專利名稱：生物組織樣本常規(guī)石蠟制片he染色無二甲苯全程處理液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)療器械中的體外診斷試劑，具體說就是一種生物組 織樣本常規(guī)石蠟制片HE染色無二甲苯全程處理液。
(二)
背景技術(shù)：
組織病理學(xué)的誕生已有150多年的歷史。在所有的醫(yī)院，只要做 手術(shù)，均由醫(yī)院病理科對手術(shù)組織樣本作出組織病理學(xué)診斷。常規(guī)石 蠟包埋HE染色制片仍是當(dāng)前用以處理組織樣本的最基本技術(shù)，它是 病理診斷方法學(xué)的基礎(chǔ)，也是許多新方法、新技術(shù)優(yōu)劣的評定參照標(biāo) 準(zhǔn)。我國著名病理學(xué)家北京協(xié)和醫(yī)院陳杰教授近年多次在會議上強 調(diào)"目前病理技術(shù)多處于手工階段，各自配制各自的染液，很難達 到統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)重阻礙了病理技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化及質(zhì)量的提高。我們呼吁 諸如試劑、染液能實現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化、社會化供求。"
目前，全國乃至全世界依然在使用傳統(tǒng)的老方法，即在置放處 理液的缸中，依次倒入或調(diào)入不同處理液，樣本依次在每個缸中按規(guī) 定浸泡不同時間完成處理、切片、染色、封片等全過程。該過程使操 作人員置身于有毒環(huán)境，操作復(fù)雜，浪費資源，缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。
病理行業(yè)組織處理液用品的標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，社會化供求，是行業(yè)發(fā) 展的必然趨勢。
(三)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種主要應(yīng)用于各級醫(yī)院病理科對各類 組織樣本進行處理的病理學(xué)診斷試劑，可滿足組織樣本在手工或自動 脫水機操作下的制片技術(shù)和脫落細胞HE染色技術(shù)的需要的生物組織 樣本常規(guī)石蠟制片HE染色無二甲苯全程處理液。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的本發(fā)明的技術(shù)方案主要體現(xiàn)在配方
與操作工藝。生物組織樣本常規(guī)石蠟制片服染色無二甲苯全程處理
液分為組織脫水和切片染色兩部分
l.組織脫水組織固定液用分析純級無水乙醇85%，甲醛10%，冰醋酸5%。 常溫下將甲醛倒入分析純級無水乙醇中，最后滴入冰醋
酸，攪勻。PH值為6.5，分析純級無水乙醇濃度為85
/b 。
組織脫水液I:用分析純級乙醇70%，酮類30%。按比例常溫下混 溶均勻即得。分析純級乙醇濃度為70%。
組織脫水液II:用分析純級乙醇60%，酮類20%，多功能團20%。 常溫下按比例混配。分析純級乙醇濃度為60%。
組織透明液用分析純級桉油素25%，苯甲酸甲酯75%,常溫下按 比例混配。
組織浸蠟液I:病理切片專用石蠟90%，硬脂酸10%。置于容器內(nèi)， 加溫7(TC混溶后，常溫冷卻分切成型。熔點56 61 。C。
組織浸蠟液II:石蠟80%，蜂蠟10%，硬脂酸10%。置于容器內(nèi)， 加溫7(TC混溶后，常溫冷卻分切成型。熔點56 61 。C。
2.切片染色
切片脫蠟液I: 93號汽油30%，多功能團40%，松節(jié)油30%。按比
例常溫下混配均勻。 切片脫蠟液II:用分析純醇類50%,，苯甲酸甲酯50%。按比例常溫
下混配均勻。
