茶多酚及其衍生物在預(yù)防日本血吸蟲感染的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種茶多酚及其衍生物在預(yù)防日本血吸蟲感染的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù)與預(yù)防醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。所述茶多酚及其衍生物可以預(yù)防日本血吸蟲感染，特別表沒食子兒茶素沒食子酸酯對疫水中尾蚴結(jié)構(gòu)的破壞，減弱尾蚴的鉆膚功能，預(yù)防日本血吸蟲經(jīng)皮感染。
【專利說明】茶多酚及其衍生物在預(yù)防日本血吸蟲感染的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)與預(yù)防醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種茶多酚及其衍生物在預(yù)防日本血吸蟲感染的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]血吸蟲病依然是世界和我國目前主要面對的一項(xiàng)公共衛(wèi)生難題，被中國衛(wèi)生部列為4種重大傳染病之一。我國血吸蟲病防治工作自上世紀(jì)50年代開展以來，取得了舉世矚目的成績。2004年，全國第3次血吸蟲病流行病學(xué)抽樣調(diào)查結(jié)果指出在我國7個流行省疫情未控制村的血吸蟲感染率為2.5%。截止2006年底，已有五個省市如上海市、浙江省、福建省、廣東省、廣西壯族自治區(qū)等達(dá)到血吸蟲病傳播阻斷標(biāo)準(zhǔn)，但是在湖北、湖南、江西、安徽、江蘇、四川、云南7個省尚未達(dá)到疫情控制標(biāo)準(zhǔn)，據(jù)統(tǒng)計全國約有血吸蟲病人70萬人。
[0003]血吸蟲的生活史分為成蟲、蟲卵、毛蝴、母胞蝴、子胞蝴、尾蝴、童蟲等7個階段。中間宿主是釘螺,哺乳動物是其終宿主。終宿主、中間宿主及其生存的外部環(huán)境共同構(gòu)成了血吸蟲生存、繁衍的環(huán)境鏈條。
[0004]自毛蝴鉆入釘螺體內(nèi)到尾蝴發(fā)育成熟所需時間與溫度有關(guān)，在自然條件下，最快需要44天，最慢需要186天。人工控制溫度在25~30°C時，感染后2個月，僅有少數(shù)尾蝴發(fā)育成熟，3個月后有大量尾蝴成熟。血吸蟲尾蝴是血吸蟲的感染蟲期，感染方式為經(jīng)皮膚鉆入終末 宿主。
[0005]釘螺是日本血吸蟲的唯一中間宿主，滅螺仍是目前控制血吸蟲病的重要策略和措施之一。但是，多年的血吸蟲防治結(jié)果表明:由于釘螺生存環(huán)境復(fù)雜、繁殖力強(qiáng)，要想從根本上消滅釘螺非常困難。血吸蟲尾蝴是感染人畜的唯一階段，尾蝴以靜態(tài)方式浮在水面上，并且尾蝴是血吸蟲生命周期中最脆弱的階段。因此研究血吸蟲尾蝴防治藥物日漸引起人們的關(guān)注。
[0006]吡喹酮是目前治療日本血吸蟲病的首選理想藥物。對血吸蟲尾蝴、童蟲、成蟲均有明顯、快速的殺滅作用。吡喹酮在水中殺死尾蝴的最低有效濃度為0.05g/mL。尾蝴與吡喹酮接觸后IOs變松弛.1~5min內(nèi)尾部與體部分離.2~4h內(nèi)死亡。但是吡喹酮難溶于水.密度比水大.直接作為清除大面積水面尾蝴的藥物難以實(shí)行。
[0007]氯硝柳胺作為滅螺首選藥物，不但對釘螺有較高的殺滅效果，而且對血吸蟲尾蝴也有一定的殺滅作用。由于水溶性差、易沉降或者毒性大而限制其大面積水域使用。人們對此加以改進(jìn)，研制出了緩釋劑和漂浮劑。硝苯柳胺是湖南省血吸蟲病防治所在氯硝柳胺的基礎(chǔ)上經(jīng)改進(jìn)其結(jié)構(gòu)及合成路線而成功合成的一種化合物，其理化性質(zhì)與氯硝柳胺相似，對人畜毒性低且無遺傳毒作用。在溫度為25°C _35°C時，硝苯柳胺水溶液濃度為0.5~
