專利名稱：色譜分離劑及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及色譜分離劑(separating agent)，更具體地涉及適合用作分離旋光異構(gòu)體的高效液相色譜法(下文縮寫(xiě)為“HPLC”)的分離劑的色譜分離劑。
背景技術(shù)：
通常，利用多糖衍生物的手性的色譜分離劑是眾所周知的。用作色譜分離劑的多糖衍生物的實(shí)例是纖維素或直鏈淀粉的酯衍生物或氨基甲酸酯衍生物。該多糖衍生物通過(guò)擔(dān)載于載體比如硅膠上而用作色譜分離劑，用于增加分離劑在柱子中的填充比，方便它的處理，增強(qiáng)它的機(jī)械強(qiáng)度等。
使用擔(dān)載于載體上的多糖衍生物的這種色譜分離劑具有高的旋光異構(gòu)體分離能力，并且不僅用于旋光異構(gòu)體的分析，而且用于旋光異構(gòu)體的大規(guī)模制備分離，比如在各種藥物的制備中。
然而，采用多糖衍生物的普通色譜分離劑具有僅僅通過(guò)物理吸附擔(dān)載于載體上的多糖衍生物。因此，取決于洗脫溶劑的類型，該多糖衍生物可以溶于洗脫溶劑，以及該分離劑可以變得不能使用。
尤其，旋光異構(gòu)體的大規(guī)模分離要求原料在分離之前以高濃度溶于洗脫溶劑。能夠進(jìn)行這種溶解的洗脫溶劑存在的問(wèn)題是多糖衍生物在洗脫溶劑中的溶解性通常是高的。
此外，多糖衍生物具有低機(jī)械強(qiáng)度，因此存在的問(wèn)題是，當(dāng)該多糖衍生物尤其用作HPLC的分離劑時(shí)，該多糖衍生物不能耐受HPLC中的壓力。
為了避免此類問(wèn)題，人們嘗試了將多糖衍生物以化學(xué)鍵連接于載體的表面，用于防止多糖衍生物在洗脫溶劑中洗脫，以及提高多糖衍生物的機(jī)械強(qiáng)度。
例如，JP-A-04-202141公開(kāi)了通過(guò)具有經(jīng)酯鍵或脲烷鍵引入到多糖的羥基上的乙烯基的多糖衍生物和具有以化學(xué)鍵連接的乙烯基的載體的共聚，從而使多糖衍生物和載體以化學(xué)鍵連接而獲得的色譜分離劑。
此外，在JP-B-07030122中，本發(fā)明的發(fā)明人此前提出了通過(guò)經(jīng)由異氰酸酯化合物使多糖衍生物以化學(xué)鍵連接于硅膠，從而防止多糖衍生物在洗脫溶劑中洗脫所獲得的色譜分離劑。
在JP-A-11-171800中，本發(fā)明的發(fā)明人提出了通過(guò)經(jīng)由苯乙烯和乙烯基苯在擔(dān)載了纖維素衍生物的硅膠上的共聚而形成三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)來(lái)防止纖維素衍生物在洗脫溶劑中的洗脫。
然而，在上述各專利文件中公開(kāi)的色譜分離劑不能完全防止固定于載體上的多糖衍生物在洗脫溶劑中的洗脫。
在這方面，本發(fā)明的發(fā)明人在JP-A-2002-148247中已經(jīng)提出了通過(guò)下列步驟獲得的具有高的多糖衍生物在硅膠上的固定比的色譜分離劑預(yù)先將可聚合的不飽和基團(tuán)引入到多糖衍生物中；制備通過(guò)硅烷偶聯(lián)劑引入了2-甲基丙烯酰氧基乙基的硅膠；以及通過(guò)共聚使多糖衍生物和硅膠化學(xué)鍵合。
該色譜分離劑幾乎能完全防止多糖衍生物在洗脫溶劑中的洗脫，具有優(yōu)異的旋光異構(gòu)體分離能力，并且具有高的機(jī)械強(qiáng)度。
然而，在上述專利文件中披露的色譜分離劑中，只有多糖衍生物具有分離旋光異構(gòu)體所必需的手性，而不具有手性的載體比如硅膠不直接協(xié)助旋光異構(gòu)體的分離。因此，在將色譜分離劑填充到柱子中的情況下，由于載體比如硅膠的量，一次光學(xué)分析的化合物的量是較少的。

發(fā)明內(nèi)容
考慮到通常的情況，提出了本發(fā)明，所要完成的本發(fā)明的目的是提供能夠防止在洗脫溶劑中洗脫，允許一次可以光學(xué)離析大量化合物，并且耐受高壓的色譜分離劑；以及生產(chǎn)該色譜分離劑的方法。
本發(fā)明的色譜分離劑包括由多糖衍生的多糖衍生物，其中該多糖衍生物具有其中存在于多糖中的一部分羥基通過(guò)交聯(lián)分子彼此交聯(lián)和存在于多糖中的未交聯(lián)羥基各自用改性分子改性的結(jié)構(gòu)；以及該多糖衍生物不擔(dān)載于載體上。
此外，本發(fā)明提供了制備色譜分離劑的方法，包括下列步驟將保護(hù)基引入到存在于多糖中的一部分羥基上；用改性分子改性在引入了保護(hù)基的多糖中保留的各羥基；脫去所引入的保護(hù)基，復(fù)原羥基；以及通過(guò)交聯(lián)分子使復(fù)原的羥基彼此交聯(lián)。
在本發(fā)明的色譜分離劑中，多糖衍生物用交聯(lián)分子交聯(lián)，形成三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，這顯著改進(jìn)了耐溶劑性。因此，本發(fā)明的色譜分離劑允許使用洗脫溶劑比如氯仿，四氫呋喃或乙酸乙酯，而上述這些洗脫溶劑不能用于采用多糖衍生物的普通色譜分離劑。
該色譜分離劑完全不使用載體，由直接提供旋光異構(gòu)體的分離的多糖衍生物組成。因此，所要填充到柱子中的多糖衍生物的量可以增加，以及一次光學(xué)離析的化合物的量可以增加。
此外，該多糖衍生物具有由于交聯(lián)帶來(lái)的顯著提高的機(jī)械強(qiáng)度，因此，用作HPLC分離劑的該多糖衍生物可以充分耐受HPLC中的壓力。
附圖簡(jiǎn)述

圖1是顯示了色譜的圖，該色譜圖通過(guò)使用分別填充了實(shí)施例1和對(duì)比實(shí)施例1的色譜分離劑的柱子和改變一次注射的外消旋體的量來(lái)光學(xué)離析2，2，2-三氟-1-(9-蒽基)乙醇(9)的外消旋體所獲得。
圖2是用掃描電子顯微鏡拍攝的實(shí)施例1的色譜分離劑的二次電子圖像(照片)。
圖3是用掃描電子顯微鏡拍攝的實(shí)施例1的色譜分離劑的二次電子圖像(照片)。
圖4是用掃描電子顯微鏡拍攝的實(shí)施例3的色譜分離劑的二次電子圖像(照片)。
圖5是用掃描電子顯微鏡拍攝的實(shí)施例3的色譜分離劑的二次電子圖像(照片)。
圖6是用掃描電子顯微鏡拍攝的對(duì)比實(shí)施例1的色譜分離劑的二次電子圖像(照片)。
