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用作腎毒性標(biāo)記物的甲狀腺素運(yùn)載蛋白的制作方法

文檔序號(hào):6114564閱讀:197來源:國(guó)知局
專利名稱:用作腎毒性標(biāo)記物的甲狀腺素運(yùn)載蛋白的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及作為腎毒性生物標(biāo)記物的甲狀腺素運(yùn)載蛋白在腎皮質(zhì)中的積累。
甲狀腺素運(yùn)載蛋白是一種不在腎臟中表達(dá)的血漿蛋白質(zhì),并且在血漿中檢測(cè)到甲狀腺素運(yùn)載蛋白與例如某些腫瘤、營(yíng)養(yǎng)不良或胰腺炎的存在相關(guān)。
本發(fā)明涉及甲狀腺素運(yùn)載蛋白積累的原位檢測(cè),其中在發(fā)生退化改變的腎皮質(zhì)區(qū)域內(nèi)鑒定甲狀腺素運(yùn)載蛋白的積累。因此,根據(jù)本發(fā)明,對(duì)腎皮質(zhì)中甲狀腺素運(yùn)載蛋白積累的檢測(cè)可用于評(píng)價(jià)腎毒性。
本申請(qǐng)證實(shí),當(dāng)施用慶大霉素時(shí)受調(diào)節(jié)的生物標(biāo)記物之一被鑒定為甲狀腺素運(yùn)載蛋白(前白蛋白),它是一個(gè)13kDa的血液轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。然后,通過Western印跡證實(shí)了該結(jié)果,這表明該蛋白質(zhì)在來自慶大霉素處理大鼠的腎臟中比來自對(duì)照大鼠的腎臟中明顯更多。
在藥物研制過程中所測(cè)試的候選藥物副作用之一是腎毒性。
腎毒性的特征在于近端小管的明顯退化/再生(4級(jí)),其在用100mg/kg/天的慶大霉素處理7天的大鼠內(nèi)明顯可見,因此證實(shí)慶大霉素處理誘導(dǎo)了腎毒性。因此,慶大霉素處理被用作鑒定腎毒性的新標(biāo)記物。通過MAIDL IMS分析大鼠腎薄切片。分析所得到的譜圖并將峰分等級(jí)。將質(zhì)量m/z 12959的峰歸為皮質(zhì)中的第一位的等級(jí),其在慶大霉素處理的大鼠腎臟中的平均信噪比為5,并且在對(duì)照中完全缺乏。
從皮質(zhì)區(qū)域微抽提皮質(zhì)蛋白質(zhì),并通過反相色譜分級(jí)分離。含有質(zhì)量m/z 12959處峰的級(jí)分經(jīng)串聯(lián)MS鑒定為甲狀腺素運(yùn)載蛋白。
在原位以及在HPLC級(jí)分中證明了甲狀腺素運(yùn)載蛋白的存在。同樣,也證明了通過串聯(lián)質(zhì)譜鑒定為甲狀腺素運(yùn)載蛋白S28-Q146(甲狀腺素運(yùn)載蛋白的一種加工形式)的m/z種類12959僅僅存在于慶大霉素處理樣品的原位質(zhì)譜中和HPLC級(jí)分D10質(zhì)譜中。
因此,本發(fā)明提供一種評(píng)價(jià)腎毒性的方法,其包括以下步驟a)提供來自懷疑患有腎毒性的受試者的腎樣品;b)確定與健康受試者相比甲狀腺素運(yùn)載蛋白在懷疑患有腎毒性的受試者腎皮質(zhì)中的積累;其中,與健康受試者相比,甲狀腺素運(yùn)載蛋白在懷疑患有腎毒性的受試者腎皮質(zhì)中的積累增加指示存在腎毒性。
所述受試者可以是哺乳動(dòng)物。所述哺乳動(dòng)物可以是非人哺乳動(dòng)物。所述非人哺乳動(dòng)物可以是大鼠。
甲狀腺素運(yùn)載蛋白在腎皮質(zhì)中的積累可以通過任何適宜方法確定。此類方法之一是免疫組織化學(xué),其使用甲狀腺素運(yùn)載蛋白特異的且適合免疫組織化學(xué)的抗體。開展免疫組織化學(xué)的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。另一種方法是對(duì)腎皮質(zhì)提取物進(jìn)行電泳以及隨后通過例如使用甲狀腺素運(yùn)載蛋白特異抗體的Western印跡或質(zhì)譜對(duì)甲狀腺素運(yùn)載蛋白的檢測(cè)。檢測(cè)腎皮質(zhì)中甲狀腺素運(yùn)載蛋白積累的優(yōu)選方法是腎切片的MALDI成像質(zhì)譜(IMS)。這使得可以在損傷腎皮質(zhì)中檢測(cè)和定位標(biāo)記物的加工形式。
