專利名稱：一種體外檢測日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮抗藥性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種體外檢測日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮抗藥性的方法，屬于抗寄生蟲藥物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
日本血吸蟲病是一種危害人類健康，影響社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重大傳染病。吡喹酮是當(dāng)前用于治療日本血吸蟲病的唯一商品化藥物。長期大規(guī)模反復(fù)應(yīng)用同一種抗蟲藥物往往會(huì)導(dǎo)致藥物抗藥性的產(chǎn)生，因此有必要建立現(xiàn)場監(jiān)測和檢測吡喹酮抗藥性的技術(shù)。當(dāng)前檢測吡喹酮抗藥性的主要方法是在疫區(qū)現(xiàn)場治療病人，評估化療結(jié)果，該方法時(shí)間長、病人依次性低，且存在漏查漏治現(xiàn)象。我們在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)建立了一種體外檢測日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮抗藥性的技術(shù)，可方便、快速、敏感檢測日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮的抗藥性，解決了吡喹酮抗藥性難以檢測的技術(shù)難題，有利于現(xiàn)場監(jiān)測和檢測日本血吸蟲吡喹酮抗藥性的產(chǎn)生。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種體外檢測日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮抗藥性的方法，解決現(xiàn)場監(jiān)測和檢測日本血吸蟲吡喹酮抗藥性的技術(shù)問題，快速、簡便、敏感、可靠。本發(fā)明的技術(shù)方案一種體外檢測日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮抗藥性的方法，取一塊M孔細(xì)胞培養(yǎng)板，在板孔內(nèi)加入濃度分別為10_5、5X 10_6、10_6和5X 10_7 mol/L吡喹酮藥液1 mL，隨后用接種環(huán)移入2(Γ50條新逸出的日本血吸蟲尾蚴，在吡喹酮藥液作用20 min 后在解剖鏡下觀察各孔內(nèi)尾蚴斷尾變化，計(jì)算尾蚴斷尾率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次。通過觀察尾蚴斷尾率，可檢測日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮的抗藥性。尾蚴斷尾變化，是指在吡喹酮藥液作用后，日本血吸蟲尾蚴的體部和尾部分離斷開。吡喹酮藥液為吡喹酮溶于二甲基亞砜(DMSO)中配制成濃度為1X10—3 mol/L 與水稀釋備用。一種體外檢測日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮抗藥性的方法，先在M孔細(xì)胞培養(yǎng)板孔內(nèi)加入濃度分別為10-5、5Χ10_6、10-6和5X10_7mOl/L吡喹酮藥液各1 mL，然后用接種環(huán)移入20 50條新逸出的日本血吸蟲尾蚴，在吡喹酮藥液作用20 min后，在解剖鏡下觀察尾蚴斷尾變化，計(jì)算尾蚴斷尾率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次。在經(jīng)10_5 mol/L吡喹酮藥液作用20 min后， 尾蚴斷尾率< 40%;經(jīng)5父10-6 mol/L吡喹酮藥液作用20 min后，尾蚴斷尾率< 35% ；經(jīng)10_6 mol/L吡喹酮藥液作用20 min后，尾蚴斷尾率< 30% ；經(jīng)5X 10_7 mol/L吡喹酮藥液作用20 min后，尾蚴斷尾率< 10%，則可認(rèn)為該日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮具有抗藥性。本發(fā)明的有益效果一種體外檢測日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮抗藥性的方法，快速、 簡便、敏感、可靠，適合現(xiàn)場快速檢測和監(jiān)測日本血吸蟲吡喹酮抗藥性的產(chǎn)生，可解決日本血吸蟲吡喹酮抗藥性現(xiàn)場檢測和監(jiān)測的技術(shù)問題。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 日本血吸蟲吡喹酮敏感株和抗性株尾蚴對吡喹酮的敏感性測定取一塊M孔細(xì)胞培養(yǎng)板，在板孔內(nèi)加入濃度為10_5 mol/L的吡喹酮藥液1 mL，隨后用
