RNAi試劑、組合物及其用于治療甲狀腺素運(yùn)載蛋白(TTR)相關(guān)疾病的使用方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了靶向甲狀腺素運(yùn)載蛋白(TTR)基因的RNAi試劑(例如雙鏈RNAi試劑)和使用這樣的RNAi試劑用于治療或預(yù)防TTR相關(guān)疾病的方法。
【專利說明】RNAi試劑、組合物及其用于治療甲狀腺素運(yùn)載蛋白(TTR)相關(guān)疾病的使用方法
[0001]相關(guān)串請(qǐng)
[0002]本申請(qǐng)要求2011年11月18日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/561，710、2012年3月26日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/615，618以及2012年8月6日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/680，098的優(yōu)先權(quán)，各自的全文內(nèi)容特此通過引用結(jié)合在此。
[0003]序列表
[0004]本申請(qǐng)含有一個(gè)序列表，該序列表已經(jīng)經(jīng)由EFS-Web以ASCII格式提交并且特此通過引用以其全文結(jié)合在此。創(chuàng)建于2012年11月13日的所述ASCII拷貝被命名為121301W0.txt,并且大小是541，508字節(jié)。
[0005]發(fā)明背景
[0006]甲狀腺素運(yùn)載蛋白(TTR)(也稱為前白蛋白)見于血清和腦脊髓液(CSF)中。TTR運(yùn)載視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)和甲狀腺素(T4)，并且還通過其與血液和CSF中的RBP締合而充當(dāng)一種視黃醇(維生素A)載體。甲狀腺素運(yùn)載蛋白(Transthyretin)由于其運(yùn)載(transport)甲狀腺素(thyroxine)和視黃醇(retinol)而得名。TTR還充當(dāng)一種蛋白酶，并且可以裂解蛋白質(zhì)，包括apoA-1(主要的HDL載脂蛋白)、淀粉樣β-肽以及神經(jīng)肽Y。參看莉斯 Μ.Α.(Liz，M.A.)等人(2010)《IUBMB 生命》(IUBMB Life) ,62(6):429_435。
[0007]TTR是四種富含β片層結(jié)構(gòu)的相同127-氨基酸亞單位(單體)的一種四聚體。每個(gè)單體具有兩個(gè)4鏈β片層和長(zhǎng)橢球的形狀。反向平行β_片層相互作用將單體連接成二聚體。來自每個(gè)單體的一個(gè)短環(huán)形成主要二聚體-二聚體相互作用。這兩對(duì)環(huán)將二聚體的相對(duì)的凸面片層分隔以形成一個(gè)內(nèi)部通道。
[0008]肝臟是TTR表達(dá)的主要部位。其他顯著表達(dá)部位包括脈絡(luò)叢、視網(wǎng)膜(特別是視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞)以及胰腺。
[0009]甲狀腺素運(yùn)載蛋白是至少27種不同類型的蛋白質(zhì)之一，它是淀粉樣原纖維形成中的一種前體蛋白。參看關(guān)J.(Guan，J.)等人(2011年11月4日)心臟淀粉樣變性的當(dāng)前看法(Current perspectives on cardiac amyloidosis),《美國生理學(xué)雜志-心臟與循環(huán)生理學(xué)》(Am J Phys1l Heart Circ Phys1l),do1:10.1152/ajpheart.00815.2011。淀粉樣原纖維在器官和組織中的細(xì)胞外沉積是淀粉樣變性的標(biāo)志。淀粉樣原纖維由錯(cuò)誤折疊的蛋白聚集體構(gòu)成，這些聚集體可以由前體蛋白的或者過量產(chǎn)生或者特異性突變而產(chǎn)生。TTR的成淀粉樣可能性可能與其大量的β片層結(jié)構(gòu)相關(guān)；X射線結(jié)晶研究表明，某些成淀粉樣突變使蛋白質(zhì)的四聚體結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。參看例如薩賴瓦Μ.J.Μ.(Saraiva Μ.J.Μ.) (2002)《分子醫(yī)學(xué)專家評(píng)論》(Expert Reviews in Molecular Medicine), 4 (12):1_11。
[0010]淀粉樣變性是用于由淀粉樣沉積物表征的淀粉樣疾病群組的一個(gè)通用術(shù)語。淀粉樣疾病基于其前體蛋白來歸類；舉例來說，名稱以用于淀粉樣的“A”開始并且接著是前體蛋白的縮寫，例如用于成淀粉樣甲狀腺素運(yùn)載蛋白(amloidogenic transthyretin)的ATTR0同前。
