一種用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層及其制備方法與應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明屬于無機納米材料和生物傳感器領(lǐng)域，公開了一種用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明通過噴涂法在不同基底上制備具有特定的埃洛石納米結(jié)構(gòu)，并固定上目標細胞特異性識別分子，或者直接利用粗糙的納米結(jié)構(gòu)，利用細胞表面結(jié)構(gòu)與基底粗糙納米結(jié)構(gòu)之間增強的三維拓撲相互作用，納米粗糙結(jié)構(gòu)比光滑表面可以固定更多的目標細胞的識別分子，以及基于納米粗糙表面的結(jié)構(gòu)能降低血液中流體的流動速度從而增加與細胞的相互作用機會，從而提高埃洛石納米結(jié)構(gòu)的細胞捕獲效率，對多數(shù)腫瘤細胞的3h的捕獲率超過80％。該方法操作簡單、能耗低、制備效率高，而且整個基底的制備過程無有毒有害物質(zhì)產(chǎn)生，對環(huán)境無污染。
【專利說明】
一種用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層及其制備方法與應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于無機納米材料和生物傳感器領(lǐng)域，特別涉及一種用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]癌癥是目前世界上威脅人類健康及生命的重大疾病之一。癌癥難治愈、致死率高的最主要原因是存在癌轉(zhuǎn)移，超過90%癌癥病人的死亡跟腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移直接相關(guān)。在癌轉(zhuǎn)移過程中，原發(fā)上皮腫瘤的癌細胞會脫落并入侵進入循環(huán)血液系統(tǒng)。隨著血液循環(huán)在其他組織和器官位置生長成新的腫瘤組織(轉(zhuǎn)移灶)，這種存在于循環(huán)血液中的癌細胞被稱為循環(huán)腫瘤細胞(Circulating Tumor Cells ,CTCs)。檢測循環(huán)血液中的CTCs的存在及數(shù)目變化，是一種非破壞性、非侵入式和有效的癌轉(zhuǎn)移監(jiān)控、癌癥預(yù)后判斷手段，對癌癥的體外診斷、個性化治療和病理學研究等都具有很重要的意義。特別是近年來發(fā)現(xiàn)，CTCs在癌癥早期實體腫瘤未形成前就已經(jīng)在血液中存在，因此準確地檢測血液中CTCs可以作為早期癌癥篩查、監(jiān)測癌癥進展以及患者對治療的應(yīng)答情況的可靠手段，為患者贏得較多的存活機會。但是在腫瘤患者的外周血中CTCs的數(shù)量很少，很難通過特定的手段將其從血液中分離出。
[0003]納米技術(shù)迅速發(fā)展為腫瘤的早期診斷帶來曙光。納米材料偶聯(lián)上特殊的抗體能夠特異性地與腫瘤細胞結(jié)合，進而從血液中特異性地分離出腫瘤細胞，這種方法可以作為癌癥診斷和轉(zhuǎn)移監(jiān)監(jiān)控的可靠手段。由于腫瘤細胞的尺寸和表面結(jié)構(gòu)不同于外周血中的血液細胞，因此某些粗糙的納米表面結(jié)構(gòu)的表面即使不偶聯(lián)抗體，也能通過納米陷阱的方式捕獲腫瘤細胞，進而更加簡便快捷地進行癌癥診斷。