圖7是用掃描電子顯微鏡拍攝的對(duì)比實(shí)施例1的色譜分離劑的二次電子圖像(照片)。
圖8是用掃描電子顯微鏡拍攝的交聯(lián)后的實(shí)施例4的珠粒A的二次電子圖像(照片)。
圖9是用掃描電子顯微鏡拍攝的交聯(lián)后的實(shí)施例4的珠粒B的二次電子圖像(照片)。
圖10是顯示了色譜的圖，該色譜圖通過(guò)使用實(shí)施例4的柱子A和填充了對(duì)比實(shí)施例1的色譜分離劑的柱子和改變一次注射的外消旋體的量來(lái)光學(xué)離析2，2，2-三氟-1-(9-蒽基)乙醇(9)的外消旋體所獲得。
圖11是用掃描電子顯微鏡拍攝的使用聚苯乙烯作為生孔劑(porogen)的實(shí)施例5的色譜分離劑的二次電子圖像(照片)。
圖12是用掃描電子顯微鏡拍攝的使用聚甲基丙烯酸甲酯作為生孔劑的實(shí)施例6的色譜分離劑的二次電子圖像(照片)。
圖13是用掃描電子顯微鏡拍攝的使用聚-N-異丙基丙烯酰胺作為生孔劑的實(shí)施例7的色譜分離劑的二次電子圖像(照片)。
實(shí)施本發(fā)明的最佳方式下文，將描述本發(fā)明。
本發(fā)明的色譜分離劑不限于HPLC的分離劑，并且可以其它色譜技術(shù)比如超臨界流體色譜法，柱色譜法，薄層色譜法，氣相色譜法，和毛細(xì)管色譜法。
用作本發(fā)明的色譜分離劑的原料的多糖可以是天然多糖，合成多糖，或天然改性多糖，只要該多糖具有手性。在這些當(dāng)中，多糖優(yōu)選具有高度規(guī)律的成鍵模式，以便提高旋光異構(gòu)體分離能力。
多糖的典型實(shí)例是纖維素，但它們的其它實(shí)例包括直鏈淀粉，木聚糖，脫乙酰殼多糖，殼多糖，甘露聚糖，菊粉，凝膠多糖，淀粉，右旋糖酐，支鏈淀粉，bustulan，葡聚糖，半乳聚糖，果聚糖，bullulan，瓊脂糖，和藻酸。此外，還可以使用含有直鏈淀粉的淀粉。在這些當(dāng)中，纖維素，直鏈淀粉，木聚糖，脫乙酰殼多糖，殼多糖，甘露聚糖，菊粉，凝膠多糖等是優(yōu)選的，因?yàn)樗鼈兏髯允侨菀撰@得的高純度多糖。尤其，有利地使用纖維素和直鏈淀粉。
多糖的數(shù)均聚合度(分子中的吡喃糖環(huán)或呋喃糖環(huán)的平均數(shù))是≥5，優(yōu)選≥10。一般，從容易處理來(lái)看，它的數(shù)均聚合度理想地是≤3,000。
用交聯(lián)分子的交聯(lián)優(yōu)選在吡喃糖環(huán)或呋喃糖環(huán)的第6位羥基和另一吡喃糖環(huán)或呋喃糖環(huán)的第6位的羥基之間進(jìn)行。根據(jù)本發(fā)明的發(fā)明人的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，證明第6位羥基對(duì)旋光異構(gòu)體分離能力具有非常小的影響。因此，第6位羥基的交聯(lián)不降低旋光異構(gòu)體分離能力。此外，第6位羥基活性很高，從而有利于用交聯(lián)分子的交聯(lián)反應(yīng)。
順便提一下，本發(fā)明的色譜分離劑包括通過(guò)交聯(lián)劑彼此交聯(lián)的存在于如上所述的多糖中的一部分羥基?？梢允褂媚軌蚴沽u基彼此交聯(lián)的任何化合物作為交聯(lián)劑。
交聯(lián)劑的實(shí)例包括各自在分子中具有多個(gè)異氰酸酯基的分子，比如4，4’-二苯基甲烷二異氰酸酯，亞甲苯基二異氰酸酯，和六亞甲基二異氰酸酯；二羧酸；二羧酰鹵；二羧酰胺；和二羧酸酯。
此外，可聚合不飽和基團(tuán)可以預(yù)先通過(guò)使用不飽和酰鹵比如丙烯酰氯，甲基丙烯酰氯，或乙烯基苯甲酰氯，或不飽和異氰酸酯化合物比如異氰酸乙烯基苯基酯而引入到存在于多糖的一部分羥基上。然后，產(chǎn)物可以通過(guò)與不飽和烴單體比如苯乙烯，二乙烯基苯，或異戊二烯；(甲基)丙烯酸衍生物；或類似物共聚來(lái)交聯(lián)(參見(jiàn)JP-A-2002-148247)。
在這些交聯(lián)劑中，在分子中具有多個(gè)異氰酸酯基的化合物是優(yōu)選的，因?yàn)榻宦?lián)反應(yīng)容易進(jìn)行和反應(yīng)步驟的數(shù)目較少。
用于改性存在于多糖中的各非交聯(lián)羥基的改性分子不是特別限制的。改性分子僅要求是能夠改性各羥基的化合物，如異氰酸衍生物，羧酸，酯，酰鹵，酰胺，鹵化物，環(huán)氧化合物，醛，或醇。在這些當(dāng)中，為了可以通過(guò)簡(jiǎn)單反應(yīng)操作以高收率改性各羥基，在分子中具有一個(gè)異氰酸酯基的化合物是優(yōu)選的。
本發(fā)明的色譜分離劑優(yōu)選被成形為珠粒的形狀，從而提高它在柱子中的填充比和提供高的旋光異構(gòu)體分離能力。
在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“珠粒的形狀”是指基本上球形或球形，也就是說(shuō)，具有1.0-5.0，優(yōu)選1.0-2.0，更優(yōu)選1.0-1.3的最大直徑與最小直徑的平均比率的形狀，該比率通過(guò)測(cè)定大約20粒色譜分離劑顆粒各自的最大直徑和最小直徑來(lái)獲得。
此外，從提高在柱子中的填充比和增強(qiáng)旋光異構(gòu)體分離能力的觀點(diǎn)來(lái)看，本發(fā)明的色譜分離劑優(yōu)選具有1-100μm，更優(yōu)選1-50μm，此外優(yōu)選3-20μm的粒徑。色譜分離劑的粒度例如可以通過(guò)分類來(lái)調(diào)節(jié)。
從增加色譜分離劑的表面積和增強(qiáng)旋光異構(gòu)體分離能力的觀點(diǎn)來(lái)看，本發(fā)明的色譜分離劑優(yōu)選具有孔。
在本發(fā)明中，色譜分離劑的顆粒形狀或粒度可以通過(guò)例如用掃描電子顯微鏡(SEM)拍攝的色譜分離劑的圖像來(lái)測(cè)定。
本發(fā)明的色譜分離劑可以如下所述來(lái)生產(chǎn)。也就是說(shuō)，生產(chǎn)本發(fā)明的色譜分離劑的第一方法包括下列步驟將保護(hù)基引入到存在于多糖的一部分羥基上；用改性分子改性在引入了保護(hù)基的多糖中保留的各羥基；脫去所引入的保護(hù)基，復(fù)原羥基；以及通過(guò)交聯(lián)分子使復(fù)原的羥基彼此交聯(lián)。
