專利名稱：一種中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療女性陰道炎、宮頸炎、宮頸糜爛等婦科炎癥的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，屬中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
宮頸炎、陰道炎、宮頸糜爛是婦女生殖系統(tǒng)炎癥中的常見病、多發(fā)病，屬中醫(yī)“帶下”、“陰癢”范疇，古有“十女九帶”之說，給廣大婦女帶來很大的身心痛苦。在該類疾病的治療上，西醫(yī)多采用化學(xué)藥物外用治療，但復(fù)發(fā)率高，且易引起化學(xué)性外陰道炎和表皮的潰破，療效不甚滿意。
中藥中有許多藥材具有殺菌抗炎的作用，但如何將這些中藥材配方組合，使其能發(fā)揮協(xié)同增效的作用，是中藥界一直在研究的課題。另外，由于制劑技術(shù)的局限和衛(wèi)生條件的限制，至今極少有適宜的中藥劑型可以供婦科外用。而已有的劑型也僅有洗劑、栓劑、泡騰片劑，這些劑型都存在載藥量小、藥物停留時(shí)間短或釋藥不均勻等問題。
本發(fā)明目的旨在克服現(xiàn)有藥物的不足，提供一種有效治療女性陰道炎、宮頸炎、宮頸糜爛的中藥組合物及其制備方法；本發(fā)明目的還在于提供一種中藥組合物的質(zhì)量控制方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明所述的藥物是由下列組份的原料藥制成的(用量為重量份)苦參1000～2000份、莪術(shù)200～800份、蒼術(shù)100～500份、冰片5～20份。
經(jīng)優(yōu)選后的原料藥比例為苦參1400～1600份、莪術(shù)400～600份、蒼術(shù)200～400份、冰片5～15份。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)后進(jìn)一步優(yōu)選后，確實(shí)最優(yōu)配比為苦參1500份、莪術(shù)500份、蒼術(shù)300份、冰片10份。
為了方便臨床使用，發(fā)明人針對(duì)該原料藥做了進(jìn)一步研究，以制定其提取制備工藝，將其制成臨床或藥學(xué)所需的各種劑型，如顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、栓劑、凝膠劑、洗液等。研究過程如下首先為前提取工藝的研究采用正交試驗(yàn)法，以苦參堿和總生物堿得量為指標(biāo)考察苦參的提取工藝和精制工藝；以揮發(fā)油得量為指標(biāo)考察了莪術(shù)、蒼術(shù)的提取工藝；冰片為直接入藥的部分，將上述三部分藥物合并即得本藥物組合物。
基本工藝過程為取苦參藥材，粉碎，加水煎煮，煎液減壓濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.00～1.10的清膏，加乙醇使含醇量達(dá)60～80％，靜置冷藏后濾過，濾液減壓回收乙醇，并濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.10～1.20的清膏，調(diào)pH2～3，靜置，濾過，濾液通過強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂柱，加完藥液后，以去離子水繼續(xù)洗脫至水洗脫液pH6～8，棄去；加濃氨水浸泡1～3小時(shí)，再以5～15％的氨水液洗脫至完全，收集洗脫液，減壓回收溶劑，藥液濃縮至干，粉碎，備用；另取莪術(shù)、蒼術(shù)兩味藥材，加水蒸餾提取，收集餾液，加5～30％的氯化鈉，冷藏，分取上層油液，與上面的苦參提取精制物及冰片合并，制成中間體，可以進(jìn)一步制成各種劑型。
優(yōu)選后的工藝過程為取苦參藥材，粉碎分別加10倍量水煎煮三次，合并煎液，于65～70℃，-0.08Mpa條件下減壓濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.08～1.10的清膏，放冷加乙醇使含醇量達(dá)70～80％，靜置冷藏24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.18～1.20的清膏，加鹽酸調(diào)pH2～3，放置12小時(shí)，濾過，濾液通過H型強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂柱，加完藥液后，以去離子水繼續(xù)洗脫至水洗脫液pH6～7，棄去；加濃氨水浸泡2小時(shí)，再以10～15％的氨水液洗脫，以10％硅鎢酸試劑檢查至沉淀反應(yīng)陰性為止，收集洗脫液，減壓回收溶劑，藥液濃縮至干，粉碎，備用；另取莪術(shù)、蒼術(shù)兩味藥材，加8～10倍量水蒸餾提取5～8小時(shí)，收集餾液，加12～20％的氯化鈉，冷藏12小時(shí)，分取上層油液，與上面的苦參提取精制物及冰片合并，得到制劑中間體。
這其中，樹脂柱的具體要求是用濕法裝柱，濕樹脂重0.75～1.0kg，柱徑與柱高之比為1∶5～1∶10，水流出液pH3～4。
應(yīng)用以上提取及前處理工藝得到的藥物組合物中間體，配以相應(yīng)的輔料，就可以制成臨床所需的各種劑型，包括包括顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、栓劑、凝膠劑、洗液等。由于凝膠劑最有創(chuàng)新性，最適合本發(fā)明產(chǎn)品的應(yīng)用，故發(fā)明人重點(diǎn)研究了凝膠劑。