[0011]存在眾多TTR相關(guān)疾病，其中大多數(shù)是淀粉樣疾病。正常序列TTR與老年人的心臟淀粉樣變性相關(guān)，并且被稱為老年全身性淀粉樣變性(SSA)(也稱為老年心臟淀粉樣變性(SCA)或心臟淀粉樣變性)。SSA通常在多種其他器官中伴隨有微觀沉積物。TTR淀粉樣變性以不同形式顯現(xiàn)。當(dāng)周圍神經(jīng)系統(tǒng)更顯著地受影響時(shí)，該疾病被稱為家族性淀粉樣多發(fā)性神經(jīng)病(FAP)。當(dāng)心臟主要受累但神經(jīng)系統(tǒng)則不受累時(shí)，該疾病被稱為家族性淀粉樣心肌病(FAC)。TTR淀粉樣變性的一種第三主要類型是軟腦膜淀粉樣變性，也稱為軟腦膜或腦膜腦血管淀粉樣變性、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)淀粉樣變性或淀粉樣變性VII型。TTR的突變還可能會(huì)引起淀粉樣玻璃體混濁、腕管綜合征以及甲狀腺功能正常的高甲狀腺素血癥，該疾病是一種非淀粉樣疾病，被認(rèn)為在由于一種突變TTR分子對(duì)于甲狀腺素具有增加的親和力而有所增加的甲狀腺素與TTR的締合之后發(fā)生。參看例如摩西(Moses)等人(1982)《臨床研究雜志》(J.Clin.1nvest.)，86，2025-2033。
[0012]異常的成淀粉樣蛋白質(zhì)可以或者被遺傳或者通過體細(xì)胞突變獲取。關(guān)J.等人(2011年11月4日)心臟淀粉樣變性的當(dāng)前看法，《美國生理學(xué)雜志-心臟與循環(huán)生理學(xué)》，doi:10.1152/ajpheart.00815.2011。甲狀腺素運(yùn)載蛋白相關(guān)ATTR是遺傳性全身性淀粉樣變性的最常見形式。洛巴托L.(Lobato, L.)(2003)《腎臟學(xué)雜志》(J.Nephrol.), 16:438-442。TTR突變加速了 TTR淀粉樣形成的過程，并且是ATTR發(fā)展的最重要的風(fēng)險(xiǎn)因素。已知多于85種成淀粉樣TTR變體引起全身性家族性淀粉樣變性。TTR突變通常引起全身性淀粉樣沉積，特別累及周圍神經(jīng)系統(tǒng)，但一些突變與心肌病或玻璃體混濁相關(guān)。同前。
[0013]V30M突變是最普遍的TTR突變。參看例如洛巴托L.(2003)《腎臟學(xué)雜志》，16:438-442。非裔美國人群體中有3.9%攜帶V122I突變，并且它是FAC的最常見病因。雅各布森 D.R.(Jacobson, D.R.)等人(1997)《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》(N.Engl.J.Med.) 336 (7):466-73。據(jù)估計(jì)，SSA影響了多于25%的超過80歲的群體。韋斯特馬克P.(ffestermark,P.)等人(1990)《美國國家科學(xué)院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.)87(7):2843_5。
[0014]因此，在本領(lǐng)域中存在對(duì)用于TTR相關(guān)疾病的有效治療的需要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0015]本發(fā)明提供了靶向甲狀腺素運(yùn)載蛋白(TTR)基因的RNAi試劑(例如雙鏈RNAi試劑)。本發(fā)明還提供了使用本發(fā)明的這些RNAi試劑(例如雙鏈RNAi試劑)抑制TTR表達(dá)的方法和治療或預(yù)防一名受試者中的一種TTR相關(guān)疾病的方法。本發(fā)明至少部分基于以下發(fā)現(xiàn)，包含具體化學(xué)修飾的RNAi試劑展示一種優(yōu)越的抑制TTR表達(dá)的能力。包括某一模式的化學(xué)修飾(例如一種交替模式)和一個(gè)配體的試劑在此被展示為在使TTR基因的活性沉默方面是有效的。此外，包括一個(gè)或多個(gè)在三個(gè)連續(xù)核苷酸上具有三個(gè)相同修飾的基序、在試劑的裂解位點(diǎn)處或附近包括一個(gè)這樣的基序的試劑展示了出人意料地增強(qiáng)的TTR基因沉默活性。當(dāng)一個(gè)這樣的單個(gè)化學(xué)基序存在于該試劑中時(shí)，它優(yōu)選在裂解區(qū)處或附近以便增強(qiáng)基因沉默活性。裂解區(qū)是環(huán)繞裂解位點(diǎn)(即該標(biāo)靶mRNA上的裂解發(fā)生所處的位點(diǎn))的區(qū)。
[0016]因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明特征是RNAi試劑(例如雙鏈RNAi試劑)，用于抑制一種甲狀腺素運(yùn)載蛋白(TTR)的表達(dá)。該雙鏈RNAi試劑包括與一條反義鏈互補(bǔ)的一條有義鏈。該反義鏈包括與一種編碼甲狀腺素運(yùn)載蛋白的mRNA的一部分互補(bǔ)的一個(gè)區(qū)。每條鏈具有14到30個(gè)核苷酸，并且該雙鏈RNAi試劑由式(III)表示:
[0017]有義鏈:5'np-Na- (XXX) -Nb-YYY-Nb- (ZZZ) rNa-nq3,
[0018]反義鏈:3'n/ -Na' -(X' V V )k-N/ -V V V -Nb, -(Zf V V )1-N^ -V 5'
[0019](III)。
[0020]在式III中，1、j、k以及I各自獨(dú)立地是0或I ;p、p'、q以及q'各自獨(dú)立地是0-6 ;每個(gè)Na和Na'獨(dú)立地表示包括0-25個(gè)或者被修飾或者未被修飾或者其組合的核苷酸的一個(gè)寡核苷酸序列，每個(gè)序列包括至少兩個(gè)被不同地修飾的核苷酸；每個(gè)Nb和N/獨(dú)立地表示包括0-10個(gè)或者被修飾或者未被修飾或者其組合的核苷酸的一個(gè)寡核苷酸序列；每個(gè)np、np'、nq以及n/獨(dú)立地表示一個(gè)突出端核苷酸；XXX、YYY> ZZZ、V V V、