附圖簡(jiǎn)述

圖1腎薄切片上的基質(zhì)點(diǎn)樣方案。
圖2對(duì)照對(duì)慶大霉素處理大鼠腎臟皮質(zhì)中7個(gè)最明顯區(qū)別特征的聚類分析。
圖3對(duì)照和慶大霉素處理大鼠腎臟皮質(zhì)中m/z 12959的平均信號(hào)。
圖4鑒定方案。
圖5m/z 12959的串聯(lián)質(zhì)譜分析A)完整質(zhì)譜圖。B)簡(jiǎn)潔(Deconvulated)質(zhì)譜圖。C)解析的串聯(lián)質(zhì)譜圖。
圖6數(shù)據(jù)庫(kù)檢索結(jié)果。
圖7A)來自腎皮質(zhì)和HPLC級(jí)分D10的胞質(zhì)部分的Western印跡分析。B)大鼠腎皮質(zhì)和HPLC級(jí)分的MALDI MS分析,D10G/C慶大霉素/對(duì)照的HPLC級(jí)分D10;G/C慶大霉素/對(duì)照的腎胞質(zhì)部分。
圖8來自對(duì)照和慶大霉素處理大鼠腎的免疫組織化學(xué)檢查。來自處理大鼠(A)和對(duì)照大鼠(B)的整個(gè)腎臟切片的掃描數(shù)字圖像顯示在處理的腎皮質(zhì)內(nèi)有高水平的甲狀腺素運(yùn)載蛋白免疫反應(yīng)性。來自皮質(zhì)(C、E)對(duì)髓質(zhì)(D、F)的高放大倍數(shù)顯微照片顯示了TTR免疫反應(yīng)性在處理腎臟皮質(zhì)小管中的具體位置。通過二氨基聯(lián)苯胺-Ni灰色沉淀和甲酚紫復(fù)染顯示TTR免疫反應(yīng)性。
實(shí)施例實(shí)施例1腎毒性的模型系統(tǒng)實(shí)施例1a)動(dòng)物處理從當(dāng)?shù)毓芾頇C(jī)構(gòu)獲得動(dòng)物研究許可,并且所有研究方案都遵守動(dòng)物福利指南。大約12周齡的雄性HanBrlWistar大鼠(300g±20%)獲自BRL,F(xiàn)üllinsdorf,瑞士。這些動(dòng)物單獨(dú)圈養(yǎng)在20℃及50%相對(duì)濕度的墊有木刨花的Macrolone籠中,12小時(shí)光照/黑暗循環(huán),自由飲水和攝食Kliba 3433嚙齒動(dòng)物飼料(Provimi Kliba AG,Kaiseraugst,瑞士)。
用100mg/kg/天量的慶大霉素(溶于鹽水)或媒介物皮下注射(sc)動(dòng)物,連續(xù)處理7天,最后一次施用后24小時(shí)通過吸入CO2處死。在處死前立即在異氟烷麻醉下從眼后竇收集終末血樣用于臨床化學(xué)研究。
實(shí)施例1b)組織學(xué)典型腎臟樣品在10%中性緩沖福爾馬林中固定。所有樣品均使用常規(guī)方法處理并用Paraplast包埋。切成約2-3微米的組織切片,并用蘇木精-伊紅(HE)或高碘酸-希夫反應(yīng)(PAS)染色。
實(shí)施例2慶大霉素處理大鼠腎皮質(zhì)的MALDI-IMS研究腎臟區(qū)域內(nèi)(皮質(zhì)、髓質(zhì)、乳頭)的差異蛋白質(zhì)表達(dá)以便研究在組織病理學(xué)上所觀察到的慶大霉素的毒性是否與通過IMS得到的結(jié)果相關(guān)聯(lián)。當(dāng)施用慶大霉素時(shí),皮質(zhì)區(qū)內(nèi)的幾個(gè)蛋白質(zhì)峰受到明顯的調(diào)節(jié)。
在用100mg/kg/天的慶大霉素處理7天的大鼠內(nèi)清楚地觀察到近端小管的明顯退化/再生(4級(jí))。該發(fā)現(xiàn)與通過MALDI IMS對(duì)大鼠腎臟薄切片的分析相關(guān)。如下所述,將9個(gè)對(duì)照和9個(gè)慶大霉素處理大鼠腎臟薄切片(來自3個(gè)動(dòng)物,每個(gè)動(dòng)物3片;如圖1所示將基質(zhì)點(diǎn)樣于該薄切片上)進(jìn)行質(zhì)譜分析。