蘇木素染色液蘇木精100g，無水酒精5000ml，蒸餾水5000ml，甘 油5000ml，冰醋酸500ml，硫酸鋁鉀(鉀磯)400g。 先將蘇木精溶于無水酒精中，然后依次加入蒸餾水、 甘油和冰醋酸，最后加入研細的硫酸鋁鉀(鉀礬)，邊 加邊攪拌，直到瓶底出現(xiàn)鉀礬結(jié)晶為止。混合后溶液 顏色呈淡紅色，放入容器中，用紗布封口，自然氧化 1~2月，至顏色變?yōu)樯罴t色時即可過濾備用。 伊紅染色液伊紅300g，蒸餾水50000ml,乙醇60000ml，冰乙酸 600ml。在伊紅中倒入少量的蒸餾水，使其溶解，然
后一邊緩慢倒入冰乙酸， 一邊用玻璃棒攪拌，直至溶
液成糊狀，然后將其放在烤箱中5crc烘烤，使之成粉
狀，加入75X的乙醇600ml，溶解。將剩余水溶液加 入伊紅液，待其全部溶解。PH值為4. 5 5. 5 除浮染液為95%乙醇。
除水透明液乙醇80%，丙酮20%。按比例常溫下混配均勻。乙 醇濃度為80。％。
切片透明液四氫呋喃30%，苯甲酸甲酯700%。按比例常溫下混配 均勻。
本發(fā)明生物組織樣本常規(guī)石蠟制片HE染色無二甲苯全程處理 液，將做為第一個行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化試劑，實現(xiàn)統(tǒng)一配制，標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)量管理， 無需單獨購配試劑。作為節(jié)約型環(huán)保新技術(shù)，它在加快了制片速度的 同時又不使組織發(fā)生過度收縮、硬、裂、脆，使細胞及組織結(jié)構(gòu)更接 近原有形態(tài)；對組織脫水較徹底，使用效果穩(wěn)定，操作簡單快捷、易 掌握、有良好的可控性；各類新型混合試劑為低揮發(fā)或不揮發(fā)、無毒 性(除固定液使用微量甲醛)、無污染的分析純有機化學(xué)試劑，在組 織標(biāo)本制備和組織切片HE染色的全程制片中，取締了原大量使用的 有毒性、致癌性(引起造血、神經(jīng)系統(tǒng)等損傷)、環(huán)境污染重的二甲 苯試劑，消除由此產(chǎn)生的職業(yè)病。使制片質(zhì)量達到優(yōu)質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，同時具 備了標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)量控制管理，是新一代可替代型產(chǎn)品。 具體實施例方式
下面結(jié)合附圖
對本發(fā)明作進一步說明。
本發(fā)明生物組織樣本常規(guī)石蠟制片HE染色無二甲苯全程處理液 分為組織脫水和切片染色兩部分 1.組織脫水
組織固定液用分析純級無水乙醇85%，甲醛10%，冰醋酸5%。 常溫下將甲醛倒入分析純級無水乙醇中，最后滴入冰醋 酸，攪勻。PH值為6.5，分析純級無水乙醇濃度為85
/b 。
組織脫水液I:用分析純級乙醇70%，酮類30%。按比例常溫下混
溶均勻即得。分析純級乙醇濃度為70%。 組織脫水液II:用分析純級乙醇60%，酮類20%，多功能團20%。
常溫下按比例混配。分析純級乙醇濃度為60%。 組織透明液用分析純級桉油素25%,苯甲酸甲酯75%，常溫下按
比例混配。
組織浸蠟液I:病理切片專用石蠟90%，硬脂酸10%。置于容器內(nèi)， 加溫7(TC混溶后，常溫冷卻分切成型。熔點56 61 。C。
組織浸蠟液II:石蠟80%，蜂蠟10%，硬脂酸10%。置于容器內(nèi)， 加溫7(TC混溶后，常溫冷卻分切成型。熔點56 61 。C。
2.切片染色
切片脫蠟液I: 93號汽油30%，多功能團40%，松節(jié)油30%。按比
例常溫下混配均勻。 切片脫蠟液II:用分析純醇類50%，苯甲酸甲酯50。X。按比例常溫
下混配均勻。
