發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及可以用于針對酒精濫用或戒酒檢測或監(jiān)測的酒精攝入或者相關(guān)疾病和治療監(jiān)測的乙基葡萄糖醛酸苷(“etg”)側(cè)向流動免疫測定測試帶、裝置和方法。

背景

作為用于檢測或監(jiān)測體液或生物樣品中藥物或分析物的存在的方法，免疫測定變得越來越普及。在免疫測定的開發(fā)中的具體挑戰(zhàn)是針對靶標(biāo)藥物/分析物的抗體的制備，因為許多不是固有抗原性的。通常，必須將藥物修飾以制備抗原衍生物，但是當(dāng)藥物以適當(dāng)可用的靈敏度(通常具有生理和/或藥理學(xué)顯著性的水平)包含在待測試的液體樣本中時，針對抗原衍生物制備的抗體必須能夠識別藥物。靈敏度不是唯一的擔(dān)憂。各種代謝物經(jīng)常存在并且其他藥物可能會與靶標(biāo)分析物一起存在。優(yōu)選地，針對特定藥物或代謝物的抗體與其他代謝物或其他藥物具有最小的交叉反應(yīng)性(如果存在的話)。

側(cè)向流動測試，也被稱為側(cè)向流動免疫層析測定，是預(yù)期用于在不需要專門且昂貴的設(shè)備的情況下檢測樣品(基質(zhì))中靶標(biāo)代謝物的存在(或不存在)的裝置，盡管存在許多由讀取設(shè)備支持的基于實驗室的應(yīng)用。通常，這些檢測用于針對家庭檢測、護(hù)理點檢測(pointofcaretesting)或?qū)嶒炇矣猛镜尼t(yī)學(xué)診斷以及車輛駕駛員的法律強(qiáng)制檢測。

所述技術(shù)基于一系列毛細(xì)管床，如多孔紙或燒結(jié)聚合物的層。這些層中的每一層具有自發(fā)輸送液體(例如，尿液)的能力。第一層(樣品墊)起海綿的作用并且容納過量的樣品液體。一旦浸漬，液體即遷移至第二層(綴合物墊)，制造商已經(jīng)在其中儲存了所謂的綴合物，即在含有保證靶標(biāo)分子(例如，抗原)與已經(jīng)固定在粒子表面上的其化學(xué)伴侶(例如，一抗)(任選第二標(biāo)記抗體(二抗)(例如，夾心測定)之間的優(yōu)化的化學(xué)反應(yīng)所需的完全試劑混合物的鹽-糖基質(zhì)中的生物活性化合物(參見以下)的干燥形式。在樣品液體溶解鹽-糖基質(zhì)的同時，其還溶解試劑，并且在一個組合輸送作用中，樣品和試劑在流經(jīng)多孔結(jié)構(gòu)的同時混合。以這種方式，代謝物在經(jīng)由第三毛細(xì)管床進(jìn)一步遷移的同時與抗體結(jié)合。這種床具有一個或多個已經(jīng)由制造商固定第三分子(通常為標(biāo)記的抗體)的區(qū)域(通常被稱為條帶)。到樣品-綴合物混合物到達(dá)這些條帶時，代謝物已經(jīng)結(jié)合在第一抗體上并且第三“捕獲”分子結(jié)合復(fù)合物。一會之后，當(dāng)越來越多的液體經(jīng)過條帶時，抗體/代謝物復(fù)合物積聚并且條帶區(qū)域改變顏色。通常，存在至少兩個條帶：捕獲任何粒子并且從而表明反應(yīng)條件和技術(shù)起作用的條帶(對照)。第二條帶區(qū)域含有特異性捕獲分子并且僅捕獲包含代謝物分子和第一抗體的那些復(fù)合物。在經(jīng)過這些反應(yīng)區(qū)域之后，液體進(jìn)入最終的多孔材料，芯材，其提供牽引測試液體通過多個毛細(xì)管床的膠體滲透壓(oncoticpressure)并且起廢料容器的作用。

側(cè)向流動測試可以作為競爭性測定或夾心測定操作。在競爭性測定中，沖洗復(fù)合物，抗體受到限制或者存在與用于一抗結(jié)合的靶標(biāo)競爭的靶標(biāo)類似物。在夾心測定中，使用對抗原特異的一抗，并且二抗位于第三層中，二抗僅對第一抗體是特異性的。當(dāng)使用二抗時，其可以與視覺(或可視化)標(biāo)記物如熒光團(tuán)或?qū)梢暬陌l(fā)色團(tuán)特異的酶綴合。

在圖3中示出的乙基葡萄糖醛酸苷(“etg”)是通過乙醇與活化葡萄糖醛酸在udp葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶(glucuronyltransferase)的存在下在線粒體膜上綴合形成的乙醇的直接代謝物。盡管乙醇在飲用之后僅數(shù)小時內(nèi)是可檢測的，而etg在酒精飲用之后多至約四或五天是可檢測的，使其成為用于確定酒精飲用的可靠靶標(biāo)分析物(假定該測試可以針對假陽性和假陰性進(jìn)行驗證和控制)。酒精飲用的監(jiān)測由于許多原因是重要的，包括與酒精濫用和戒酒檢測和監(jiān)測結(jié)合的用途(用于醫(yī)學(xué)治療、和法庭或法律強(qiáng)制檢測和監(jiān)測中的一種或多種)、安全敏感性程序如航空公司飛行員以及衛(wèi)生保健或急救護(hù)理專業(yè)人員以及重型機(jī)械或車輛操作員。

目前，etg通過氣相色譜法/質(zhì)譜法(“gc/ms”)和液相色譜法/聯(lián)用質(zhì)譜法(“l(fā)c/ms/ms”)準(zhǔn)確且可重復(fù)地檢測。已經(jīng)嘗試了使用多克隆抗血清檢測etg的酶聯(lián)免疫測定(“elisa”)試驗，但是多克隆抗體的使用可能會導(dǎo)致顯著且增加的假陽性和假陰性數(shù)量，這表明該測定的差的特異性和靈敏度。此外，暴露于外部乙醇(例如，含有乙醇的個人護(hù)理產(chǎn)品、急救產(chǎn)品、清潔產(chǎn)品等)也產(chǎn)生假陽性。這種不準(zhǔn)確性導(dǎo)致了這樣的建議或策略：對于陽性測試結(jié)果來說，僅高水平的etg(例如，至少500、750、或1000ng/ml尿液)是可接受的，這可能會導(dǎo)致顯著數(shù)量的假陰性，尤其是使用免疫測定檢測etg。因此，市場上似乎沒有提供針對etg的準(zhǔn)確、可重復(fù)且商業(yè)可行的免疫測定的優(yōu)點的產(chǎn)品，所述免疫測定任選不需要通過使用包括(“gc/ms”)和液相色譜法/聯(lián)用質(zhì)譜法(“l(fā)c/ms/ms”)在內(nèi)的額外檢測進(jìn)一步驗證。這樣的測試還需要大量時間以提供結(jié)果，例如至少數(shù)小時、數(shù)天、或數(shù)周。

因此，需要提供和解決與開發(fā)用于針對etg的準(zhǔn)確、可重復(fù)且商業(yè)可行的免疫測定的裝置和方法相關(guān)的當(dāng)前問題中的一個或多個，例如，與現(xiàn)有的測定相比，提供更好的靈敏度和/或特異性(例如，使用etg特異性單克隆抗體)、較低和/或可接受的假陰性和/或假陽性比率中的一個或多個，不需要使用更加昂貴且耗時和實驗室所需的測試(例如，gc/ms和/或lc/ms/ms)的第二輪檢測來確認(rèn)陽性檢測。因此，還需要提供超過已知系統(tǒng)或方法的改進(jìn)(任選地克服這些問題中的一個或多個)的制造系統(tǒng)和方法。

概述

本發(fā)明的非限制性實施方案可以任選包括etg免疫測定側(cè)向流動測試帶、裝置、方法、和/或試劑中的一個或多個，如etg特異性側(cè)向流動帶免疫測定裝置以及制造和使用其的方法。

非限制性的任選的實施方案可以包括裝置、制造或使用方法、軟件、計算機(jī)可讀的計算機(jī)系統(tǒng)、和/或用于檢驗或檢測藥物或其他化學(xué)品或代謝物的存在的系統(tǒng)，例如，但不限于診斷、監(jiān)測、或測量與疾病或醫(yī)學(xué)病癥相關(guān)的化學(xué)或其他參數(shù)，或者用于任選在非控制或難控制環(huán)境中檢驗非法或違禁藥物。

本發(fā)明的裝置、方法或系統(tǒng)可以任選使用組織或體液中的一種或多種(例如，但不限于尿液、血液、唾液、或等血漿)作為用于檢測etg的測試樣品。非限制性的任選的實施方案可以任選包括下列各項中的一種或多種：電子器件如智能電話或其他無線、互聯(lián)網(wǎng)或蜂窩通訊能力的器件，以及數(shù)字和/或其他成像、數(shù)據(jù)處理、數(shù)據(jù)存儲和/或經(jīng)由蜂窩網(wǎng)絡(luò)或wi-fi的數(shù)據(jù)的無線電子傳輸。

裝置、系統(tǒng)或方法可以任選收集、檢測、處理、操控、改變、調(diào)節(jié)、確定、驗證、和/或測試足以測試、化學(xué)和/或機(jī)械收集、檢測、處理、操控、改變、調(diào)節(jié)、確定、驗證、和/或測試尿液或口腔或其他體液或組織中的一個或多個中的etg的體積的尿液、口腔或其他體液或組織。針對檢測和/或?qū)⒄{(diào)節(jié)的液體遞送至用于診斷、監(jiān)測、或測量與疾病或醫(yī)學(xué)病癥相關(guān)的化學(xué)或其他參數(shù)、或確定etg存在或不存在、或etg的其他定量或定性測量的側(cè)向流動測試帶或其他檢測系統(tǒng)，裝置、系統(tǒng)或方法也可以提供設(shè)置和/或優(yōu)化。

通過一旦將檢測裝置插入至定位外罩中即自動引發(fā)計時或者由用戶借助與觸敏或其他圖形用戶界面相互作用來引發(fā)測試的起始時間，這樣的裝置還可以任選提供測試終點和/或隨后的圖像捕獲的定時。

側(cè)向流動測試條裝置、系統(tǒng)或方法可以任選提供進(jìn)行測試的人員(測試者)進(jìn)行選自由下列各項組成的組的至少一種：將測試裝置從包裝中移除，將蓋從液體收集裝置中移除或?qū)⒛蛞夯蚱渌w液放置在液體收集裝置中或測試條或檢測裝置(例如，但不限于測試條保持器、盒、插入物、檢測裝置組分等)上。

測試條、裝置、或系統(tǒng)可以任選包括用于檢測尿液或其他體液(例如，唾液、血液、血液組分、或其他組織樣品(例如，皮膚、頭發(fā)或指甲)中乙基葡萄糖醛酸苷的乙基葡萄糖醛酸苷(etg)側(cè)向流動測試條免疫測定系統(tǒng)、裝置或方法，其包括下列各項中的至少一個或多個：

(a)如圖1和2中示意性地示出的側(cè)向流動測試條，所述測試條包括；

(i)至少一種類型的毛細(xì)管流動材料，其能夠可重復(fù)地提供尿液、體液或組織樣品經(jīng)由測試條的側(cè)向流動，以可重復(fù)地相互作用并且使用在測試條中包含的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體以及第一和第二可檢測標(biāo)記物檢測etg，所述系統(tǒng)提供(1)陽性結(jié)果，如在圖2中所示的僅(c)著色帶顯色；(2陰性結(jié)果，)如在圖2中所示的(t)著色帶和(c)著色帶二者均顯色；或無效結(jié)果，如在圖2中所示的僅(t)著色帶顯色，或沒有帶；

(ii)如在圖1中所示的尿液/體液/組織樣品或?qū)φ諛悠肥┘訁^(qū)域(a)，其包含樣品施加組分；

(iii)如在圖1中所示的標(biāo)記的etg標(biāo)記的抗體區(qū)域(b)，其包含設(shè)置在測試條材料上或設(shè)置到測試條材料的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體，所述可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體包含在施加至測試條之后與可檢測標(biāo)記物組分綴合并且由于尿液、體液或組織或?qū)φ諛悠返拿?xì)管作用而可溶于測試條或沿著測試條傳導(dǎo)的etg特異性抗體；

(iv)第一檢測區(qū)域(d)，其包含所述第一可檢測標(biāo)記物作為當(dāng)尿液、體液或組織或?qū)φ諛悠分械膃tg的濃度低于在100至2000ng/ml之間的預(yù)選擇的閾值時結(jié)合可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的第一標(biāo)記部分；其中低于預(yù)選擇的閾值的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的結(jié)合得到如在圖2中所示的具有(t)和(c)著色帶二者的陰性結(jié)果；并且其中當(dāng)尿液、體液或組織或?qū)φ諛悠分械膃tg高于預(yù)選擇的閾值時，所述可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體未可檢測地或明顯地結(jié)合第一可檢測標(biāo)記物并且也不提供陰性結(jié)果；

(v)第二檢測區(qū)域(e)，其包含第二可檢測標(biāo)記物作為當(dāng)尿液、體液或組織或?qū)φ諛悠分械膃tg的濃度高于在100至2000ng/ml之間的預(yù)選擇的閾值時結(jié)合可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的第二標(biāo)記部分；并且其中高于預(yù)選擇的閾值的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的結(jié)合得到如在圖2中所示的僅具有(c)著色帶的陽性結(jié)果；并且其中當(dāng)尿液、體液或組織或?qū)φ諛悠分械膃tg高于預(yù)選擇的閾值時，可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體未可檢測地或明顯地結(jié)合第一可檢測標(biāo)記物；并且