在保護(hù)基引入步驟中引入保護(hù)基使改性分子和交聯(lián)分子可靠地鍵接于預(yù)定羥基。
所要在保護(hù)基引入步驟中引入的保護(hù)基不是特別限制的，只要它們是在改性步驟中比用于改性各羥基的改性分子更容易從羥基上脫去的基團(tuán)。例如，改性分子可以用作用于將保護(hù)基引入到羥基上的化合物。用于引入保護(hù)基的化合物可以根據(jù)所要保護(hù)或改性的羥基的反應(yīng)性，或該化合物與羥基的反應(yīng)性來(lái)確定。
將保護(hù)基引入到羥基上，用改性分子改性各羥基，以及通過(guò)交聯(lián)分子交聯(lián)羥基可以根據(jù)所要與羥基反應(yīng)的化合物的類型通過(guò)已知的適當(dāng)反應(yīng)來(lái)進(jìn)行。在脫去步驟中從羥基上脫去保護(hù)基不是特別限制的，可以通過(guò)已知方法比如水解例如用酸或堿來(lái)進(jìn)行。
在交聯(lián)步驟中，所有復(fù)原的羥基可以通過(guò)交聯(lián)分子彼此交聯(lián)，或者復(fù)原的羥基的一部分可以彼此交聯(lián)。在該情況下，剩余羥基優(yōu)選通過(guò)類似于改性步驟的操作來(lái)改性。
在本發(fā)明中，具有孔的色譜分離劑可以通過(guò)除了上述步驟以外進(jìn)一步包括以下步驟的方法來(lái)生產(chǎn)在溶劑中溶解通過(guò)在脫去步驟中復(fù)原羥基所獲得的復(fù)原多糖衍生物；在所得復(fù)原的多糖衍生物的溶液中分散生孔劑(porogen)；將分散有生孔劑的復(fù)原多糖衍生物的溶液保持在所需形式和除去溶劑，形成所需形式的復(fù)原多糖衍生物；以及用能夠溶解生孔劑的洗滌溶劑洗滌所形成的復(fù)原多糖衍生物。
生孔劑是指能夠分散于復(fù)原多糖衍生物的溶液中，并且能夠與多糖衍生物分開(kāi)溶解的固體化合物。各種有機(jī)化合物或無(wú)機(jī)化合物可以用作生孔劑，但從在復(fù)原的多糖衍生物的溶液中的分散性，復(fù)原多糖衍生物的溶液的液滴在如下所述的珠粒形成過(guò)程中的穩(wěn)定性等來(lái)看，有機(jī)化合物是優(yōu)選使用的。各種聚合物比如聚苯乙烯可以用作有機(jī)化合物。
用于復(fù)原多糖衍生物的溶液的溶劑僅僅要求是能夠溶解通過(guò)在脫去步驟中復(fù)原羥基所獲得的復(fù)原多糖衍生物的溶劑。復(fù)原多糖衍生物的溶液可以通過(guò)各種方法保持在所需形式，這些方法例如包括將該溶液引入到所需形狀的容器內(nèi)；以及如在以下所述的珠粒形成中形成液滴。此外，分散有生孔劑的復(fù)原多糖的溶液可以引入到柱形管中。從復(fù)原多糖衍生物的溶液中除去溶劑可以通過(guò)加熱、減壓和這兩種方法來(lái)進(jìn)行。
用于將生孔劑溶解在成形為所需形式的復(fù)原多糖中的洗滌溶劑僅僅要求是能夠溶解該生孔劑的溶劑。然而，該溶劑優(yōu)選是不溶解多糖衍生物和僅僅溶解生孔劑的溶劑，更優(yōu)選生孔劑的溶解度高于多糖衍生物的溶解度的溶劑，此外優(yōu)選僅僅溶解生孔劑的溶劑。這種洗滌溶劑可以根據(jù)多糖衍生物和生孔劑的類型，多糖衍生物和生孔劑在溶劑中的溶解度等從已知溶劑中選擇。
此外，該交聯(lián)步驟優(yōu)選包括下列步驟通過(guò)在溶劑中溶解由在改性步驟中復(fù)原羥基所獲得的復(fù)原多糖衍生物，形成復(fù)原多糖衍生物的溶液，將復(fù)原多糖衍生物的溶液滴入到表面活性劑的溶液中，以及攪拌該整個(gè)體系，而形成珠粒形式的復(fù)原多糖衍生物；以及通過(guò)交聯(lián)分子交聯(lián)珠粒形式的復(fù)原多糖衍生物，形成珠粒形式的色譜分離劑。根據(jù)本發(fā)明的發(fā)明人的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，已經(jīng)確定，珠粒形式的色譜分離劑可以容易地通過(guò)這種方法來(lái)生產(chǎn)。
在珠粒形成步驟中用于復(fù)原多糖衍生物的溶液的溶劑僅僅要求是能夠溶解通過(guò)在脫去步驟中復(fù)原羥基所獲得的復(fù)原多糖衍生物的溶劑。在該溶劑溶于表面活性劑的溶液的情況下，可以另外使用在表面活性劑的溶液中不溶或幾乎不溶的助溶劑，從而形成復(fù)原多糖衍生物的溶液。將可以含有助溶劑的復(fù)原多糖衍生物的溶液滴入到表面活性劑的溶液中，從而形成復(fù)原多糖衍生物在表面活性劑的溶液中的溶液的液滴。然后，從復(fù)原多糖衍生物的溶液中蒸餾掉溶劑(和/或助溶劑)，從而形成珠粒形式的多糖衍生物。
該表面活性劑不是特別限制的，只要它是允許在表面活性劑的溶液中形成的復(fù)原多糖衍生物的溶液的液滴的穩(wěn)定存在的化合物。陰離子表面活性劑例如可以用作該表面活性劑。
珠粒交聯(lián)步驟可以以類似于上述交聯(lián)步驟的方式進(jìn)行。
本發(fā)明的色譜分離劑還可以如下所述來(lái)制備。也就是說(shuō)，生產(chǎn)本發(fā)明的色譜分離劑的第二方法包括下列步驟通過(guò)交聯(lián)分子使存在于多糖的一部分羥基彼此交聯(lián)；以及用改性分子改性在通過(guò)交聯(lián)分子交聯(lián)的多糖中保留的各羥基。
該方法不需要引入保護(hù)基，并且可以減少步驟的數(shù)目，從而降低了生產(chǎn)成本。此外，珠粒形式的多糖可以市購(gòu)?？梢允褂弥榱Ｐ问降氖匈?gòu)多糖，從而可以低成本供應(yīng)大量的珠粒形式的色譜分離劑。
在使用分子中具有多個(gè)異氰酸酯基的化合物，比如在分子中具有鍵接于多糖或多糖衍生物的羥基的多個(gè)交聯(lián)位點(diǎn)的化合物作為交聯(lián)步驟中的交聯(lián)劑的情況下，該方法可以進(jìn)一步包括在交聯(lián)之后改性多糖或多糖衍生物的自由交聯(lián)位點(diǎn)的步驟。這種步驟可以抑制在光學(xué)離析過(guò)程中在自由交聯(lián)位點(diǎn)和旋光異構(gòu)體之間的相互作用。