2.0mg/L,在8~32min內(nèi)將尾蝴全部殺死。硝苯柳胺是一種較強(qiáng)殺日本血吸蟲尾蝴的殺蝴劑，其殺蝴作用隨溫度升高而增加。
[0008]五氯酚鈉易溶于水，對釘螺和尾蝴均有較高殺滅活性；滅血釘草蟲滅可濕性粉劑系以沙蠶毒類農(nóng)藥殺蟲單位為主要成分，與磺酰脲類除草劑芐嘧磺隆混合配制而成，對釘螺和尾蝴有殺滅作用。
[0009]以上研究都有其不足之處，如:藥物擴(kuò)散效果不好、在水面容易團(tuán)聚，導(dǎo)致滅蝴效果難以評價，此外為使水體中藥物濃度達(dá)到有效濃度，必須加大藥量，這樣會導(dǎo)致對水生生物毒性也較大.藥物安全性難以得到保證。
[0010]植物滅蝴藥主要是從植物根、莖、葉、花、果和籽中提取出有滅蝴活性的有效成分。許多對釘螺有較強(qiáng)毒殺作用的植物滅螺藥同時能夠殺滅血吸蟲尾蝴。這些植物藥的主要成分分屬皂甙類、生物堿類、(異)黃酮類、萜類、鞣質(zhì)、烯基酚、萘醌和呋喃香豆素等。植物滅蝴藥的優(yōu)點(diǎn)是對水生生物毒性低，具有環(huán)境友好性，對于血吸蟲病流行、植物資源豐富的國家和地區(qū)來說可以充分利用。但是，植物活性成分提取步驟復(fù)雜、成本高，大面積水域施藥濃度不易控制再加上用量大，將其作為滅蝴藥大面積推廣還存在許多困難。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明的目的是解決上述問題而提供了一種茶多酚及其衍生物在預(yù)防日本血吸蟲感染的應(yīng)用。
[0012]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
[0013]茶多酚及其衍生物在預(yù)防日本血吸蟲感染的應(yīng)用，所述茶多酚及其衍生物可以預(yù)防日本血吸蟲感染。
[0014]優(yōu)選地，所述茶多酚及其衍生物的形式為水溶性或脂溶性。
[0015]更優(yōu)選地，所述茶多酚及其衍生物為表沒食子兒茶素沒食子酸酯。
[0016]進(jìn)一步地，所述茶多酚及其衍生物為表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)為綠茶中提取的一種成分。
[0017]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0018]本發(fā)明對現(xiàn)有的茶多酚進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)茶多酚及其衍生物在預(yù)防日本血吸蟲感染的上有良好的效果。EGCG是茶多酚中的一種，它是從中國綠茶中提取的一種成份，它是綠茶主要的活性和水溶性成份，是兒茶素中含量最高的組分，占綠茶毛重的9%~13%，因?yàn)榫哂刑厥獾牧Ⅲw化學(xué)結(jié)構(gòu)，EGCG具有非常強(qiáng)的抗氧化活性，在抗癌和心血管疾病方面擔(dān)當(dāng)了重要的角色，近年來，發(fā)現(xiàn)其對病原生物的重要蛋白有一定的破壞作用，可以阻斷病原生物感染的擴(kuò)散。本發(fā)明中EGCG對疫水中尾蝴結(jié)構(gòu)的破壞，減弱尾蝴的鉆膚功能，預(yù)防日本血吸蟲經(jīng)皮感染，同時EGCG是一種純天然制劑，毒副作用小，對人畜無害。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1為實(shí)施例1中0.1%EGCG作用日本血吸蟲尾蝴后的參照圖；
[0020]圖2為實(shí)施例1中1%EGCG作用日本血吸蟲尾蝴后的參照圖；
[0021]圖3為實(shí)施例1中對照組日本血吸蟲尾蝴的參照圖；
[0022]圖4為實(shí)施例2中日本血吸蟲尾蝴感染小鼠后肝組織病理檢測圖；