[0004]埃洛石納米管是自然界中形成的一維納米材料，具有獨特而完美的納米級管狀結(jié)構(gòu)，其化學式為Al2Si2O5(OH)4.H2O,是一種無機硅鋁酸鹽礦物。埃洛石管內(nèi)徑尺寸范圍是10?30nm，外徑尺寸為40?70nm，而長度為0.2?2μηι。與其他一維納米材料相比，埃洛石于構(gòu)筑生物檢測表面構(gòu)筑的優(yōu)勢是:①埃洛石具有適合制備細胞捕獲分離表面的尺寸和結(jié)構(gòu)，其直徑約為50nm，長徑比約為20;并且埃洛石的親水性好，能在生理溶液和血液中穩(wěn)定分散和存在;②埃洛石表面具有硅鋁羥基等活性基團可進行多種功能化修飾;③埃洛石的細胞親和性好，具有很好的細胞相容性與細胞粘附性;④埃洛石價廉易得，方便進行推廣應(yīng)用，可以解決價格昂貴、原料來源限制、批次穩(wěn)定性差等問題，成本優(yōu)勢明顯。但是至今沒有合適的技術(shù)方法能夠快速制備埃洛石粗糙表面，以用于腫瘤細胞的特異捕獲。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺點與不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層的制備方法。本發(fā)明利用噴涂法將埃洛石制備成粗糙表面，不僅可以有效的克服常見的直接溶液揮發(fā)干燥法制備埃洛石粗糙表面成型困難的缺點，也能克服用溶液涂覆塑料管造成涂層不均勻和附著力差的缺點，還能克服傳統(tǒng)的納米表面制備方法無法實現(xiàn)大面積制備的缺點，是一種新型的可用于腫瘤細胞捕獲的埃洛石納米粗糙表面的制造方法。噴涂法能夠獲得大面積的埃洛石表面，制備過程方便快捷，涂層與基底的附著力尚，涂層均勾，可重現(xiàn)性尚。
[0006]本發(fā)明另一目的在于提供上述方法制備的用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層。
[0007]本發(fā)明再一目的在于提供上述用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層在捕獲腫瘤細胞和癌癥早期診斷領(lǐng)域的應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明的目的通過下述方案實現(xiàn):
[0009]—種用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層的制備方法，包括以下步驟:
[0010](I)制備埃洛石分散液:按質(zhì)量份數(shù)計，取埃洛石0.0I?40份，去離子水O?99.9份，有機溶劑O?99.9份，硅烷0.001?5份，表面活性劑0.001?I份，混合，經(jīng)機械攪拌或超聲分散即得埃洛石分散液；
[0011](2)將步驟(I)制備得到的埃洛石分散液噴涂到預(yù)熱的基材上，然后充分干燥，干燥后的涂層即為用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層；
[0012]或者，
[0013]重復步驟(I)和(2)，然后將步驟(2)中干燥后的涂層與腫瘤細胞的特異性識別抗體進行偶聯(lián)，即得到抗體修飾的用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層。
[0014]步驟(I)中所述的有機溶劑可為乙醇、甲醇、丙酮、四氫呋喃、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、二氧六環(huán)、二氯甲烷或氯仿中的一種或多種的混合物。
[0015]步驟(I)中所述的硅烷可為γ -氨基丙基三乙氧基硅烷、γ -環(huán)氧基丙基三乙氧基硅烷、γ-巰丙基三甲氧基硅烷、γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷中的至少一種。
[0016]步驟(I)中所述的表面活性劑為聚苯乙烯磺酸鈉、六偏磷酸鈉、十六烷基三甲基溴化銨、焦磷酸鈉、檸檬酸鈉中的至少一種。
[0017]步驟(I)中所述的去離子水和有機溶劑的用量不能同時為O。
[0018]步驟(I)中所述的超聲分散的條件為在60?1000W功率下超聲5?60min。
[0019]步驟(I)中所述的機械攪拌是指在50?1500rpm的速度下攪拌3?120min。
[0020]步驟(2)中所述的基材為載玻片、石英片、硅片、聚苯乙烯透明塑料片或金屬片，所述的預(yù)熱的溫度為35?100°C。
[0021 ] 步驟(2)中所述的干燥是指在30?100°C下干燥0.5?600min。
[0022]所述的腫瘤細胞的特異性識別抗體可為上皮細胞粘附分子抗體ant1-EpCAM或人表皮生長因子ant1-HER2。