交聯(lián)位點(diǎn)的改性根據(jù)假定與交聯(lián)位點(diǎn)相互作用和所要光學(xué)離析的旋光異構(gòu)體來(lái)改變。然而，一般，從提高交聯(lián)位點(diǎn)的位阻來(lái)看，它們的改性優(yōu)選通過(guò)使用具有低極性的取代基來(lái)進(jìn)行，以及優(yōu)選通過(guò)使用龐大取代基來(lái)進(jìn)行。取代基的實(shí)例包括各自具有支化結(jié)構(gòu)的烴基比如叔丁基和三苯甲基。交聯(lián)位點(diǎn)用這種取代基的改性可以通過(guò)已知的適當(dāng)反應(yīng)比如縮合反應(yīng)來(lái)進(jìn)行，類似于上述保護(hù)基引入步驟，改性步驟等。
此外，在本發(fā)明中，色譜分離劑還可以通過(guò)在珠粒形成步驟中將生孔劑分散于復(fù)原多糖衍生物的溶液中；將含有生孔劑的復(fù)原多糖衍生物的溶液滴入到表面活性劑的溶液中，從而形成含有生孔劑的珠粒形式的復(fù)原多糖衍生物(含有生孔劑的珠粒)；以及用洗滌溶劑洗滌含生孔劑的珠粒，以便溶解含生孔劑的珠粒中的生孔劑。
此類操作使得可以在珠粒形式的色譜分離劑中形成大量的孔，從而增加或調(diào)節(jié)色譜分離劑的表面積。因此，可以提高或調(diào)節(jié)光學(xué)離析力。
在使用生孔劑的情況下，可以在用于生產(chǎn)所需形式的色譜分離劑的交聯(lián)步驟之前或之后；或者在用于生產(chǎn)珠粒形式的色譜分離劑的珠粒交聯(lián)步驟之前或之后進(jìn)行生孔劑的溶解。
下文，在實(shí)施例1-7中給出了本發(fā)明的具體實(shí)施例的說(shuō)明。
(實(shí)施例1)實(shí)施例1的色譜分離劑具有如下所述通過(guò)使用纖維素作為多糖的原料生產(chǎn)的珠粒的形式。
<保護(hù)基引入步驟>
首先，如式(1)所示，作為保護(hù)基引入步驟進(jìn)行第6位的羥基的三苯甲基化。
也就是說(shuō)，將9.2g的氯化鋰和135ml的干燥N，N’-二甲基乙酰胺加入到13g(86mmol)的干燥纖維素中，以及讓該混合物在氮?dú)夥諊性?00℃下溶脹137小時(shí)。然后，將50g(180mmol)的三苯甲基氯和200ml的吡啶加入到其中，在100℃下反應(yīng)28小時(shí)。將吡啶可溶部分滴入到甲醇中，以及收集不溶部分。然后，所得物在真空下干燥，從而獲得在葡萄糖環(huán)的第6位上具有三苯甲基化羥基的纖維素衍生物。
<改性步驟>
接下來(lái)，如式(2)所示，進(jìn)行在這樣三苯甲基化纖維素衍生物中保留的羥基的氨基甲酰化。
也就是說(shuō)，將17g的其中第6位羥基在保護(hù)基引入步驟中三苯甲基化的纖維素衍生物溶于160ml的吡啶中，再于氮?dú)夥諊鷮?9g(128mmol)的異氰酸3，5-二甲基苯基酯加入到其中，在80℃下反應(yīng)20小時(shí)。取反應(yīng)溶液的樣品進(jìn)行紅外吸收光譜測(cè)定，確定在該溶液中存在未反應(yīng)的異氰酸酯。然后，將該反應(yīng)溶液滴入到甲醇，用于收集不溶物質(zhì)，所得物在真空下干燥，從而獲得了28g的纖維素-2，3-雙(3，5-二甲基苯基氨基甲?；?-6-O-三苯甲基纖維素。
<脫去步驟>
然后，如式(3)所示，從其中羥基照這樣氨基甲?；睦w維素衍生物中脫去三苯甲基。
也就是說(shuō)，將在改性步驟中獲得的2，3-雙(3，5-二甲基苯基氨基甲酰基)-6-O-三苯甲基纖維素在50ml的1％ HCl/甲醇中攪拌24小時(shí)，用于去保護(hù)，從而使第6位的基團(tuán)復(fù)原為羥基。然后，在用玻璃濾器過(guò)濾的同時(shí)，用甲醇洗滌反應(yīng)液體，在真空下干燥所得物，從而獲得20g的纖維素2，3-雙(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)。
注意，第6位的羥基的豐度比是大約63％，由1H NMR譜計(jì)算，以及剩余羥基用異氰酸3，5-二甲基苯基酯進(jìn)行氨基甲酸酯化。下文，該衍生物被縮寫(xiě)為“OD(6-OH)-63”。
<珠粒形成步驟>
將這樣獲得的OD(6-OH)-63溶于四氫呋喃中，以及將少量的庚醇加入到其中。接下來(lái)，將所得溶液滴入到月桂基硫酸鈉的水溶液中，同時(shí)該水溶液用裝有6葉片型螺旋的分散器攪拌。在滴加結(jié)束后，包括含有水溶液的容器在內(nèi)的水浴的溫度從室溫提高到75℃，以蒸餾出四氫呋喃。所形成的珠粒通過(guò)吸濾來(lái)收集，并用水和乙醇洗滌。在洗滌之后，所得物在真空下干燥，從而獲得由OD(6-OH)-63組成的OD(6-OH)-63珠粒。要指出的是，使用燒杯作為容器。表1示出了生產(chǎn)OD(6-OH)-63珠粒的結(jié)果。
表1

<珠粒交聯(lián)步驟>
然后，如式(4)所示，進(jìn)行在脫去步驟中復(fù)原的羥基的交聯(lián)反應(yīng)。

也就是說(shuō)，在氮?dú)夥諊?，?0ml的甲苯加入到0.91g的干燥OD(6-OH)-63中，以及將該混合物在80℃下加熱3小時(shí)，以溶脹這些珠粒。然后，將0.13g(0.52mmol)的4，4’-二苯基甲烷二異氰酸酯加入到其中，反應(yīng)6小時(shí)。取少量珠粒樣品，確定這些珠粒變成不溶于四氫呋喃。然后，將0.5g(3.4mmol，過(guò)量)的異氰酸3，5-二甲基苯基酯加入到其中，反應(yīng)14小時(shí)。未反應(yīng)的異氰酸酯的存在通過(guò)IR測(cè)量來(lái)確定，然后通過(guò)吸濾收集珠粒。這些珠粒用溫甲醇洗滌，同時(shí)抽吸，從而除去所形成的脲。通過(guò)IR測(cè)量確定不存在脲，然后將珠粒在真空下干燥，從而獲得0.88g的具有30％的彼此交聯(lián)的第6位羥基的實(shí)施例1的珠粒。
(實(shí)施例2)實(shí)施例2的色譜分離劑通過(guò)在按與實(shí)施例1相同方式獲得的OD(6-OH)-63珠粒和用于交聯(lián)OD(6-OH)-63的羥基的15％的量的4，4’-二苯基甲烷二異氰酸酯之間的交聯(lián)反應(yīng)來(lái)獲得。其它操作按照與實(shí)施例1的生產(chǎn)珠粒的方法相同的方式進(jìn)行。
(實(shí)施例3)實(shí)施例3的色譜分離劑如下所述通過(guò)使用珠粒形式的纖維素作為多糖原料來(lái)生產(chǎn)。