其中當(dāng)測定無效時，可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的結(jié)合得到如在圖2中所示的僅具有(t)著色帶或沒有帶的無效結(jié)果；并且其中可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體未可檢測地或明顯地結(jié)合第二可檢測標(biāo)記物。

任選地，可以包括以下中的一個或多個：其中：閾值是500、750、或1000ng/ml；可檢測標(biāo)記物是膠體金或膠乳金；etg特異性抗體是單克隆的；etg特異性抗體對etg的親和力是至少10^-7kd；可檢測標(biāo)記物包含酶、酶片段或酶供體片段。

所述方法可以任選包括下列步驟中的一個或多個：提供如圖1和2中示意性地示出的側(cè)向流動測試條；將尿液、體液或組織或?qū)φ諛悠肥┘又翜y試條；和確定尿液、體液或組織或?qū)φ諛悠肥欠癜哂诨虻陀陂撝档膃tg。

本發(fā)明的這些和其他優(yōu)點和特征根據(jù)以下描述和所附權(quán)利要求將會變得更加顯而易見，或者可以通過如在下文中給出的本發(fā)明的實踐而獲知。

附圖簡述

為了進(jìn)一步闡明本發(fā)明的以上和其他優(yōu)點和特征，本發(fā)明的更具體的描述將會參照在附圖中所示的其具體實施方案給出。應(yīng)理解的是，這些附圖僅描繪了本發(fā)明的典型實施方案并且因此不應(yīng)被認(rèn)為限制其范圍。將通過使用附圖額外具體且詳細(xì)地描述和解釋本發(fā)明，其中：

圖1示出了本發(fā)明的測試條的非限制性實例的示意圖。

圖2示出了顯示陰性、陽性和無效結(jié)果的本發(fā)明的測試條的非限制性實例的示意圖。

圖3示出了乙基葡萄糖醛酸苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)。

描述

在圖3中示出的乙基葡萄糖醛酸苷(“etg”)是通過乙醇與活化葡萄糖醛酸在udp葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶的存在下在線粒體膜上綴合形成的乙醇的直接代謝物。盡管乙醇在飲用之后僅數(shù)小時內(nèi)是可檢測的，etg在酒精飲用之后多至四或五天內(nèi)是可檢測的，使其成為用于確定酒精飲用的可靠靶標(biāo)分析物。酒精飲用的監(jiān)測由于許多原因是重要的，包括與酒精濫用和戒酒檢測和監(jiān)測結(jié)合的用途(用于醫(yī)學(xué)治療、和法庭或法律強(qiáng)制檢測和監(jiān)測中的一種或多種)、安全敏感性程序如航空公司飛行員以及衛(wèi)生保健或急救護(hù)理專業(yè)人員以及重型機(jī)械或車輛操作員。

目前，etg通過氣相色譜法/質(zhì)譜法(“gc/ms”)和液相色譜法/聯(lián)用質(zhì)譜法(“l(fā)c/ms/ms”)檢測。這樣的方法耗時且昂貴。zimmer等人(j.analyticaltoxicology,26:11-16,2002；整體結(jié)合在本文中)描述了使用通過用經(jīng)由在etg的5位置的羧基直接連接至過氧化物酶的etg免疫誘導(dǎo)的多克隆抗血清檢測etg的酶聯(lián)免疫測定(“elisa”)或酶免疫測定(eia)試驗。多克隆抗體的使用可能會增加的假陽性(23.2％)和假陰性(24.3％)數(shù)量，這表明該測定的差的特異性和靈敏度。在2001年，mediagnostcompanyltd.(reutlingen,germany)開始開發(fā)了使用通過用etg的脂肽綴合物免疫制備的單克隆抗體的elisa試驗(wurst等人，addiction98(suppl.2),51-61頁,2003)。然而，至今，沒有制造可用的產(chǎn)品。

通常，本發(fā)明可以任選包括改進(jìn)的etg免疫測定側(cè)向流動測試帶以及裝置和方法中的一個或多個，其包括提供抗體用作etg特異性免疫診斷試劑的成分并且用于免疫診斷方案中。因此，本發(fā)明可以任選包括改進(jìn)的基于etg的免疫原，基于etg的抗原，由基于etg的免疫原制備的抗體，以及制造和使用其的方法。更具體地，本發(fā)明可以任選包括根據(jù)本發(fā)明的可以與由基于etg的免疫原制備的etg特異性抗體一起使用的改進(jìn)的免疫測定側(cè)向流動測試帶、裝置、和技術(shù)。

在非限制性的實施方案中，本發(fā)明可以任選包括利用基于etg的免疫原制備的抗體，其中抗體是能夠與etg和etg類似物相互作用的抗etg抗體。此外，抗體能夠與樣品中的濃度小于或等于約0.05mg/dl的etg相互作用，并且與乙基葡萄糖醛酸苷、勞拉西泮(lorazepam)葡萄糖醛酸苷、奧沙西泮(oxazepam)葡萄糖醛酸苷、替馬西泮(temazepam)葡萄糖醛酸苷、d-葡萄糖、1-丁醇、或2-丁醇中的至少一種具有小于約1％的交叉反應(yīng)性。

在非限制性的實施方案中，本發(fā)明可以任選包括用于檢測etg的免疫測定系統(tǒng)，其中所述系統(tǒng)可以具有利用本文所述的基于etg的免疫原制備的抗etg抗體。此外，免疫測定系統(tǒng)可以具有基于etg的免疫測定試劑。

在非限制性的實施方案中，本發(fā)明可以任選包括檢測樣品中etg的方法。這樣的方法可以包括以下：從疑似飲用乙醇的受試者得到樣品；將抗etg抗體和etg類似物與樣品組合以形成第一組合物，所述抗體和類似物在第一組合物內(nèi)游離，并且所述抗體能夠結(jié)合etg和etg類似物；使得來自樣品的任何游離etg和etg類似物為與抗體結(jié)合而競爭；和檢測etg類似物和抗體之間的結(jié)合。通過為游離形式，抗原和抗體能夠在溶液內(nèi)自由移動從而溶解或懸浮，而不是如在elisa測定中附著至反應(yīng)容器。可以利用如在本文中所描述的基于etg的免疫原來制備抗etg抗體?？梢愿鶕?jù)本文中描述來制備etg類似物以包含可檢測標(biāo)記物，如酶(例如，g6pdh)、酶片段或酶供體片段(例如，β-半乳糖苷酶供體片段ed28并且n是約2)。

乙基葡萄糖醛酸苷(etg)是通過乙醇與葡萄糖醛酸借助udp葡萄糖醛?；D(zhuǎn)移酶(glucuronosyltransferase)的體內(nèi)綴合形成的少量的乙醇非氧化性代謝物。etg是攝入的酒精(乙醇)的代謝過程的產(chǎn)物，其在體內(nèi)迅速代謝，并且其在血液、毛發(fā)和尿液中被排出。通過使用etg快速測試裝置，可以在尿液中檢測etg，確認(rèn)酒精的飲用。etg代謝物在體內(nèi)保持較長并且因此具有8至80小時的更有用的檢測窗口。根據(jù)本發(fā)明的etg檢測是優(yōu)異的選擇，例如，但不限于零容忍酒精飲用或康復(fù)程序。

本發(fā)明的非限制性的實施方案可以包括etg側(cè)向流動免疫測定測試條和/或裝置，例如設(shè)計為通過裝置中顯色的視覺解讀來檢測etg的etg快速測試裝置(尿液)，所述檢測通過使用已經(jīng)為檢測而標(biāo)記的etg特異性抗體介導(dǎo)。測試條的膜或相似組分可以與etg綴合物固定在測試區(qū)域上，并且綴合物墊可以任選預(yù)涂布有著色或標(biāo)記的抗etg抗體，例如，但不限于膠體金或膠乳金標(biāo)記的etg抗體(例如，單克隆的或多克隆的，或者其etg結(jié)合片段)綴合物。抗體可以任選不設(shè)置在綴合物墊上，但是任選可以包括這樣的情況：將金直接放置到塑料裝置上、干燥、向金加入樣本以溶解，并且之后將金和樣本混合，然后向上流動至包含底墊/樣品墊、膜和芯吸材料/墊的帶。在加入樣本(例如，尿液、體液或組織和對照，例如陽性和/或陰性對照)之后，金綴合物沿著膜或測試條移動(通過毛細(xì)管作用而層析移動)并且抗體遷移至測試區(qū)域。如果在尿液中不存在藥物分子(即，etg)，則抗體-金綴合物附著至藥物綴合物以在測試區(qū)域中形成可見的線，在這種情況下，當(dāng)尿液、體液或組織對于藥物來說是陰性時，在測試區(qū)域中發(fā)生可見的沉淀物的形成。如果在尿液中存在etg，則藥物抗原與在測試區(qū)域上固定的藥物綴合物競爭有限的抗體位點。任選地，如在本領(lǐng)域中已知的，可以利用使用第二標(biāo)記抗體檢測第一抗體的夾心測定來檢測etg。在足夠濃度的藥物代謝物etg的情況下，其填充有限的抗體結(jié)合位點。這將會阻止著色的抗體-膠體金或膠乳金綴合物附著至測試區(qū)域上的藥物綴合物區(qū)域。因此，在測試區(qū)域上不存在著色帶顯示出陽性結(jié)果。在對照區(qū)域的著色帶的外觀充當(dāng)程序性對照。這表明已經(jīng)加入了適當(dāng)體積的樣本并且已經(jīng)發(fā)生了膜芯吸。

在檢測期間，一部分尿液、體液或組織樣本通過毛細(xì)管作用向上遷移。如果以低于其截留濃度存在于尿液、體液或組織中，etg將不會使其特異性抗體的結(jié)合位點飽和?？贵w之后將會與藥物-蛋白質(zhì)綴合物反應(yīng)并且將會在特異性藥物帶的測試線區(qū)域中出現(xiàn)可見的著色線。在尿液、體液或組織或口腔液樣本中高于截留濃度的藥物的存在將會使抗體的全部結(jié)合位點飽和。因此，將不會在測試線區(qū)域中形成著色線。藥物陽性的尿液、體液或組織樣本由于藥物競爭將不會在帶的特異性測試線區(qū)域中產(chǎn)生著色線，而藥物陰性的尿液、體液或組織或口腔液樣本由于不存在藥物競爭將會在測試線區(qū)域中產(chǎn)生線。

為了充當(dāng)程序性對照，著色線將總會在對照線區(qū)域出現(xiàn)，表明已經(jīng)加入了適當(dāng)體積的樣本并且已經(jīng)發(fā)生了膜芯吸。

如在圖1中所示，樣本在樣品施加區(qū)域例如(a)加入，并且之后經(jīng)由毛細(xì)管作用沿著膜或測試條遷移以與可以以備選標(biāo)記形式提供的標(biāo)記的綴合物(b)相互作用。在樣本(例如，尿液或其他體液或組織)中存在的低于截留或閾值量(例如，小于100、200、250、300、350、400、450、或500、600、700、750、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1700、1750、1800、1900、或2000ng/ml)的etg將不會使金綴合的抗etg抗體的全部結(jié)合位點飽和并且將不會形成著色的抗體-抗原復(fù)合物(c)。金綴合的抗體之后將會被固定的綴合物捕獲并且將會在位置(d)(對應(yīng)于以下圖2中的(t))形成代表陰性結(jié)果的可見的(例如，紅色)帶，在這種情況下，金-etg抗體復(fù)合物將會在(d)結(jié)合，因為在etg抗體上的etg結(jié)合位點不飽和并且將會結(jié)合固定在(d)的etg或表位或其模擬物以在(d)(對應(yīng)于圖2中的帶(t))處提供標(biāo)記的陰性結(jié)果和帶。在測試線區(qū)域中不存在線形成代表陽性讀數(shù)并且測試樣本的(a)水平高于測試的檢測靈敏度(例如，100、200、250、400、或500、600、700、750、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1700、1750、1800、1900、或2000ng/ml的檢測靈敏度，其中500、750、或1000ng/ml是優(yōu)選的)。

在膜的對照線區(qū)域中，無論是否存在測試樣本組合物，固定的試劑都捕獲著色的綴合物。所得的可見的紅色帶(e)確認(rèn)了測定正確地發(fā)揮功能。圖2示出了在非限制性實例中的一組可能的測試結(jié)果。

測試條、裝置、或系統(tǒng)可以任選包括用于檢測尿液中乙基葡萄糖醛酸苷的乙基葡萄糖醛酸苷(etg)側(cè)向流動測試條免疫測定系統(tǒng)、裝置或方法，其包括下列各項中的至少一個或多個：

(a)如圖1和2中示意性地示出的側(cè)向流動測試條，所述測試條包括；

(i)至少一種類型的毛細(xì)管流動材料，其能夠可重復(fù)地提供尿液、體液或組織樣品經(jīng)由測試條的側(cè)向流動，以可重復(fù)地相互作用并且使用在測試條中包含的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體以及第一和第二可檢測標(biāo)記物檢測etg，所述系統(tǒng)提供(1)陽性結(jié)果，如在圖2中所示的僅(c)著色帶顯色；(2)陰性結(jié)果，如在圖2中所示的(t)著色帶和(c)著色帶二者均顯色；或無效結(jié)果，如在圖2中所示的僅(t)著色帶顯色，或沒有帶；