實(shí)施例2a)MALDI IMS樣品制備切下大鼠腎臟,在干冰上迅速冷凍,并在進(jìn)一步處理之前保存在-80℃。用冰凍切片機(jī)(LEICA CM 3000,Leica Microsystems)于-18℃切成12μm切片,貼于ITO-包被的傳導(dǎo)載玻片上(氧化銦錫,50×75×0.9mm,Delta Technologies)。根據(jù)已公開的方法(Schwartz,S.A.,Reyzer,M.L.和Caprioli,R.M.(2003)Journal of Mass Spectrometry 38,699-708)進(jìn)行樣品制備。然后將組織切片浸沒于乙醇浴中固定,并在真空下干燥30分鐘。在所有過程中,這些切片盡可能儲(chǔ)存在真空中。用移液器將MALDI基質(zhì)手工點(diǎn)樣。200nL新鮮制備的芥子酸溶液(以20mg/ml濃度溶于1∶1的水/乙腈、0.1%三氟乙酸中的3,5-二甲氧基-4-羥基肉桂酸,F(xiàn)luka)點(diǎn)在組織上。結(jié)晶后,在斑點(diǎn)上覆蓋另外200nL的芥子酸溶液,并且將基質(zhì)室溫干燥。如果不立即通過質(zhì)譜分析,則將樣品置于真空下。
實(shí)施例2b)質(zhì)譜使用帶有標(biāo)準(zhǔn)337nm N2激光(在50Hz下工作且激光光斑大小為50μm)的UltraFlex MALDI ToF/ToF設(shè)備(Bruker Daltonics)獲得MALDIMS譜圖。在正線性模式(2kDa-30kDa)中以恒定激光功率操作設(shè)備。對(duì)于每個(gè)手工點(diǎn)樣的基質(zhì)滴平均進(jìn)行總共8次的100次激光脈沖。使用蛋白質(zhì)校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液(胰島素、泛蛋白I、細(xì)胞色素C、肌球蛋白;BrukerDaltonics)對(duì)譜圖進(jìn)行外部校準(zhǔn)。在獲得后使用來自譜圖的過量的已知峰(血紅蛋白α-鏈、胸腺素β-4、細(xì)胞色素c氧化酶多肽VIIa L、泛蛋白、細(xì)胞色素c氧化酶多肽VIb)進(jìn)行內(nèi)部校準(zhǔn)。
實(shí)施例2c)數(shù)據(jù)分析聯(lián)合使用商業(yè)可得的工具和Vanderbilt大學(xué)內(nèi)部開發(fā)的工具對(duì)圖譜進(jìn)行處理。使用ProTS-Date軟件(Efeckta Technologies公司)進(jìn)行基線扣除、歸一化、峰檢測(cè)和光譜調(diào)整。對(duì)所有譜圖進(jìn)行基線校準(zhǔn)以去除化學(xué)噪聲對(duì)信號(hào)的影響。該步驟可通過局部估計(jì)基線并從原始數(shù)據(jù)中扣除基線譜圖來實(shí)現(xiàn)。對(duì)于本數(shù)據(jù)集,將軟件進(jìn)行設(shè)置,認(rèn)為不同m/z區(qū)域分辨率的差異是因?yàn)榇翱趯挾仁欠鍖挼?0倍。通過按比例換算成一般總離子流,將基線校準(zhǔn)的譜圖在強(qiáng)度上進(jìn)行歸一化。使用ProTS-Date進(jìn)行峰檢測(cè),并且選出一列13個(gè)共有峰作為使用二次校準(zhǔn)功能的內(nèi)部調(diào)整點(diǎn)。選擇共有峰的標(biāo)準(zhǔn)是該峰必須在大于80%的待調(diào)整譜圖中出現(xiàn),必須沒有干擾峰或重疊峰,并且這些峰具有小于7個(gè)質(zhì)量單位的所觀察矩心值標(biāo)準(zhǔn)偏差。為了避免出現(xiàn)在調(diào)整步驟中由外推所造成的誤差,要在跨過從2500至15000質(zhì)量單位的整個(gè)目的質(zhì)量范圍內(nèi)選擇調(diào)整峰。包含矩心值和歸一化強(qiáng)度的峰表輸出為單獨(dú)文件。
使用Vanderbilt大學(xué)內(nèi)部開發(fā)的程序,根據(jù)峰的m/z值,將峰表歸類(bin)。使用遺傳算法并行檢索策略(Yanagisawa,K.,Shyr,Y.,Xu,B.J.,Massion,P.P.,Larsen,P.H.,White,B.C.,Roberts,J.R.,Edgerton,M.,Gonzales,A.,Nadaf,S.,Moore,J.H.,Caprioli,R.M.,和Carbone,D.P.(2003)The Lancet 362,433-439),將輸出的MALDI-TOF MS峰對(duì)樣品進(jìn)行調(diào)整。簡(jiǎn)言之,將峰歸類在一起,這樣使來自不同樣品的峰數(shù)目最大化,同時(shí)來自同一樣品的峰數(shù)目最小化。產(chǎn)生一系列質(zhì)量窗口或峰類,使得相似峰從眾多譜圖中分開。