VV V以及Zi V V各自獨(dú)立地表示在三個(gè)連續(xù)核苷酸上具有三個(gè)相同修飾的一個(gè)基序；Nb上的修飾不同于Y上的修飾，并且N/上的修飾不同于y'上的修飾。在一些實(shí)施例中，該有義鏈與至少一個(gè)配體(例如至少一個(gè)配體，例如至少一個(gè)連接到該有義鏈的3'端的配體)結(jié)合。在其他實(shí)施例中，該配體可以與該反義鏈結(jié)合。
[0021]在一些實(shí)施例中，i是I ;j是I ;或i和j都是I。
[0022]在一些實(shí)施例中，k是I ;1是I ;或k和I都是I。
[0023]在一些實(shí)施例中，i是O ; j是I。
[0024]在一些實(shí)施例中，i是I ; j是O。
[0025]在一些實(shí)施例中，k是O ;1是I。
[0026]在一些實(shí)施例中，k是I ;1是O。
[0027]在一些實(shí)施例中，XXX與X' V V互補(bǔ)，YYY與Y' Y' Y'互補(bǔ)，并且ZZZ與
VV V互補(bǔ)。
[0028]在一些實(shí)施例中，該YYY基序存在于該有義鏈的裂解位點(diǎn)處或附近。
[0029]在一些實(shí)施例中，該y' Y' Y'基序存在于該反義鏈的從5’端起的11、12以及13位處。
[0030]在一些實(shí)施例中，該Y'是2' -O-甲基。
[0031]在一些實(shí)施例中，該Y'是2'-氟基。
[0032]在一些實(shí)施例中，式(III)被表示為式(IIIa):
[0033]有義鏈:5'np-Na-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq3/
[0034]反義鏈:3'np' -Na' -Y' Y' Y' -N/ -V V V -Na' n/ 5'
[0035](Ilia)。
[0036]在式IIIa中，每個(gè)Nb和N/獨(dú)立地表不包括1_5個(gè)被修飾的核苷酸的一個(gè)寡核苷酸序列。
[0037]在一些實(shí)施例中，式(III)被表示為式(IIIb):
[0038]有義鏈:5'np-Na-XXX-Nb-YYY-Na-nq3;
[0039]反義鏈:3'η/ -Na' -V V V -N/ -V V V -Na' -n/ 5'
[0040](IIIb)。
[0041]在式IIIb中，每個(gè)Nb和N/獨(dú)立地表不包括1_5個(gè)被修飾的核苷酸的一個(gè)寡核苷酸序列。
[0042]在一些實(shí)施例中，式(III)被表示為式(IIIc):
[0043]有義鏈:5'np-Na-XXX-Nb-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq3'
[0044]反義鏈:3'n/ -Na' -V V V -Nb' -V V V -Nb' -V V V -Na' -ηq'5'
[0045](IIIc)。
[0046]在式IIIc中，每個(gè)Nb和Nb'獨(dú)立地表不包括1_5個(gè)被修飾的核苷酸的一個(gè)寡核苷酸序列，并且每個(gè)Na和Na'獨(dú)立地表示包括2-10個(gè)被修飾的核苷酸的一個(gè)寡核苷酸序列。
[0047]在許多實(shí)施例中，該雙鏈體區(qū)具有15-30個(gè)核苷酸對(duì)長(zhǎng)度。在一些實(shí)施例中，該雙鏈體區(qū)具有17-23個(gè)核苷酸對(duì)長(zhǎng)度、17-25個(gè)核苷酸對(duì)長(zhǎng)度、23-27個(gè)核苷酸對(duì)長(zhǎng)度、19-21個(gè)核苷酸對(duì)長(zhǎng)度或21-23個(gè)核苷酸對(duì)長(zhǎng)度。
[0048]在某些實(shí)施例中，每條鏈具有15-30個(gè)核苷酸。
[0049]在一些實(shí)施例中，這些核苷酸上的這些修飾選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成:LNA、HNA、CeNA、2' _甲氧基乙基、2' _0-烷基、2' -O-稀丙基、2' -C-稀丙基、2'-氣基、2'-脫氧、2'-羥基及其組合。在一些優(yōu)選實(shí)施例中，這些核苷酸上的這些修飾是2' -O-甲基或2' _氣基。
[0050]在一些實(shí)施例中，該配體是通過一種二價(jià)或三價(jià)支鏈連接子連接的一種或多種N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)衍生物。在具體實(shí)施例中，該配體是
[0051]

【權(quán)利要求】
1.一種雙鏈RNAi試劑，包含與一條反義鏈互補(bǔ)的一條有義鏈，其中所述反義鏈包含與一種編碼甲狀腺素運(yùn)載蛋白(TTR)的mRNA的一部分互補(bǔ)的一個(gè)區(qū)，其中每條鏈具有約14到約30個(gè)核苷酸，其中所述雙鏈RNAi試劑由式(III)表示:
有義鏈:5, np-Na- (XXX) -Nb-YYY-Nb- (ZZZ) rNa-nq3, 反義鏈:3, n/ -Na, -(X, V V )k-Nb, -Y, Y, V -Nb, _(Z, V V )Na151