(ii)如在圖1中所示的尿液、體液或組織或?qū)φ諛悠肥┘訁^(qū)域(a)，其包含樣品施加組分；

(iii)如在圖1中所示的標(biāo)記的etg標(biāo)記的抗體區(qū)域(b)，其包含設(shè)置在測試條材料上或設(shè)置到測試條材料的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體，所述可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體包含在施加至測試條之后與可檢測標(biāo)記物組分綴合并且由于尿液、體液或組織或?qū)φ諛悠返拿?xì)管作用而可溶于測試條或沿著測試條傳導(dǎo)的etg特異性抗體；

(iv)第一檢測區(qū)域(d)，其包含所述第一可檢測標(biāo)記物作為當(dāng)尿液或?qū)φ諛悠分械膃tg的濃度低于在100至2000ng/ml之間的預(yù)選擇的閾值時結(jié)合可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的第一標(biāo)記部分；其中低于預(yù)選擇的閾值的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的結(jié)合得到如在圖2a中所示的具有(t)和(c)著色帶二者的陰性結(jié)果；并且其中當(dāng)尿液、體液或組織或?qū)φ諛悠分械膃tg高于預(yù)選擇的閾值時，所述可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體未可檢測地或明顯地結(jié)合第一可檢測標(biāo)記物并且也未提供陰性結(jié)果；

(v)第二檢測區(qū)域(e)，其包含第二可檢測標(biāo)記物作為當(dāng)尿液、體液或組織或?qū)φ諛悠分械膃tg的濃度高于在100至2000ng/ml之間的預(yù)選擇的閾值時結(jié)合可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的第二標(biāo)記部分；并且其中高于預(yù)選擇的閾值的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的結(jié)合得到如在圖2b中所示的僅具有(c)著色帶的陽性結(jié)果；并且其中當(dāng)尿液、體液或組織或?qū)φ諛悠分械膃tg高于預(yù)選擇的閾值時，可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體未可檢測地或明顯地結(jié)合第一可檢測標(biāo)記物；并且

其中當(dāng)測定無效時，可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的結(jié)合得到如在圖2c中所示的僅具有(t)著色帶或沒有帶的無效結(jié)果；并且其中可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體未可檢測地或明顯地結(jié)合第二可檢測標(biāo)記物。

任選地，可以包括以下各項中的一個或多個：其中：閾值是500、750、或1000ng/ml；可檢測標(biāo)記物是膠體金或膠乳金或elisa或eia標(biāo)記物；etg特異性抗體是單克隆的或多克隆的；etg特異性抗體對etg的親和力是至少1、2、3、4、5、6、7、8、或9乘以10^-5kd、10^-6kd、10^-7kd、10^-8kd、或10^-9kd中的一個或多個；所述可檢測標(biāo)記物包含酶、酶片段或酶供體片段、和/或可檢測標(biāo)記物。如在本領(lǐng)域內(nèi)公知的，在elisa或eia中使用的酶的非限制性的實例包括辣根過氧化物酶(hrp)、堿性磷酸酶(ap)或葡萄糖氧化酶、或鏈霉親和素/生物素。這些酶允許用于檢測，通常因為它們在特定試劑存在下產(chǎn)生可觀察的顏色變化。參見，例如，“免疫測定手冊(theimmunoassayhandbook)”，第3版，davidwild編,elsevier,2008，其通過引用整體結(jié)合在本文中。

所述方法可以任選包括下列步驟中的一個或多個：提供如圖1和2中示意性地示出的側(cè)向流動測試條；將尿液、體液或組織或?qū)φ諛悠肥┘又翜y試條；和確定尿液、體液或組織或?qū)φ諛悠肥欠癜哂诨虻陀陂撝档膃tg。

在非限制性的實施方案中，本發(fā)明可以任選包括用于以適合的特異性和靈敏度(例如，親和力、結(jié)合速率(on-rate)、解離速率(off-rate)、親合力(avidity)、kd等)確定樣品中etg的存在和/或量(例如，尿液中，例如至少100、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900或1000ng/ml尿液或更多，或在其中的任何范圍或值)的免疫測定。

在本發(fā)明的非限制性的實施方案中，可以將etg化學(xué)修飾以制備能夠在哺乳動物中誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的免疫原，從而制備抗etg抗體。此外，可以將etg化學(xué)修飾以制備能夠與抗etg抗體相互作用的抗原。此外，可以將etg化學(xué)修飾以制備包含與也能夠與抗etg抗體相互作用的標(biāo)記物結(jié)合的etg的綴合物。

在本發(fā)明的另一個實施方案中，可以使用基于etg的免疫原制備對etg具有特異性和靈敏度的抗etg抗體。此外，針對etg的抗etg抗體可以與免疫測定結(jié)合使用以檢測樣品如患者樣本中etg的存在和/或確定etg的濃度。此外，可以在用于檢測樣品如尿液中的etg的存在和/或確定etg的濃度的系統(tǒng)或試劑盒中結(jié)合由基于etg的免疫原制備的抗etg抗體。

根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，用于制造由基于etg的免疫原或etg的免疫原性衍生物制備的抗etg抗體(例如，單克隆的和/或多克隆的)的方法是在本領(lǐng)域內(nèi)公知的和/或如在本文中描述或引用的。

定義：

除非另外說明，以下術(shù)語和短語具有以下提供的含義。

如在本文中所使用的，術(shù)語“親和力”意指表位和抗體之間結(jié)合強(qiáng)度的量度。因此，單一抗體對于多種表位可以具有不同的親和力。這可以允許單一抗體與一個表位強(qiáng)烈結(jié)合并且與另一個表位較不強(qiáng)烈結(jié)合。

如在本文中所使用的，術(shù)語“類似物”或“衍生物”意指由母體化合物或分子通過一個或多個化學(xué)反應(yīng)制造的化學(xué)化合物或分子。因此，類似物可以是具有與etg的結(jié)構(gòu)相似的結(jié)構(gòu)或基于etg骨架但是在某些組分或結(jié)構(gòu)組成方面與其不同的化合物，其在代謝上可以具有相似或相反的作用。根據(jù)本發(fā)明的etg的類似物或衍生物可以用于識別類似物和etg二者的抗體競爭結(jié)合。此外，類似物可以包括經(jīng)由接頭基團(tuán)與etg偶聯(lián)的操作部分。

如在本文中所使用的，術(shù)語“抗體”意指多克隆和/或單克隆抗體和相關(guān)的抗原識別單元，如在本領(lǐng)域中已知的，包括免疫球蛋白分子的片段和衍生物(例如，如在本領(lǐng)域中已知的，可變區(qū)、恒定區(qū)或連接區(qū)，重鏈和/或輕鏈，cdr1、2和/或3等中的一個或多個，以及其融合蛋白，例如，peg化的、綴合的等)。可以使用任何已知的方法，例如從免疫的動物(例如，小鼠、大鼠等)的b細(xì)胞中分離并且克隆，重組方法，例如噬菌體展示、轉(zhuǎn)基因小鼠、嵌合等，其可以任選使用蛋白質(zhì)a以結(jié)合抗體和/或代替在測試條上任選使用的金標(biāo)記物。使用免疫的動物制備抗體的一種方法是：出于誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的目的以一系列注射向宿主動物施用通常與佐劑如弗氏佐劑(freund'sadjuvant)組合的靶標(biāo)分析物的免疫原性衍生物，并且之后從動物的脾或血液中分離并且克隆產(chǎn)生抗體的b細(xì)胞。這樣的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。用于制備單克隆抗體的方法首先由kohler和milstein描述(nature,vol.256,pp495-497,1975；整體結(jié)合在本文中)并且自從該出版物出現(xiàn)已經(jīng)改進(jìn)數(shù)次。對于雜交瘤技術(shù)來說，讀者通常參考美國專利號4,491,632；4,472,500；和4,444,887；和酶學(xué)中的方法(methodsinenzymology),73b:3(1981)；其各自整體結(jié)合在本文中。因為具體方法不是至關(guān)重要的，任何證實的方法均可以用于使用如在本文中所描述的免疫原制備抗體，其針對所需性能進(jìn)行選擇，所述性能例如特異性、親和力、結(jié)合速率、解離速率、kd等。如在本文中所使用的，術(shù)語“抗體”意指響應(yīng)體內(nèi)的外源分子的存在而產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。它們特征可以在于它們結(jié)合抗原和結(jié)合免疫系統(tǒng)的專門細(xì)胞或蛋白質(zhì)二者的能力。例如，抗體分為五類，igg、igm、iga、ige、和igd，并且是由漿細(xì)胞產(chǎn)生的免疫球蛋白。

如在本文中所使用的，術(shù)語“載體”、“免疫原性部分”、或“免疫原性載體”意指免疫原性物質(zhì)，通常為可以與半抗原偶聯(lián)的蛋白質(zhì)。與半抗原偶聯(lián)的免疫原性部分可以誘導(dǎo)免疫應(yīng)答并且誘發(fā)可以與半抗原特異性結(jié)合的抗體的產(chǎn)生。免疫原性部分是包括被識別為外來物質(zhì)并且誘發(fā)來自宿主的免疫應(yīng)答的蛋白質(zhì)、多肽、糖蛋白、復(fù)雜多糖、粒子、核酸、多核苷酸等的操作部分。多糖的實例是淀粉、糖原、纖維素、糖膠如阿拉伯膠、瓊脂等。多糖還可以含有聚(氨基酸)殘基和/或脂質(zhì)殘基。目前使用的最常用的載體蛋白質(zhì)中的一些是鑰孔蟲戚血藍(lán)蛋白(keyholelimpethemocyanin，“klh”，mw450,000至13,000,000)、卵清蛋白、牛γ-球蛋白(“bgg”)、和牛血清白蛋白(“bsa”，mw67,000)。

如在本文中所使用的，術(shù)語“表位”意在限定抗原與抗體相互作用的區(qū)域。因此，作為抗原的分子或其他物質(zhì)可以包括至少一個具有抗體活性的表位。這可以使得抗原具有被相同或不同抗體識別的多個表位。此外，表位不是任何具體結(jié)構(gòu)的固有性質(zhì)，而是可以被定義為與抗體相互作用的結(jié)合位點。

如在本文中所使用的，術(shù)語“半抗原”意指部分或不完全抗原。它們是不含蛋白質(zhì)的物質(zhì)，大多數(shù)是低分子量物質(zhì)，其不能刺激抗體形成，但是與抗體反應(yīng)，所述抗體通過將半抗原與高分子量載體偶聯(lián)并且之后將偶聯(lián)產(chǎn)物(即免疫原)注入至人或其他動物受試者中而形成。

如在本文中所使用的，術(shù)語“免疫測定”或“免疫診斷”意指利用抗原和抗體之間的結(jié)合從而確定和/或量化生物樣品中的特異性抗原或特異性抗體中的至少一種的技術(shù)。免疫測定的實例可以包括以下：(1)抗體捕獲測定；(2)抗原捕獲測定；(3)雙抗體夾心測定；和(4)可檢測的抗原-抗體相互作用。此外，考慮了將會開發(fā)新型免疫測定并且其將能夠采用本發(fā)明的類似物和抗體。

如在本文中所使用的，術(shù)語“標(biāo)記物”、“檢測分子”、或“示蹤物”意指產(chǎn)生或可以被誘導(dǎo)而產(chǎn)生可檢測信號的任何分子。標(biāo)記物可以與分析物、免疫原、抗體或者與另一個分子如受體或與受體結(jié)合的分子如配體直接或者經(jīng)由接頭綴合。標(biāo)記物、檢測分子、或示蹤物的非限制性實例包括放射性同位素、酶、酶片段、酶底物、酶抑制劑、輔酶、催化劑、熒光團(tuán)、染料、化學(xué)發(fā)光劑(chemiluminescer)、發(fā)光劑(luminescer)、敏化劑、非磁性或磁性粒子、固體支持物、脂質(zhì)體、配體、受體、半抗原放射性同位素等。如在本文中所描述的，還可以通過在本領(lǐng)域內(nèi)公知的方法將類似物與各種標(biāo)記物偶聯(lián)以提供可以以各種免疫測定形式使用的各種試劑。為了檢測免疫測定的結(jié)果，可以將檢測分子如熒光團(tuán)，例如熒光素、放射性標(biāo)記物、或化學(xué)發(fā)光基團(tuán)與類似物偶聯(lián)以產(chǎn)生示蹤物。

如在本文中所使用的術(shù)語“操作部分”意指經(jīng)由接頭基團(tuán)與etg偶聯(lián)的分子或大分子。此外，操作部分為etg提供操作功能以用于準(zhǔn)備或進(jìn)行免疫診斷測定。操作基團(tuán)可以包括免疫原性部分、抗原部分、示蹤物部分等。通常，操作基團(tuán)在以下提供的化學(xué)式中被表示為“z”。

如在本文中所使用的，術(shù)語“樣品”或“生物樣品”意指來自包括人在內(nèi)的生物的任何量的物質(zhì)。這樣的物質(zhì)包括，但不限于血液、血清、尿液、眼淚、細(xì)胞、器官、組織、和毛發(fā)。

此外，在本文中用于描述本發(fā)明的術(shù)語可以解釋為使用前述定義和/或在本領(lǐng)域內(nèi)公知的定義。因此，前述術(shù)語意在描述本發(fā)明并且并非意在限制。

如在本文中進(jìn)一步描述的，和/或如在本領(lǐng)域中已知的，本公開通常涉及制備、提供和/或使用便攜式側(cè)向流動測試條系統(tǒng)、裝置、或方法的方法，唾液或體液側(cè)向流動測試條系統(tǒng)、裝置或方法，任選的檢測盒、系統(tǒng)、裝置、和/或系統(tǒng)任選使用一個或多個壓制(press)制造方法。