凝膠制劑的研究按上述的工藝研究資料，取莪術(shù)500份、蒼術(shù)300份提取揮發(fā)油，加揮發(fā)油中加入80型吐溫5份，研磨均勻，取冰片10份，加乙醇使溶解，加入到上述混合物中，研磨均勻，再加甘油200份，羥丙甲纖維素20份，充分研勻，得藥液A；再取苦參1500份提取精制成藥粉，加水500份，再加適量乳酸調(diào)節(jié)pH至3～4，加熱使溶解，放冷，濾過，所得濾液加入到藥液A中，邊加邊攪，再加水補(bǔ)足至1000份，攪拌使成均勻凝膠，即得。
隨著處方量的變化，各種輔料的比例也會(huì)有所波動(dòng)，但其比例是基本不變的，因而都應(yīng)屬本發(fā)明申請(qǐng)的保護(hù)范圍。
凝膠劑是一種新的中藥外用劑型，本發(fā)明是采用新型水溶性基質(zhì)-羥丙甲纖維素為賦形劑，配以中藥苦參、莪術(shù)、蒼術(shù)、冰片的提取物，加適宜附加劑制成的凝膠劑，具有清熱燥濕，抗菌、消炎、殺蟲、解毒之功效，用于治療女性宮頸炎、陰道炎癥。凝膠劑是一種適用于中藥外用的理想劑型，它是藥物與能形成大分子網(wǎng)絡(luò)體系的輔料混合制成的半流體制劑，與黏膜有良好的偶合作用和水合作用，可較長時(shí)間與作用部位緊密黏附，有較好的生物相容性，無油膩感，有利于藥物釋放。本制劑克服了一般制劑經(jīng)口服、注射、直腸等給藥途徑產(chǎn)生的味苦、疼痛、給藥不便的缺點(diǎn)；療效確切，使用方便，毒副作用小，患者易接受。
質(zhì)量控制方法的研究在研究本發(fā)明產(chǎn)品及制備方法的過程中，為了有效控制本發(fā)明產(chǎn)品的質(zhì)量，發(fā)明人還制定了其質(zhì)量控制方法，也應(yīng)屬于本發(fā)明的整體思路之一，因而也是本申請(qǐng)的保護(hù)內(nèi)容。這套質(zhì)量控制辦法包括含量測定部分和定性鑒別兩部分，分述如下。
含量測定方法照高效液相色譜法測定苦參堿色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，比例為30∶70的乙腈-0.02％三乙胺為流動(dòng)相，流速1ml/min，檢測波長為230nm，理論塔板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取已干燥至恒重的苦參堿對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含苦參堿200μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
供試品溶液的制備 取本品1.0g，精密稱定，置錐形瓶中，加飽和食鹽水20ml，攪拌使溶，再加濃氨水調(diào)節(jié)pH9～10，以氯仿振搖提取5次，每次20ml，合并氯仿液，水浴揮干溶劑，殘?jiān)蛹状级哭D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，微孔濾膜濾過，即得。
測定法 分別精密吸取對(duì)照品與供試品液各10μl注入液相色譜儀，測定，即得。
定性鑒別方法(1)取本品4g，加硅藻土10g，研磨均勻，加水50ml轉(zhuǎn)移至100ml圓底燒瓶中，上接揮發(fā)油提取器，提取器刻度管內(nèi)先加滿水，再加入醋酸乙酯2ml，蒸餾提取1小時(shí)，收集醋酸乙酯液，作為供試品溶液；另取莪術(shù)對(duì)照藥材1g，加石油醚20ml超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml作為對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2～5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以比例為19∶1苯-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫色主斑點(diǎn)。
(2)取(1)項(xiàng)下的供試品溶液作為供試品溶液；另取蒼術(shù)對(duì)照藥材1g，加石油醚20ml超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3～8μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的墨綠色斑點(diǎn)。
(3)取(1)項(xiàng)下的供試品溶液作為供試品溶液；另取冰片對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5～10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以比例為19∶1環(huán)己烷-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(4)取(1)項(xiàng)下經(jīng)蒸餾提取后的水液，以脫脂棉濾過，再加濃氨水調(diào)節(jié)pH9～10，以氯仿振搖提取3次，每次30ml，合并氯仿液，水浴蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取苦參堿對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以比例為2∶3∶4∶0.2的苯-丙酮-醋酸乙酯-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙紅色斑點(diǎn)。
