。一旦完成數(shù)據(jù)的匯總，就采用程序“a_pos_foods.sas、a_pos_foods_by_dx.sas”生成有關(guān)兩種性別和有關(guān)ibs受治療者和對(duì)照受治療者兩者的“陽(yáng)性食物(第90)的數(shù)量”和“陽(yáng)性食物(第95)的數(shù)量”的頻率分布和直方圖。

測(cè)量診斷性能的方法：為了測(cè)量每一位受治療者的針對(duì)每一種食物項(xiàng)目的診斷性能，我們使用上述每一個(gè)自助重復(fù)中的每一位受治療者的“陽(yáng)性食物(第90)的數(shù)量”和“陽(yáng)性食物(第95)的數(shù)量”的數(shù)據(jù)。在此分析中，分界點(diǎn)被設(shè)定為1。因而，如果受治療者具有一個(gè)或多個(gè)“陽(yáng)性食物(第90)的數(shù)量”，則受治療者被呼叫為“罹患ibs”。如果受治療者具有小于1個(gè)“陽(yáng)性食物(第90)的數(shù)量”，則受治療者被呼叫為“未罹患ibs”。當(dāng)建立了所有呼叫時(shí)，呼叫與實(shí)際的診斷進(jìn)行比較以確定呼叫是否是真陽(yáng)性(tp)、真陰性(tn)、假陽(yáng)性(fp)或假陰性(fn)。當(dāng)分界點(diǎn)被設(shè)定為1用于每一種方法時(shí)，匯總整個(gè)受治療者的比較以得到“陽(yáng)性食物(第90)的數(shù)量”和“陽(yáng)性食物(第95)的數(shù)量”的敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值以及陰性預(yù)測(cè)值的性能指標(biāo)。每一(敏感度、1-特異度)對(duì)成為在roc曲線(xiàn)上用于此重復(fù)的點(diǎn)。

為了提高準(zhǔn)確度，上述分析通過(guò)將分界點(diǎn)從2個(gè)增加到高達(dá)24個(gè)，且重復(fù)用于1000個(gè)自助重復(fù)中的每一個(gè)來(lái)被重復(fù)。于是，1000個(gè)自助重復(fù)中的性能指標(biāo)通過(guò)采用程序“t_pos_foods_by_dx.sas”計(jì)算平均值被匯總。女性和男性的診斷性能的結(jié)果顯示在表13(女性)和表14(男性)中。

當(dāng)然，應(yīng)理解，可以對(duì)食物制備物做出某些變化而不會(huì)改變本文提供的本發(fā)明的主題。例如，如果食物項(xiàng)目是黃洋蔥，則該項(xiàng)目應(yīng)該被理解為還包括被證明在測(cè)試中具有等同活性的其他洋蔥種類(lèi)。的確，發(fā)明人注意到，對(duì)于每一個(gè)所測(cè)試的食物制備物，某些其他相關(guān)的食物制備物也以相同或等同的方式(數(shù)據(jù)未顯示)被測(cè)試。因而，應(yīng)理解，每一個(gè)受測(cè)試的且要求保護(hù)的食物制備物將存在與具有經(jīng)驗(yàn)證的測(cè)試中的相同或等同反應(yīng)的的制備物相關(guān)聯(lián)的等同物。

對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明顯的是除了已經(jīng)描述的那些之外，還可以在不脫離本文的發(fā)明構(gòu)思的前提下進(jìn)行更多的修改。因此，除了所附權(quán)利要求的精神外，本發(fā)明的主題不受限制。此外，在解釋說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)時(shí)，所有術(shù)語(yǔ)應(yīng)以符合上下文的最廣泛的方式進(jìn)行解釋。特別地，術(shù)語(yǔ)“包括(comprises)”和“包括(comprising)”應(yīng)被解釋為以非排他性方式指代要素、部件或步驟，指示參考要素、部件或步驟可以與未明確引用的其他要素、部件或步驟存在或使用或組合。如果說(shuō)明書(shū)聲明指代選自由a、b、c...和n組成的組中的至少一種，則文本應(yīng)該被解釋為僅需要組中的一個(gè)要素，而不是a加n或b加n等。

表1

根據(jù)經(jīng)fdr校正的雙尾排列t檢驗(yàn)的p值的食物的排名

表2

根據(jù)食物和性別的elisa得分的基本描述性統(tǒng)計(jì)量比較ibs與對(duì)照

表3

作為候選者的對(duì)照受治療者的elisa信號(hào)得分的上側(cè)分位數(shù)用于確定“陽(yáng)性”或“陰性”的檢驗(yàn)分界點(diǎn)

使用排列檢驗(yàn)的按區(qū)分能力的降序排名的前24種食物

表4

表5

表6

表7

表8

表9

表10

表11

表12

從陽(yáng)性食物的數(shù)量預(yù)測(cè)ibs狀態(tài)的性能指標(biāo)

使用elisa信號(hào)的第90百分位數(shù)以確定陽(yáng)性

表13

從陽(yáng)性食物的數(shù)量預(yù)測(cè)ibs狀態(tài)的性能指標(biāo)

使用elisa信號(hào)的第90百分位數(shù)以確定陽(yáng)性

表14