(III) 其中: 1.j、k以及I各自獨(dú)立地是O或I; P、P'、q以及q'各自獨(dú)立地是0-6; 每個(gè)Na和Na'獨(dú)立地表示包含0-25個(gè)或者被修飾或者未被修飾或者其組合的核苷酸的一個(gè)寡核苷酸序列，每個(gè)序列包含至少兩個(gè)被不同地修飾的核苷酸； 每個(gè)Nb和N/獨(dú)立地表示包含0-10個(gè)或者被修飾或者未被修飾或者其組合的核苷酸的一個(gè)寡核苷酸序列； 每個(gè)np、np/ >nq以及n/獨(dú)立地表示一個(gè)突出端核苷酸； χχχ,yyy,ζζζ,χ/ V V、v Y' Y'以及ζ' V V各自獨(dú)立地表示在三個(gè)連續(xù)核苷酸上具有三個(gè)相同修飾的一個(gè)基序； Nb上的修飾不同于Y上的修飾，并且N/上的修飾不同于Y'上的修飾；并且 其中該有義鏈與至少一個(gè)配體結(jié)合。
2.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中i是I;j是I ;或i和j都是I。
3.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中k是I;1是I ;或k和I都是I。
4.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中XXX與x'V V互補(bǔ)，YYY與Y' Y' Y'互補(bǔ)，并且ZZZ與t Z' Z'互補(bǔ)。
5.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中該YYY基序存在于該有義鏈的裂解位點(diǎn)處或附近。
6.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中該Y'Y' Y'基序存在于該反義鏈的從5’端起的11、12以及13位處。
7.如權(quán)利要求6所述的RNAi試劑，其中該Y'是W-O-甲基。
8.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中式(III)被表示為式(IIIa):
有義鏈:5' np-Na-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq3/ 反義鏈:3, n/ -Na, -Y, Y, Y, -Nb, -V V V -Na, n/ 5,
(IIIa) 其中每個(gè)Nb和N/獨(dú)立地表不包含1-5個(gè)被修飾的核苷酸的一個(gè)寡核苷酸序列。
9.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中式(III)被表示為式(IIIb):
有義鏈:5, np-Na-XXX-Nb-YYY-Na-nq3, 反義鏈:3, n/ -Na, -V V V -Nb, -Y' Y' Y' -Na, -n/ 5,
(IIIb) 其中每個(gè)Nb和N/獨(dú)立地表不包含1-5個(gè)被修飾的核苷酸的一個(gè)寡核苷酸序列。
10.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中式(III)被表示為式(IIIc):有義鏈:5' np-Na-XXX-Nb-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq3' 反義鏈:3, np, -Na, -V V V -Nb, -V V Y, -Nb, -V V V -Na, -ηq 0
(IIIc) 其中每個(gè)Nb和N/獨(dú)立地表不包含1-5個(gè)被修飾的核苷酸的一個(gè)寡核苷酸序列，并且每個(gè)Na和Na'獨(dú)立地表不包含2-10個(gè)被修飾的核苷酸的一個(gè)寡核苷酸序列。
11.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中該雙鏈體區(qū)具有15-30個(gè)核苷酸對(duì)長(zhǎng)度。
12.如權(quán)利要求11所述的RNAi試劑，其中該雙鏈體區(qū)具有17-23個(gè)核苷酸對(duì)長(zhǎng)度。
13.如權(quán)利要求11所述的RNAi試劑，其中該雙鏈體區(qū)具有17-25個(gè)核苷酸對(duì)長(zhǎng)度。
14.如權(quán)利要求11所述的RNAi試劑，其中該雙鏈體區(qū)具有23-27個(gè)核苷酸對(duì)長(zhǎng)度。
15.如權(quán)利要求11所述的RNAi試劑，其中該雙鏈體區(qū)具有19-21個(gè)核苷酸對(duì)長(zhǎng)度。
16.如權(quán)利要求13所述的RNAi試劑，其中該雙鏈體區(qū)具有21-23個(gè)核苷酸對(duì)長(zhǎng)度。
17.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中每條鏈具有15-30個(gè)核苷酸。
18.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中這些核苷酸上的這些修飾選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成:LNA、HNA、CeNA、2'-甲氧基乙基、2' -O-烷基、2' -O-烯丙基、2' -C-烯丙基、2' _氟基、2' _脫氧、2' _羥基及其組合。
19.如權(quán)利要求18所述的RNAi試劑，其中這些核苷酸上的這些修飾是W-O-甲基、2'-氟基或兩者。