也就是說(shuō)，將0.68g的氯化鋰和10ml的N，N’-二甲基乙酰胺加入到1.0g(6.3mmol)的市購(gòu)纖維素珠粒(“Cellflow C-25”，商品名，由Chisso Corporation供應(yīng))中，以及將珠粒在氮?dú)夥諊略?0℃下溶脹60小時(shí)。然后，將10ml的吡啶和0.47g(1.9mmol)的4，4’-二苯基甲烷二異氰酸酯加入到其中用于凝膠化。將10ml的吡啶和3.8g(26mmol)的異氰酸3，5-二甲基苯基酯加入到其中，反應(yīng)22小時(shí)。通過(guò)IR測(cè)量證實(shí)了未反應(yīng)異氰酸酯的存在，以及珠粒用溫甲醇洗滌，同時(shí)通過(guò)抽吸過(guò)濾，從而收集了珠粒。將這些珠粒在真空下干燥，從而獲得1.5g的實(shí)施例3的珠粒，其中第6位羥基的30％彼此交聯(lián)。
(對(duì)比實(shí)施例1)對(duì)比實(shí)施例1的色譜分離劑包括擔(dān)載于硅膠的纖維素的3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯衍生物，并且如下所述來(lái)生產(chǎn)。也就是說(shuō)，將多孔硅膠(7μm的粒度，和100nm的孔徑)干燥，再與3-氨基丙基三乙氧基硅烷在苯中在80℃下在催化量的吡啶的存在下反應(yīng)。所得物用甲醇、丙酮和己烷洗滌，再干燥。將纖維素三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的四氫呋喃溶液(0.75g/10ml)逐步加入到3g的用氨基丙基這樣改性的硅膠中，并搖動(dòng)整個(gè)體系。然后，在減壓下蒸餾出溶劑四氫呋喃，從而獲得包括擔(dān)載于硅膠的纖維素的氨基甲酸3，5-二甲基苯基酯衍生物的對(duì)比實(shí)施例1的色譜分離劑。
評(píng)價(jià)(光學(xué)離析試驗(yàn)1)具有3-15μm的粒度的實(shí)施例1-3的各色譜分離劑通過(guò)篩分來(lái)取樣，再通過(guò)淤漿法填充到具有25cm的長(zhǎng)度和0.2mm的內(nèi)徑的不銹鋼柱子中。該填充通過(guò)將實(shí)施例1-3各自的取樣色譜分離劑分散于30ml的己烷/液體鏈烷烴(2/1)中；使用己烷/2-丙醇(9/1)作為溶劑；以及將填充壓力設(shè)定在50kg/cm2(4.9MPa)來(lái)進(jìn)行。
對(duì)于實(shí)施例1，還生產(chǎn)在100kg/cm2(9.8MPa)下填充的柱子。
通過(guò)與上述類似的操作，將對(duì)比實(shí)施例1的色譜分離劑填充到類似柱子中。要指出的是，前幾分鐘，將填充壓力設(shè)定在400kg/cm2，然后設(shè)定在100kg/cm2。
通過(guò)淤漿法將對(duì)比實(shí)施例1的色譜分離劑填充到具有25cm的長(zhǎng)度和0.46cm的內(nèi)徑的不銹鋼柱子以及具有25cm的長(zhǎng)度和0.2cm的內(nèi)徑的不銹鋼柱子中。
通過(guò)使用由上述操作獲得的分別填充了實(shí)施例1-3和對(duì)比實(shí)施例1的色譜分離劑的柱子，對(duì)由以下結(jié)構(gòu)式1-10表示的10種外消旋體進(jìn)行旋光離析試驗(yàn)。
Co(acac)3 8 9 10使用己烷/2-丙醇(9/1)作為洗脫劑。在實(shí)施例1-3中，流速是0.2ml/min，以及在對(duì)比實(shí)施例1中，對(duì)于具有0.46cm的內(nèi)徑的柱子，流速是0.5ml/min，而對(duì)于具有0.2cm的內(nèi)徑的柱子，流速是0.1ml/min。通過(guò)聯(lián)合使用UV檢測(cè)器和旋光計(jì)來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。由苯的峰確定理論塔板數(shù)N，以及由1，3，5-三叔丁基苯的洗脫時(shí)間確定洗脫劑通過(guò)柱子的時(shí)間t0。在填充之前和之后的珠粒的SEM觀測(cè)證實(shí)了珠粒沒(méi)有因?yàn)樵谔畛溥^(guò)程中的壓力而變形。表2示出了結(jié)果。
表2

在表2中，k1’表示容量系數(shù)和α表示分離系數(shù)。在括號(hào)內(nèi)的符號(hào)表示首先洗脫的對(duì)映體的旋光能力。表2揭示，實(shí)施例1-3各自的容量系數(shù)k1’是對(duì)比實(shí)施例1的容量系數(shù)k1’的2.5-3倍，可能是因?yàn)閷?shí)施例1-3各自的色譜分離劑不使用載體。因此，實(shí)施例1-3的各色譜分離劑估計(jì)可以一次光學(xué)離析更大量的化合物。
表3示出了理論塔板數(shù)的測(cè)量結(jié)果。
表3

表3揭示，在50kg/cm的填充壓力下用實(shí)施例1的色譜分離劑填充的柱子的理論塔板數(shù)大于對(duì)比實(shí)施例1的理論塔板數(shù)。
(光學(xué)離析試驗(yàn)2)通過(guò)使用在50kg/cm2的填充壓力下分別填充了實(shí)施例1的色譜分離劑和對(duì)比實(shí)施例1的色譜分離劑的具有25cm的長(zhǎng)度和0.2cm的內(nèi)徑的不銹鋼柱子測(cè)定一次通過(guò)能夠分離為旋光異構(gòu)體的化合物的最大量。
也就是說(shuō)，將2，2，2-三氟-1-(9-蒽基)乙醇的外消旋體溶于組成與洗脫劑相同的溶劑中，從而制備了具有10mg/l，40mg/l和50mg/l的濃度的溶液。通過(guò)使用這些溶液來(lái)進(jìn)行光學(xué)離析，以及在所得圖中提供了兩種對(duì)映體的重疊峰的外消旋體的量被認(rèn)為是能夠用柱子分離的化合物的最大量。圖1示出了結(jié)果。
圖1揭示，具有0.2cm的內(nèi)徑的對(duì)比實(shí)施例1的柱子僅能分離6mg的外消旋體，但實(shí)施例1的柱子幾乎完全分離8mg外消旋體。
(用掃描電子顯微鏡觀察)對(duì)于實(shí)施例1和3以及對(duì)比實(shí)施例1，用掃描電子顯微鏡照相。結(jié)果，如圖2-7所示，實(shí)施例1-3的色譜分離劑各自為珠粒的形式，與對(duì)比實(shí)施例1相同。