蘇木素染色液蘇木精100g，無水酒精5000ml，蒸餾水5000ml，甘 油5000ml，冰醋酸500ml，硫酸鋁鉀(鉀磯)400g。 先將蘇木精溶于無水酒精中，然后依次加入蒸餾水、 甘油和冰醋酸，最后加入研細的硫酸鋁鉀(鉀礬)，邊 加邊攪拌，直到瓶底出現(xiàn)鉀礬結(jié)晶為止?；旌虾笕芤?顏色呈淡紅色，放入容器中，用紗布封口，自然氧化 1 2月，至顏色變?yōu)樯罴t色時即可過濾備用。
伊紅染色液伊紅300g，蒸餾水50000ml,乙醇60000ml，冰乙酸 600ml。在伊紅中倒入少量的蒸餾水，使其溶解，然 后一邊緩慢倒入冰乙酸， 一邊用玻璃棒攪拌，直至溶 液成糊狀，然后將其放在烤箱中5(TC烘烤，使之成粉 狀，加入75X的乙醇600ml，溶解。將剩余水溶液加 入伊紅液，待其全部溶解。PH值為4. 5 5. 5
除浮染液為95%乙醇。
除水透明液乙醇80%，丙酮20%。按比例常溫下混配均勻。乙
醇濃度為80%。
切片透明液四氫呋喃30%，苯甲酸甲酯70%。按比例常溫下混配均勻。
實施例1
本發(fā)明生物組織樣本常規(guī)石蠟制片HE染色無二甲苯全程處理液 所述的組織固定液設(shè)定編號為第一缸，組織脫水液I為第二缸，組織 脫水液II為第三缸，組織透明液為第四缸，組織浸蠟液I為第五缸， 組織浸蠟液II為第六缸。在生物組織樣本進行脫水處理時，將生物組
織樣本依次分別放入第一缸至第六缸，其操作要求如下
放入第一缸的時間當(dāng)日下午16時到19時30分；(泡時間3
小時30分)
放入第二缸的時間；當(dāng)日晚上19時30分到21時；(浸泡時間
1小時30分)
放入第三缸的時間當(dāng)日晚上21時到22時30分；(浸泡時間
1小時30分)
放入第四缸的時間當(dāng)日晚上22時30分到次日1時O分；(浸 泡時間2小時30分)
放入第五缸的時間次日1時0分到4時0分；(浸泡時間3 小時O分)
放入第六缸的時間次日4時0分到8時0分；(浸泡時間4 小時O分)
以上為組織脫水過程。
本發(fā)明生物組織樣本常規(guī)石蠟制片HE染色無二甲苯全程處理液 所述的切片脫蠟液I設(shè)定編號為第七缸，切片脫蠟液II為第八缸，蘇 木素染色液為第九缸，伊紅染色液為第十缸，除浮染液為第十一缸， 除水透明液為第十二缸，切片透明液為第十三缸。
下面是生物組織樣本切片的染色過程
(1) 將生物組織樣本切片放入第七缸中浸五分鐘，取出放入第八缸。
(2) 將生物組織樣本切片在第八缸中浸五分鐘，取出；
(3) 將生物組織樣本切片用自來水緩流清洗兩分鐘，然后放入第九 缸中，在第九缸中浸5-8分鐘，取出，用自來水緩流清洗藍花 兩分鐘，然后放入第十缸里；
(4) 生物組織樣本切片在第十缸中浸2-5分鐘后取出，用自來水緩
流清洗一分鐘，然后放入第十一缸中浸10秒鐘取出；
(5) 將生物組織樣本切片放入第十二缸中浸3分鐘后取出放入第十 三缸中再浸5分鐘。
至此，完成了生物組織樣本切片的染色。 實施例3
較大及微小組織切片HE染色操作程序要求:
(1) 較大組織與微小組織切片HE染色方法及用時相同。載玻片磨 砂處僅能用2B鉛筆標(biāo)號，否則字跡難保留。室溫在15'C以上時，蠟 塊要置于冰塊上冷卻，以防皺褶不易打開和不易切片。組織切片厚 度3 4um，充分打開皺褶。
(2) 防止脫片液使用方法主要用于凝血塊及易脫片的組織切片，
每張切片在載玻片適當(dāng)位置滴極少該液，用另一張載玻片貼合拉開 即可使用，或用手指抹去多余防脫片劑。
(3) 干燥處理表好的組織切片在熔蠟恒溫箱內(nèi)或烘片機內(nèi)干燥，
用時20 30min。
(4) 組織切片在脫蠟、染色、透明各處理程序時，均要求反復(fù)手 提染色架3 5次，是提高染色質(zhì)量所必須。
(5) 組織切片在12、 13、 14號液內(nèi)分別完成后，要充分瀝干液體 達到切片潮干或用電吹風(fēng)機冷風(fēng)吹干。需在IOO瓦燈照明下， 逐一滴膠封片(用套材中配制的無苯樹膠)，不可以一次性把 全部切片滴完封膠再依次加蓋玻片封片，封片中要按壓蓋玻 片排凈氣泡。
實施例4
脫落細胞HE染色操作程序要求
需單獨設(shè)立一套染色液，染色程序及所用試劑編號如下
(1) 固定^同組織標(biāo)本制備技術(shù)中1號固定液一缸，lmin; 水洗——自來水小流量緩慢流水清洗，lmin;
