專利名稱：一種惡性黑素瘤t細(xì)胞納米抗體、其編碼序列及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)或生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種針對(duì)惡性黑素瘤T 細(xì)胞抗原表位多肽Martl多肽的納米抗體。
背景技術(shù)：
惡性黑素瘤發(fā)病率不高，但是是一種表皮或粘膜的黑素細(xì)胞的惡性腫瘤，惡 性程度高，且易發(fā)生血行及淋巴轉(zhuǎn)移，預(yù)后不良。據(jù)上海腫瘤醫(yī)院的資料，本 病占皮膚惡性腫瘤的1 0 %，占全部肺瘤的1 - 2 %，近年來有增加趨勢(shì)。治療 措施手術(shù)切除，放射治療，化學(xué)治療(用于有轉(zhuǎn)移者)和免疫療法(如用卡介 苗、白介素II、 a-干擾素等作為輔助治療)或綜合以上四種方法結(jié)合治療 《http:〃www.biox.cn/content/20050910/37264.htm》。國外近年在臨床試用惡性黑 素瘤T細(xì)胞抗原表位多肽(gp100, Martl)的疫苗，其效果也還不能最終肯定。 納米抗體技術(shù)，是生物醫(yī)學(xué)科學(xué)家在傳統(tǒng)抗體的基礎(chǔ)上，運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)結(jié) 合納米粒子科學(xué)的概念，進(jìn)行的抗體工程革命，而研發(fā)的最新和最小的抗體分子， 最初由比利時(shí)的科學(xué)家(Hamers, R)在駱駝血液中發(fā)現(xiàn)。普通的抗體蛋白由兩 條重鏈與兩條輕鏈組成，而從駱駝血液中發(fā)現(xiàn)的新型抗體只有兩條重鏈，沒有輕 鏈，這些"重鏈抗體"能像正?？贵w一樣與抗原等靶標(biāo)緊緊結(jié)合，而且不像單鏈 抗體那樣互相私連聚集成塊。以該"重鏈抗體"為基礎(chǔ)的納米抗體不僅分子量 只有普通抗體的1/10,而且化學(xué)性質(zhì)也更加靈活，能與酶的活性部位和細(xì)胞膜中 鑲嵌的標(biāo)志等特殊的或不暴露的抗原表位結(jié)合在一起，因而應(yīng)用納米抗體技術(shù)研 發(fā)新穎腫瘤治療和斥全測(cè)試劑具有廣闊的前景。
三
發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題
本發(fā)明的目的是提供一種針對(duì)惡性黑素瘤T細(xì)胞抗原表位的納米抗體，同
4時(shí)提供該納米抗體的編碼序列以及該納米抗體在制備檢測(cè)和治療惡性黑素瘤的 藥物組合物中的應(yīng)用。
技術(shù)方案本發(fā)明的技術(shù)解決方案為即
在本發(fā)明的第一方面，提供了一種惡性黑素瘤T細(xì)胞納米抗體V朋鏈，它 的互補(bǔ)決定區(qū)CDR具有選自下組的CDR的氨基酸序列
SEQ ID NO:ll所示的CDR1, SEQ ID NO:12所示的CDR2, SEQ ID NO:13 所示的CDR3;或
SEQ ID NO:14所示的CDR1, SEQ ID NO:15所示的CDR2, SEQ ID NO:16 所示的CDR3;或
SEQ ID NO: 17所示的CDR1 ， SEQ ID NO: 18所示的CDR2, SEQ ID NO: 19 所示的CDR3;或
SEQ ID NO:20所示的CDR1, SEQ ID NO:21所示的CDR2, SEQ ID NO:22 所示的CDR3;或
SEQ ID NO:23所示的CDR1, SEQ ID NO:24所示的CDR2, SEQ ID NO:25 所示的CDR3。
較佳地，所述的惡性黑素瘤T細(xì)胞納米抗體VHH鏈具有SEQ ID NO: 1 、 2 、 3、 4或5所示的氨基酸序列。
在本發(fā)明的第二方面，提供了一種惡性黑素瘤T細(xì)胞納米抗體，它針對(duì)惡 性黑素瘤T細(xì)胞抗原表位Marti多肽GAAGIGILIV,包括兩條具有SEQ ID NO:l 、 2、 3、 4或5所示的氨基酸序列的VHH鏈。
在本發(fā)明的第三方面，提供了一種DNA分子，它編碼選自下組的蛋白質(zhì) 本發(fā)明所述的惡性黑素瘤T細(xì)胞納米抗體VHH鏈或惡性黑素瘤T細(xì)胞納米抗體， 較佳地，所述DNA分子具有選自下組的DNA序列SEQIDNO:6、 7、 8、 9或 10。
在本發(fā)明的第四方面，提供了一種表達(dá)載體，它含SEQIDNO:6、 7、 8、 9 或10所示的核苦酸序列，還包含與所述核苦酸序列操作性相連的表達(dá)調(diào)控序列。 在本發(fā)明的第五方面，提供了一種宿主細(xì)胞，其含本發(fā)明所述的表達(dá)載體。 在本發(fā)明的第六方面，提供了本所述惡性黑素瘤T細(xì)胞納米抗體用于檢測(cè)
5惡性黑素瘤的用途。
本發(fā)明的最后一方面，提供了一種4全測(cè)和治療惡性黑素瘤的藥物組合物，其 含有藥學(xué)上有效量的本發(fā)明所述的惡性黑素瘤T細(xì)胞納米抗體以及藥學(xué)上可接 受的載體。
有益效果