(實(shí)施例4)(a)在第6位具有羥基的纖維素3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯的合成作為珠粒的原料，合成具有在第6位上保留的羥基的纖維素OD(6-OH)的3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯衍生物，該羥基后來(lái)通過(guò)使用二異氰酸酯彼此交聯(lián)。
將15g的氯化鋰和150ml的脫水N，N’-二甲基乙酰胺加入到10g(62mmol)的干燥纖維素中，將該混合物在氮?dú)夥諊略?0℃溶脹27小時(shí)。然后，將32(114mmol)的三苯基甲基氯和150ml的吡啶加入到其中，在80℃下反應(yīng)24小時(shí)。將吡啶可溶部分滴入到甲醇中，作為不溶部分收集。然后所得物在真空下干燥。
所得衍生物在葡萄糖環(huán)的第6位上具有不完全三苯甲基化羥基。因此，再次，將15g的氯化鋰和150ml的脫水N，N’-二甲基乙酰胺加入到該衍生物中，以及將該混合物在氮?dú)夥諊略?0℃溶脹24小時(shí)。然后，將17g(62mmol)的三苯甲基氯和150ml的吡啶加入到其中，在80下反應(yīng)24℃小時(shí)。將吡啶可溶部分滴入到甲醇中，并收集不溶部分。然后，所得物在真空下干燥，從而獲得了其中葡萄糖環(huán)的第6位的羥基被完全三苯甲基化的纖維素衍生物。
接下來(lái)，將21g的所得衍生物溶于190ml的吡啶，再在氮?dú)夥諊聦?2g(150mmol)的3，5-二甲基苯基異氰酸酯加入到該混合物中，在80℃下反應(yīng)30小時(shí)。取反應(yīng)溶液的樣品進(jìn)行紅外吸收光譜測(cè)定，證實(shí)了未反應(yīng)的異氰酸酯在該溶液中的存在。然后，將反應(yīng)溶液滴入到甲醇中，用于收集不溶物質(zhì)，從而獲得纖維素2，3-雙(3，5-二甲基苯基氨基甲酰基)-6-O-三苯甲基纖維素。
然后，將該衍生物在1,500ml的1％HCl/甲醇中攪拌24小時(shí)用于去保護(hù)，從而使第6位的三苯甲基復(fù)原為羥基。然后，所得物用甲醇洗滌，在真空下干燥，從而獲得24g的目標(biāo)纖維素2，3-雙(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)。
OD(6-OH)-25的合成接下來(lái)，將10g(22mmol)的所得衍生物溶于65ml的吡啶，再在氮?dú)夥諊聦?.5g(1.7mmol)的異氰酸3，5-二甲基苯基酯加入到該混合物中，在80℃下反應(yīng)18小時(shí)。將反應(yīng)溶液滴入到甲醇中，用于收集不溶物質(zhì)，以及將所得物在真空下干燥。從反應(yīng)前的衍生物與異氰酸3，5-二甲基苯基酯比率可以測(cè)定，大約25％的葡萄糖環(huán)的第6位的羥基被保留。下文，該衍生物被稱為OD(6-OH)-25。
(b)OD(6-OH)-25珠粒的制備將0.25g的OD(6-OH)-25溶于30ml的四氫呋喃/庚醇(2/1，v/v)的混合溶劑中。將OD(6-OH)-25的溶液滴入到500ml的月桂基硫酸鈉的0.2％水溶液中，同時(shí)該水溶液用分散器在1,100rpm的軸轉(zhuǎn)速下攪拌，以及將包含含有水溶液的容器的水浴的溫度升高到75℃。在滴加完后，使水浴的溫度保持在75℃，從而蒸餾出四氫呋喃。所形成的珠粒通過(guò)吸濾來(lái)收集，并用水和乙醇洗滌。在洗滌之后，所得物在真空下干燥，從而以大約87％的收率獲得了OD(6-OH)-25珠粒。這些珠粒進(jìn)行反復(fù)操作，通過(guò)20μm過(guò)濾器分類，從而收集了具有大約3到10μm的粒度的珠粒。
該分散器采用6葉片型軸，以及使用1L燒杯作為容器。所得珠粒用掃描電子顯微鏡(SEM)觀察。
(c)OD(6-OH)-25用二異氰酸酯交聯(lián)為了將強(qiáng)度提供給所得OD(6-OH)-25珠粒，讓第6位的羥基和4，4’-二苯基甲烷二異氰酸酯反應(yīng)，用于在珠粒中交聯(lián)。
交聯(lián)前的珠粒在THF中可溶 交聯(lián)后的珠粒在THF中不溶交聯(lián)珠粒的制備(用于柱子A)在氮?dú)夥諊聦?0ml的甲苯加入到1.83g的干燥OD(6-OH)-25珠粒中，再將該混合物在80℃下加熱4小時(shí)，從而溶脹這些珠粒。然后，將0.3g(1.2mmol，過(guò)量)的4，4’-二苯基甲烷二異氰酸酯加入到其中，在80℃下反應(yīng)24小時(shí)。通過(guò)上層液的液體IR測(cè)量證實(shí)了未反應(yīng)的異氰酸酯的存在，再取少量珠粒樣品，用于證實(shí)這些珠粒在四氫呋喃中變得不溶。然后，通過(guò)吸濾收集這些珠粒，并且在吸濾的同時(shí)用溫甲醇洗滌，從而從過(guò)量異氰酸酯中除去所形成的脲。通過(guò)珠粒的固體IR測(cè)量證實(shí)不存在脲，然后在真空下干燥這些珠粒，從而獲得1.83g的珠粒(下文，稱為珠粒A)，其中25％的第6位的羥基彼此交聯(lián)。
交聯(lián)珠粒的制備(用于柱子B)在氮?dú)夥諊聦?1ml的甲苯加入到1.0g的干燥OD(6-OH)-25珠粒中，再將該混合物在80℃下加熱4.5小時(shí)，從而溶脹這些珠粒。然后，將0.14g(0.56mmol，過(guò)量)的4，4’-二苯基甲烷二異氰酸酯加入到其中，在80℃下反應(yīng)15小時(shí)。通過(guò)上層液的液體IR測(cè)量證實(shí)了未反應(yīng)的異氰酸酯的存在，再取少量珠粒樣品，用于證實(shí)這些珠粒在四氫呋喃中變得不溶。然后，為了改性剩余的異氰酸酯，添加10ml(過(guò)量)的叔丁醇，反應(yīng)3小時(shí)。
通過(guò)上層液的液體IR測(cè)量證實(shí)了異氰酸酯的不存在。然后，通過(guò)吸濾收集這些珠粒，并且在吸濾的同時(shí)用溫甲醇洗滌，從而從異氰酸酯和叔丁醇中除去所形成的脲。通過(guò)珠粒的固體IR測(cè)量證實(shí)不存在脲，然后在真空下干燥這些珠粒，從而獲得1.0g的珠粒(下文，稱為珠粒B)，其中25％的第6位的羥基彼此交聯(lián)。
