專利名稱：一種分離分析阿戈美拉汀中間體及其終產(chǎn)品的hplc方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)涉一種高效液相分析方法，尤其是一種阿戈美拉汀中間體及其終產(chǎn)品的 分離與分析測定。
背景技術(shù)：
阿戈美拉汀(Agomelatine)是一種褪黑素激動劑，具有抗抑郁癥狀作用， 可在不影響白天活動狀態(tài)的情況下改善夜間睡眠情況。在化學(xué)合成過程中經(jīng)過幾 個中間體關(guān)鍵歩驟，所以在終產(chǎn)品中可能殘留有各中間體，會影響產(chǎn)品的質(zhì)量， 所以建立分離分析方法對其進(jìn)行質(zhì)量控制是非常必要的，其各中間體及終產(chǎn)品的 結(jié)構(gòu)如下
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阿戈美拉汀N- (2- (7-甲氧基-l-萘基)乙基)-乙酰胺，
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中間體—4 ((7_甲氧基_3， 4-二氫-l-萘基)乙腈)
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中間體-5 ((7-甲氧基-1-萘基)乙腈)<formula>formula see original document page 4</formula>
中間體-6 (2- (7-甲氧基-l-萘基)乙胺鹽酸鹽)
從以上各成分結(jié)構(gòu)上來考察，結(jié)構(gòu)非常相似，所以采用HPLC方法時，在同 一色譜柱上要想達(dá)到各組分有效的分離是非常困難的，事實也是如此，通過改變 二元流動相比例、pH值、離子強(qiáng)度等方法結(jié)果均不理想。而且到目前為止，沒 有文獻(xiàn)報道對阿戈美拉汀的中間體及終產(chǎn)品的成功分離分析方法。
后經(jīng)反復(fù)試驗意外發(fā)現(xiàn)，采用C18柱，緩沖液(pH值2 7)與另外兩種有 機(jī)溶劑以--定配比成三元流動相，流動相的流速為1.0mL/min。用該方法可以快 速有效的分離分析阿戈美拉汀中間體及其終產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種分離分析阿戈美拉汀中間體及其終產(chǎn)品的高效 液相色譜方法，從而實現(xiàn)阿戈美拉汀中間體與及其終產(chǎn)品的分離分析測定。本發(fā) 明用高效液相色譜法分離分析阿戈美拉汀中間體及其終產(chǎn)品。
本發(fā)明所說的用高效液相色譜法分析分離阿戈美拉汀中間體及其終產(chǎn)品的 方法，是以C18為色譜柱，緩沖液(pH值2 7)與另外兩種有機(jī)溶劑以一定配 比成三元組合為流動相，流動相的流速為1.0mL/min。用該方法可以快速有效的 分離分析阿戈美拉汀中間體及其終產(chǎn)品。
本發(fā)明的有機(jī)溶劑選自下列化合物乙腈、甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇。 所述的有機(jī)溶劑優(yōu)選甲醇和乙腈與甲醇和乙醇以一定比例配比；最優(yōu)選的有機(jī)溶 劑為甲醇和乙腈以一定比例配比。其中一種有機(jī)溶劑另外一種有機(jī)溶劑緩沖 液的比例為30~50% (v/v) 30 10% (v八'):50 30% (v/v)。緩沖液的pH值 為2~7，所述的緩沖液的pH值優(yōu)選為2.5 5;最優(yōu)選2.7 4。緩沖液采用的緩沖 鹽為醋酸鈉-醋酸、磷酸氫二鈉-磷酸、磷酸氫二鉀-磷酸，優(yōu)選為醋酸鈉-醋酸、 磷酸氫二鈉-磷酸；最優(yōu)選磷酸氫二鈉-磷酸。
本發(fā)明所述的分離分析方法，可按照以下方法實現(xiàn) (1) 取阿戈美拉汀中間體樣品適量，采用流動相溶解，配制成每lmL含 阿戈美拉汀0.1 1 mg的樣品溶液。
(2) 設(shè)置流動相流速為0.4 L2mL/min,檢測波長為230nm,室溫。
(3) 取(l)的樣品溶液2-50 nL注入液相色譜儀，完成阿戈美拉汀中間體 及終產(chǎn)品分離與分析。


圖1流動相為甲醇-乙腈-磷酸鹽緩沖液(O.OIM磷酸氫二鈉，磷酸調(diào)pH至2.7) =42 : 18 : 40，其中圖譜中1為中間體-6， 2為中間體-4， 3為阿戈美拉汀，4為 中間體-5，可以看出在該條件下阿戈美拉汀主峰可以和三個中間體完全分離。
圖2流動相為甲醇-乙腈-磷酸鹽緩沖液(0.01M磷酸氫二鈉，磷酸調(diào)pH至2.7) =40 : 20 : 40;其中圖譜中1為中間體-6, 2為中間體-4， 3為阿戈美拉汀，4為 中間體-5，可以看出在該條件下阿戈美拉汀主峰可以和三個中間體完全分離。