經(jīng)發(fā)明人證明，以上質(zhì)量控制方法可以應(yīng)用于本發(fā)明技術(shù)方案能夠制成的各種劑型。
有益效果本發(fā)明藥物組合物具有行氣破瘀，燥濕殺蟲，生肌止痛之功效，可用于治療女性細(xì)菌性、霉菌性陰道炎，宮頸炎，宮頸糜爛等癥。為證明其效果，發(fā)明人進(jìn)行了如下動(dòng)物藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)。
試驗(yàn)藥品婦康凝膠(按本發(fā)明最優(yōu)技術(shù)方案制備而得)批號(hào)20031020含量2.31g生藥/g凝膠受試藥物的配置用基質(zhì)稀釋，小、中、大劑量含生藥分別為0.58g生藥/g凝膠、1.16g生藥/g凝膠、2.31g生藥/g凝膠。
試驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，由山東中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)2003002；白色豚鼠動(dòng)物合格證號(hào)2003004；家兔，體重2.1～2.5kg，♀♂兼用，由山東省農(nóng)科院畜牧所種兔場提供，動(dòng)物合格證號(hào)魯動(dòng)質(zhì)字D20021135。
試驗(yàn)器材Oliympus ch30顯微鏡(日本)，YJ-1450醫(yī)用凈化工作臺(tái)(蘇州金燕掙化廠)。
菌種金黃色葡萄球菌(ATCC，25923)，大腸桿菌(ATCC，25922)，乙型溶血性鏈球菌(32204)、淋球菌、白色念珠菌，均由山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科細(xì)菌室臨床分離。
潔爾陰洗液成都恩威制藥有限公司，批號(hào)021140。
營養(yǎng)肉湯(生物制劑)山東省衛(wèi)生防疫站，批號(hào)20000401。
磷酸組胺上海麗珠東風(fēng)生物技術(shù)有限公司，批號(hào)990406。
達(dá)克寧栓西安楊森制藥有限公司，批號(hào)010115711。
注射用青霉素山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)B030616。
試驗(yàn)方法與結(jié)果1.婦康凝膠體外抑菌試驗(yàn)1.1婦康凝膠抑制細(xì)菌試驗(yàn)(1)菌種致病性大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、淋球菌、白色念珠菌，以上細(xì)菌均選標(biāo)準(zhǔn)菌株(皆從臨床標(biāo)本分離，每個(gè)菌種分離10個(gè)菌株)。(2)培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯(3)方法取滅菌小試管若干支，用相應(yīng)的培養(yǎng)基稀釋被試藥，濃度從含生藥0.2g/ml開始，并二倍稀釋法分為6管，(另設(shè)藥物對(duì)照組試管及菌株對(duì)照試管)每管加培養(yǎng)基1ml，每管加入0.1ml稀釋的新鮮菌液(含菌量金黃色葡萄球菌約3.5×108、乙型溶血性鏈球菌1×107、大腸桿菌約5×109)，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18小時(shí)后觀察有無細(xì)菌生長，如果藥液顏色深或不透明，無法判定有無細(xì)菌生長，把可疑試管再移到平面皿培養(yǎng)基上，培養(yǎng)18小時(shí)，觀察細(xì)菌生長情況，細(xì)菌不生長的最高藥物稀釋濃度為該藥的最低抑菌濃度(MIC)，每個(gè)菌種采用10株，求其平均值為其最低抑菌濃度，試驗(yàn)結(jié)果見表1。
表1 凝膠液體試管法體外抑菌(MIC)試驗(yàn)結(jié)果(X±SD)(g/ml)

“+”有細(xì)菌生長，“-”無細(xì)菌生長結(jié)論婦康凝膠與對(duì)照藥相比，有明顯抑菌作用。
1.2婦康凝膠抑制真菌試驗(yàn)(1)菌種白色念珠菌、酵母菌，試驗(yàn)用第二代新鮮培養(yǎng)物，選標(biāo)準(zhǔn)菌株。(2)培養(yǎng)基沙雷氏真菌培養(yǎng)基(3)方法取滅菌小試管若干支，用相應(yīng)的培養(yǎng)基稀釋被試藥，藥物濃度從含生藥0.2g/ml開始，并二倍稀釋法分為5管，(另設(shè)藥物對(duì)照組試管及菌株對(duì)照試管)每管加培養(yǎng)基1ml，再加入200倍稀釋的新鮮真菌培養(yǎng)液0.1ml，置32℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18小時(shí)后觀察有無真菌生長，如果藥液顏色深或不透明，無法判定有無細(xì)菌生長，把可疑試管再移到沙雷氏真菌培養(yǎng)平面皿上，培養(yǎng)18小時(shí)，觀察細(xì)菌生長情況，細(xì)菌不生長的最高藥物稀釋濃度為該藥的最低抑菌濃度(MIC)。試驗(yàn)結(jié)果見表2。
表2凝膠液體試管法體外抑真菌(MIC)試驗(yàn)結(jié)果(X±SD)(g/ml)

“+”有細(xì)菌生長，“-”無細(xì)菌生長。與潔爾陰組比較※P＜0.05結(jié)論婦康凝膠與對(duì)照藥相比，有明顯抑菌作用。