如在本文中所描述的，任選利用在本領(lǐng)域中已知的，已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)，設(shè)計、含量、組分、方向、壓縮、粘合劑、塑料、輥系統(tǒng)和方法、接觸、液體接觸、形狀、尺寸、規(guī)格、孔、切割、狹縫、覆蓋物、通風(fēng)、時機(jī)、對照中的一個或多個方面，和/或材料、組分、制造方法和結(jié)構(gòu)的其他方面為測試帶提供了意外的、協(xié)同的、反向教導(dǎo)的(taughtawayfrom)、有利的、更低成本的、更準(zhǔn)確的、更加可重復(fù)的、更一致的結(jié)果，提供了精確的體積控制和/或準(zhǔn)確性，以更低的成本和/或更快的制造提供了更加可重復(fù)且準(zhǔn)確的結(jié)果。

本發(fā)明的非限制性的任選的實施方案基于如在本文中所描述的和在本領(lǐng)域中已知的改進(jìn)的測試帶和制造方法的發(fā)現(xiàn)和改造。已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)或者反向教導(dǎo)了(包括但不限于)以下中的一個或多個作為非限制性實例：

毛細(xì)管力驅(qū)動的-已經(jīng)發(fā)現(xiàn)毛細(xì)管力驅(qū)動的遷移受打開或關(guān)閉可以使用如在本文中所描述的新型方法結(jié)合在本領(lǐng)域中已知的那些制造和控制的外部通風(fēng)口中的一個或多個控制。因為隨著液體流入因此置換密封腔中的空氣，關(guān)閉的通風(fēng)口將會引起空氣壓力在裝置中積累，打開外部通風(fēng)口釋放了這種壓力，使得流動能夠繼續(xù)進(jìn)行，同時可以通過在根據(jù)需要停止樣品液體流動的位置和校準(zhǔn)的位置通風(fēng)口實現(xiàn)自動關(guān)閉，以提供準(zhǔn)確性、一致性、預(yù)校準(zhǔn)、更快的制造、或更廉價的制造中的一個或多個；可以采用可溶解的膜以使流動停止，直到膜溶解，以提供準(zhǔn)確性、一致性、預(yù)校準(zhǔn)、更快的制造、或更廉價的制造中的一個或多個。作為非限制性實例，可以設(shè)計和/或制造這樣的通風(fēng)口以在潤濕時關(guān)閉空氣通道，因為在區(qū)室內(nèi)由毛細(xì)管力驅(qū)動的液體流動生成的空氣壓力足夠低從而不足以迫使空氣通過潤濕的材料，其中這可以用于在僅由液體向閥移動的流量和流入距離確定的時間時被動且自動地使流動停止?？梢匀芜x使用這樣的特征作為液體控制的停止或開始開關(guān)。

被動體積控制：毛細(xì)管驅(qū)動的填充可以由針對水性材料展現(xiàn)出毛細(xì)管力的材料的尺寸控制；可以通過材料所在的區(qū)室的高度非常嚴(yán)格地控制材料的體積，因為這種層壓組合件具有非常精確的垂直維數(shù)(dimensionality)，例如在0.1-5％變化中的至少一個內(nèi)；當(dāng)材料充滿液體時流動停止；材料被疏水性材料包圍以確保在支持毛細(xì)管力驅(qū)動的流動的材料外部存在流動。

材料之間的液體接觸可以通過在不透液體(liquidtight)的層壓層放置孔而不是用于側(cè)向流動快速測試帶的典型重疊途徑實現(xiàn)，以得到更精確的液體轉(zhuǎn)移體積。當(dāng)引導(dǎo)流動以從位于第二輸送材料下方的輸送材料移動并且通過層壓層中的一個的孔將這兩種材料連接時，這確保了所有流動由毛細(xì)管力而不是由液體頭部壓力驅(qū)動。與將測試條浸漬在液體中相反，可以使液體在非常精確的位置進(jìn)入輸送材料。

標(biāo)記可以針對組合裝置內(nèi)的重要組件對準(zhǔn)。這明顯地使對準(zhǔn)誤差(registrationerror)最小化。

可以將具有親水性表面的開放空間區(qū)室設(shè)計到裝置中。這些基本上是毛細(xì)管。這些空間從樣品施加點填充至最遠(yuǎn)端部。當(dāng)測試條或其他液體組分位于該通道的遠(yuǎn)端時，該通道充當(dāng)液體計量裝置，因此確保檢測過程直到通道充滿并且具有足夠樣品體積以完成檢測過程才開始。

液體收集和/或檢測裝置的任選的實施方案可以任選通過由對于規(guī)定吸收材料來說天然的毛細(xì)管力驅(qū)動的吸收來從被測試的人員收集液體，其中當(dāng)裝置充滿或具有足夠液體以進(jìn)行所選擇的測試時，所述裝置可以任選具有改變顏色的指示物或者提供視覺、機(jī)械、或電指示物。這種指示物還可以充當(dāng)用于化學(xué)調(diào)節(jié)液體的被動計時器，因為干燥化學(xué)品的溶解和/或這些化學(xué)品對液體的組分的作用不是瞬間的過程和/或可能會需要一些時間以最佳地調(diào)節(jié)液體。與監(jiān)督檢測執(zhí)行或提供該過程的液體調(diào)節(jié)部分的時機(jī)的人員相反，可以任選包括這種功能作為檢測裝置本身的特征。作為非限制性實例，可以通過改變遷移的距離或支持遷移的材料來改變該時機(jī)以到達(dá)用于調(diào)節(jié)的最佳時間。

樣品進(jìn)入控制和準(zhǔn)備、流動控制、和通風(fēng)。如在非限制性的任選的實施方案中提供的，檢測裝置的特征是，可以任選直到已經(jīng)經(jīng)過了足夠的溫育時間和/或從裝置移除標(biāo)記物或貼紙才將未調(diào)節(jié)的液體引入至側(cè)向流動測試帶。在裝置填充或收集液體時，液體可以進(jìn)入含有調(diào)節(jié)化學(xué)品和/或緩沖液的區(qū)域。檢測裝置可以任選含有一個或多個基于毛細(xì)管力的和/或成形的區(qū)室，其可以任選為當(dāng)將液體引入至裝置時功能上相對于外部環(huán)境不透氣的，任選地除非加入、提供、或激活通風(fēng)口，如將通風(fēng)孔設(shè)置在裝置中，其可以任選通過液體移動至裝置中的預(yù)定位置而關(guān)閉。為了液體任選流動至在每個區(qū)室中包含的材料中，可以任選存在通向外部的通風(fēng)口以允許空氣被進(jìn)入的液體置換。如果不存在通風(fēng)口，液體可以任選不僅通過毛細(xì)管力進(jìn)入?yún)^(qū)室。通過在一個或多個含有稍后的流動測試帶的腔的通風(fēng)口上放置可移除貼紙，用戶可以任選控制液體在什么時候進(jìn)入該腔。在一個實施方案中，可以任選僅當(dāng)裝置顯示已經(jīng)收集足夠液體時和/或由于任選設(shè)計到填充指示物中的預(yù)設(shè)被動時機(jī)方面而移除覆蓋測試條腔的通風(fēng)口的檢測引發(fā)貼紙，此時為了調(diào)節(jié)液體已經(jīng)經(jīng)過了足夠的時間，所述液體在填充指示物顯示為“完全”之前與調(diào)節(jié)化學(xué)品接觸和/或之后將會處于用于側(cè)向流動檢測的最佳狀態(tài)。

非限制性的任選的實施方案的任選的功能可以包括下列各項中的一個或多個：

1.體液的收集和/或確保檢測裝置的內(nèi)部區(qū)室的填充僅通過由液體與裝置內(nèi)結(jié)合的輸送材料的相互作用產(chǎn)生的毛細(xì)管力進(jìn)行。沒有測試受試者產(chǎn)生真空效應(yīng)的壓力。

2.確保液體對于液體調(diào)節(jié)化學(xué)品花費設(shè)定的或最少的時間。

3.填充指示物可以任選用于兩種目的。

a.表示已經(jīng)收集了足夠的液體以確保裝置具有足夠的樣品以完成檢測。

i.填充所需的時間任選并且不直接與指示物表示充滿狀態(tài)所花費的時間相關(guān)。可以人為地延長觀察到的填充時間以確保已經(jīng)將液體與調(diào)節(jié)化學(xué)品溫育足夠量的時間。這可以任選通過填充指示區(qū)域中材料的選擇來實現(xiàn)，因為這些可以基于側(cè)向流量選擇，因此影響觀察到的填充時間。這還可以任選通過僅延長填充指示物區(qū)域中液體的遷移距離來實現(xiàn)以改變觀察到的填充時間。

4.任選的可移除標(biāo)記物或結(jié)合的通風(fēng)孔當(dāng)存在時可以防止液體流動至稍后的流動測試條上和/或當(dāng)移除打開或關(guān)閉時允許液體流動至側(cè)向流動測試帶上。

a.控制側(cè)向流動檢測裝置中的液體流量。層壓結(jié)構(gòu)的精確性質(zhì)可以向試劑測試條或側(cè)向流動測試條的墊施加非常精確的壓力，因此將墊稍微壓縮但是限制壓縮的量和/或延緩和/或到側(cè)向流動測試條中的流量，提供更多的時間和/或指示物反應(yīng)進(jìn)行的優(yōu)化。

b.歸因于試劑墊的可變密度，在大量測試帶內(nèi)的流量可以是可變的。任選在帶或墊中使用表面活性劑，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)利用有限的和/或精確的量的體積壓縮將這些墊壓縮至相同的高度，以提高了流量一致性。

測試條可以任選分析體液或組織中的其etg乙醇代謝物的存在或量，以確定所述量是否高于預(yù)選擇的閾值或濃度，或者定量地或定性地提供結(jié)果的讀取。

術(shù)語“組件”可以指，但不限于指定的選擇的區(qū)域，如邊緣、拐角、側(cè)邊等；結(jié)構(gòu)構(gòu)件，如條、墊、層或面板、材料層等。

在整個說明書中，術(shù)語“放置”和表達(dá)方式“置于……上”、“放置在……上”、“放置在……中”、“放置在……之間”及其變化形式(例如，在詞語“放置”和“上”之間插入被“放置”制品的描述)意在表示一個元件可以與另一個元件構(gòu)成整體，或者一個元件可以是與另一個元件結(jié)合或與另一個元件一起放置或放置在另一個元件附近的單獨的結(jié)構(gòu)。因此，可以直接或間接將“放置”在吸收性服裝的元件上的組件形成或施加至該元件的表面，在多個層元件的層之間形成或施加，形成或施加至與該元件一起放置或放置在該元件附近的測試條，在元件或另一個測試條的層中形成或施加，或其他變體或它們的組合。

測試條的多種部分可以彼此附著或彼此相連以形成在測試條的使用壽命期間優(yōu)選維持其形狀的結(jié)構(gòu)。如在本文中所使用的，術(shù)語“附著”、“連接”、“相連”和相似術(shù)語包括其中通過將第一部分直接附加至第二部分、通過將第一部分經(jīng)由中間構(gòu)件間接連接至第二部分、和通過借助其他部分之間的捕獲部分固定多個部分的相對位置來將第一部分直接連接至第二部分的構(gòu)造。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，多個方法或方法的組合可以用于將測試條的相應(yīng)部分彼此牢固地連接。

乙基葡萄糖醛酸苷免疫原

實施用于檢測小分子如etg的免疫測定可能會是一個挑戰(zhàn)。這是因為這樣的小分子可能通常缺少抗原性，使其難以產(chǎn)生抗體。對于缺乏免疫原性的etg來說尤其是有問題的。為了增加免疫原性，可以將較大的抗原化合物(包括但不限于bsa、卵清蛋白、klh等)與etg偶聯(lián)。此外，免疫測定中etg的檢測通常需要使用與抗體、etg、或etg類似物綴合的可檢測示蹤物。

因此，將免疫原性操作部分與etg偶聯(lián)可以提供與etg充分免疫學(xué)上相似的etg免疫原，從而由免疫原誘導(dǎo)的抗體可以與免疫原、etg、和其他etg類似物反應(yīng)。因此，基于etg的免疫原也被認(rèn)為是etg類似物。包括免疫原性載體的根據(jù)本發(fā)明的etg類似物可以能夠誘導(dǎo)抗etg抗體如單克隆和多克隆抗體的產(chǎn)生。因此，使用獨特etg免疫原生成的抗體可以與etg和其他etg類似物相互作用和/或結(jié)合。這些抗體、免疫原、抗原、和類似物可以用于準(zhǔn)備和進(jìn)行用于檢測生物樣品中etg的免疫測定。

可以通過將etg與免疫原或抗原載體蛋白經(jīng)由在etg或etg類似物的糖基(glucyl)環(huán)的1-碳或5-碳位置的接頭偶聯(lián)來制造免疫原。此外，已經(jīng)在一些實例中發(fā)現(xiàn)，較長的接頭可以增加所產(chǎn)生的抗體的親和力。部分認(rèn)為，而不被約束于此，較長的接頭可以允許更多的對抗原的可達(dá)性(accessibility)。此外，歸因于暴露的抗原或表位的增加的表面積，還可以增加親合力，在本領(lǐng)域中提供了改進(jìn)。