圖3流動相為甲醇-乙腈-醋酸鈉緩沖液(冰醋酸調(diào)pH至2.7) =40 : 20 : 40; 其中圖譜中1為中間體-6， 2為中間體-4， 3為阿戈美拉汀，4為中間體-5，可以 看出在該條件下阿戈美拉汀主峰可以和三個中間體完全分離。
圖4流動相為甲醇-異丙醇-醋酸鈉緩沖液(冰醋酸調(diào)pH3.8) =40 : 15 : 5;其 中圖譜中l(wèi)為中間體-6， 2為中間體-4， 3為中間體-5, 4為阿戈美拉汀，可以看
出在該條件下阿戈美拉汀主峰可以和三個中間體完全分離。
圖5流動相為甲醇-乙腈-磷酸鹽緩沖液(O.OIM磷酸氫二鈉，磷酸pH至3.0) =42 : 18 : 40:其中圖譜中1為中間體-6， 2為中間體-4， 3為阿戈美拉汀，4一 中間體-5，可以看出在該條件下阿戈美拉汀主峰可以和三個中間體完全分離。
圖6流動相為甲醇-乙腈-醋酸鈉緩沖液(冰醋酸調(diào)pH至2.7) =30 : 30 : 40; 其中圖譜中1為中間體-6， 2為中間體-4和中間體-5, 3為阿戈美拉汀，可以看 出在該條件下阿戈美拉汀主峰可以和三個中間體完全分離。 圖7 (對比實施例)流動相為甲醇一水(冰醋酸，pH2.7) =60:40;其中圖 譜中1為中間體-6， 2為中間體-4， 3為阿戈美拉汀和中間體-6，可以看出在該條 件下阿戈美拉汀主峰與中間體-6不能完全分離。
具體實施例方式
實施例1
1. 儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCL-10Avp， DGU-12A; 色譜柱C18 (250mmx4.6mm);流動相甲醇-乙腈-磷酸鹽緩沖液(0.01M 磷酸氫二鈉，磷酸調(diào)pH至2.7) =42 : 18 : 40;流速1.0mL/min;檢測波
長230 nm;柱溫室溫；進(jìn)樣體積10 μL。
2. 實驗歩驟
將阿戈美拉汀中間體和終產(chǎn)品混合，采用流動相溶解樣品，按上述條件進(jìn)行 高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖l。
實施例2
1. 儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCL-10Avp， DGU-12A; 色譜柱C18 (250mmx4.6mm);流動相甲醇-乙腈-磷酸鹽緩沖液(0.01M 磷酸氫二鈉，磷酸調(diào)pH至2.7) =40:20:40;流速1.0mL/min;檢測波 長230 nm;柱溫室溫；進(jìn)樣體積10 μL。
2. 實驗歩驟
將阿戈美拉汀中間體和終產(chǎn)品混合，采用流動相溶解樣品，按上述條件進(jìn)行
高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖2 實施例3
1. 儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCL-10Avp， DGU-12A; 色譜柱C18 (250mmx4.6mm);流動相甲醇-乙腈-醋酸鈉緩沖液(冰醋 酸調(diào)pH至2.7) =40:20:40;流速1.0mL/min;檢測波長230 nm;柱
溫室溫；進(jìn)樣體積10 μL
2. 實驗歩驟
將阿戈美拉汀中間體和終產(chǎn)品混合，采用流動相溶解樣品，按上述條件進(jìn)行 高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖3 實施例4
1. 儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATvp， SPD-M10Avp, SCL-10Avp, DGU-12A 色譜柱C18 (250mmx4.6mm);流動相甲醇-異丙醇-醋酸鈉緩沖液(冰 醋酸調(diào)pH至3.8) =40:15:45;流速1.0mL/min;檢測波長230nm; 柱溫室溫；進(jìn)樣體積10 U L
2. 實驗歩驟
將阿戈美拉汀中間體和終產(chǎn)品混合，采用流動相溶解樣品，按上述條件進(jìn)行
高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖4 實施例5
1. 儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCL-10Avp， DGU-12A 色譜柱:C18 (250mmx4.6mm);流動相甲醇-乙腈-(0.01M磷酸氫二鈉， 磷酸調(diào)pH至3.0) =42:18:40;流速1.0mL/min;檢測波長230 nm;
柱溫室溫；進(jìn)樣體積10 W L
2. 實驗歩驟
將阿戈美拉汀中間體和終產(chǎn)品混合，采用流動相溶解樣品，按上述條件進(jìn)行