[0023]所述的偶聯(lián)具體包括以下步驟:將干燥后的涂層在I?20yg/mL的抗體PBS溶液中浸泡3?30min，然后取出用磷酸鹽緩沖液沖洗2-3次。
[0024]—種由上述方法制備得到的用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層。
[0025]上述的用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層具有捕獲腫瘤細胞效率高、靈敏度高等特點，可用于在捕獲腫瘤細胞和癌癥早期診斷領(lǐng)域的應(yīng)用。
[0026]所述的腫瘤細胞包括人乳腺癌細胞(MCF-7)、人前列腺癌細胞(PC-3)、人肝癌細胞(HePG2)、人結(jié)腸腺癌細胞(SW480)、人肺小細胞腺癌細胞(A549)、人卵巢癌細胞(H0-8910)、人腦膠質(zhì)瘤細胞(U87)和人骨肉瘤細胞(SW1353)。
[0027]本發(fā)明的機理為:
[0028]通過在不同基底上制備具有特定的埃洛石納米結(jié)構(gòu)，并固定上目標細胞特異性識別分子(如上皮細胞粘附分子抗體，ant1-EpCAM)，或者直接利用粗糙的納米結(jié)構(gòu)，利用細胞表面結(jié)構(gòu)與基底粗糙納米結(jié)構(gòu)之間增強的三維拓撲相互作用，納米粗糙結(jié)構(gòu)比光滑表面可以固定更多的目標細胞的識別分子，以及基于納米粗糙表面的結(jié)構(gòu)能降低血液中流體的流動速度從而增加與細胞的相互作用機會，是本發(fā)明制備的納米結(jié)構(gòu)能夠提高細胞捕獲效率的主要原因。
[0029]本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的優(yōu)點及有益效果:
[0030]1、本發(fā)明提出一種噴涂法快速制備埃洛石納米涂層的方法，造價低廉、操作簡單、能耗低、制備效率高，整個基底的制備過程無有毒有害物質(zhì)產(chǎn)生，對環(huán)境無污染，制備的涂層能用于循環(huán)腫瘤細胞的富集和檢測。
[0031]2、本發(fā)明采用埃洛石納米管來源廣泛，價格便宜，無毒無害，環(huán)境友好，血液和細胞相容性好，易于在極性溶劑體系中分散和組裝成陣列結(jié)構(gòu)，方便地構(gòu)建微納米粗糙表面，從而可以固定更多的目標細胞的識別分子，以及降低血液中流體的流動速度從而增加與細胞的相互作用機會，使表面對腫瘤細胞具有高的捕獲效率。
[0032]3、本發(fā)明制備的埃洛石涂層的穩(wěn)定性好，與基底的附著力強，埃洛石表面的活性基團能夠方便地進行疏水化處理和偶聯(lián)腫瘤細胞的特異性識別抗體，從而特異性地從血液中捕獲腫瘤細胞。
[0033]4、制備的涂層具有捕獲腫瘤細胞效率高(3h的捕獲率超過85%)、靈敏度高等特點，可用于癌癥病人的臨床診斷和轉(zhuǎn)移監(jiān)控。同時被該涂層捕獲的腫瘤細胞活性高，可繼續(xù)消化下來培養(yǎng)，可進行實時監(jiān)測，對于腫瘤細胞的后續(xù)分析具有重要意義。
【附圖說明】
[0034]圖1為本發(fā)明實施例1中制備的抗體修飾的埃洛石涂層的表面原子力顯微鏡圖。
[0035]圖2為本發(fā)明實施例2中制備的在硅片上的埃洛石涂層和普通玻璃基底對人前列腺癌細胞PC-3的捕獲效果比較圖。
[0036]圖3為本發(fā)明實施例3中制備的埃洛石涂層對各種細胞的捕獲效果統(tǒng)計圖；
【具體實施方式】
[0037]下面結(jié)合實施例和附圖對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。
[0038]實施例中所用試劑如無特殊說明均可從市場常規(guī)購得。實施例中所用癌細胞、正常細胞也均可從市場常規(guī)購得。實施例中所述的份數(shù)均指質(zhì)量份數(shù)。
[0039]實施例1