本發(fā)明針對(duì)惡性黑素瘤特異性的T細(xì)胞抗原表位多肽如Martl多肽一 GAAGIGILIV生物素化后，與親和素磁珠結(jié)合，展示多肽的正確空間結(jié)構(gòu)，以 此形式的抗原篩選非免疫納米抗體基因庫(駱駝重鏈抗體噬菌體展示基因庫)， 而獲得了針對(duì)惡性黑素瘤特異性的納米抗體基因，將此基因與表達(dá)載體重組，構(gòu) 建了能在大腸桿菌中高效表達(dá)的納米抗體;f朱。
四

圖1是MT-弁1納米抗體蛋白的質(zhì)粒圖； 圖2是MT-#5納米抗體蛋白的質(zhì)粒圖3是高壓液相純化MT-#1， MT-#2納米抗體蛋白的SDS-聚丙烯凝膠電泳圖， 從右至左各蛋白帶分別為第1為蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)，從第2到10為MT-#1納 米抗體高壓液相純化洗脫峰管28， 30, 32, 34， 36, 38, 40， 42, 44;第11到 15為MT-#5納米抗體高壓液相純化洗脫峰管32, 34, 36， 38, 39,納米抗體+白喉 內(nèi)毒素B亞單位分子量約為29KD。
五具體實(shí)施例方式
本發(fā)明應(yīng)用針對(duì)惡性黑素瘤特異性的T細(xì)胞抗原表位多肽Martl多肽一 GAAGIGILIV生物素化后，與親和素磁珠結(jié)合，展示多肽的正確空間結(jié)構(gòu)，以 此形式的抗原篩選非免疫納米抗體基因庫(駱駝重鏈抗體噬菌體展示基因庫)， 而獲得了針對(duì)惡性黑素瘤特異性的納米抗體基因，將此基因與表達(dá)載體重組，構(gòu) 建了能在大腸桿菌中高效表達(dá)的納米抗體林。
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
6實(shí)施例1:
針對(duì)惡性黑素瘤特異性的T細(xì)胞抗原表位多肽Martl多肽一GAAGIGILIV 的納米抗體篩選過程
(1)用生物素化的Martl多肽一GAAGIGILIV 20孩i克分別與親和素^茲珠 (Product by Invitrogen company) 100微克在室溫下結(jié)合2小時(shí)。同時(shí)用100微 升噬菌體(5x1011 tfu非免疫駱駝納米抗體噬菌體展示基因庫)+100微克親和 素磁珠+500微升的2%脫脂牛奶O.OIM磷酸鹽緩沖液(PBS)， pH7.0,在室溫下 作用2小時(shí)。(2)去掉(1 )中的生物素-親和素^茲珠結(jié)合物的上清，加入經(jīng)親和 素》茲珠吸附過后的的噬菌體，在室溫下結(jié)合2小時(shí)。(3)用0.05%吐溫20 (T) PBS (PBST)和PBS各洗5次，以洗掉不結(jié)合的噬菌體。(4 )用TEA (triethylamine (7.18M))將與多肽特異性結(jié)合的噬菌體解離下，并感染處于對(duì)數(shù)生長期的大腸 桿菌TGl,產(chǎn)生并純化噬菌體用于下一輪的篩選。相同篩選過程重復(fù)3 4輪。
實(shí)施例2:
用噬菌體的酶聯(lián)免疫方法(ELISA)篩選多肽特異性單個(gè)陽性克隆 (1 )從上述經(jīng)3~4輪篩選后含有噬菌體的細(xì)菌培養(yǎng)亞中，挑選單個(gè)菌落并 接種于96孔細(xì)菌培養(yǎng)板中，培養(yǎng)過夜，(2)將其含有噬菌體的上清液轉(zhuǎn)移到經(jīng) 親和素預(yù)先包被并與生物素化的Martl多肽一GAAGIGILIV結(jié)合的ELISA板中， 在室溫獲37度放置1~2小時(shí)，(3)用PBST洗去未結(jié)合的噬菌體，(4)加入辣 根過氧化物酶標(biāo)記的抗噬菌體抗體，作用1小時(shí)，(5)TMB顯色，于ELISA儀 上，在450nm波長，讀取吸收值(OD)。 (5)當(dāng)樣品孔OD值大于對(duì)照孔OD 值3倍以上，判為陽性克隆孔。(6) PCR擴(kuò)增或純化陽性孔的質(zhì)粒并進(jìn)行基因 測(cè)序。
依據(jù)各個(gè)克隆抹的基因序列，把CDR1, CDR2, CDR3序列相同的抹視為同一 克隆林，而其序列不同的林視為不同的克隆林。
實(shí)施例3:
特異性納米抗體表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
PCR擴(kuò)增所獲得的特異性的納米抗體基因，而獲得帶有限制性內(nèi)切酶Bbsl
7和Apal位點(diǎn)PCR產(chǎn)物，用限制性內(nèi)切酶Bbsl和Apal分別處理PCR產(chǎn)物和載 體(pSCTl質(zhì)粒-來源于經(jīng)j資飾的pSJF2質(zhì)粒)，經(jīng)連接重組，而獲得能在大腸桿 菌中高效表達(dá)的質(zhì)粒MT-#l~MT-#5。
實(shí)施例4:
納米抗體蛋白在大腸桿菌中表達(dá)、純化