(2) 蘇木素染色——同編號9號蘇木素染色液一缸，5min; 水洗藍化——自來水小流量緩慢流水清洗，3 min;
(3) 伊紅染色——同編號IO號伊紅染色液一缸，5min; 水洗^"自來水小流量緩慢流水清洗，lmin;
(4) 除浮染——同編號11號除水液一缸，lmin;
(5) 透明——同編號13號透明液一缸，2min;
(6) 封片——用套液中無苯封片膠。也可不用滴封片膠，直接讀 片，適用大批量快速閱片，陽性者再封片。
權(quán)利要求
1.一種生物組織樣本常規(guī)石蠟制片HE染色無二甲苯全程處理液，分為組織脫水和切片染色兩部分(1)組織脫水組織固定液用分析純級無水乙醇85％，甲醛10％，冰醋酸5％；常溫下將甲醛倒入分析純級無水乙醇中，最后滴入冰醋酸，攪勻；PH值為6.5，分析純級無水乙醇濃度為85％；組織脫水液I用分析純級乙醇70％，酮類30％；按比例常溫下混溶均勻即得；分析純級乙醇濃度為70％；組織脫水液II用分析純級乙醇60％，酮類20％，多功能團20％；常溫下按比例混配；分析純級乙醇濃度為60％；組織透明液用分析純級桉油素25％，苯甲酸甲酯75％，常溫下按比例混配；組織浸蠟液I病理切片專用石蠟90％，硬脂酸10％；置于容器內(nèi)，加溫70℃混溶后，常溫冷卻分切成型；熔點56～61℃；組織浸蠟液II石蠟80％，蜂蠟10％，硬脂酸10％；置于容器內(nèi)，加溫70℃混溶后，常溫冷卻分切成型；熔點56～61℃；(2)切片染色切片脫蠟液I93號汽油30％，多功能團40％，松節(jié)油30％，按比例常溫下混配均勻；切片脫蠟液II用分析純醇類50％，，苯甲酸甲酯50％；按比例常溫下混配均勻；蘇木素染色液蘇木精100g，無水酒精5000ml，蒸餾水5000ml，甘油5000ml，冰醋酸500ml，硫酸鋁鉀(鉀礬)400g；先將蘇木精溶于無水酒精中，然后依次加入蒸餾水、甘油和冰醋酸，最后加入研細的硫酸鋁鉀(鉀礬)，邊加邊攪拌，直到瓶底出現(xiàn)鉀礬結(jié)晶為止；混合后溶液顏色呈淡紅色，放入容器中，用紗布封口，自然氧化1～2月，至顏色變?yōu)樯罴t色時即可過濾備用；伊紅染色液伊紅300g，蒸餾水50000ml，乙醇60000ml，冰乙酸600ml；在伊紅中倒入少量的蒸餾水，使其溶解，然后一邊緩慢倒入冰乙酸，一邊用玻璃棒攪拌，直至溶液成糊狀，然后將其放在烤箱中50℃烘烤，使之成粉狀，加入75％的乙醇600ml，溶解；將剩余水溶液加入伊紅液，待其全部溶解；PH值為4.5～5.5；除浮染液為95％乙醇；除水透明液乙醇80％，丙酮20％；按比例常溫下混配均勻；乙醇濃度為80％；切片透明液四氫呋喃30％，苯甲酸甲酯70％；按比例常溫下混配均勻。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供一種主要應(yīng)用于各級醫(yī)院病理科對各類組織樣本進行處理的病理學(xué)診斷試劑，可滿足組織樣本在手工或自動脫水機操作下的制片技術(shù)和脫落細胞HE染色技術(shù)的需要的生物組織樣本常規(guī)石蠟制片HE染色無二甲苯全程處理液，分為組織脫水和切片染色兩部分。作為節(jié)約型環(huán)保新技術(shù)，它在加快了制片速度的同時又不使組織發(fā)生過度收縮、硬、裂、脆，使細胞及組織結(jié)構(gòu)更接近原有形態(tài)；對組織脫水較徹底，各類新型混合試劑為低揮發(fā)或不揮發(fā)、無毒性、無污染的分析純有機化學(xué)試劑，在組織標(biāo)本制備和組織切片HE染色的全程制片中，取締了原大量使用的有毒性、環(huán)境污染重的二甲苯試劑，消除由此產(chǎn)生的職業(yè)病。
文檔編號G01N1/30GK101344467SQ20081013696
公開日2009年1月14日 申請日期2008年8月20日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月20日
發(fā)明者趙曉輝 申請人:趙曉輝