2.婦康凝膠對(duì)陰道炎模型的影響2.1.婦康凝膠對(duì)家兔真菌性(白色念珠菌)陰道炎模型的影響方法建立了真菌性(白色念珠菌)陰道炎動(dòng)物模型，將大白兔用兔架固定，眼科鑷鑷起陰道口，用大鼠灌胃針頭注入濃度為3×108個(gè)/ml的白色念珠菌0.05ml，然后用浸入青霉素的棉球堵住陰道口。接種后每天肉眼觀察陰道有無發(fā)生充血水腫、出血、糜爛、分泌物增多等情況，于接種后第5天取陰道分泌物，用生理鹽水濕片法鏡檢為陽性，并用沙氏培養(yǎng)基培養(yǎng)后見假菌絲和芽生孢子，證實(shí)造模成功。將感染的大白兔隨機(jī)分為6組治療凝膠基質(zhì)組、達(dá)克寧組、藥物大、中、小劑量組、生理鹽水組，每組動(dòng)物8只，另設(shè)空白對(duì)照組也為8只，于接種第5后連續(xù)給藥7天。于第8天取家兔陰道局部分泌物作真菌培養(yǎng)，經(jīng)鏡檢和培養(yǎng)無菌者為轉(zhuǎn)陰者。藥物與達(dá)克寧經(jīng)秩和檢驗(yàn)看區(qū)別。處死大鼠取陰道肉眼觀察并作病理檢查觀察家兔陰道炎癥情況無充血、水腫為(-)，評(píng)分0分；輕度為(+)評(píng)分1分；中度為(++)評(píng)分2分；重度為(+++)評(píng)分3分。每項(xiàng)指標(biāo)炎癥評(píng)分值的總和為炎癥總分值，受試組炎癥總分值與空白對(duì)照組炎癥總分值之差計(jì)算感染炎癥分值。以生理鹽水對(duì)照組的感染炎癥分值定為100％(炎癥程度)，藥物組與生理鹽水對(duì)照組比較，可得出藥物組的炎癥程度(％)，100％減去炎癥程度即為對(duì)陰道炎的治愈程度(100％-炎癥程度％)。分析比較其對(duì)白色念珠菌所致陰道炎癥的影響，試驗(yàn)結(jié)果見表3。
表3 婦康凝膠對(duì)家兔白色念珠菌陰道炎的影響(X±SD)

與生理鹽水比較※p＜0.05，※※p＜0.01結(jié)論婦康凝膠與對(duì)照藥相比，有明顯的抗炎作用。
2.2.凝膠對(duì)大鼠細(xì)菌性陰道炎模型的影響建立金葡菌、大腸桿菌混合感染性陰道炎動(dòng)物模型從大鼠陰道注入金葡菌(3×108個(gè)/ml)和大腸桿菌(16×108個(gè)/ml)混合菌液，菌液注入量為0.05ml/100g，隔日再注射一次，第5天及第7天分別取陰道分泌物做鏡檢、細(xì)菌培養(yǎng)，并分別分離出金葡菌和大腸桿菌，再分別接種于培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)后做菌株鑒定。鏡檢及菌株鑒定均為陽性者即為感染成功的大鼠。取感染成功的大鼠隨機(jī)分組治療。于接種后第5天取陰道分泌物，經(jīng)鏡檢和培養(yǎng)檢驗(yàn)為陽性者作為感染模型。治療方法、炎癥評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)同真菌性陰道炎模型，結(jié)果見表4。
表4婦康凝膠對(duì)大鼠細(xì)菌性陰道炎模型的影響(X±SD)

與生理鹽水比較※p＜0.05，※※p＜0.01與生理鹽水比較※p＜0.05，※※p＜0.01結(jié)論婦康凝膠與對(duì)照藥相比，有明顯的抗炎作用。
3、婦康凝膠對(duì)大鼠宮頸炎的影響取健康、雌性、末孕大白鼠70只，體重150～200g，將動(dòng)物按體重隨機(jī)分成7組，正常對(duì)照組、試驗(yàn)造模組、基質(zhì)組、婦康凝膠小、中、大劑量組、潔爾陰組。除正常對(duì)照組外其余6組用注射器向陰道深部注入25％苯酚膠漿，每只0.5ml，3天1次，共3次。造模后第9天開始給以上藥物，0.5ml/只/次/天，連續(xù)給藥12天后處死各組動(dòng)物，解剖子宮后取出觀察。取陰道至子宮分角處組織，置10％福爾馬林中固定，3天后將組織自中線縱行切開，做常規(guī)石蠟切片，HE染色，鏡下觀察陰道至子宮組織形態(tài)學(xué)變化及粘膜、粘膜下間質(zhì)形態(tài)學(xué)的炎癥改變程度，根據(jù)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定炎癥程度。標(biāo)準(zhǔn)粘膜，鱗狀上皮層僅局部超過2～3層略有增厚為“+”，明顯增厚為“++”，廣泛增厚并使粘膜凹凸不平為“+++”；有些柱狀上皮可見有增生而出現(xiàn)鱗化趨勢為“+”，明顯鱗化為“++”，鱗化區(qū)域廣泛甚至達(dá)管腔為“+++”；僅見極少區(qū)域鱗狀上皮出現(xiàn)糜爛，而被鄰近柱狀上皮增生替代為“+”，柱狀上皮增生明顯替代鱗狀上皮為“++”，鱗狀上皮大片脫落由柱狀上皮替代為“+++”，僅見極少區(qū)域糜爛突破基底膜為“+”，可見明顯粘膜上皮變性壞死為“++”，粘膜潰瘍伴有感染為“+++”；炎細(xì)胞浸潤僅見粘膜及粘膜下淺層有少量炎細(xì)胞浸潤為“+”，粘膜及粘膜下間質(zhì)內(nèi)均有中等量炎細(xì)胞浸潤為“++”，粘膜下及間質(zhì)內(nèi)深層均見大量廣泛炎細(xì)胞浸潤為“+++”；間質(zhì)成纖維細(xì)胞增生間質(zhì)內(nèi)僅見成纖維細(xì)胞賂較正常對(duì)照組增多為“+”，成纖維細(xì)胞增生明顯并有少量膠原纖維束為“++”，成纖維細(xì)胞增生伴有大量膠原纖維束形成為“+++”。將宮頸總體炎癥改變程度分為4級(jí)，正常六項(xiàng)中僅見淺層少量炎細(xì)胞浸潤；輕度六項(xiàng)中兩項(xiàng)以上“+”；中度六項(xiàng)中兩項(xiàng)以上“+”，兩項(xiàng)有“++”；重度六項(xiàng)中一項(xiàng)有“+++”，兩項(xiàng)有“++”，三項(xiàng)有“+”或三項(xiàng)有“+++”，試驗(yàn)結(jié)果見表5。