20.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中該配體是通過一種二價(jià)或三價(jià)支鏈連接子連接的一種或多種GalNAc衍生物。
21.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中該配體是
22.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中該配體連接到該有義鏈的3'端。
23.如權(quán)利要求22所述的RNAi試劑，其中該RNAi試劑與如以下示意圖中所示的配體結(jié)合:
其中X是O或S。
24.如權(quán)利要求23所述的RNAi試劑，其中該RNAi試劑與如以下示意圖中所示的配體結(jié)合:
25.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，進(jìn)一步包含至少一個(gè)硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸間鍵聯(lián)。
26.如權(quán)利要求25所述的RNAi試劑，其中該硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸間鍵聯(lián)在一條鏈的3'末端處。
27.如權(quán)利要求26所述的RNAi試劑，其中所述鏈?zhǔn)窃摲戳x鏈。
28.如權(quán)利要求26所述的RNAi試劑，其中所述鏈?zhǔn)窃撚辛x鏈。
29.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中該雙鏈體的反義鏈的5'端的I位處的該堿基對(duì)是一個(gè)AU堿基對(duì)。
30.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中這些Y核苷酸含有一個(gè)2'-氟基修飾。
31.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中這些y核苷酸含有一個(gè)W-O-甲基修飾。
32.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中V>0。
33.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，其中V=2。
34.如權(quán)利要求33所述的RNAi試劑,其中q'= O, p = O, q = O,并且p'突出端核苷酸與該標(biāo)靶mRNA互補(bǔ)。
35.如權(quán)利要求33所述的RNAi試劑,其中q'= O, p = O, q = O,并且p'突出端核苷酸與該標(biāo)IE mRNA不互補(bǔ)。
36.如權(quán)利要求33所述的RNAi試劑，其中該有義鏈具有總共21個(gè)核苷酸，并且該反義鏈具有總共23個(gè)核苷酸。
37.如權(quán)利要求32到36中任一項(xiàng)所述的RNAi試劑，其中至少一個(gè)np^經(jīng)由一個(gè)硫代磷酸酯鍵聯(lián)而鍵聯(lián)到一個(gè)相鄰核苷酸。
38.如權(quán)利要求37所述的RNAi試劑，其中所有np'都經(jīng)由硫代磷酸酯鍵聯(lián)而鍵聯(lián)到相鄰核苷酸。
39.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，選自表1中列出的RNAi試劑的群組。
40.如權(quán)利要求1所述的RNAi試劑，選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成:AD-51544、AD-51545、AD-51546 以及 AD-51547。
41.如權(quán)利要求40所述的RNAi試劑，其中該RNAi試劑是AD-51547。
42.一種細(xì)胞，含有如權(quán)利要求1到41中任一項(xiàng)所述的該雙鏈RNAi試劑。
43.一種藥物組合物，包含一種如權(quán)利要求1到41中任一項(xiàng)所述的RNAi試劑。
44.如權(quán)利要求43所述的藥物組合物，其中RNAi試劑在一種非緩沖溶液中給予。
45.如權(quán)利要求44所述的藥物組合物，其中所述非緩沖溶液是生理鹽水或水。
46.如權(quán)利要求43所述的藥物組合物，其中所述siRNA與一種緩沖溶液給予。
47.如權(quán)利要求46所述的藥物組合物，其中所述緩沖溶液包括乙酸鹽、檸檬酸鹽、醇溶谷蛋白、碳酸鹽或磷酸鹽或其任何組合。
48.如權(quán)利要求47所述的藥物組合物，其中所述緩沖溶液是磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)。
49.如權(quán)利要求43所述的藥物組合物，其中所述藥物組合物是一種脂質(zhì)體。
50.如權(quán)利要求43所述的藥物組合物，其中所述藥物組合物是一種脂質(zhì)配制品。
51.—種抑制細(xì)胞中的一種甲狀腺素運(yùn)載蛋白(TTR)表達(dá)的方法,包括使所述細(xì)胞與一種如權(quán)利要求1到41中任一項(xiàng)所述的RNAi試劑或與一種如權(quán)利要求43到50中任一項(xiàng)所述的藥物組合物以有效抑制所述細(xì)胞中的所述TTR表達(dá)的一個(gè)量接觸,從而抑制所述細(xì)胞中的所述甲狀腺素運(yùn)載蛋白(TTR)表達(dá)。