(1 )將菌種接種在含氨基芐青霉素的LB培養(yǎng)板上，37度過夜，(2)挑選 單個(gè)菌落接種于20毫升的含氨基節(jié)青霉素的LB培養(yǎng)液中，37度，搖床培養(yǎng)過 夜，(3 )轉(zhuǎn)種于1升含氨基千青霉素的LB培養(yǎng)液中，37度搖床培養(yǎng)，200轉(zhuǎn)/ 分，培養(yǎng)到OD值達(dá)0.6 1.0時(shí)，加入IPTG,繼續(xù)培養(yǎng)過夜。(4)離心，收菌， (5)加融菌酶裂解細(xì)菌，離心，收上清中可溶性納米抗體蛋白。(6)經(jīng)Ni十離 子親和層析高壓液相制備純度可達(dá)90%以上的蛋白。MT-#1、 MT-弁5的每1升細(xì) 菌培養(yǎng)物蛋白得率分別為154.5和23毫克。序列表
<110>無錫勝博生物技術(shù)有P艮公司
<120> —種惡性黑素瘤T細(xì)胞納米抗體、其編碼序列及應(yīng)用 <130> —種惡性黑素瘤T細(xì)胞納米抗體、其編碼序列及應(yīng)用 <160> 25
<170> Patentln version 3. 3
<210> 1
<211> 117
<212> PRT
<213> 駱駝
<400> 1
Glu Val Gin Leu Gin Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Asp 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30
Asn Met Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Asp Arg Glu Phe Val 35 40 45
Ala Ala lie Met Trp Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
9Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Lys Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys85 90 95
Trp Ser Thr Asp Asp Tyr Gly Val Asp Ser Trp Gly Gin Gly Thr Gin100 105 110
Val Thr Val Ser Ser115
<210> 2
<211> 127
<212> PRT
<213> 駱駝
<400> 2
Glu Gly Gin Leu Gin Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Asp15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Met Ser Gly Arg Thr Val Ser Ser His20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Leu Gin His Pro Gly Lys Gly Ser Glu Phe Val35 40 45Ser Ala lie Asp Trp Asn Gly Asn Ser Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Ala 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Arg Val Thr Phe Lys Met Arg Thr Ser Leu Arg Ser Thr Ser 100 105 110
Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120 125
<210> 3
<211> 118
<212> PRT <213>駱駝
<400> 3
Asp Val Gin Leu Gin Ala Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Phe Gly Asn 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Pro Thr Val Asp Ala Tyr 20 25 30
11Ala lie Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val35 40 45
Ala Ala lie Asn Trp Asn Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Thr Gly Ser Val50 55 60
Arg Gly Arg Phe Ala lie Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn lie Val Asn65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Gly Val Tyr Tyr Cys85 90 95
Ala Ala Asp Val Trp Gly Leu Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr100 105 110
Gin Val Thr Val Ser Ser115
<210> 4
<211> 117
<212> PRT
<213> 駱駝
<400> 4