表5 婦康凝膠對(duì)宮頸炎大鼠的影響

組織形態(tài)學(xué)觀察造模組陰道粘膜鱗狀上皮層增厚，宮頸鱗柱交界處可見有枝狀上皮鱗狀化生，有多處可見上皮糜爛，并有糜爛部位柱狀上皮替代鱗狀上皮的趨勢。少數(shù)動(dòng)物可見有粘膜潰瘍，粘膜下層毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，間質(zhì)水腫。從粘膜至間質(zhì)均可見大量炎細(xì)胞浸潤，并可見間質(zhì)纖維組織增生。藥物組與造模組相應(yīng)部位比較，病變均明顯輕微，其炎癥改變程度也明顯較其它組輕，其鱗狀上皮形態(tài)與正常對(duì)照組相似，粘膜下炎細(xì)胞浸潤較造模組明顯減少，組織結(jié)構(gòu)與正常對(duì)照組無明顯差異。
結(jié)論婦康凝膠與對(duì)照藥相比，有明顯的抗炎作用。
4.止癢作用取白色豚鼠60只，雌雄各半，體重300～400g，隨機(jī)分成6組，試驗(yàn)前一天各鼠右后足背剃毛，涂藥一次。試驗(yàn)當(dāng)天用粗砂紙擦傷剃毛處，面積約為1cm2，局部再涂藥一次，對(duì)照組給予等量的生理鹽水。末次涂藥后10分鐘，開始在創(chuàng)面滴0.01％磷酸組織胺，每只0.05ml，此后每隔3分鐘按0.01％、0.02％、0.03％……遞增濃度，每次均為0.05ml，直至出現(xiàn)豚鼠回頭舔后足所給予的磷酸組織胺總量為致癢閾，記錄并比較各組致癢閾，經(jīng)方差分析比較區(qū)別。磷酸組織胺50μl，涂抹擦傷皮膚，3分鐘內(nèi)若豚鼠不出現(xiàn)回頭舔后足皮膚動(dòng)作，重復(fù)操作，如此直至出現(xiàn)為止，記錄涂抹組織胺次數(shù)及用量。試驗(yàn)結(jié)果見表6表6 婦康凝膠對(duì)磷酸組織胺所致豚鼠癢閾值的影響(X±SD)(ug)

與生理鹽水比較※p＜0.05結(jié)論婦康凝膠與對(duì)照藥相比，有明顯的止癢作用。
具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例來詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案實(shí)施例1[處方]苦參1000g、莪術(shù)200g、蒼術(shù)100g、冰片5g[制法]取苦參藥材，粉碎成最粗粉，分別加10倍量水煎煮三次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.10的清膏，放冷加乙醇使含醇量達(dá)60％，靜置冷藏24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇至相對(duì)密度為1.15～1.18的清膏，加鹽酸調(diào)pH2～3，放置12小時(shí)，濾過，濾液通過已處理好的強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂柱(濕法裝柱，濕樹脂重0.8kg，柱徑與柱高之比為1∶5，水流出液pH3)，加完藥液后，以去離子水繼續(xù)洗脫至水洗脫液pH6～7，棄去；加濃氨水浸泡1小時(shí)，再以7％的氨水液洗脫，以10％硅鎢酸試劑檢查至沉淀反應(yīng)陰性為止，收集洗脫液，減壓回收溶劑，藥液濃縮至干，粉碎，備用；再取莪術(shù)、蒼術(shù)兩味藥材，粉碎成粗顆粒，加8倍量水蒸餾提取5小時(shí)，收集餾液，加12％的氯化鈉，冷藏12小時(shí)，分取上層油液，加入吐溫-80 2g研磨30分鐘，取冰片，加乙醇10ml使溶解，加入到上述混合物中，研磨均勻，再加甘油100g，羥丙甲纖維素10g，充分研勻，放置30分鐘，備用；取苦參提取精制的藥粉，加水200ml，再加適量乳酸調(diào)節(jié)pH至4，加熱使溶解，放冷，濾過，所得濾液加入到上面的混合物中，邊加邊攪，再加水補(bǔ)足至600g，攪拌使成均勻凝膠，即得。
實(shí)施例2[處方]苦參2000g、莪術(shù)800g、蒼術(shù)500g、冰片20g[制法]取苦參藥材，粉碎成最粗粉，分別加10倍量水煎煮二次，每次1.5小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.00～1.03的清膏，放冷加乙醇使含醇量達(dá)70％，靜置冷藏24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇至相對(duì)密度為1.10～1.15的清膏，加鹽酸調(diào)pH2～3，放置12小時(shí)，濾過，濾液通過已處理好的H型強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂柱(濕法裝柱，濕樹脂重1.0kg，柱徑與柱高之比為1∶8，水流出液pH4)，加完藥液后，以去離子水繼續(xù)洗脫至水洗脫液pH7，棄去；加濃氨水浸泡3小時(shí)，再以15％的氨水液洗脫，以10％硅鎢酸試劑檢查至沉淀反應(yīng)陰性為止，收集洗脫液，減壓回收溶劑，藥液濃縮至干，粉碎，備用；再取莪術(shù)、蒼術(shù)兩味藥材，粉碎成粗顆粒，加10倍量水蒸餾提取8小時(shí)，收集餾液，加20％的氯化鈉，冷藏12小時(shí)，分取上層油液，加入吐溫-80 8g研磨30分鐘，取冰片，加乙醇20ml使溶解，加入到上述混合物中，研磨均勻，再加甘油250g，羥丙甲纖維素27g，充分研勻，放置40分鐘，備用；取苦參提取精制的藥粉，加水700ml，再加適量乳酸調(diào)節(jié)pH至3，加熱使溶解，放冷，濾過，所得濾液加入到上面的混合物中，邊加邊攪，再加水補(bǔ)足至1500g，攪拌使成均勻凝膠，即得。