免疫原部分可以包括多種蛋白質(zhì)或多肽，其可以起免疫原載體的作用。這些類型的多肽包括白蛋白、血清蛋白、球蛋白、晶狀體蛋白、脂蛋白、和其部分。說明性的蛋白質(zhì)包括bsa、klh、卵清蛋白、牛γ-球蛋白(“bgg”)等。備選地，可以使用合成多肽。此外，免疫原部分還可以是多糖，其為高分子量聚合物。多糖的實例是淀粉、糖原、纖維素、糖膠如阿拉伯膠、瓊脂等。此外，免疫原部分可以是多核苷酸，如dna或rna。多核苷酸可以是修飾的或未修飾的，并且包含任何數(shù)量的核酸，只要其提供載體和/或免疫原功能即可。多糖還可以含有或連接至多肽殘基、多核苷酸殘基、和/或脂質(zhì)殘基。此外，免疫原部分可以單獨是多核苷酸或與上述多肽或多糖中的一種綴合。

免疫原部分或載體還可以是粒子或微粒。免疫原粒子通常為至少約0.02微米(μm)且不大于約100μm，并且通常直徑為約0.05μm至10μm。粒子可以是有機(jī)的或無機(jī)的，可溶脹的或不可溶脹的，和/或多孔的或無孔的。任選地，免疫原粒子可以具有接近水的密度，通常約0.5至1.5g/ml，并且包含可以為透明、部分透明、或不透明的材料。免疫原粒子可以是生物材料如細(xì)胞和微生物，包括非限制性實例如紅細(xì)胞、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、鏈球菌屬(streptococcus)、金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)、大腸桿菌(e.coli)、和病毒粒子。粒子還可以包含有機(jī)和無機(jī)聚合物、脂質(zhì)體、膠乳、磷脂囊泡、脂質(zhì)體、陽離子脂質(zhì)體、陰離子脂質(zhì)體、脂蛋白、脂質(zhì)聚合物等。

本發(fā)明的任選的實施方案可以包括一種或多種用于產(chǎn)生etg抗體的etg免疫原，其為在用于準(zhǔn)備和/或?qū)嵤┯糜跈z測樣品中etg的免疫測定的過程中使用的etg類似物。可以根據(jù)式(i)制備這樣的etg類似物：–[-etg-l-x-y-]n-z。根據(jù)該式，etg類似物可以表征如下：n可以大于或等于1和/或小于約1000；l可以是基團(tuán)o、s、co、coo、so2、ch2、nh、nh(ch2)2nh、conh、ph、nhch2ph等中的至少一種；x可以是l和y之間的鍵、芳族基、或脂族基中的至少一種；y可以選自由下列各項組成的組：脂族、醇、胺、酰胺、羧酸、醛、酯、活化酯、脂族酯、亞胺酯、異氰酸酯、異硫氰酸酯、酸酐、硫醇、硫代內(nèi)酯、重氮、馬來酰亞胺基、nhs、o--nhs、和與操作部分偶聯(lián)的源自其的接頭；并且z可以是操作部分。

在非限制性的實施方案中，x可以是l和y之間的鍵、具有1至2個環(huán)的取代的或未取代的芳族或脂族基、或具有1至20個碳和/或雜鏈原子的飽和的或不飽和的、取代的或未取代的直鏈或支鏈中的至少一種。此外，當(dāng)使用時，操作部分z可以選自由下列各項組成的組：蛋白質(zhì)、脂蛋白、糖蛋白、多肽、聚(氨基酸)、多糖、核酸、多核苷酸、磷壁酸、可檢測標(biāo)記物、放射性同位素、酶、酶片段、酶供體片段、酶受體片段、酶底物、酶抑制劑、輔酶、熒光部分、磷光部分、反斯托克斯向上調(diào)節(jié)(anti-stokesup-regulating)部分、化學(xué)發(fā)光部分、發(fā)光部分、染料、敏化劑、粒子、微粒、磁性粒子、固體支持物、脂質(zhì)體、配體、受體、半抗原放射性同位素、白蛋白、人血清白蛋白、牛血清白蛋白、鑰孔蟲戚血藍(lán)蛋白、以及它們的組合。在類似物是免疫原的情況下，z可以是以下中的至少一種：n為約1至約35的人血清白蛋白；n為約1至約35的牛血清白蛋白；或n為約1至約500的鑰孔蟲戚血藍(lán)蛋白。在類似物是用于檢測etg的免疫測定試劑的情況下，z可以是可檢測標(biāo)記物。例如，可檢測標(biāo)記物可以是酶(例如，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶“g6pdh”)、酶片段、或酶供體片段(例如，β-半乳糖苷酶供體片段ed28)。

因此、根據(jù)本發(fā)明制備的免疫原可以用于產(chǎn)生可以具有對etg以及etg類似物的親和力的抗體。

抗etg抗體

在非限制性的實施方案中，可以在用于制備單克隆和/或多克隆抗體的方法中使用根據(jù)本發(fā)明的etg類似物系免疫原。因此，抗體可以由基于etg的免疫原產(chǎn)生并且與etg相互作用和/或結(jié)合。此外，利用免疫原制備抗體的方法是在本領(lǐng)域內(nèi)公知的?？梢栽谟糜谂cetg相互作用和/或結(jié)合的單克隆和/或多克隆抗體的篩選中使用免疫原。

例如，以用于得到抗體的公知方法可以與基于etg的免疫原一起使用從而制備抗etg抗體。因此，可以得到基于etg或etg類似物的免疫原并且將其與免疫原制劑組合。簡而言之，將約0.5ml的免疫原組合物與約0.5ml的完全弗氏佐劑混合；然而，可以使用其他量的免疫原和/或佐劑。之后可以將免疫原制劑施用于產(chǎn)生抗體的受試者，其可以是大鼠、小鼠、豬、兔、鳥、綿羊、和/或其他動物，但是優(yōu)選哺乳動物。施用可以經(jīng)由尾部靜脈注射、皮下注射、靜脈內(nèi)注射、或其他公知的注射位置。隨后，可以將免疫原增強(qiáng)劑施用于接受了最初施用的動物，其中增強(qiáng)劑可以包括與最初制劑基本上相同的成分并且可以以預(yù)定間隔施用。例如，最初施用之后可以是隨后的每周一次或其他較長或較短間隔的增強(qiáng)劑。在至少最初施用之后，以及任選在隨后的增強(qiáng)劑之后，可以收集由動物產(chǎn)生的抗etg抗體?？梢酝ㄟ^從之前施用了免疫原的動物中獲得血液、血清、血漿、或其他生物樣品來收集抗體。任選地，之后可以按照在本領(lǐng)域內(nèi)公知的來處理含抗體的組合物，其中這樣的處理可以包括以適用于進(jìn)行免疫診斷測定的形式放置抗體的技術(shù)。備選地，該處理可以包括利用elisa通過公知和廣泛接受的技術(shù)來篩選抗體。此外，可以使用該處理獲得如在本領(lǐng)域內(nèi)公知的多克隆抗體。

測試條特征和組分：根據(jù)本發(fā)明制造的非限制性的任選的實施方案的側(cè)向流動檢測裝置可以具有任何形狀和規(guī)格，如正方形、圓形、橢圓形、多邊形、六邊形等中的一種或組合，但是優(yōu)選是矩形測試條。

根據(jù)本發(fā)明制造的非限制性的任選的實施方案的測試裝置的測試條可以包含為包含基板，其至少部分為任何吸水或非吸水材料等，如硝酸纖維素、尼龍、紙、玻璃纖維、滌綸、聚酯、聚乙烯、烯烴或其他鑄型或熱塑材料，如聚氯乙烯、聚乙酸乙烯酯、乙酸乙烯酯和氯乙烯的共聚物、聚酰胺、聚碳酸酯、聚苯乙烯等。在優(yōu)選的實施方案中，至少一種測試條材料是具有至少約1微米、更優(yōu)選大于約5微米或約8-12微米的孔徑的硝酸纖維素。具有多至大約12微米的標(biāo)稱孔徑的適合的硝酸纖維素片材可商購自例如schleicher和schuellgmbh。

在上下文中與非限制性的任選的實施方案一起使用的測試條可以任選包括標(biāo)記，其可以包括用于使用測試條進(jìn)行的測試的符號。這樣的標(biāo)記可以使用在本領(lǐng)域中已知的方法印刷在測試條材料上。備選地，標(biāo)記可以是在附著至測試條(如通過粘合劑)的其他薄構(gòu)件如塑料或紙上。

測試條可以包含一種或多種材料。如果測試條包含多于一種材料，所述一種或多種材料優(yōu)選是液體連通的。測試條的一種材料可以覆蓋在測試條的另一種材料上，例如覆蓋在硝酸纖維素上的濾紙。備選地或此外，測試條可以包括包含一種或多種材料的區(qū)域和隨后的包含一種或多種不同材料的區(qū)域。在這種情況下，區(qū)域是液體連通的并且彼此可以或可以不部分重疊。

測試條的一種或多種材料可以與例如在薄層層析中發(fā)現(xiàn)的支持物或固體表面結(jié)合，并且可以具有作為整體部分或液體接觸的吸收墊。例如，測試條可以包含例如利用支持片材如塑料片材“支撐”的硝酸纖維素片材以增加其操作強(qiáng)度。這可以通過在支撐材料的片材上形成硝酸纖維素的薄層來制造。當(dāng)以這種方式支撐時，硝酸纖維素的實際孔徑將會傾向于低于相應(yīng)的未被支撐的材料的孔徑。備選地，硝酸纖維素的預(yù)制片材和/或一種或多種其他吸水或非吸水材料可以附著至至少一種支持片材，如由聚合物制成的片材(參見，例如，us5,656,503，通過引用整體結(jié)合)。支持片材可以是透明的、半透明的或不透明的。在其中支持物片材為透明的非限制性的任選的實施方案的方面中，支持片材優(yōu)選為不透水的，但是可以是耐水的或可透水的。在非限制性的任選的實施方案中，可以通過包含透明材料如玻璃、塑料、或mylar(但是優(yōu)選是耐斷裂的)的窗口觀察測試條。

在以下討論中，將通過說明而不是限制的方式描述測試條材料的條。

通常，非限制性的任選的實施方案的測試條包括樣品施加區(qū)域和測試結(jié)果確定區(qū)域。測試結(jié)果確定區(qū)域可以包括一個或多個etg乙醇代謝物檢測區(qū)域和一個或多個對照區(qū)域中的一個或二者。任選地，測試條可以包括試劑區(qū)域。

可以將在測試條的測試結(jié)果確定區(qū)域中的一個或多個特異性結(jié)合成分浸漬在作為測試結(jié)果確定區(qū)域中的吸水或非吸水材料的基板的整個厚度中(例如，可以將針對一種或多種藥物、化合物、或代謝物的特異性結(jié)合成分浸漬在一個或多個etg乙醇代謝物檢測區(qū)域中的測試條材料的整個厚度中，并且可以將針對一種或多種etg乙醇代謝物的特異性結(jié)合成分浸漬在一個或多個對照區(qū)域中的測試條材料的整個厚度中，但是并非必須是這樣的情況)。這樣的浸漬可以提高固定的試劑可以捕獲遷移樣品中存在的etg乙醇代謝物的程度。備選地，可以將包括信號產(chǎn)生系統(tǒng)的特異性結(jié)合成分和組分的試劑涂覆至吸水或非吸水材料的表面?？梢允謩踊蛲ㄟ^機(jī)器完成將特異性結(jié)合成分浸漬至測試條材料中或?qū)⑻禺愋越Y(jié)合成分涂覆至測試條材料上。

硝酸纖維素具有在測試結(jié)果確定區(qū)域中的特異性結(jié)合成分可以在沒有前化學(xué)處理的情況下固定的優(yōu)點。如果多孔固相材料包含紙，例如，可以通過使用例如cnbr、羰基二咪唑、或三氟乙烷磺酰氯(tresylchloride)的化學(xué)偶聯(lián)來進(jìn)行在測試結(jié)果確定區(qū)域中的抗體的固定。

在將特異性結(jié)合成分施加至測試結(jié)果確定區(qū)域之后，應(yīng)當(dāng)處理多孔固相材料的其余部分以阻斷其他地方的任何剩余結(jié)合位點?？梢酝ㄟ^用蛋白質(zhì)(例如牛血清白蛋白或乳汁蛋白)或用聚乙烯醇或乙醇胺或這些試劑的任何組合處理來實現(xiàn)阻斷。用于試劑區(qū)域的標(biāo)記的試劑之后可以被分配至干燥載體上并且當(dāng)處于潤濕狀態(tài)時將會變得在載體中可移動。在這些多個工藝步驟(敏化、未標(biāo)記的試劑的施加、標(biāo)記的試劑的阻斷和施加)中的每一個之間，應(yīng)當(dāng)將多孔固相材料干燥。

為了當(dāng)用樣品將測試條潤濕時有助于標(biāo)記的試劑的自由遷移率，可以將標(biāo)記的試劑涂覆至吸水或非吸水材料作為表面層，而不是浸漬在吸水材料的厚度中。這可以使吸水或非吸水材料和標(biāo)記的試劑之間的相互作用最小化。例如，可以在要施加標(biāo)記的試劑的區(qū)域中用上釉材料將吸水或非吸水材料預(yù)處理。例如，可以通過將例如蔗糖或乳糖的糖或纖維素水溶液沉積在相關(guān)部分的載體上并且干燥來實現(xiàn)上釉(u.s.5,656,503)。之后可以將標(biāo)記的試劑涂覆至上釉部分。載體材料的其余部分不應(yīng)上釉。

可以以各種方式將試劑涂覆至載體材料。對于將液體試劑施加至載體來說，之前已經(jīng)使用或知曉了多種“打印”技術(shù)，例如微注射器、使用計量泵的筆、直接打印和噴墨打印，并且在本發(fā)明的上下文中可以使用這些技術(shù)中的任何一種。為了有助于制造，可以用試劑處理載體(例如片材)并且之后細(xì)分為一個或多個更小的部分、層、組分、層壓體、或其他結(jié)構(gòu)(例如各自包含所需含試劑區(qū)域的小窄條)以提供多個相同的載體單元。