[0040]配制埃洛石的分散液，其中埃洛石2份，去離子水20份，乙醇80份，γ-氨丙基三乙氧基硅烷I份，表面活性劑聚苯乙烯磺酸鈉0.5份，將上述組分經(jīng)室溫機械攪拌(400r/min，攪拌30min)混合均勻，用噴槍噴涂到經(jīng)100°C預(yù)熱的玻璃片上；將涂層在60°C充分揮發(fā)干燥，之后將埃洛石涂層浸泡到5yg/mL Ant1-EpCAM(購于Sigma-Aldrich公司)抗體的PBS溶液中，1min后取出用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，即得抗體修飾的埃洛石涂層。
[0041]附圖1為實施例1制備得到的抗體修飾的埃洛石涂層的表面原子力顯微鏡圖。從圖1中可以看出涂層的表面均勻，厚度均一，均方粗糙度為52.6nm，適合用于細胞的捕獲。
[0042]將所得的抗體修飾的埃洛石涂層進行人乳腺癌細胞捕獲，將抗體修飾的埃洛石表面置于細胞培養(yǎng)板中，將計量好數(shù)目的人乳腺癌細胞加入到細胞培養(yǎng)液(DMEM培養(yǎng)基，10%的胎牛血清)中，之后將加入了一定數(shù)量的癌細胞的細胞培養(yǎng)液加到埃洛石表面，在37°C靜置培養(yǎng)3h。之后用PBS溶液沖洗至少三次，用熒光染料DAPI對細胞進行染色，用熒光顯微鏡拍照觀察細胞的數(shù)量。發(fā)現(xiàn)3h埃洛石涂層對MCF-7細胞的捕獲效率達90%。
[0043]實施例2
[0044]配制埃洛石的分散液，其中埃洛石5份，去離子水10份，乙醇90份，γ-環(huán)氧基丙基三乙氧基硅烷2份，表面活性劑六偏磷酸鈉0.8份，將上述組分在室溫下經(jīng)機械攪拌(400r/min，攪拌30min)混合均勾，用噴槍噴涂到經(jīng)80 °C預(yù)熱的娃片上;將涂層在60°C充分揮發(fā)干燥，之后將埃洛石涂層浸泡到10yg/mL anti_HER2(購于Sigma-Aldrich公司)抗體的PBS溶液中30min后，用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，即得抗體修飾的埃洛石涂層。
[0045]將所得的抗體修飾的埃洛石涂層進行人前列腺癌細胞捕獲，將抗體修飾的埃洛石表面置于細胞培養(yǎng)板中，同時以空白的玻璃片作為空白對照。將計量好數(shù)目的人前列腺癌細胞加入到細胞培養(yǎng)液(DMEM培養(yǎng)基，10%的胎牛血清)中，之后將加入了一定數(shù)量的癌細胞的細胞培養(yǎng)液加到埃洛石表面，在37°C靜置培養(yǎng)2h。之后用PBS溶液沖洗三次，用熒光染料DAPI對細胞進行染色，用熒光顯微鏡拍照觀察細胞的數(shù)量。發(fā)現(xiàn)2h埃洛石涂層對PC-3細胞的捕獲效率達85 %。
[0046]附圖2為實施例2中所制備的抗體修飾的硅片上的埃洛石涂層和空白的玻璃片在不同的捕獲時間對人前列腺癌細胞(PC3)的細胞熒光圖。從圖2中看出，在同樣的捕獲時間，埃洛石涂層比空白玻璃片表面顯示出更高的細胞捕獲效率。
[0047]實施例3
[0048]配制埃洛石的分散液，其中埃洛石10份，甲醇100份，γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷0.5份，表面活性劑焦磷酸鈉1.5份，將上述組分在800W下超聲30min混合均勻，用噴槍噴涂到經(jīng)50°C預(yù)熱的鋁片上;將涂層在80°C充分揮發(fā)干燥，之后將埃洛石涂層浸泡到30yg/mL anti_HER2抗體的PBS溶液中20min后，用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，即得抗體修飾的埃洛石涂層。
[0049]將所得的抗體修飾的埃洛石涂層進行人肝癌細胞捕獲，將抗體修飾的埃洛石表面置于細胞培養(yǎng)板中，將計量好數(shù)目的人肝癌細胞加入到細胞培養(yǎng)液(DMEM培養(yǎng)基，10%的胎牛血清)中，之后將加入了一定數(shù)量的癌細胞的細胞培養(yǎng)液加到埃洛石表面，在37°C靜置培養(yǎng)3h。之后用PBS溶液沖洗至少三次，用熒光染料DAPI對細胞進行染色，用熒光顯微鏡拍照觀察細胞的數(shù)量。發(fā)現(xiàn)3h埃洛石涂層對H印G細胞的捕獲效率達93 %。
[0050]實施例4