實(shí)施例3[處方]苦參1500g、莪術(shù)500g、蒼術(shù)300g、冰片10g[制法]取苦參藥材，粉碎成最粗粉，分別加10倍量水煎煮三次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.08～1.10的清膏，放冷加乙醇使含醇量達(dá)80％，靜置冷藏24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇至相對(duì)密度為1.18～1.20的清膏，加鹽酸調(diào)pH2～3，放置12小時(shí)，濾過，濾液通過已處理好的H型強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂柱，加完藥液后，以去離子水繼續(xù)洗脫至水洗脫液pH6～7，棄去；加濃氨水浸泡2小時(shí)，再以10％的氨水液洗脫，以10％硅鎢酸試劑檢查至沉淀反應(yīng)陰性為止，收集洗脫液，減壓回收溶劑，藥液濃縮至干，粉碎，備用；再取莪術(shù)、蒼術(shù)兩味藥材，粉碎成5目左右顆粒，加8倍量水蒸餾提取6小時(shí)，收集餾液，加15％的氯化鈉，冷藏12小時(shí)，分取上層油液，加入吐溫-80 5g研磨30分鐘，取冰片，加乙醇15ml使溶解，加入到上述混合物中，研磨均勻，再加甘油200g，羥丙甲纖維素20g，充分研勻，放置30分鐘，備用；取苦參提取精制的藥粉，加水500ml，再加適量乳酸調(diào)節(jié)pH至4，加熱使溶解，放冷，濾過，所得濾液加入到上面的混合物中，邊加邊攪，再加水補(bǔ)足至1000g，攪拌使成均勻凝膠，即得。
實(shí)施例4[處方]苦參1200g、莪術(shù)400g、蒼術(shù)300g、冰片15g[制法]取苦參藥材，粉碎，加水煎煮，煎液減壓濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.08～1.10的清膏，加乙醇使含醇量達(dá)65％，靜置冷藏過夜，濾過，濾液減壓回收乙醇，并濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.18～1.20的清膏，調(diào)pH3，靜置，濾過，濾液通過強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂柱(濕法裝柱，濕樹脂重0.8kg，柱徑與柱高之比為1∶8，水流出液pH3)，加完藥液后，以去離子水繼續(xù)洗脫至水洗脫液pH7，棄去；加濃氨水浸泡1小時(shí)，再以10％的氨水液洗脫至硅鎢酸反應(yīng)陰性，收集洗脫液，減壓回收溶劑，藥液濃縮至干，粉碎，備用；另取莪術(shù)、蒼術(shù)兩味藥材，加10倍量水蒸餾提取6小時(shí)，收集餾液，加15％的氯化鈉，冷藏12小時(shí)，分取上層油液，與上面的苦參提取精制物及冰片合并，加入80％乙醇，混合均勻，制成洗劑。
實(shí)施例5對(duì)實(shí)施例3所制凝膠進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)[鑒別](1)取本品4g，加硅藻土10g，研磨均勻，加水50ml轉(zhuǎn)移至100ml圓底燒瓶中，上接揮發(fā)油提取器，提取器刻度管內(nèi)先加滿水，再加入醋酸乙酯2ml，蒸餾提取1小時(shí)，收集醋酸乙酯液，作為供試品溶液；另取莪術(shù)對(duì)照藥材1g，加石油醚(60～90℃)20ml超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml作為對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2～5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯(19∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫色主斑點(diǎn)。
(2)取[鑒別](1)項(xiàng)下的供試品溶液作為供試品溶液；另取蒼術(shù)對(duì)照藥材1g，加石油醚(60～90℃)20ml超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3～8μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的墨綠色斑點(diǎn)。
(3)取[鑒別](1)項(xiàng)下的供試品溶液作為供試品溶液；另取冰片對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5～10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯(19∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(4)取[鑒別](1)項(xiàng)下經(jīng)蒸餾提取后的水液，以脫脂棉濾過，再加濃氨水調(diào)節(jié)pH9～10，以氯仿振搖提取3次，每次30ml，合并氯仿液，水浴蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取苦參堿對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-丙酮-醋酸乙酯-濃氨試液(2∶3∶4∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙紅色斑點(diǎn)。