在通過信號產(chǎn)生系統(tǒng)，如通過一種或多種與分析物特異性反應(yīng)的酶檢測etg的實施方案中，信號產(chǎn)生系統(tǒng)的一種或多種組分可以以與如上所述的特異性結(jié)合成分結(jié)合測試條材料相同的方式與測試條材料的etg檢測區(qū)域結(jié)合。備選地或此外，可以將在測試條的樣品施加區(qū)域、試劑區(qū)域、或etg檢測區(qū)域中包含或者在整個測試條中包含的信號產(chǎn)生系統(tǒng)的組分浸漬至測試條的一種或多種材料中。這可以通過表面施加這樣的組分的溶液或者通過將一種或多種測試條材料浸漬至這樣的組分的溶液中來實現(xiàn)。在一次或多次施用或一次或多次浸漬之后，將測試條材料干燥。備選地或此外，如對于標(biāo)記的試劑所描述的，可以將在測試條的樣品施加區(qū)域、試劑區(qū)域、或etg檢測區(qū)域中包含或者在整個測試條中包含的信號產(chǎn)生系統(tǒng)的組分涂覆至測試條的一種或多種測試條材料的表面。

樣品施加區(qū)域

樣品施加區(qū)域是測試條施加樣品，如液體樣品，如生物液體樣品如血液、血清、唾液、或尿液、或來源于生物樣品的液體，如喉嚨或生殖道拭子(swab)的區(qū)域。樣品施加區(qū)域可以包括吸水或非吸水材料，如濾紙、硝酸纖維素、玻璃纖維、聚酯或其他適當(dāng)材料。樣品施加區(qū)域的一種或多種材料可以發(fā)揮過濾功能，從而防止大粒子或細(xì)胞通過測試條移動。樣品施加區(qū)域可以與測試條的包括測試結(jié)果確定區(qū)域在內(nèi)的其余部分直接或間接液體連通。直接或間接液體連通可以是，例如末端與末端連通、重疊連通、或涉及另一個元件如液體連通結(jié)構(gòu)如濾紙的重疊或末端與末端連通。

樣品施加區(qū)域或基板的其他部分還可以任選包括對于檢測和/或測試的最佳性能來說可能是必需或理想的化合物或分子。樣品施加區(qū)域或基板可以任選包括，例如，但不限于下列各項中的一種或多種：加入、預(yù)加入或后加入的緩沖液、穩(wěn)定劑、表面活性劑、鹽、還原劑、親和劑、標(biāo)記物、酶、指示物、粘結(jié)劑、標(biāo)記的試劑或特異性結(jié)合成分如與標(biāo)記物相連或連接的抗體或其活性片段等，其可以使用本領(lǐng)域中已知的方法制造。特異性結(jié)合成分可以結(jié)合藥物、化合物、組織、生物成分、或代謝物和/或可以結(jié)合任選的化合物等。

試劑區(qū)域

測試條還可以包括其中尤其是當(dāng)處于液體狀態(tài)時可以提供固定的(共價或非共價固定)或非固定的可用于檢測etg乙醇代謝物的試劑的試劑區(qū)域。試劑區(qū)域可以在試劑墊上，例如包含在測試條上包括的吸水或非吸水材料的單獨的基板區(qū)段，或者其可以是還包括其他區(qū)域(如etg乙醇代謝物檢測區(qū)域)的測試條的吸水或非吸水材料的區(qū)域。在非限制性的任選的實施方案的一個方面中，試劑區(qū)域或基板可以任選包括，例如，但不限于下列各項中的一種或多種：加入、預(yù)加入或后加入的緩沖液、穩(wěn)定劑、表面活性劑、鹽、還原劑、親和劑、標(biāo)記物、酶、指示物、粘結(jié)劑、標(biāo)記的試劑或特異性結(jié)合成分如與標(biāo)記物相連或連接的抗體或其活性片段等，其可以使用本領(lǐng)域中已知的方法制造。特異性結(jié)合成分可以結(jié)合藥物、化合物、組織、生物成分、或代謝物和/或可以結(jié)合任選的化合物等。

在一個實例中，試劑區(qū)域可以包括兩群以上的著色珠。一群著色珠附著至抗兔igg抗體或其活性片段并且另一群著色珠附著至抗etg乙醇代謝物抗體或其活性片段。標(biāo)記的抗兔igg抗體或抗體片段用于視覺檢測測試條的對照區(qū)域中的信號。在對照區(qū)域中的顏色信號表明樣品已經(jīng)經(jīng)過檢測區(qū)域。標(biāo)記的抗etg乙醇代謝物抗體或其片段在檢測區(qū)域中提供指示樣品中etg乙醇代謝物的存在的視覺信號。

其他優(yōu)選實施方案是使抗(濫用藥物)抗體或其活性片段與著色珠群體結(jié)合?？梢耘c在前述實例中一樣使用多于一群珠以在檢測區(qū)域中提供視覺信號和在對照區(qū)域中提供第二視覺信號。多群珠可以是相同或是不同的顏色或者可以作為顏色的混合物提供。備選地或此外，與不同抗體或抗體片段結(jié)合的不同群的珠可以用于通過在一個或多個檢測區(qū)域中產(chǎn)生一個或多個視覺信號來指示樣品中多于一種etg乙醇代謝物的存在。檢測區(qū)域或基板可以任選包括，例如，但不限于下列各項中的一種或多種：加入、預(yù)加入或后加入的緩沖液、穩(wěn)定劑、表面活性劑、鹽、還原劑、親和劑、標(biāo)記物、酶、指示物、粘結(jié)劑、標(biāo)記的試劑或特異性結(jié)合成分如與標(biāo)記物相連或連接的抗體或其活性片段等，其可以使用本領(lǐng)域中已知的方法制造。特異性結(jié)合成分可以結(jié)合藥物、化合物、組織、生物成分、或代謝物和/或可以結(jié)合任選的化合物等。

優(yōu)選標(biāo)記物是珠如金屬粒子，如膠體金或膠乳金、或聚合物珠，如著色珠、或炭黑粒子。其他標(biāo)記物包括，例如酶、發(fā)色團(tuán)或熒光團(tuán)，如它們是在本領(lǐng)域中、尤其是免疫測定中已知的，或以后開發(fā)的。珠群體以粉末狀形式設(shè)置在可以包括吸水材料如濾紙、玻璃纖維、尼龍、或硝酸纖維素的試劑區(qū)域上。這些試劑與試劑區(qū)域可逆地結(jié)合，因為當(dāng)與液體如沿著測試條經(jīng)過的液體樣品接觸放置時它們可以移動。

在非限制性的任選的實施方案的另一個實施方案中，試劑區(qū)域可以包括信號產(chǎn)生系統(tǒng)的組分，例如，催化劑，如酶、輔因子、電子供體或受體、和/或指示物化合物。

試劑區(qū)域還可以包括對于測試的最佳性能來說可能會是必需或理想的化合物或分子，例如緩沖液(優(yōu)選干燥緩沖液或調(diào)節(jié)劑)、穩(wěn)定劑、表面活性劑、鹽、還原劑、或酶。

測試結(jié)果確定區(qū)域

測試結(jié)果確定區(qū)域包括固定的或非固定的試劑，其可以檢測被測試的etg和抗體的存在。這樣的試劑優(yōu)選處于干燥狀態(tài)并且可以在液體狀態(tài)下共價固定、非共價固定、或不固定。測試結(jié)果確定區(qū)域可以包括一個或多個etg乙醇代謝物檢測區(qū)域和一個或多個對照區(qū)域中的一個或二者。

根據(jù)具體形式和測試的etg乙醇代謝物，可以在測試結(jié)果確定區(qū)域提供多種試劑。例如，測試結(jié)果確定區(qū)域可以包括特異性結(jié)合成分如抗體、酶、酶底物、輔酶、增強(qiáng)劑、第二酶、活化劑、輔因子、抑制劑、清除劑、金屬離子等。在測試結(jié)果確定區(qū)域設(shè)置的一種或多種試劑可以與測試條材料結(jié)合。包括這樣的試劑的測試帶是在本領(lǐng)域中已知的并且可以適用于本發(fā)明的測試裝置。

在本發(fā)明的優(yōu)選方面中，測試結(jié)果確定區(qū)域的一個或多個醫(yī)學(xué)、etg乙醇代謝物檢測區(qū)域包括一個或多個固定的(共價或非共價固定的)與etg結(jié)合的特異性結(jié)合成分，其與設(shè)置在試劑區(qū)域中的與標(biāo)記物結(jié)合的特異性結(jié)合成分一樣結(jié)合。因此，在其中試劑區(qū)域含有一種或多種針對分析物的特異性結(jié)合成分的實施方案中，試劑區(qū)域和etg乙醇代謝物檢測區(qū)域的特異性結(jié)合成分應(yīng)當(dāng)與被測試的etg乙醇代謝物上的不同表位結(jié)合。例如，當(dāng)試劑區(qū)域中的標(biāo)記的特異性結(jié)合成分與etg結(jié)合時，則etg檢測區(qū)域中的固定的特異性結(jié)合成分應(yīng)當(dāng)與etg乙醇代謝物的另一個區(qū)域結(jié)合。因此，當(dāng)在樣品中存在etg時，etg將會結(jié)合標(biāo)記的抗etg乙醇抗體，其被輸送至在與固定的抗etg結(jié)合的etg檢測區(qū)域的測試結(jié)果確定區(qū)域以提供視覺讀數(shù)。

etg檢測區(qū)域可以包括當(dāng)etg乙醇代謝物存在時光學(xué)性質(zhì)(如顏色、化學(xué)發(fā)光或熒光)變化的底物。這樣的底物是在本領(lǐng)域中已知的，如，但不限于，用于過氧化物酶的1,2-苯二胺、5-氨基水楊酸、3,3',5,5'四甲基聯(lián)苯胺、或聯(lián)甲苯胺；用于堿性磷酸酶的5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯/硝基藍(lán)四唑和用于β半乳糖苷酶的5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-d-吡喃半乳糖苷、鄰硝基苯基-β-d-吡喃半乳糖苷、萘酚-as-bi-β-d-吡喃半乳糖苷、和4-甲基-傘形酮酰-β-d-吡喃半乳糖苷。

在其中通過信號產(chǎn)生系統(tǒng)檢測etg的實施方案中，信號產(chǎn)生系統(tǒng)的一種或多種組分，如酶、底物、和/或指示物可以設(shè)置在etg檢測區(qū)域中。備選地，信號產(chǎn)生系統(tǒng)的組分可以設(shè)置在測試條中的其他地方并且可以遷移至etg檢測區(qū)域中。

任選地，測試結(jié)果確定區(qū)域可以包括任選的對照區(qū)域。對照區(qū)域可以在測試結(jié)果確定區(qū)域的etg檢測區(qū)域的上游、下游、或與etg檢測區(qū)域構(gòu)成整體。在后一種情況中，當(dāng)etg乙醇代謝物和對照提供陽性反應(yīng)時，對照區(qū)域和/或etg乙醇代謝物檢測區(qū)域可以基于測定的具體形式形成標(biāo)記，如針對陽性反應(yīng)的著色條、記號、指示物、或“+”符號和針對陰性反應(yīng)的著色條、記號、指示物、“-”符號，并且對于在一個或多個測試帶上進(jìn)行的一個或多個測定來說，測定測試條或外罩或外殼還可以任選包括指示測定中的一個或多個無效的指示或指示區(qū)域作為測試或?qū)φ眨芜x作為陰性或陽性對照。

對照區(qū)域提供指示在測試條上的測試已經(jīng)正確進(jìn)行的結(jié)果。在本發(fā)明的一個優(yōu)選方面中，試劑區(qū)域包括與被測試的etg不同的已知etg乙醇代謝物結(jié)合的特異性結(jié)合成分。例如，可以在試劑區(qū)域中提供兔igg。對照區(qū)域可以包括固定(共價或非共價)抗兔igg抗體。在操作中，當(dāng)將試劑區(qū)域中的標(biāo)記的兔igg輸送至其中的測試結(jié)果確定區(qū)域和對照區(qū)域時，標(biāo)記的兔igg將會與固定的抗兔igg結(jié)合并且形成可檢測信號。

對照區(qū)域可以包括當(dāng)任選的物質(zhì)存在時光學(xué)性質(zhì)(如顏色、化學(xué)發(fā)光或熒光)變化的底物。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選方面中，測試條可以包括結(jié)果確定區(qū)域(其包括任選的etg乙醇代謝物檢測區(qū)域)和樣品摻雜對照區(qū)域。在本發(fā)明的另一個方面中，測試條可以包括結(jié)果確定區(qū)域(其任選地包括任選物)和任選的摻雜對照區(qū)域。第二測試條可以包括摻雜對照區(qū)域和任選的任選物。優(yōu)選地，這種第二測試條包括摻雜對照區(qū)域和任選物二者，但是并非必須是這樣的情況。在其中可以使用一個或多個第一測試條檢測除摻雜etg乙醇代謝物外的etg乙醇代謝物并且可以使用一個或多個第二測試條檢測摻雜分析物的情況中，測試條可以作為檢測多種藥物、化合物或代謝物的多個測試條或測試條提供。