[0051]配制埃洛石的分散液，其中埃洛石8份，丙酮100份，γ-巰丙基三甲氧基硅烷I份，表面活性劑檸檬酸鈉0.8份，將上述組分在500W下超聲Ih混合均勻，用噴槍噴涂到經(jīng)90°C預(yù)熱的云母片上;將涂層在40°C充分揮發(fā)干燥，之后將埃洛石涂層浸泡到2yg/mL Ant1-EpCAM抗體的PBS溶液中1min后，用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，即得抗體修飾的埃洛石涂層。
[0052]將所得的抗體修飾的埃洛石涂層進行人肺癌腫瘤細胞捕獲，將抗體修飾的埃洛石表面置于細胞培養(yǎng)板中，將計量好數(shù)目的人肺癌細胞加入到細胞培養(yǎng)液(DMEM培養(yǎng)基，10%的胎牛血清)中，之后將加入了一定數(shù)量的癌細胞的細胞培養(yǎng)液加到埃洛石表面，在37°C靜置培養(yǎng)lOmin。之后用PBS溶液沖洗三次，用熒光染料DAPI對細胞進行染色，用熒光顯微鏡拍照觀察細胞的數(shù)量。發(fā)現(xiàn)1min埃洛石涂層對A549細胞的捕獲效率達75%。
[0053]實施例5
[0054]配制埃洛石的分散液，其中埃洛石0.5份，二氯甲烷100份，γ-氨丙基三乙氧基硅烷3份，表面活性劑聚苯乙烯磺酸鈉I份，將上述組分在500rpm轉(zhuǎn)速下經(jīng)機械攪拌60分鐘后，用噴槍噴涂到經(jīng)100°C預(yù)熱的玻璃片上;將涂層在40°C充分揮發(fā)干燥，之后將埃洛石涂層浸泡到8yg/mL Ant1-EpCAM抗體的I3BS溶液中l(wèi)Omin，然后用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，即得抗體修飾的埃洛石涂層。
[0055]將所得的抗體修飾的埃洛石涂層進行人卵巢癌細胞捕獲，將抗體修飾的埃洛石表面置于細胞培養(yǎng)板中，將計量好數(shù)目的人卵巢癌細胞加入到細胞培養(yǎng)液(DMEM培養(yǎng)基，10%的胎牛血清)中，之后將加入了一定數(shù)量的癌細胞的細胞培養(yǎng)液加到埃洛石表面，在37°C靜置培養(yǎng)5min。之后用PBS溶液沖洗三次，用熒光染料DAPI對細胞進行染色，用熒光顯微鏡拍照觀察細胞的數(shù)量。發(fā)現(xiàn)5min埃洛石涂層對H0-8910細胞的捕獲效率達78%。
[0056]實施例6
[0057]配制埃洛石的分散液，其中埃洛石20份，純水30份，四氫呋喃60份，γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷2份，表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨0.6份，將上述組分在100rpm轉(zhuǎn)速下經(jīng)機械攪拌30分鐘后混合均勻，用噴槍噴涂到經(jīng)90 °C預(yù)熱的玻璃片上;將涂層在80°C充分揮發(fā)干燥，得不經(jīng)抗體偶聯(lián)的埃洛石涂層。
[0058]將不經(jīng)抗體偶聯(lián)的埃洛石涂層直接進行人腦膠質(zhì)瘤細胞(U87)捕獲，將埃洛石表面置于細胞培養(yǎng)板中，將計量好數(shù)目的人腦膠質(zhì)瘤細胞加入到細胞培養(yǎng)液(DMEM培養(yǎng)基，10%的胎牛血清)中，之后將加入了一定數(shù)量的癌細胞的細胞培養(yǎng)液加到埃洛石表面，在37°(:靜置培養(yǎng)30min。之后用PBS溶液沖洗三次，用熒光染料DAPI對細胞進行染色，用熒光顯微鏡拍照觀察細胞的數(shù)量。發(fā)現(xiàn)30min對U87細胞的捕獲效率達85%。
[0059]實施例7
[0060]將實施例3制備的抗體修飾的埃洛石涂層對正常細胞前成骨細胞(MC3T3-E1)和人正常肝細胞(L02)以及人肝癌細胞(HEPG-2)、人乳腺癌細胞(MCF-7)、小鼠腦神經(jīng)瘤細胞(Neuro-2a)、肺癌細胞(A549)和小鼠黑色素瘤(B16F10)進行捕獲，具體操作同實施例3，對各種細胞的捕獲效率如圖3所示，從圖3中可以看出偶聯(lián)抗體的埃洛石表面對正常細胞的捕獲率遠低于腫瘤細胞。說明其能夠較好的區(qū)分正常細胞和腫瘤細胞，因此方便地進行癌癥診斷。