為了使用加權(quán)靈活混合共變量方法(WeightedFlexible Compound Covariate Method)(WFCCM)確定用于慶大霉素誘導(dǎo)腎毒性的相關(guān)生物標(biāo)記物,根據(jù)觀察到的差異程度把譜圖特征分等級(jí)。由Shyr,Y.等人(Shyr,Y.和KyungMann,K.(2003)A Practical Approach toMicroarray Data Analysis,D.Berrar編)描述的該策略使用了6個(gè)不同統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)的組合,以便計(jì)算基于在處理和對(duì)照之間所觀察到差異的等級(jí)。
可以使用單一數(shù)據(jù)聚類分析成功區(qū)分對(duì)照和處理情況。如所期望,在皮質(zhì)中發(fā)現(xiàn)了大多數(shù)的能區(qū)分對(duì)照和處理的峰。表1顯示了經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)鑒定為在對(duì)照皮質(zhì)對(duì)處理樣品皮質(zhì)中上調(diào)或下調(diào)的蛋白質(zhì)。圖2顯示了使用最高的7個(gè)等級(jí)的峰基于WMA、最大平均S/N和p值得到的簇。
表1在皮質(zhì)中的譜形按照1)WMA、2)最大平均S/N、3)p值歸類的用于慶大霉素誘導(dǎo)腎毒性的生物標(biāo)記物等級(jí)
在該數(shù)據(jù)表中,在質(zhì)量m/z 12959處的峰定為皮質(zhì)中的第一位的等級(jí),其在慶大霉素處理大鼠腎臟中的平均信噪比為5,并且在對(duì)照中完全缺乏(圖3)。在m/z 6480上的雙電荷種類顯示具有相似行為。
實(shí)施例3微洗脫在皮質(zhì)區(qū)域進(jìn)行液體微抽提。
通過在腎臟皮質(zhì)區(qū)域直接上下吹吸1μl溶劑(1∶1的水/乙腈、0.1%三氟乙酸)幾秒鐘進(jìn)行蛋白質(zhì)微抽提。在幾個(gè)樣品上重復(fù)該過程幾次,得到約20μl體積的混合樣品。然后,該樣品在真空離心干燥儀中干燥,并重溶于95∶5的水/乙腈、0.1%三氟乙酸。
所得到的蛋白質(zhì)混合物通過反相液相色譜分級(jí)分離。
使用配備1mm內(nèi)徑聚合柱(219TP5110,Vydac)的標(biāo)準(zhǔn)Agilent 1100系列HPLC(Agilent Technologies)以50μl/分鐘流速進(jìn)行蛋白質(zhì)分級(jí)分離。溶劑A為溶于水的0.1%三氟乙酸,溶劑B為溶于乙腈的0.1%三氟乙酸。使用下列程序洗脫蛋白質(zhì)5%的B溶液5分鐘之后,在7分鐘內(nèi)梯度上升至35%的B溶液,然后在34分鐘內(nèi)梯度上升至60%的B溶液,接著在0.5分鐘內(nèi)增加至90%的B溶液并維持10分鐘。從剛開始運(yùn)行至48分鐘每30秒收集一次級(jí)分,級(jí)分直接收集于96孔微量滴定板內(nèi)(Greinerbio-one)。如果需要,樣品可經(jīng)幾輪HPLC分級(jí)分離,然后合并相應(yīng)的級(jí)分用以分析。
將1μl級(jí)分與1μl的溶于90∶10的水/乙腈、0.1%TFA中的1g/L芥子酸點(diǎn)在384MALDI錨定靶(Bruker Daltonics)上,通過MALDI-TOF MS測(cè)定所得到的LC級(jí)分。
通過比較IMS產(chǎn)生譜圖和LC分級(jí)分離譜圖,確定目的峰的存在。
實(shí)施例3a)蛋白質(zhì)的鑒定然后,包含目的蛋白質(zhì)種類的級(jí)分通過納-ESI質(zhì)譜進(jìn)一步分析,并且目的蛋白質(zhì)通過串聯(lián)質(zhì)譜鑒定。