pH取本品5g，加新沸冷卻水50ml，攪拌30分鐘，測定水液的pH，應(yīng)為4.0～6.0。
照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(5μm，250mm×4.6mm)，乙腈-0.02％三乙胺(30∶70)為流動(dòng)相，流速1ml/min，柱溫40℃，檢測波長為230nm，理論塔板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取已干燥至恒重的苦參堿對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含苦參堿200μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
供試品溶液的制備 取本品1.0g，精密稱定，置錐形瓶中，加飽和食鹽水20ml，攪拌使溶，再加濃氨水調(diào)節(jié)pH9～10，以氯仿振搖提取5次，每次20ml，合并氯仿液，水浴揮干溶劑，殘?jiān)蛹状级哭D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。
測定法 分別精密吸取對(duì)照品與供試品液各10μl注入液相色譜儀，測定，即得。
行氣破瘀，燥濕殺蟲，生肌止痛。用于治療女性細(xì)菌性、霉菌性陰道炎，宮頸炎，宮頸糜爛。
權(quán)利要求
1.一種用于治療婦科生殖系統(tǒng)炎癥的藥物組合物，其特征在于它是由如下重量份原料藥制成的苦參1000～2000份、莪術(shù)200～800份、蒼術(shù)100～500份、冰片5～20份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于各原料藥的優(yōu)選重量配比為苦參1400～1600份、莪術(shù)400～600份、蒼術(shù)200～400份、冰片5～15份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于各原料的最佳重量配比為苦參1500份、莪術(shù)500份、蒼術(shù)300份、冰片10份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一所述的藥物組合物，其特征在于該組合物可制成臨床上或藥學(xué)上可接受的各種劑型，包括顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、栓劑、凝膠劑、洗液等。
5.權(quán)利要求4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法包含如下工藝過程取苦參藥材，粉碎，加水煎煮，煎液減壓濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.00～1.10的清膏，加乙醇使含醇量達(dá)60～80％，靜置冷藏后濾過，濾液減壓回收乙醇，并濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.10～1.20的清膏，調(diào)pH2～3，靜置，濾過，濾液通過強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂柱，加完藥液后，以去離子水繼續(xù)洗脫至水洗脫液pH6～8，棄去；加濃氨水浸泡1～3小時(shí)，再以5～15％的氨水液洗脫至完全，收集洗脫液，減壓回收溶劑，藥液濃縮至干，粉碎，備用；另取莪術(shù)、蒼術(shù)兩味藥材，加水蒸餾提取，收集餾液，加5～30％的氯化鈉，冷藏，分取上層油液，與上面的苦參提取精制物及冰片合并，加入適宜輔料，制成相應(yīng)劑型。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述藥物組合物的制備方法，其特征在于該具體過程如下取苦參藥材，粉碎分別加10倍量水煎煮三次，合并煎液，于65～70℃，-0.08Mpa條件下減壓濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.08～1.10的清膏，放冷加乙醇使含醇量達(dá)70～80％，靜置冷藏24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.18～1.20的清膏，加鹽酸調(diào)pH2～3，放置12小時(shí)，濾過，濾液通過H型強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂柱，加完藥液后，以去離子水繼續(xù)洗脫至水洗脫液pH6～7，棄去；加濃氨水浸泡2小時(shí)，再以10～15％的氨水液洗脫，以10％硅鎢酸試劑檢查至沉淀反應(yīng)陰性為止，收集洗脫液，減壓回收溶劑，藥液濃縮至干，粉碎，備用；另取莪術(shù)、蒼術(shù)兩味藥材，加8～10倍量水蒸餾提取5～8小時(shí)，收集餾液，加12～20％的氯化鈉，冷藏12小時(shí)，分取上層油液，與上面的苦參提取精制物及冰片合并，加入適宜輔料，制成所需劑型。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述藥物組合物的制備方法，其特征在于其中的陽離子交換樹脂柱是用濕法裝柱，濕樹脂重0.75～1.0kg，柱徑與柱高之比為1∶5～1∶10，水流出液pH3～4。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述藥物組合物的制備方法，其特征在于凝膠劑的工藝過程為取莪術(shù)500份、蒼術(shù)300份提取揮發(fā)油，加揮發(fā)油中加入80型吐溫5份，研磨均勻，取冰片10份，加乙醇使溶解，加入到上述混合物中，研磨均勻，再加甘油200份，羥丙甲纖維素20份，充分研勻，得藥液A；再取苦參1500份提取精制成藥粉，加水500份，再加適量乳酸調(diào)節(jié)pH至3～4，加熱使溶解，放冷，濾過，所得濾液加入到藥液A中，邊加邊攪，再加水補(bǔ)足至1000份，攪拌使成均勻凝膠，即得。