[0023]圖5為實(shí)施例3中ELISA檢測小鼠血清中日本血吸蟲抗體的參照圖。
【具體實(shí)施方式】[0024]下面結(jié)合附圖和實(shí)施方式對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0025]實(shí)施例1
[0026]EGCG對尾蝴活性影響檢測
[0027]分別計數(shù)日本血吸蟲尾蝴約40條置于蒸餾水，1%EGCG，0.P/oEGCG，中處理2~IOmin,然后于解剖鏡下觀測尾蝴活性，其結(jié)果如下:
[0028]參照圖1和圖3，尾蝴在P/oEGCG中2min后，尾蝴運(yùn)動明顯較對照組劇烈，其尾部急劇擺動，攣縮。參照圖2和圖3，0.P/oEGCG組與對照組無特別大的差別。
[0029]實(shí)施例2
[0030]EGCG對尾蝴感染效果影響(成蟲計數(shù)與肝臟病理)
[0031]實(shí)驗(yàn)鼠隨機(jī)分成3組:蒸餾水對照組，尾蝴經(jīng)1%EGCG處理組，尾蝴經(jīng)0.1%EGCG處理組，每組5只小鼠。實(shí)驗(yàn)前小鼠腹部剃毛(范圍2CmX3Cm);皮下注射10%水合氯醛0.1ml進(jìn)行麻醉。分別取經(jīng)蒸餾水，1%EGCG, 0.P/oEGCG處理IOmin后的日本血吸蟲尾蝴(30±5)條，貼于3組小鼠腹部，感染20min。
[0032]I)成蟲計數(shù)
[0033]感染43d后解剖小鼠，用灌注法加撕碎法收集蟲體。首先經(jīng)上腔靜脈灌注沖洗，解剖鏡下計數(shù)其肝、腸靜脈叢內(nèi)的蟲體數(shù)；灌洗結(jié)束，取下肝、腸，用小鑷子將肝與腸系膜拉碎，檢查、計數(shù)未沖出的蟲體，計算小鼠感染率、平均蟲荷數(shù)以及減蟲率。減蟲率計算公式為:
[0034]減蟲率(％)=(對照組蟲荷數(shù)一實(shí)驗(yàn)組蟲荷數(shù))/對照組蟲荷數(shù)X 100%
[0035]2)肝臟病理檢測
[0036]感染43d后解剖小鼠，取小鼠肝臟，觀察蟲卵結(jié)節(jié)沉積情況，并石蠟包埋切片，HE染色，鏡下觀察，其結(jié)果如下。
[0037]成蟲計數(shù)比較:感染43d后解剖小鼠，檢查、計數(shù)未沖出的蟲體，計算小鼠感染率、平均蟲荷數(shù)以及減蟲率。從表1中可以看出，1%EGCG減蟲率為81.87%, 0.1%EGCG減蟲率為33.52%.[0038]表1 19ffiGCG、0.1%EGCG以及對照組平均荷蟲率和減蟲率
[0039]
【權(quán)利要求】
1.茶多酚及其衍生物在預(yù)防日本血吸蟲感染的應(yīng)用，其特征在于，所述茶多酚及其衍生物可以預(yù)防日本血吸蟲感染。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茶多酚及其衍生物在預(yù)防日本血吸蟲感染的應(yīng)用，其特征在于，所述茶多酚及其衍生物的形式為水溶性或脂溶性。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的茶多酚及其衍生物在預(yù)防日本血吸蟲感染的應(yīng)用，其特征在于，所述茶多酚及其衍生物為表沒食子兒茶素沒食子酸酯。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的茶多酚及其衍生物在預(yù)防日本血吸蟲感染的應(yīng)用，其特征在于，所述茶多酚及其衍生物`為表沒食子兒茶素沒食子酸酯為綠茶中提取的一種成分。
【文檔編號】A61K31/353GK103768254SQ201410031153
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月23日
【發(fā)明者】徐德, 宋文劍, 孔爭, 張澤華, 胡松, 陳琳, 艾永循, 劉楷 申請人:江漢大學(xué)