52.如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述TTR表達(dá)被抑制至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%或至少約90%。
53.如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述細(xì)胞在體外與所述RNAi試劑接觸。
54.如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述細(xì)胞存在于一名受試者內(nèi)。
55.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述受試者是一個(gè)人。
56.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述受試者罹患一種TTR相關(guān)疾病，并且所述有效量是一個(gè)治療有效量。
57.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述受試者是有風(fēng)險(xiǎn)患上一種TTR相關(guān)疾病的一名受試者，并且所述有效量是一個(gè)預(yù)防有效量。
58.如權(quán)利要求57所述的方法，其中所述受試者攜帶與一種TTR相關(guān)疾病的發(fā)展相關(guān)的一種TTR基因突變。
59.如權(quán)利要求56或57所述的方法，其中所述TTR相關(guān)疾病選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成:老年全身性淀粉樣變性(SSA)、全身性家族性淀粉樣變性、家族性淀粉樣多發(fā)性神經(jīng)病(FAP)、家族性淀粉樣心肌病(FAC)、軟腦膜/中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)淀粉樣變性以及高甲狀腺素血癥。
60.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述受試者具有一種TTR相關(guān)淀粉樣變性，并且所述方法減少所述受試者中的一種淀粉樣TTR沉積物。
61.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述RNAi試劑通過一種選自下組的給藥手段給予給所述受試者，該組由以下各項(xiàng)組成:皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、支氣管內(nèi)、胸膜內(nèi)、腹膜內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、經(jīng)淋巴、經(jīng)腦脊髓及其任何組合。
62.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述RNAi試劑經(jīng)由皮下、肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥而給予給所述受試者。
63.如權(quán)利要求62所述的方法，其中所述皮下給藥包括經(jīng)由一個(gè)皮下泵或皮下儲(chǔ)槽給藥。
64.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述RNAi試劑被給予給所述受試者，以使得所述RNAi試劑被遞送到所述受試者內(nèi)的一個(gè)具體部位。
65.如權(quán)利要求64所述的方法，其中所述部位選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成: 肝臟、脈絡(luò)叢、視網(wǎng)膜以及胰腺。
66.如權(quán)利要求64所述的方法，其中所述部位是肝臟。
67.如權(quán)利要求64所述的方法，其中所述RNAi試劑的遞送由肝細(xì)胞中存在的一種脫唾液酸糖蛋白受體(ASGP-R)介導(dǎo)。
68.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述RNAi試劑以0.05-50mg/kg的一個(gè)劑量給予。
69.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述RNAi試劑在兩個(gè)或更多個(gè)劑量中給予。
70.如權(quán)利要求69所述的方法，其中所述RNAi試劑以選自下組的時(shí)間間隔給予，該組由以下各項(xiàng)組成:每隔約12小時(shí)一次、每隔約24小時(shí)一次、每隔約48小時(shí)一次、每隔約72小時(shí)一次以及每隔約96小時(shí)一次。
71.如權(quán)利要求54所述的方法，進(jìn)一步包括評(píng)估來源于該受試者的一種樣品中的TTRmRNA表達(dá)或TTR蛋白質(zhì)表達(dá)的水平。
72.如權(quán)利要求54所述的方法，其中給予所述RNAi試劑不在所述受試者中產(chǎn)生一種炎癥應(yīng)答，如基于來自所述受試者的一種樣品中的一種選自下組的細(xì)胞因子或趨化因子的水平而評(píng)估，該組由以下各項(xiàng)組成:G-CSF、IFN- Y、IL-10、IL-12 (p70)、ILl β、IL-lra、IL-6、IL-8、IP-10、MCP-UMIP-1 a ,MIP-1 β、TNF a 及其任何組合。