區(qū)域的方向

測試條的多個區(qū)域，包括樣品施加區(qū)域、一個或多個試劑區(qū)域、和一個或多個測試結(jié)果確定區(qū)域(其包括一個或多個etg乙醇代謝物檢測區(qū)域并且任選包括一個或多個對照和一個或多個摻雜區(qū)域)，可以在單一的材料帶，如濾紙或硝酸纖維素上，或者可以設(shè)置在材料的單獨的部件和/或?qū)由?。不同的區(qū)域可以由相同或不同的材料或材料的組合制成，但是優(yōu)選選自吸水材料，如濾紙、玻璃纖維目和硝酸纖維素。樣品施加區(qū)域優(yōu)選包括玻璃纖維、聚酯或濾紙，一個或多個試劑區(qū)域優(yōu)選包括玻璃纖維、聚酯或濾紙，并且測試結(jié)果確定區(qū)域(其包括一個或多個etg乙醇代謝物檢測區(qū)域并且任選包括一個或多個對照)優(yōu)選包括硝酸纖維素。

任選地，包括液體吸收區(qū)域。液體吸收區(qū)域優(yōu)選包括吸收性紙并且用于吸收樣品中的液體以將液體從樣品施加區(qū)域經(jīng)由試劑區(qū)域和檢測區(qū)域驅(qū)動，其還可以任選包括干燥緩沖液或調(diào)節(jié)組合物。

優(yōu)選地，將區(qū)域如下排列：樣品施加區(qū)域、一個或多個試劑區(qū)域、一個或多個測試結(jié)果確定區(qū)域、一個或多個對照、一個或多個摻雜區(qū)域、和液體吸收區(qū)域。如果測試結(jié)果確定區(qū)域包括任選物，優(yōu)選其在測試結(jié)果確定區(qū)域的etg檢測區(qū)域之后。所有這些區(qū)域或它們的組合可以設(shè)置在單一材料的單一帶中。備選地，區(qū)域由不同材料制成并且以液體連通方式連接在一起。例如，不同區(qū)域可以直接或間接液體連通。在這種情況下，不同區(qū)域可以末端與末端連接以液體連通，重疊以液體連通，或者通過另一個構(gòu)件連通，這樣的相鄰材料優(yōu)選為吸水的如濾紙、玻璃纖維或硝酸纖維素。在使用連接材料中，連接材料可以從末端與末端連接的區(qū)域或包括這樣的區(qū)域的材料、不液體連通的末端與末端連接的區(qū)域或包括這樣的區(qū)域的材料、或重疊(如，但不限于從上到下)但是不液體連通的連接區(qū)域或包括這樣的區(qū)域的材料連通液體。

當(dāng)并且如果測試條包括摻雜對照區(qū)域時，摻雜對照區(qū)域可以放置在結(jié)果確定區(qū)域之前或之后。當(dāng)在這樣的測試條上的結(jié)果確定區(qū)域中存在任選的摻雜對照區(qū)域時，則摻雜對照區(qū)域優(yōu)選在對照區(qū)域之前，但是并非必須是這樣的情況。在其中測試條是用于確定摻雜etg乙醇代謝物和/或任選物的任選的測試條的非限制性的任選的實施方案中，則摻雜對照區(qū)域可以放置在對照區(qū)域之前或之后，但是優(yōu)選在對照區(qū)域之前。

檢測樣品中etg乙醇代謝物的方法

非限制性的任選的實施方案的裝置可以用于收集樣品、將樣品轉(zhuǎn)移至接收測試條樣品的區(qū)域并且任選將樣品與一種或多種試劑如干燥緩沖液或調(diào)節(jié)劑混合。之后可以在測試條內(nèi)將樣品或樣品和一種或多種試劑引導(dǎo)至測試元件以檢測樣品中的一種或多種藥物、化合物、或代謝物，優(yōu)選測試條的樣品施加區(qū)域。樣品可以是液體或膠體?？梢允┘又翜y試條的液體或流體樣品的實例可以包括血液、血清、唾液、或尿液。

為了收集樣品，可以經(jīng)由多種技術(shù)施加液體或膠體樣品，例如使用移液管、傾倒或使用滴管。備選地，可以使用樣品收集裝置收集樣品并且將樣品轉(zhuǎn)移至測試條上。樣品收集裝置可以具有不同結(jié)構(gòu)但是優(yōu)選為拭子?？梢酝ㄟ^不同實施方案例如浸漬、刷抹或拭抹使用拭子將樣品收集至拭子頭部上?？梢詫⒕哂袠悠返氖米邮┘又量梢匀芜x含有一種或多種試劑的測試條，或者將干燥緩沖液加入至樣品中。

非限制性的任選的實施方案任選提供用于使用干燥緩沖液或唾液或體液測試樣品的預(yù)調(diào)節(jié)預(yù)校準(zhǔn)/定量的側(cè)向流動藥物測試條的數(shù)字圖像捕獲和分析的便攜式藥物檢測平臺。平臺可以任選包括具有記錄包括針對一種或多種藥物、化合物、或代謝物的活性化學(xué)性質(zhì)和特異性的預(yù)校準(zhǔn)/定量的測試條的數(shù)字組件的數(shù)碼相機(jī)硬件；用于制備測試樣品的干燥緩沖液或調(diào)節(jié)介質(zhì)；用于與用戶連接的軟件，以及與數(shù)碼相機(jī)連接的圖像處理和計算裝置。

在具體的實施方案中，系統(tǒng)接受大范圍的側(cè)向流動檢測裝置。測試樣品(例如，唾液或體液)從被測試的人員取得并且加入至設(shè)置有干燥緩沖液或調(diào)節(jié)劑的一個或多個測試盒或測試條，以設(shè)置樣品用于加入至用于檢測的測試條。側(cè)向測試條或測試盒在指定區(qū)域設(shè)置有被調(diào)節(jié)的測試樣品并且樣品之后根據(jù)時機(jī)或指示繼續(xù)到達(dá)指定或適當(dāng)位置以與測試條的藥物分析組分相互作用，從而使樣品反應(yīng)以提供陽性、陰性、和/或由特定測試條測試的etg的閾值量的指示。測試條或測試條的外殼設(shè)置有校準(zhǔn)的、足夠的測試樣品，以及結(jié)果指示標(biāo)識以顯示每個測試條和被測試的相應(yīng)藥物、化合物或代謝物的測試結(jié)果。

通過選取在具有任選通過測試儀、外罩和/或外殼定位的數(shù)碼相機(jī)的每個測試條上調(diào)節(jié)并且運行的樣品的數(shù)字圖像，系統(tǒng)之后繼續(xù)進(jìn)行藥物檢測?？梢匀芜x通過數(shù)碼相機(jī)或單獨的照明源提供照明。測試條結(jié)果的數(shù)字圖像數(shù)據(jù)、額外的識別信息(包括被測試的人員的識別、關(guān)于測試儀的信息、位置、完成的藥物檢測等中的一種或多種)、以及該圖像和其他數(shù)據(jù)收集并且儲存于數(shù)碼相機(jī)、數(shù)據(jù)存儲器、和/或基于云端或單獨的數(shù)據(jù)存儲器存儲裝置中。之后利用與系統(tǒng)的軟件組件結(jié)合的處理能力使用主機(jī)裝置(例如專用智能電話、pda、筆記本電腦、蜂窩電話等)處理數(shù)字圖像數(shù)據(jù)。預(yù)加載至智能電話或處理器上的軟件向預(yù)定的校準(zhǔn)數(shù)據(jù)提供處理指令并且比較圖像分析數(shù)據(jù)以，得到定性或定量結(jié)果，例如，但不限于陽性、陰性、高于或低于一個或多個閾值濃度或量等。系統(tǒng)可以經(jīng)由多種不同物理標(biāo)準(zhǔn)與主機(jī)裝置連接。這些標(biāo)準(zhǔn)包括行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)如個人計算機(jī)存儲卡國際聯(lián)合會(personalcomputermemorycardinternationalassociation，pcmcia)，通用串行總線(usb)，串行，安全數(shù)字(securedigital)，藍(lán)牙^tm，光、磁、或固態(tài)數(shù)據(jù)驅(qū)動器中的一種或組合，wi-fi或其他公司專門標(biāo)準(zhǔn)如handspringspringboardplatform^tm。

在另一個實施方案中，軟件自動用于稍后的針對交叉場檢測兼容性的流動測試條數(shù)字成像。這種系統(tǒng)可以提供與一系列商業(yè)或定制側(cè)向流動條的兼容性。系統(tǒng)將來自測試的結(jié)果(如可以任選常規(guī)上由人手動讀取的測試條)數(shù)字化并且客觀地量化；將原始和修改的數(shù)字圖像和數(shù)據(jù)儲存至存儲器以用于檢查；并且通過執(zhí)行圖像處理算法來提高測試處理。

免疫診斷測定

可以在用于鑒別樣品如血液、血漿、血清、組織等中etg的存在的免疫測定中使用抗etg抗體，單克隆的或多克隆的。這可以有益于鑒別或確定受試者是否攝入了酒精飲料。因此，可以在免疫診斷測定中使用抗etg抗體代替其他抗體，從而可以將測定配置為用于鑒別作為酒精飲用的指示的etg的存在并且任選量化etg的量。此外，免疫診斷測定可以使用根據(jù)本發(fā)明的etg類似物或其他etg類似物。

本文所述的etg抗體還適用于許多具有包括但不限于酶或熒光的一系列檢測系統(tǒng)的異相免疫測定和/或包括但不限于快速側(cè)向流動測定的均相免疫測定中的任何一種，和抗體陣列，以及尚待開發(fā)的形式。

盡管已經(jīng)在本文中描述了使用etg類似物、綴合物、抗體、免疫原和/或示蹤物的多種免疫診斷測定，如在本領(lǐng)域內(nèi)公知的，還可以對這樣的測定進(jìn)行修改。因此，可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)做出用于進(jìn)行這樣的免疫測定的步驟或行為的各種修改。

實施例

提供以下實施例以說明本發(fā)明的實施方案并且其并非意在限制。因此，實施例中的一些已經(jīng)通過實驗進(jìn)行并且一些是基于在本領(lǐng)域內(nèi)公知的技術(shù)、標(biāo)準(zhǔn)、和結(jié)果預(yù)測的。此外，應(yīng)當(dāng)顯而易見的是，本發(fā)明可以任選包括未通過實施例示出的額外的實施方案。此外，許多實施例已經(jīng)借助在本領(lǐng)域內(nèi)公知的實驗方案使用根據(jù)本發(fā)明制備的etg類似物、抗原、免疫原、和抗etg抗體進(jìn)行。

實施例1抗etg抗體的制備

如以上所討論的，可以使用任何數(shù)量的被接受的過程以使用如上所述的免疫原制備抗體。例如，圖2a-c中所示的在弗氏佐劑中的免疫原用于免疫小鼠。在一系列免疫之后，如本領(lǐng)域中常規(guī)的，使用本領(lǐng)域中已知的方法，取出脾并且與永生化的非生產(chǎn)性骨髓瘤細(xì)胞系融合，制備雜交瘤細(xì)胞系。為了本發(fā)明的目的，在針對識別etg的能力初步篩選培養(yǎng)物上清液之后，選擇各種雜交瘤細(xì)胞系(例如，19d7、14c5、和12e7克隆)用于制備單克隆抗體。盡管多種雜交瘤細(xì)胞系當(dāng)針對etg篩選時顯示出陽性的反應(yīng)性，由于各種原因而選擇雜交瘤細(xì)胞系19d7、14c5、和12e7克隆，包括其生長和抗體產(chǎn)生特性。

實施例2：來自尿液的etg的檢測

乙基葡萄糖醛酸苷(etg)是通過乙醇與葡萄糖醛酸借助udp葡萄糖醛酰轉(zhuǎn)移酶(glucuronosyltransferase)的體內(nèi)綴合形成的乙醇的少量非氧化性代謝物。etg是攝入的酒精(乙醇)的代謝過程的產(chǎn)物，其在體內(nèi)迅速代謝，并且其在血液、毛發(fā)和尿液中被排出。通過使用etg快速測試裝置，可以在尿液中檢測etg，確認(rèn)酒精的飲用。etg代謝物在體內(nèi)保持較長并且因此具有8至80小時的更有用的檢測窗口。根據(jù)本發(fā)明的etg檢測是優(yōu)異的選擇，例如，但不限于零容忍酒精飲用或康復(fù)程序。

本發(fā)明的非限制性的實施方案可以包括etg側(cè)向流動免疫測定測試條和/或裝置，例如設(shè)計為通過裝置中顯色的視覺解讀來檢測etg的etg快速測試裝置(尿液)，所述檢測通過使用已經(jīng)為檢測而標(biāo)記的etg特異性抗體介導(dǎo)。測試條的膜或相似組件可以與etg綴合物固定在測試區(qū)域上，并且樣品墊預(yù)涂布有著色或標(biāo)記的抗etg抗體，例如，但不限于膠體金或膠乳金標(biāo)記的etg抗體(例如，單克隆的或多克隆的，或者其etg結(jié)合片段)綴合物。在加入樣本(例如，尿液和對照，例如陽性和/或陰性對照)之后，金綴合物沿著膜或測試條移動(例如通過毛細(xì)管作用而層析移動)并且抗體遷移至測試區(qū)域。如果在尿液中不存在藥物分子(即，etg)，則抗體-金綴合物附著至藥物綴合物以在測試區(qū)域中形成可見的線，在這種情況下，當(dāng)尿液對于藥物來說是陰性時，在測試區(qū)域中發(fā)生可見的沉淀物的形成。如果在尿液中存在etg，則藥物抗原與在測試區(qū)域上固定的藥物綴合物競爭有限的抗體位點。在足夠濃度的藥物代謝物etg的情況下，其填充有限的抗體結(jié)合位點。這將會阻止著色的抗體-膠體金或膠乳金綴合物附著至測試區(qū)域上的藥物綴合物區(qū)域。因此，在測試區(qū)域上不存在著色帶顯示出陽性結(jié)果。在對照區(qū)域著色帶的出現(xiàn)充當(dāng)程序性對照。這表明已經(jīng)加入了適當(dāng)體積的樣本并且已經(jīng)發(fā)生了膜芯吸。