Asp Val Gin Leu Gin Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly15 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Gly Phe Gly Ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Asn Ser Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys 50 55 60
Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Asp Lys Lys Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80
Gin Thr Thr Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys 85 90 95
Ala Leu Asp lie Thr Thr Ala Ala Ser Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin 100 105 110
Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 5 <211> 124 <212> PRT <213>駱駝<400> 5
Glu Val Gin Leu Gin Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Ala Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
His Met Gly Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Glu Arg Asp Phe Val 35 40 45
Ala Ala lie Ser Gly Ser Gly Val Tyr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Lys Asp Asn Ala Lys Asn Thr Gly Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asp Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ala Val Arg Ser Leu Tyr lie Thr Thr Ala Gin Ala Glu Tyr Asp 100 105 110
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Gin Val Thr Val Ser Ser 115 120<210> 6
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
gaggtgcagc tgcaggcgtc tgggggagga ttggtgcagg ctggggactc tctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggacg caccttcagt acctataaca tgggctggtt ccgccaggct 120
ccagggaagg accgtgagtt tgtagcagct attatgtgga gtggtggtag cacatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccaaagaca acgccaagaa cacggtgtat 240
ctgcaaatga acagcctgaa acctgaggac acggccgttt atttctgttg gagtaccgac 300
gattatggcg tggactcctg gggccagggg acccaggtca ccgtctcctc a 351
<210> 7
<211> 381
<212> DNA <213>人工序列
<400> 7
gagggtcagc tgcaggcgtc tgggggagga ttggtgcagg ctggggactc tctgagactc 60
tcctgtgtaa tgtctggacg caccgtcagt agtcatgcca tgggctggtt cctccagcat 120
ccagggaagg ggagtgagtt tgtgtcagcc attgactgga atggaaatag Ucatactat 180
tcagactccg cgaagggccg gttcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacggtatat 240ctgcaaatga acagcctgaa acctgaggac acggccgttt attactgtgc agcacgagtc 300
acgtttaaaa tgcgtacgtc tttaaggtct acttcgggat atgactactg gggtcagggg 360
acccaggtca ccgtctcctc a
381
<210> 8
<211> 354
<212> DNA <213>人工序列
<400> 8