73.如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述RNAi試劑使用一種藥物組合物給予。
74.如權(quán)利要求73所述的方法，其中所述siRNA在一種非緩沖溶液中給予。
75.如權(quán)利要求74所述的方法，其中所述非緩沖溶液是生理鹽水或水。
76.如權(quán)利要求73所述的方法，其中所述siRNA與一種緩沖溶液給予。
77.如權(quán)利要求76所述的方法，其中所述緩沖溶液包括乙酸鹽、檸檬酸鹽、醇溶谷蛋白、碳酸鹽或磷酸鹽或其任何組合。
78.如權(quán)利要求77所述的方法，其中所述緩沖溶液是磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)。
79.如權(quán)利要求73所述的方法，其中所述藥物組合物是一種脂質(zhì)體。
80.一種治療或預(yù)防受試者中的一種TTR相關(guān)疾病的方法，包括給予所述受試者一個(gè)治療有效量或一個(gè)預(yù)防有效量的一種如權(quán)利要求1到41中任一項(xiàng)所述的RNAi試劑或一種如權(quán)利要求43到50中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，從而治療或預(yù)防所述受試者中的所述TTR相關(guān)疾病。
81.如權(quán)利要求80所述的方法,其中來源于所述受試者的一種樣品中的TTR表達(dá)被抑制至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%或至少約90%。
82.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述受試者是一個(gè)人。
83.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述受試者是罹患一種TTR相關(guān)疾病的一名受試者。
84.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述受試者是有風(fēng)險(xiǎn)患上一種TTR相關(guān)疾病的一名受試者。
85.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述受試者攜帶與一種TTR相關(guān)疾病的發(fā)展相關(guān)的一種TTR基因突變。
86.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述TTR相關(guān)疾病選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成:老年全身性淀粉樣變性(SSA)、全身性家族性淀粉樣變性、家族性淀粉樣多發(fā)性神經(jīng)病(FAP)、家族性淀粉樣心肌病(FAC)、軟腦膜/中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)淀粉樣變性以及高甲狀腺素血癥。
87.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述受試者具有一種TTR相關(guān)淀粉樣變性，并且所述方法減少所述受試者中的一種淀粉樣TTR沉積物。
88.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述RNAi試劑通過一種選自下組的給藥手段給予給所述受試者，該組由以下各項(xiàng)組成:皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、支氣管內(nèi)、胸膜內(nèi)、腹膜內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、經(jīng)淋巴、經(jīng)腦脊髓及其任何組合。
89.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述RNAi試劑經(jīng)由皮下、肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥而給予給所述受試者。
90.如權(quán)利要求89所述的方法，其中所述皮下給藥包括經(jīng)由一個(gè)皮下泵或皮下儲(chǔ)槽給藥。
91.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述RNAi試劑被給予給所述受試者，以使得所述RNAi試劑被遞送到所述受試者內(nèi)的一個(gè)具體部位。
92.如權(quán)利要求91所述的方法，其中所述部位選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成:肝臟、脈絡(luò)叢、視網(wǎng)膜以及胰腺。
93.如權(quán)利要求91所述的方法，其中所述部位是肝臟。
94.如權(quán)利要求91所述的方法，其中所述RNAi試劑的遞送由肝細(xì)胞中存在的一種脫唾液酸糖蛋白受體(ASGP-R)介導(dǎo)。
95.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述RNAi試劑以0.05_50mg/kg的一個(gè)劑量給予。