在珠粒B的制備中，不像珠粒A的制備，沒(méi)有與衍生物反應(yīng)的4，4’-二苯基甲烷二異氰酸酯的兩個(gè)異氰酸酯基的一個(gè)異氰酸酯基用叔丁醇處理，用于用龐大的醇(bulky alcohol)改性。這樣，在光學(xué)離析中涉及的在珠粒B和外消旋體之間的相互作用沒(méi)有被其它相互作用所干擾，預(yù)期是更有效的。
OD(6-OH)-25珠粒的觀察在反應(yīng)之前和之后的珠粒A和B的SEM觀測(cè)揭示，反應(yīng)之前和之后的珠粒的尺寸或表面狀態(tài)沒(méi)有改變。圖8和9分別示出了交聯(lián)之后的珠粒A和B的SEM圖像。
(d)將珠粒填充到柱子將所得兩類珠粒A和B按粒度分類，再分散于30ml的己烷/液體鏈烷烴(2/1)。通過(guò)淤漿法，使用己烷/2-丙醇(9/1)作為洗脫劑，在3-30kg/cm2的壓力下，用HPLC泵將珠粒A和B各自填充到具有25cm的長(zhǎng)度和0.2cm的內(nèi)徑的不銹鋼柱子中。所得柱子分別被稱為柱子A和B。
填充到柱子中的珠粒的觀測(cè)表4顯示了填充到各柱子中的珠粒的質(zhì)量、表面積、理論塔板數(shù)(N)和填充時(shí)間。在填充之前和之后的珠粒的觀測(cè)揭示珠粒沒(méi)有因?yàn)樵谔畛溥^(guò)程中的壓力而變形。
表4

(e)光學(xué)離析能力的評(píng)價(jià)通過(guò)采用用由上述操作獲得的兩類珠粒填充的柱子，對(duì)用上述結(jié)構(gòu)式1-10表示的10種外消旋體進(jìn)行光學(xué)離析。使用己烷/2-丙醇(9/1)作為洗脫劑，流速是0.1ml/min。檢測(cè)峰，通過(guò)使用UV檢測(cè)器和旋光計(jì)來(lái)鑒定。注意，理論塔板數(shù)N由苯的峰測(cè)定，以及當(dāng)洗脫劑通過(guò)柱子時(shí)的時(shí)間t0由1，3，5-三叔丁基苯的洗脫時(shí)間測(cè)定。
光學(xué)離析能力的評(píng)價(jià)結(jié)果表5示出了上述外消旋體通過(guò)使用柱子A和B光學(xué)離析的結(jié)果。為了對(duì)比，表5還示出了這些外消旋體通過(guò)使用包含擔(dān)載于硅膠的3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯衍生物的填充劑(對(duì)比實(shí)施例1)光學(xué)離析的結(jié)果。表5中的值表示了容量系數(shù)k1’和分離系數(shù)α。括號(hào)內(nèi)的符號(hào)代表了首先洗脫的對(duì)映體的旋光能力。
表5珠粒柱子的光學(xué)離析能力的評(píng)價(jià)

a柱子，2.0mm(內(nèi)徑)×250mm。流速，0.1ml/min。洗脫劑，己烷/2-丙醇(90/10)b柱子，4.6mm(內(nèi)徑)×250mm。流速，0.5ml/min。洗脫劑，己烷/2-丙醇(90/10)
柱子A和B的結(jié)果的對(duì)比表明，柱子B具有通常小的容量系數(shù)k1’和通常大的分離系數(shù)α，雖然柱子用大量的衍生物填充?？赏茰y(cè)的原因是柱子B用叔丁醇處理，以消除干擾外消旋體的分離的相互作用。
此外，所有珠粒柱子的外消旋體的洗脫順序與普通擔(dān)載型柱子的洗脫順序相同。這些珠粒柱子各自的容量系數(shù)k1’比包括擔(dān)載于硅膠的衍生物的柱子的那些大2.5-4倍。該結(jié)果假定是因?yàn)橛捎跊](méi)有使用硅膠，大量的纖維素衍生物被引入到柱子中而獲得的。預(yù)期一次可以光學(xué)離析更大量的外消旋體。
(f)2，2，2-三氟-1-(9-蒽基)乙醇的大規(guī)模分離用珠粒填充的柱子比相同尺寸的普通硅膠擔(dān)載類柱子含有更大量的多糖衍生物，并且預(yù)期與硅膠擔(dān)載型柱子相比一次可以分離更大量的外消旋體?？梢砸淮畏蛛x的外消旋體2，2，2-三氟-1-(9-蒽基)乙醇(9)的量通過(guò)使用柱子A和硅膠擔(dān)載型柱子來(lái)研究。
在該情況下，將該外消旋體溶于組成與洗脫劑相同的溶劑，以制備120mg/ml的溶液，以及用該溶液進(jìn)行光學(xué)離析。使用具有25cm的長(zhǎng)度和0.2cm的內(nèi)徑的柱子，以及使用己烷/2-丙醇(9/1)作為洗脫劑。硅膠擔(dān)載型柱子的洗脫劑的流速是0.20ml/mim，以及柱子A的洗脫劑流速是0.15ml/min。在所得圖中提供了兩種對(duì)映體的重疊峰的外消旋體的量被稱為可以用該柱子分離的化合物的最大量。
2，2，2-三氟-1-(9-蒽基)乙醇的大規(guī)模分離的結(jié)果圖10示出了外消旋體2，2，2-三氟-1-(9-蒽基)乙醇的大規(guī)模分離的結(jié)果。測(cè)量波長(zhǎng)是271nm。結(jié)果，在擔(dān)載型柱子注射6mg的外消旋體和柱子A注射20mg的外消旋體的情況下，兩個(gè)峰重疊。
(實(shí)施例5-7)具有孔的纖維素衍生物珠粒的制備為了制備纖維素衍生物珠粒，將作為生孔劑的聚合物加入到纖維素的THF/1-庚醇混合溶液中。在攪拌下，將該混合物滴入到月桂基硫酸鈉的水溶液中，并加熱整個(gè)體系，以蒸餾掉THF。所得珠粒用能夠溶解用作生孔劑的聚合物的溶劑洗滌，以洗掉生孔劑，再觀測(cè)珠粒中的孔?？椎臄?shù)目或尺寸根據(jù)所用生孔劑的類型或濃度而改變。
將25mg的在一部分第6位上具有羥基的纖維素3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯溶于3ml的四氫呋喃/庚醇(2/1，v/v)的混合溶劑中，再以相對(duì)于纖維素衍生物的量的大約20質(zhì)量％的比率將用作生孔劑的聚合物溶于其中。將OD(6-OH)-25的溶液滴入到100ml的月桂基硫酸鈉的0.2％水溶液中，同時(shí)該水溶液用分散器在1,100rpm的軸轉(zhuǎn)速下攪拌，再將包括含有水溶液的容器的水浴的溫度提高到75℃。
在滴加完后，將水浴的溫度保持在75℃，以蒸餾掉四氫呋喃。所形成的珠粒通過(guò)吸濾來(lái)收集，再用水、乙醇和僅能溶解生孔劑的溶劑洗滌。在洗滌之后，在真空下干燥所得物，從而獲得具有孔和大約3-12μm的粒度的纖維素衍生物珠粒。