在檢測期間，一部分尿液樣本通過毛細(xì)管作用向上(或橫向)遷移。如果以低于其截留濃度存在于尿液中，etg將不會使其特異性抗體的結(jié)合位點飽和?？贵w之后將會與藥物-蛋白質(zhì)綴合物反應(yīng)并且將會在特異性藥物帶的測試線區(qū)域中出現(xiàn)可見的著色線。在尿液或口腔液樣本中高于截留濃度的藥物的存在將會使抗體的全部結(jié)合位點飽和。因此，將不會在測試線區(qū)域中形成著色線。藥物陽性的尿液樣本由于藥物競爭將不會在帶的特異性測試線區(qū)域中產(chǎn)生著色線，而藥物陰性的尿液或口腔液樣本由于不存在藥物競爭將會在測試線區(qū)域中產(chǎn)生線。

為了充當(dāng)程序性對照，著色線將會在對照線區(qū)域一直出現(xiàn)，表明已經(jīng)加入了適當(dāng)體積的樣本并且已經(jīng)發(fā)生了膜芯吸。

如在圖1中所示，樣本在樣品施加區(qū)域例如(a)加入，并且之后經(jīng)由毛細(xì)管作用沿著膜或測試條遷移以與可以以備選標(biāo)記形式提供的標(biāo)記的綴合物(b)相互作用。在樣本(例如，尿液或其他體液)中存在的低于截留或閾值量(例如，小于100、200、250、300、350、400、450、或500、600、700、750、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1700、1750、1800、1900、或2000ng/ml)的etg將不會使金綴合的抗etg抗體的全部結(jié)合位點飽和并且將不會形成著色的抗體-抗原復(fù)合物(c)。金綴合的抗體之后將會被固定的綴合物捕獲并且將會在位置(d)(對應(yīng)于以下圖2中的(t))形成代表陰性結(jié)果的可見的(例如，紅色)帶，在這種情況下，金-etg抗體復(fù)合物將會在(d)結(jié)合，因為在etg抗體上的etg結(jié)合位點不飽和并且將結(jié)合固定在(d)的etg或其表位或模擬物以在(d)(對應(yīng)于圖2a-c中的帶(t))提供標(biāo)記的陰性結(jié)果和帶。在測試線區(qū)域中不存在線形成代表陽性讀數(shù)并且測試樣本的(a)水平高于測試的檢測靈敏度(例如，100、200、250、400、或500、600、700、750、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1700、1750、1800、1900、或2000ng/ml的檢測靈敏度，其中500、750、或1000ng/ml是優(yōu)選的)。

在膜的對照線區(qū)域中，無論是否存在測試樣本組合物，固定的試劑都捕獲著色的綴合物。所得的可見的紅色帶(e)確認(rèn)了測定正確地發(fā)揮功能。圖2a-c示出了在非限制性實例中的一組可能的測試結(jié)果。

實施例3：均相競爭性免疫測定

g6pdh-etg綴合物用于為與抗etg抗體例如根據(jù)本文所述的過程制備的單克隆抗體結(jié)合而與尿液、血清、或其他樣品中的etg競爭。在測試的樣品中不存在etg的情況下，抗etg抗體與g6pdh-etg綴合物結(jié)合，抑制酶活性。當(dāng)在樣品中存在etg時，其競爭抗etg抗體上的結(jié)合位點，留下至少一些未結(jié)合并且能夠與底物反應(yīng)的etg-g6pdh。因此，隨著樣品中etg的濃度增加，酶活性的量成比例地增加。

用于進(jìn)行這樣的測定的示例性試劑包括：抗etg抗體，其優(yōu)選為具有專門針對etg的靈敏度和特異性的單克隆抗體；底物試劑，其包含在ph5.0的tris緩沖液中的8.5mm葡萄糖-6-磷酸和5.25mmnad，其可以與作為防腐劑的疊氮化鈉組合；酶綴合物試劑，其包含在ph8.0的tris緩沖液中的如在本文中所描述的etg-g6pdh綴合物，其可以與作為防腐劑的疊氮化鈉組合；和校準(zhǔn)劑(calibrator)，例如在適用于與待測試的特定樣品類型一起使用的ph6.0的緩沖液或尿液緩沖溶液或其他緩沖溶液中的不同濃度的etg(如0和100、200、250、300、350、和/或500、600、700、750、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1700、1750、1800、1900、或2000ng/ml)。優(yōu)選地，將抗etg抗體混合至底物試劑中?？梢詫⒁陨显噭┌b在一起作為具有或不具有校準(zhǔn)劑(其可以單獨包裝)的試劑盒。

使用例如hitachi分析儀(917或717或olympusau640)或其他相當(dāng)?shù)膬x器建立校準(zhǔn)曲線。為了使用hitachi917分析儀，將35微升校準(zhǔn)劑與80微升含有抗etg抗體的底物試劑和80微升酶綴合物試劑混合。為了使用hitachi717儀器，將20微升校準(zhǔn)劑加入至125微升含有抗etg抗體的底物試劑和125微升酶綴合物試劑中，并且根據(jù)制造商的建議使用儀器。為了使用olympusau640儀器，將50微升校準(zhǔn)劑加入至80微升含有抗etg抗體的底物試劑和80微升酶綴合物試劑中，并且根據(jù)制造商的建議使用儀器。當(dāng)檢測樣本(尿液、血清等)時，用樣本的樣品代替以上過程中的校準(zhǔn)劑。

從1至12連續(xù)編號的以下段落提供了本發(fā)明的各個方面。在一個實施方案中，在第一段(1)中，本發(fā)明提供：

1.一種用于檢測尿液中乙基葡萄糖醛酸苷的乙基葡萄糖醛酸苷(etg)側(cè)向流動測試條免疫測定系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括：

(a)如圖1和2a-c中示意性地示出的側(cè)向流動測試條，所述測試條包括；

(i)至少一種類型的毛細(xì)管流動材料，其能夠可重復(fù)地提供尿液、體液或組織樣品經(jīng)由測試條的側(cè)向流動，以可重復(fù)地相互作用并且使用在測試條中包含的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體以及第一和第二可檢測標(biāo)記物檢測etg，所述系統(tǒng)提供(1)陽性結(jié)果，如在圖2b中所示的僅(c)著色帶顯色；(2)陰性結(jié)果，如在圖2a中所示的(t)著色帶和(c)著色帶二者均顯色；或無效結(jié)果，如在圖2c中所示的僅(t)著色帶顯色，或沒有帶；

(ii)如在圖1中所示的尿液或?qū)φ諛悠肥┘訁^(qū)域(a)，其包含樣品施加組分；

(iii)如在圖1中所示的標(biāo)記的etg標(biāo)記的抗體區(qū)域(b)，其包含設(shè)置在測試條材料上或設(shè)置到測試條材料的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體，所述可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體包含在施加至測試條之后與可檢測標(biāo)記物組分綴合并且由于尿液或?qū)φ諛悠返拿?xì)管作用而可溶于測試條或沿著測試條傳導(dǎo)的etg特異性抗體；

(iv)第一檢測區(qū)域(d)，其包含第一可檢測標(biāo)記物作為當(dāng)尿液或?qū)φ諛悠分械膃tg的濃度低于在100至2000ng/ml之間的預(yù)選擇的閾值時結(jié)合可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的第一標(biāo)記部分；其中低于預(yù)選擇的閾值的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的結(jié)合得到如在圖2a中所示的具有(t)和(c)著色帶二者的陰性結(jié)果；并且其中當(dāng)尿液或?qū)φ諛悠分械膃tg高于預(yù)選擇的閾值時，可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體未可檢測地或明顯地結(jié)合第一可檢測標(biāo)記物并且也未提供陰性結(jié)果；

(v)第二檢測區(qū)域(e)，其包含第二可檢測標(biāo)記物作為當(dāng)尿液或?qū)φ諛悠分械膃tg的濃度高于在100至2000ng/ml之間的預(yù)選擇的閾值時結(jié)合可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的第二標(biāo)記部分；并且其中高于預(yù)選擇的閾值的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的結(jié)合得到如在圖2b中所示的僅具有(c)著色帶的陽性結(jié)果；并且其中當(dāng)尿液或?qū)φ諛悠分械膃tg高于預(yù)選擇的閾值時，可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體未可檢測地或明顯地結(jié)合第一可檢測標(biāo)記物；并且

其中當(dāng)測定無效時，可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的結(jié)合得到如在圖2c中所示的僅具有(t)著色帶，或沒有帶的無效結(jié)果；并且其中可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體未可檢測地或明顯地結(jié)合第二可檢測標(biāo)記物。

2.根據(jù)第1段中所述的免疫測定系統(tǒng)，其中閾值是500、750、或1000ng/ml。

3.根據(jù)第1至2段中所述的免疫測定系統(tǒng)，其中可檢測標(biāo)記物是膠體金或膠乳金。

4.根據(jù)第1至3段中所述的免疫測定系統(tǒng)，其中etg特異性抗體是單克隆的。

5.根據(jù)第1至4段中所述的免疫測定系統(tǒng)，其中etg特異性抗體對etg的親和力是至少10^-7kd。

6.根據(jù)第1至5段中所述的免疫測定系統(tǒng)，其中可檢測標(biāo)記物包含酶、酶片段或酶供體片段。

7.一種關(guān)于用于檢測尿液中乙基葡萄糖醛酸苷的乙基葡萄糖醛酸苷(etg)側(cè)向流動測試條免疫測定的方法，所述系統(tǒng)包括：

(a)提供如圖1和2中示意性地示出的側(cè)向流動測試條，所述測試條包括；

(i)至少一種類型的毛細(xì)管流動材料，其能夠可重復(fù)地提供尿液、體液或組織樣品經(jīng)由測試條的側(cè)向流動，以可重復(fù)地相互作用并且使用在測試條中包含的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體以及第一和第二可檢測標(biāo)記物檢測etg，所述系統(tǒng)提供(1)陽性結(jié)果，如在圖2b中所示的僅(c)著色帶顯色；(2)陰性結(jié)果，如在圖2a中所示的(t)著色帶和(c)著色帶二者均顯色；或無效結(jié)果，如在圖2c中所示的僅(t)著色帶顯色，或沒有帶；

(ii)如在圖1中所示的尿液或?qū)φ諛悠肥┘訁^(qū)域(a)，其包含樣品施加組分；

(iii)如在圖1中所示的標(biāo)記的etg標(biāo)記的抗體區(qū)域(b)，其包含設(shè)置在測試條材料上或設(shè)置到測試條材料的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體，所述可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體包含在施加至測試條之后與可檢測標(biāo)記物組分綴合并且由于尿液或?qū)φ諛悠返拿?xì)管作用而可溶于測試條或沿著測試條傳導(dǎo)的etg特異性抗體；

(iv)第一檢測區(qū)域(d)，其包含第一可檢測標(biāo)記物作為當(dāng)尿液或?qū)φ諛悠分械膃tg的濃度低于在100至2000ng/ml之間的預(yù)選擇的閾值時結(jié)合可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的第一標(biāo)記部分；其中低于預(yù)選擇的閾值的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的結(jié)合得到如在圖2a中所示的具有(t)和(c)著色帶二者的陰性結(jié)果；并且其中當(dāng)尿液或?qū)φ諛悠分械膃tg高于預(yù)選擇的閾值時，可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體未可檢測地或明顯地結(jié)合第一可檢測標(biāo)記物并且也未提供陰性結(jié)果；

(v)第二檢測區(qū)域(e)，其包含第二可檢測標(biāo)記物作為當(dāng)尿液或?qū)φ諛悠分械膃tg的濃度高于在100至2000ng/ml之間的預(yù)選擇的閾值時結(jié)合可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的第二標(biāo)記部分；并且其中高于預(yù)選擇的閾值的可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的結(jié)合得到如在圖2b中所示的僅具有(c)著色帶的陽性結(jié)果；并且其中當(dāng)尿液或?qū)φ諛悠分械膃tg高于預(yù)選擇的閾值時，可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體未可檢測地或明顯地結(jié)合第一可檢測標(biāo)記物；并且

其中當(dāng)測定無效時，可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體的結(jié)合得到如在圖2c中所示的僅具有(t)著色帶，或沒有帶的無效結(jié)果；并且其中可檢測標(biāo)記的etg特異性抗體未可檢測地或明顯地結(jié)合第二可檢測標(biāo)記物；

將尿液或?qū)φ諛悠肥┘又翜y試條；

確定尿液或?qū)φ諛悠肥欠癜哂诨虻陀陂撝档膃tg。

8.根據(jù)第7段所述的方法，其中閾值是500、750、或1000ng/ml。

9.根據(jù)第7至8段所述的方法，其中可檢測標(biāo)記物是膠體金或膠乳金。

10.根據(jù)第7至9段所述的方法，其中etg特異性抗體是單克隆的。

11.根據(jù)第7至10段所述的方法，其中etg特異性抗體對etg的親和力是至少10^-7kd。

12.根據(jù)第1至11段中所述的免疫測定系統(tǒng)，其中可檢測標(biāo)記物包含酶、酶片段或酶供體片段。

可以以其他具體形式實施本發(fā)明而不背離其精神或基本特征。所描述的實施方案在各方面均被認(rèn)為僅是說明性的而不是限制性的。因此，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是由前述描述指定。進(jìn)入權(quán)利要求的等價的含義和范圍內(nèi)的全部改變應(yīng)包括在其范圍內(nèi)。