gatgtgcagc tgcaggcgtc tgggggagga gtggtgcagt ttgggaactc tctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggacc caccgtcgat gcgtatgcca ttggctggtt ccgccaggct 120
ccagggaagg agcgcgaatt tgtggcagct atcaattgga atggtgcaag tacatactat 180
acagggtccg tgaggggccg attcgccatc tccagagaca atcccaaaaa tatcgtaaac 240
ctgcaaatga acagcctgac ctcagacgat tcaggcgtct actattgtgc agcagacgtt 300
tggggcctgg ggUcgacta ctggggtcag gggacccagg tcaccgtctc ctca 354
<210> 9 <211> 351
<212> DNA <213> 人工序列
<400> 9
gatgtgcagc tgcaggcgtc tgggggaggc ttggtgcagc ctgggggttc tctgagactc 60
16tcctgtgtag catctggatt cggcttcggg agtutgaca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccaggaaagg ggcccgagtg ggtctcagcg attaatagcg gtggtgacac atactatgcg 180
gcctccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatg acaagaaaac ggtgtatctg 240
caaacgacca gcctgaaacc tgaggatacg gccgtctatt actgUaagc tttggacatt 300
actactgcag catcctactg gggccagggg acccaggtca ccgtctcctc a
accgtctcct ca
351
<210> 10
<211> 372
<212> DM
<213> 人工序列
<400> 10
gatgtccagc tgcaggcgtc tgggggagga ttggtgcagg ctgggggctc tctgagactc 60
tcctgtgcat tctctggacg caccttcagt agctatcaca tgggctggtt ccgccaggct 120
gacgggaagg agcgtgagtt tgtggcggct attagcggga gtggtgtcta cacatattat 180
gcagagtccg tgaagggccg attcaccatc tccaaagaca acgccaagaa cacggggtat 240
ctgcaaatgg acagcctgaa acctgaggac acggccgttt attactgtgc agcagtacgg 300
agtctttata ttactacggc tcaggccgag tatgactact ggggccaggg gacccaggtc 360
372
<210> 11 <211> 5<212> PRT <213> 人工序列
<400> 11
Ser Thr Tyr Asn Met 1 5
<210> 12
<211> 16
<212〉 PRT
<213> 人工序列
<400> 12
lie Met Trp Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 15 10 15
<210> 13
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 13
Thr Asp Asp Tyr Gly Val Asp Ser 1 5
<210> 14
<211> 5
<212> PRT
18<213> 人工序列 <400> 14
Ser Ser His Ala Met 1 5
<210> 15
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 15
lie Asp Trp Asn Gly Asn Ser Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Ala Lys Gly 15 10 15
<210> 16
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 16
Val Thr Phe Lys Met Arg Thr Ser Leu Arg Ser Thr Ser Gly Tyr Asp 15 10 15
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
19<400> 17
Asp Ala Tyr Ala lie 1 5
<210> 18
<211> 16
<212> PRT <213>人工序列
<400> 18
lie Asn Trp Asn Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Thr Gly Ser Val Arg Gly 15 10 15