高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖5 實施例6
1. 儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATvp, SPD-M10Avp, SCL-10Avp， DGU-12A 色譜柱C18 (250mmx4.6mm);流動相甲醇-乙腈-醋酸鈉緩沖液(冰醋 酸調(diào)pH至2.7) =30:30:40;流速1.0mL/min;檢測波長230 nm;柱
溫室溫；進(jìn)樣體積10 U L
2. 實驗歩驟
將阿戈美拉汀中間體和終產(chǎn)品混合，采用流動相溶解樣品，按上述條件進(jìn)行 高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖6 對比實施例
1. 儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATvp， SPD-M10Avp, SCL-10Avp， DGU-12A 色譜柱C18 (250mmx4.6nun);流動相甲醇-水(冰酉昔酸，pH2.7) =60 :10 : 40;流速1.0mL/min;檢測波長230 nm;柱溫室溫；進(jìn)樣體積
10 uL
2. 實驗歩驟
將阿戈美拉汀中間體和終產(chǎn)品混合，采用流動相溶解樣品，按上述條件進(jìn)行
高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結(jié)果見附圖權(quán)利要求
1. 一種高效液相色譜法分離分析阿戈美拉汀中間體及終產(chǎn)品的方法，其特征在于以C18(250×4.6mm，5μm)，緩沖液(pH值2～7)與另外兩種有機(jī)溶劑以一定配比成三元流動相。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析分離方法，其特征在于色譜柱選用C18 (250X 4.6mm ， 5,)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析分離方法，其特征在于所說的另外兩種有機(jī)溶劑 選自以下幾種化合物其中的任意兩種乙腈、甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇， 優(yōu)選甲醇和乙腈、甲醇和乙醇的混合溶液，最優(yōu)選甲醇和乙腈的混合溶液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離分析方法，其特征在于一種有機(jī)溶劑另外一種 有機(jī)溶劑:緩沖液的比例為30~50% (v/v) : 30~跳(v/v) : 50 30% (v/v)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的分離分析方法，其特征在于所述緩沖液的pH值為2 7， 優(yōu)選2.5 5，最優(yōu)選3 4。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離分析方法，其特征在于緩沖液中采用的緩沖鹽為 醋酸鈉-醋酸、磷酸氫二鈉-磷酸、磷酸氫二鉀-磷酸，優(yōu)選為醋酸鈉-醋酸、磷 酸氫二鈉-磷酸，最優(yōu)選磷酸氫二鈉-磷酸。
7. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的分析分離方法，其特征在于包括以下幾個歩驟(1) 取阿戈美拉汀中間體樣品適量，采用流動相溶解，配制成每lmL含 阿戈美拉汀0.1 1 mg的樣品溶液；(2) 設(shè)置流動相流速為0.4 1.2mL/min,檢測波長為230nm，室溫；(3) 取(1)的樣品溶液2-50 UL注入液相色譜儀，完成阿戈美拉汀中間 體及終產(chǎn)品分離與分析。
8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的分離分析方法，其特征在于流動相的流速優(yōu)選為1 mL/min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種阿戈美拉汀中間體、及其終產(chǎn)品的分離與分析測定方法，采用高效液相色譜，以C18為色譜柱，緩沖液(pH值2～7)與另外兩種有機(jī)溶劑以一定配比組成三元流動相，流動相的流速為1.0mL/min，用該方法可以快速有效的分離分析阿戈美拉汀中間體及其終產(chǎn)品。
文檔編號G01N30/02GK101206200SQ20061016538
公開日2008年6月25日 申請日期2006年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月19日
發(fā)明者寧美英 申請人:北京德眾萬全藥物技術(shù)開發(fā)有限公司