分散器軸采用6葉片型軸，以及使用200ml燒杯作為容器。使用聚苯乙烯(PSt，分子量17,000，Mw/Mn1.03)，聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA，分子量42,000，Mw/Mn1.40)，和聚-N-異丙基丙烯酰胺(PNIPAM，分子量28,000，Mw/Mn1.85)作為生孔劑。
所得珠粒用掃描電子顯微鏡(SEM)觀測(cè)。圖11-13示出了所得珠粒的SEM圖像。
工業(yè)應(yīng)用性本發(fā)明的色譜分離劑包括用交聯(lián)分子交聯(lián)的多糖衍生物。因此，耐溶劑性和機(jī)械強(qiáng)度顯著改進(jìn)。因此，與普通色譜分離劑相比，可以使用具有較強(qiáng)洗脫能力的溶劑。此外，即使在高壓條件下比如HPLC的條件下，也能夠充分使用本發(fā)明的色譜分離劑。
此外，本發(fā)明的色譜分離劑不使用載體。因此，可以增加填充到柱子中的多糖衍生物的量，以及可以增加一次光學(xué)離析的化合物的量，例如，可以進(jìn)一步改進(jìn)工業(yè)生產(chǎn)光學(xué)異構(gòu)體的生產(chǎn)率。
權(quán)利要求
1.采用由多糖衍生的多糖衍生物的色譜分離劑，其中該多糖衍生物具有其中存在于多糖中的一部分羥基通過(guò)交聯(lián)分子彼此交聯(lián)和存在于多糖中的未交聯(lián)羥基各自用改性分子改性的結(jié)構(gòu)；以及該多糖衍生物不擔(dān)載于載體上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的色譜分離劑，其中該多糖是纖維素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的色譜分離劑，其中該多糖是直鏈淀粉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3的任一項(xiàng)的色譜分離劑，其中用交聯(lián)分子交聯(lián)在吡喃糖環(huán)或呋喃糖環(huán)的第6位羥基和另一吡喃糖環(huán)或呋喃糖環(huán)的第6位羥基之間進(jìn)行。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4的任一項(xiàng)的色譜分離劑，其中該交聯(lián)分子是在分子中具有多個(gè)異氰酸酯基的化合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5的任一項(xiàng)的色譜分離劑，其中改性分子是在一個(gè)分子中具有一個(gè)異氰酸酯基的化合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6的任一項(xiàng)的色譜分離劑，它被成形為珠粒的形式。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7的任一項(xiàng)的色譜分離劑，它具有孔。
9.制備色譜分離劑的方法，包括下列步驟將保護(hù)基引入到存在于多糖中的一部分羥基上；用改性分子改性在引入了保護(hù)基的多糖中保留的各羥基；脫去所引入的保護(hù)基，復(fù)原羥基；以及通過(guò)交聯(lián)分子使復(fù)原的羥基彼此交聯(lián)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的生產(chǎn)色譜分離劑的方法，進(jìn)一步包括下列步驟在溶劑中溶解通過(guò)在脫去步驟中復(fù)原羥基所獲得的復(fù)原多糖衍生物；在所得復(fù)原的多糖衍生物的溶液中分散生孔劑；將分散有生孔劑的復(fù)原多糖衍生物的溶液保持在所需形式和除去溶劑，形成所需形式的復(fù)原多糖衍生物；以及用能夠溶解生孔劑的洗滌溶劑洗滌所形成的復(fù)原多糖衍生物。
11.根據(jù)權(quán)利要求9的生產(chǎn)色譜分離劑的方法，其中交聯(lián)步驟包括下列步驟通過(guò)在溶劑中溶解由在改性步驟中復(fù)原羥基所獲得的復(fù)原多糖衍生物，形成復(fù)原多糖衍生物的溶液，將該復(fù)原多糖衍生物的溶液滴入到表面活性劑的溶液中，以及攪拌該整個(gè)體系，而形成珠粒形式的復(fù)原多糖衍生物；以及通過(guò)交聯(lián)分子交聯(lián)珠粒形式的復(fù)原多糖衍生物，形成珠粒形式的色譜分離劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的生產(chǎn)色譜分離劑的方法，進(jìn)一步包括下列步驟在珠粒形成步驟中將生孔劑分散在復(fù)原多糖衍生物的溶液中；和用能夠溶解生孔劑的洗滌溶劑洗滌所形成的珠粒形式的復(fù)原多糖衍生物。
13.生產(chǎn)色譜分離劑的方法，包括下列步驟通過(guò)交聯(lián)分子使存在于多糖中的一部分羥基彼此交聯(lián)；和用改性分子改性在通過(guò)交聯(lián)分子交聯(lián)的多糖中保留的各羥基。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的生產(chǎn)色譜分離劑的方法，其中將在交聯(lián)步驟中通過(guò)交聯(lián)分子交聯(lián)的多糖成形為珠粒的形式。
全文摘要
色譜分離劑，它包括具有其中存在于多糖中的一部分羥基通過(guò)交聯(lián)分子彼此交聯(lián)和存在于多糖中的未交聯(lián)羥基各自用改性分子改性的結(jié)構(gòu)的多糖衍生物。該多糖衍生物不是以擔(dān)載于載體的狀態(tài)存在，并且已經(jīng)成形為例如珠粒。該分離劑在洗脫溶劑中不容易溶解，可以一次光學(xué)離析大量化合物。它能夠耐受高壓。
文檔編號(hào)B01J20/29GK1774292SQ20048000803
公開(kāi)日2006年5月17日 申請(qǐng)日期2004年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月26日
發(fā)明者岡本佳男, 山本智代 申請(qǐng)人:大賽璐化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社, 財(cái)團(tuán)法人名古屋產(chǎn)業(yè)科學(xué)研究所