為了鑒定蛋白質(zhì),含有目的質(zhì)量的HPLC級(jí)分在真空離心干燥儀中干燥,并重溶于含1%甲酸的水/乙腈(1∶1)中,使用Applied Biosystems Q-StarPulsar在納-電噴霧模式中的標(biāo)準(zhǔn)操作條件下進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定。選擇目的質(zhì)量中的多電荷種類之一進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析,記錄其串聯(lián)質(zhì)譜圖并人工解析。使用Mascot MS/MS離子檢索程序(Matrix Science,http//www.matrixscience.com)利用SwissProt數(shù)據(jù)庫(kù)(版本46.6)及0.1Da的片段和前體質(zhì)量容限進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定。
鑒定該峰所采取的策略圖解于圖4。蛋白質(zhì)從皮質(zhì)區(qū)域微抽提,并通過反相色譜分級(jí)分離。m/z 12959的蛋白質(zhì)存在于級(jí)分D10中,并可以成功地與在從組織樣品直接記錄的譜圖中檢測(cè)到的種類進(jìn)行對(duì)比。將該級(jí)分干燥,并在50%乙腈、1%甲酸中重構(gòu)用于串聯(lián)質(zhì)譜分析(圖5)。產(chǎn)生的質(zhì)譜可以與甲狀腺素運(yùn)載蛋白(swTTHY_RAT)的第28位Ser至第146位Gln成功匹配(圖6)。
實(shí)施例4組織提取物和HPLC級(jí)分的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳和Western印跡分析當(dāng)施用慶大霉素時(shí)受調(diào)節(jié)的生物標(biāo)記物之一被鑒定為甲狀腺素運(yùn)載蛋白(前白蛋白),它是一個(gè)13kDa的血液轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。通過使用對(duì)該蛋白質(zhì)高度特異的抗體進(jìn)行Western印跡證實(shí)了該結(jié)果,這表明該蛋白質(zhì)在來自慶大霉素處理大鼠的腎臟中比來自對(duì)照大鼠的腎臟中明顯更多(圖7)。
在含有250mM蔗糖和蛋白酶抑制劑(Roche Complete)的10mMTris-HCl pH7.6中將一片皮質(zhì)勻漿,從而得到對(duì)照和處理大鼠腎臟的組織提取物。該組織提取物于4℃下連續(xù)離心三次(680g,10分鐘;10000g,10分鐘;100000g,1小時(shí)),同時(shí)棄去沉淀,保留最后離心步驟的上清作為腎胞質(zhì)組分。
將1μl腎胞質(zhì)組分和相應(yīng)HPLC級(jí)分在4-20%Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝膠(Invitrogen)上電泳,并且隨后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。印跡膜在5%的奶粉(溶于含0.1%Tween 20的PBS)中封閉1小時(shí),并用綿羊抗前白蛋白抗體(Abcam)(溶于含5%奶粉和0.1%Tween 20的PBS)室溫孵育過夜。用含有0.1%Tween 20的PBS洗滌后,印跡膜與辣根過氧化物酶綴合的抗綿羊IgG抗體(Silenus Laboratories)孵育1小時(shí)。使用ECL western印跡試劑(Amersham)檢測(cè)抗體結(jié)合。
同樣,通過串聯(lián)質(zhì)譜鑒定為甲狀腺素運(yùn)載蛋白S28-Q146的m/z種類12959僅僅存在于慶大霉素處理樣品的原位質(zhì)譜中和HPLC級(jí)分D10的質(zhì)譜中。
序列表<110>弗·哈夫曼-拉羅切有限公司(F.Hoffmann-La Roche AG)<120>用作腎毒性標(biāo)記物的甲狀腺素運(yùn)載蛋白<130>case 23145<160>2<170>PatentIn版本3.3<210>1<211>147<212>PRT<213>褐家鼠(Rattus norvegicus)<220>