<210> 19
<211> 8
<212> PRT <213>人工序列
<400> 19
Asp Val Trp Gly Leu Gly Tyr Asp 1 5
<210> 20
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列<400> 20
Ser Tyr Asp Met Ser 1 5
<210> 21
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 21
lie Asn Ser Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly 15 10 15
<210> 22
<211> 8
<212> PRT <213>人工序列
<400> 22
Leu Asp lie Thr Thr Ala Ala Ser 1 5
<210> 23
<211> 5
<212> PRT <213>人工序列
<400> 23
21Ser Tyr His Met Gly 1 5
<210> 24
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 24
lie Ser Gly Ser Gly Val Tyr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly 15 10 15
<210> 25
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 25
Val Arg Ser Leu Tyr lie Thr Thr Ala Gin Ala Glu Tyr Asp 1 5 10
2權(quán)利要求
1.一種惡性黑素瘤T細(xì)胞納米抗體VHH鏈，其特征在于它的互補(bǔ)決定區(qū)CDR具有選自下組的CDR的氨基酸序列SEQ ID NO11所示的CDR1，SEQ ID NO12所示的CDR2，SEQ ID NO13所示的CDR3；或SEQ ID NO14所示的CDR1，SEQ ID NO15所示的CDR2，SEQ ID NO16所示的CDR3；或SEQ ID NO17所示的CDR1，SEQ ID NO18所示的CDR2，SEQ ID NO19所示的CDR3；或SEQ ID NO20所示的CDR1，SEQ ID NO21所示的CDR2，SEQ ID NO22所示的CDR3；或SEQ ID NO23所示的CDR1，SEQ ID NO24所示的CDR2，SEQ ID NO25所示的CDR3。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的惡性黑素瘤T細(xì)胞納米抗體VHH鏈，其特征在于它具有SEQIDNO:l、 2、 3、 4或5所示的氨基酸序列。
3. —種惡性黑素瘤T細(xì)胞納米抗體，其特征在于，它針對(duì)惡性黑素瘤T細(xì)胞抗原表位Marti多肽GAAGIGILIV,包括兩條具有SEQ IDNO:l、 2、 3、 4或5所示的氨基酸序列的VHH鏈。
4. 一種DNA分子，其特征在于，它編碼選自下組的蛋白質(zhì)權(quán)利要求1或2所述的惡性黑素瘤納米抗體Vfffl鏈，或權(quán)利要求3所述的惡性黑素瘤納米抗體。
5. 如權(quán)利要求4所述的DNA分子，其特征在于，它具有選自下組的DNA序列SEQIDNO:6、 7、 8、 9或10。
6. —種表達(dá)載體，其特征在于，它含SEQIDNO:6、 7、 8、 9或10所示的核苷酸序列。
7. 如權(quán)利要求1所述的表達(dá)載體，它還包含與所述核苷酸序列操作性相連的表達(dá)調(diào)控序列。
8. —種宿主細(xì)胞，其特征在于含有權(quán)利要求7所述的表達(dá)載體。，SEQ ID NO: 13,SEQIDNO:16，SEQIDNO:19,SEQIDNO:22，SEQIDNO:25
9. 權(quán)利要求3所述惡性黑素瘤T細(xì)胞納米抗體用于檢測(cè)惡性黑素瘤的用途。
10. —種檢測(cè)和治療惡性黑素瘤的藥物組合物，其特征在于，含有藥學(xué)上有效量的權(quán)利要求3所述惡性黑素瘤T細(xì)胞納米抗體以及藥學(xué)上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明涉及針對(duì)惡性黑素瘤T細(xì)胞抗原表位多肽Mart1的納米抗體，本發(fā)明還公開了同時(shí)提供該納米抗體的編碼序列，表達(dá)或能夠表達(dá)所述納米抗體的宿主細(xì)胞，該納米抗體能在大腸桿菌中高效表達(dá)，能應(yīng)用于制備檢測(cè)和治療惡性黑素瘤的藥物組合物。
文檔編號(hào)G01N33/577GK101550191SQ20091002780
公開日2009年10月7日 申請(qǐng)日期2009年5月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月15日
發(fā)明者王大升 申請(qǐng)人:無錫勝博生物技術(shù)有限公司