96.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述RNAi試劑在兩個(gè)或更多個(gè)劑量中給予。
97.如權(quán)利要求96所述的方法，其中所述RNAi試劑以選自下組的時(shí)間間隔給予，該組由以下各項(xiàng)組成:每隔約12小時(shí)一次、每隔約24小時(shí)一次、每隔約48小時(shí)一次、每隔約72小時(shí)一次以及每隔約96小時(shí)一次。
98.如權(quán)利要求80所述的方法，進(jìn)一步包括評(píng)估來源于該受試者的一種樣品中的TTRmRNA表達(dá)或TTR蛋白質(zhì)表達(dá)的水平。
99.如權(quán)利要求80所述的方法，其中給予所述RNAi試劑不在所述受試者中產(chǎn)生一種炎癥應(yīng)答，如基于來自所述受試者的一種樣品中的一種選自下組的細(xì)胞因子或趨化因子的水平而評(píng)估，該組由以下各項(xiàng)組成:G-CSF、IFN- Y、IL-10、IL-12 (p70)、ILl β、IL-lra, IL-6,IL-8、IP-10、MCP-UMIP-1 α ,MIP-1 β ,TNFa 及其任何組合。
100.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述RNAi試劑使用一種藥物組合物給予。
101.如權(quán)利要求100所述的方法，其中所述siRNA在一種非緩沖溶液中給予。
102.如權(quán)利要求101所述的方法，其中所述非緩沖溶液是生理鹽水或水。
103.如權(quán)利要求100所述的方法，其中所述siRNA與一種緩沖溶液給予。
104.如權(quán)利要求103所述的方法，其中所述緩沖溶液包括乙酸鹽、檸檬酸鹽、醇溶谷蛋白、碳酸鹽或磷酸鹽或其任何組合。
105.如權(quán)利要求104所述的方法，其中所述緩沖溶液是磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)。
106.如權(quán)利要求100所述的方法，其中所述藥物組合物是一種脂質(zhì)體。
107.一種抑制細(xì)胞中的甲狀腺素運(yùn)載蛋白(TTR)表達(dá)的方法，包括使所述細(xì)胞與一種雙鏈RNAi試劑以有效抑制所述細(xì)胞中的TTR表達(dá)的一個(gè)量接觸，其中所述雙鏈RNAi試劑選自表1中列出的RNAi試劑的群組，從而抑制所述細(xì)胞中的甲狀腺素運(yùn)載蛋白(TTR)表達(dá)。
108.一種抑制細(xì)胞中的甲狀腺素運(yùn)載蛋白(TTR)表達(dá)的方法，包括使所述細(xì)胞與一種雙鏈RNAi試劑以有效抑制所述細(xì)胞中的TTR表達(dá)的一個(gè)量接觸，其中所述雙鏈RNAi試劑選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成:AD-51544、AD-51545、AD-51546以及AD-51547，從而抑制所述細(xì)胞中的甲狀腺素 運(yùn)載蛋白(TTR)表達(dá)。
109.一種抑制細(xì)胞中的甲狀腺素運(yùn)載蛋白(TTR)表達(dá)的方法，包括使所述細(xì)胞與一種雙鏈RNAi試劑以有效抑制所述細(xì)胞中的TTR表達(dá)的一個(gè)量接觸，其中所述雙鏈RNAi試劑是AD-51547，從而抑制所述細(xì)胞中的甲狀腺素運(yùn)載蛋白(TTR)表達(dá)。
110.一種治療或預(yù)防受試者中的一種TTR相關(guān)疾病的方法，包括給予所述受試者一個(gè)治療有效量或一個(gè)預(yù)防有效量的一種雙鏈RNAi試劑，其中所述雙鏈RNAi試劑選自表1中列出的試劑的群組，從而治療或預(yù)防所述受試者中的一種TTR相關(guān)疾病。
111.一種治療或預(yù)防受試者中的一種TTR相關(guān)疾病的方法，包括給予所述受試者一個(gè)治療有效量或一個(gè)預(yù)防有效量的一種雙鏈RNAi試劑，其中所述雙鏈RNAi試劑選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成:AD-51544、AD-51545、AD-51546以及AD-51547，從而治療或預(yù)防所述受試者中的一種TTR相關(guān)疾病。
112.—種治療或預(yù)防受試者中的一種TTR相關(guān)疾病的方法，包括給予所述受試者一個(gè)治療有效量或一個(gè)預(yù)防有效量的一種雙鏈RNAi試劑，其中所述雙鏈RNAi試劑是AD-51547，從而治療或預(yù)防所述受試者中的一種TTR相關(guān)疾病。
113.一種用于執(zhí)行如權(quán)利要求46所述的方法的試劑盒，包括 a)所述RNAi試劑，和 b)使用說明書。
114.一種用于執(zhí)行如權(quán)利要求74所述的方法的試劑盒，包括 a)所述RNAi試劑， b)使用說明書，以及 c)任選地用于將所述RNAi試劑給予給所述受試者的工具。
【文檔編號(hào)】A61K31/7088GK104080794SQ201280066622
【公開日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2012年11月16日 優(yōu)先權(quán)日:2011年11月18日
【發(fā)明者】R·G·卡蘭索塔瑟爾, T·齊默爾曼, M·馬諾哈倫, M·梅爾, S·庫奇曼奇, K·查里斯 申請(qǐng)人:阿爾尼拉姆醫(yī)藥品有限公司