[0061]上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層的制備方法，其特征在于包括以下步驟: (1)制備埃洛石分散液:按質(zhì)量份數(shù)計，取埃洛石0.0I?40份，去尚子水O?99.9份，有機溶劑O?99.9份，硅烷0.001?5份，表面活性劑0.001?I份，混合，經(jīng)機械攪拌或超聲分散即得埃洛石分散液； (2)將步驟(I)制備得到的埃洛石分散液噴涂到預(yù)熱的基材上，然后充分干燥，干燥后的涂層即為用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層； 或者， 重復步驟(I)和(2)，然后將步驟(2)中干燥后的涂層與腫瘤細胞的特異性識別抗體進行偶聯(lián)，即得到抗體修飾的用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層的制備方法，其特征在于: 步驟(I)中所述的有機溶劑為乙醇、甲醇、丙酮、四氫呋喃、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、二氧六環(huán)、二氯甲烷或氯仿中的一種或多種的混合物； 步驟(I)中所述的硅烷為γ-氨基丙基三乙氧基硅烷、γ-環(huán)氧基丙基三乙氧基硅烷、γ-巰丙基三甲氧基硅烷、γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷中的至少一種； 步驟(I)中所述的表面活性劑為聚苯乙烯磺酸鈉、六偏磷酸鈉、十六烷基三甲基溴化銨、焦磷酸鈉、檸檬酸鈉中的至少一種。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層的制備方法，其特征在于: 步驟(I)中所述的去離子水和有機溶劑的用量不能同時為O。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層的制備方法，其特征在于: 步驟(I)中所述的超聲分散的條件為在60?1000W功率下超聲5?60min; 步驟(I)中所述的機械攪拌是指在50?1500rpm的速度下攪拌3?120min。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層的制備方法，其特征在于: 步驟(2)中所述的基材為載玻片、石英片、硅片、聚苯乙烯透明塑料片或金屬片，所述的預(yù)熱的溫度為35?100°C; 步驟(2)中所述的干燥是指在30?100 °C下干燥0.5?600min。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層的制備方法，其特征在于: 所述的腫瘤細胞的特異性識別抗體為上皮細胞粘附分子抗體ant 1-EpCAM或人表皮生長因子ant1-HER2。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層的制備方法，其特征在于: 所述的偶聯(lián)具體包括以下步驟:將干燥后的涂層在I?20yg/mL的抗體PBS溶液中浸泡3?30min，然后取出用磷酸鹽緩沖液沖洗2-3次。8.—種根據(jù)權(quán)利要求1?7任一項所述的方法制備的用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層在捕獲腫瘤細胞和癌癥早期診斷領(lǐng)域的應(yīng)用。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用于捕獲腫瘤細胞的埃洛石涂層在捕獲腫瘤細胞和癌癥早期診斷領(lǐng)域的應(yīng)用，其特征在于: 所述的腫瘤細胞包括人乳腺癌細胞、人前列腺癌細胞、人肝癌細胞、人結(jié)腸腺癌細胞、人肺小細胞腺癌細胞、人卵巢癌細胞、人腦膠質(zhì)瘤細胞和人骨肉瘤細胞。
【文檔編號】B05D1/28GK106000814SQ201610508849
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月29日
【發(fā)明人】劉明賢, 何瑞, 周長忍
【申請人】暨南大學