<221>甲狀腺素運(yùn)載蛋白<222>(1)..(147)<223>swissprot基因座TTHY_RAT,登錄號(hào)P02767<400>1Met Ala Ser Leu Arg Leu Phe Leu Leu Cys Leu Ala Gly Leu Ile Phe1 5 10 15Ala Ser Glu Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gly Glu Ser Lys Cys Pro Leu20 25 30Met Val Lys Val Leu Asp Ala Val Arg Gly Ser Pro Ala Val Asp Val35 40 45Ala Val Lys Val Phe Lys Lys Thr Ala Asp Gly Ser Trp Glu Pro Phe50 55 60Ala Ser Gly Lys Thr Ala Glu Ser Gly Glu Leu His Gly Leu Thr Thr65 70 75 80Asp Glu Lys Phe Thr Glu Gly Val Tyr Arg Val Glu Leu Asp Thr Lys85 90 95Ser Tyr Trp Lys Ala Leu Gly Ile Ser Pro Phe His Glu Tyr Ala Glu100 105 110Val Val Phe Thr Ala Asn Asp Ser Gly His Arg His Tyr Thr Ile Ala115 120 125Ala Leu Leu Ser Pro Tyr Ser Tyr Ser Thr Thr Ala Val Val Ser Asn
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<221>Ser 28至Gln 146的加工形式<222>(1)..(120)<400>2Ser Lys Cys Pro Leu Met Val Lys Val Leu Asp Ala Val Arg Gly Ser1 5 10 15Pro Ala Val Asp Val Ala Val Lys Val Phe Lys Lys Thr Ala Asp Gly20 25 30Ser Trp Glu Pro Phe Ala Ser Gly Lys Thr Ala Glu Ser Gly Glu Leu35 40 45His Gly Leu Thr Thr Asp Glu Lys Phe Thr Glu Gly Val Tyr Arg Val50 55 60Glu Leu Asp Thr Lys Ser Tyr Trp Lys Ala Leu Gly Ile Ser Pro Phe65 70 75 80His Glu Tyr Ala Glu Val Val Phe Thr Ala Asn Asp Ser Gly His Arg85 90 95His Tyr Thr Ile Ala Ala Leu Leu Ser Pro Tyr Ser Tyr Ser Thr Thr100 105 110Ala Val Val Ser Asn Pro Gln Asn115 120
權(quán)利要求
1.一種評(píng)價(jià)腎毒性的方法,其包括以下步驟a)提供來自懷疑患有腎毒性的受試者的腎樣品;b)確定與健康受試者相比甲狀腺素運(yùn)載蛋白在懷疑患有腎毒性的受試者腎皮質(zhì)中的積累,其中,與健康受試者相比,甲狀腺素運(yùn)載蛋白在懷疑患有腎毒性的受試者腎皮質(zhì)中的積累增加指示存在腎毒性。
2.權(quán)利要求1所述的方法,其中所述受試者是非人哺乳動(dòng)物。
3.權(quán)利要求2所述的方法,其中所述非人哺乳動(dòng)物是大鼠。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述確定包括通過MALDI-IMS測(cè)定甲狀腺素運(yùn)載蛋白在腎皮質(zhì)中的積累。
全文摘要
甲狀腺素運(yùn)載蛋白被鑒定為一種評(píng)價(jià)腎毒性的新標(biāo)記。在腎毒性中,甲狀腺素運(yùn)載蛋白在腎皮質(zhì)中積累,其中毒性作用的特征在于在暴露于毒性化合物的生物體中觀察到近端小管的明顯退化/再生。
文檔編號(hào)G01N33/68GK1873415SQ20061008853
公開日2006年12月6日 申請(qǐng)日期2006年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月3日
發(fā)明者R·卡普廖利, A·迪克雷, H·邁斯特曼, S·呂佩 申請(qǐng)人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司
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