9.權(quán)利要求8所述藥物組合物的質(zhì)量控制方法，含有含量測定和定性鑒別兩部分，其特征在于含量測定方法如下色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，比例為30∶70的乙腈-0.02％三乙胺為流動(dòng)相，流速1ml/min，檢測波長為230nm，理論塔板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000；對(duì)照品溶液的制備 精密稱取已干燥至恒重的苦參堿對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含苦參堿200μg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備 取本品1.0g，精密稱定，置錐形瓶中，加飽和食鹽水20ml，攪拌使溶，再加濃氨水調(diào)節(jié)pH9～10，以氯仿振搖提取5次，每次20ml，合并氯仿液，水浴揮干溶劑，殘?jiān)蛹状级哭D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，微孔濾膜濾過，即得；測定法 分別精密吸取對(duì)照品與供試品液各10μl注入液相色譜儀，測定，即得。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于其中的鑒別方法包含如下的一種或幾種1)取本品4g，加硅藻土10g，研磨均勻，加水50ml轉(zhuǎn)移至100ml圓底燒瓶中，上接揮發(fā)油提取器，提取器刻度管內(nèi)先加滿水，再加入醋酸乙酯2ml，蒸餾提取1小時(shí)，收集醋酸乙酯液，作為供試品溶液；另取莪術(shù)對(duì)照藥材1g，加石油醚20ml超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml作為對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2～5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以比例為19∶1苯-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫色主斑點(diǎn)；2)取“鑒別1)”項(xiàng)下的供試品溶液作為供試品溶液；另取蒼術(shù)對(duì)照藥材1g，加石油醚20ml超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3～8μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的墨綠色斑點(diǎn)；3)取“鑒別1)”項(xiàng)下的供試品溶液作為供試品溶液；另取冰片對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5～10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以比例為19∶1環(huán)己烷-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；4)取“鑒別1)”項(xiàng)下經(jīng)蒸餾提取后的水液，以脫脂棉濾過，再加濃氨水調(diào)節(jié)pH9～10，以氯仿振搖提取3次，每次30ml，合并氯仿液，水浴蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取苦參堿對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以比例為2∶3∶4∶0.2的苯-丙酮-醋酸乙酯-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙紅色斑點(diǎn)。
11.權(quán)利要求1至3中任一所述的藥物組合物在制備用于治療女性陰道炎、宮頸炎、宮頸糜爛等婦科炎癥的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于治療婦科炎癥的中藥組合物，該組合物是由苦參、莪術(shù)、蒼術(shù)和冰片等原料藥，經(jīng)水提醇沉、樹脂柱精制、提取揮發(fā)油等工藝步驟制成適宜的劑型，優(yōu)選為凝膠劑，屬中藥領(lǐng)域。本發(fā)明中藥組合物對(duì)婦女細(xì)菌性、霉菌性陰道炎，宮頸炎，宮頸糜爛等有著顯著的治療效果。本發(fā)明同時(shí)還公開了該中藥組合物的制備方法和質(zhì)量控制方法。
文檔編號(hào)G01N33/15GK1958058SQ20051020066
公開日2007年5月9日 申請(qǐng)日期2005年11月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月1日
發(fā)明者代龍 申請(qǐng)人:代龍