接種環(huán)移入2(Γ50條新鮮逸出的日本血吸蟲吡喹酮敏感株和抗性株尾蚴，20 min后在解剖鏡下觀察各孔內(nèi)尾蚴斷尾變化，計(jì)算尾蚴斷尾率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次。表1吡喹酮對日本血吸蟲吡喹酮敏感株和抗性株尾蚴斷尾變化的影響
權(quán)利要求
1.一種體外檢測日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮抗藥性的方法，其特征在于取一塊M孔細(xì)胞培養(yǎng)板，在板孔內(nèi)加入濃度分別為10_5、5X 10_6、10_6及5X 10_7 mol/L吡喹酮藥液1 mL， 隨后用接種環(huán)移入2(Γ50條新逸出的日本血吸蟲尾蚴，在吡喹酮藥液作用20 min后在解剖鏡下觀察各孔內(nèi)尾蚴斷尾變化，計(jì)算尾蚴斷尾率，實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次，通過觀察尾蚴斷尾率，檢測日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮的抗藥性。
2.根據(jù)權(quán)利權(quán)求1所述的體外檢測日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮抗藥性的方法，其特征在于尾蚴斷尾變化，是指在吡喹酮藥液作用后，日本血吸蟲尾蚴的體部和尾部分離斷開。
3.根據(jù)權(quán)利權(quán)求1所述的體外檢測日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮抗藥性的方法，其特征在于吡喹酮藥液為吡喹酮溶于二甲基亞砜DMSO中配制成濃度為1X10_3 mol/L與水稀釋
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的體外檢測日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮抗藥性的方法，其特征在于先在M孔細(xì)胞培養(yǎng)板孔內(nèi)加入濃度分別為10_5、5X 10_6、10_6及5X 10_7 mol/L吡喹酮藥液各lmL，然后用接種環(huán)移入20 50條新逸出的日本血吸蟲尾蚴，在吡喹酮藥液作用20 min后，在解剖鏡下觀察各孔內(nèi)尾蚴斷尾變化，計(jì)算尾蚴斷尾率，實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次，在經(jīng) 10_5 mol/L吡喹酮藥液作用20 min后，尾蚴斷尾率< 40% ；經(jīng)5X 10_6 mol/L吡喹酮藥液作用20 min后，尾蚴斷尾率< 35% ；經(jīng)10_6 mol/L吡喹酮藥液作用20 min后，尾蚴斷尾率< 30% ；經(jīng)5X 10_7 mol/L吡喹酮藥液作用20 min后，尾蚴斷尾率< 10%，即認(rèn)為該日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮具有抗藥性。
全文摘要
一種體外檢測日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮抗藥性的方法，屬于抗寄生蟲藥物技術(shù)領(lǐng)域。取一塊24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，在板孔內(nèi)加入濃度分別為10-5、5×10-6、10-6及5×10-7mol/L吡喹酮藥液1mL，隨后用接種環(huán)移入20~50條新逸出的日本血吸蟲尾蚴，在吡喹酮藥液作用20min后在解剖鏡下觀察各孔內(nèi)尾蚴斷尾變化，計(jì)算尾蚴斷尾率，在經(jīng)10-5mol/L吡喹酮作用后，尾蚴斷尾率<40%；經(jīng)5×10-6mol/L吡喹酮作用后，尾蚴斷尾率<35%；經(jīng)10-6mol/L吡喹酮作用后，尾蚴斷尾率<30%；經(jīng)5×10-7mol/L吡喹酮作用后，尾蚴斷尾率<10%，即認(rèn)為該日本血吸蟲尾蚴對吡喹酮具有抗藥性。本發(fā)明快速、簡便、敏感、可靠，適合現(xiàn)場快速檢測和監(jiān)測日本血吸蟲吡喹酮抗藥性的技術(shù)問題。
文檔編號(hào)G01N33/50GK102520149SQ20111044133
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月26日
發(fā)明者戴建榮, 曲國立, 李洪軍, 梁幼生, 汪偉, 邢云天 申請人:江蘇省血吸蟲病防治研究所