一種集分離方法開發(fā)、在線分離-富集于一體的天然藥物二維制備色譜儀及其工作方法
【專利摘要】一種集分離方法開發(fā)、在線分離?富集于一體的天然藥物二維制備色譜儀及其工作方法，屬于天然藥物成分分離技術領域，應用于中藥、植物藥、海洋藥物等的研發(fā)領域。該色譜儀包括控制系統(tǒng)、泵入系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、一維色譜柱系統(tǒng)、二維色譜柱系統(tǒng)和二位八通閥。在同一臺儀器上實現分離方法開發(fā)與優(yōu)化、天然藥物的二維正交色譜分離制備。將復雜的天然產物分離成18個可重復獲得的組分或有效部位，二維分離使其進一步分離得到單體化合物，全部的分離工作在計算機控制下工作，極大的提高了中藥等天然藥物系統(tǒng)性分離制備的效率，為中藥、植物藥、海洋藥物有效部位、成分的制備分離、活性篩選提供了高效、可靠的平臺。
【專利說明】
一種集分離方法開發(fā)、在線分離-富集于一體的天然藥物二維 制備色譜儀及其工作方法
技術領域
[0001]本發(fā)明涉及一種集分離方法開發(fā)、在線分離-富集于一體的天然藥物二維制備色譜儀及其工作方法，屬于天然藥物成分分離技術領域，應用于植物藥、中藥、海洋藥物等的研發(fā)領域?！颈尘凹夹g】
[0002]色譜分離技術對于分離制備來自植物、海洋生物、中藥及生物工程等的天然產物用于創(chuàng)新藥物、精細化學品研究的重要性已勿容置疑?；趥鹘y(tǒng)中藥創(chuàng)制新藥以及中藥藥理活性成分的發(fā)現、機理研究的關鍵是中藥有效成分的可重復、系統(tǒng)性的分離制備。
[0003]天然藥物組成復雜，單次色譜分離效果有限，需要經過多次分離，在分離過程中使用不同色譜分離模式可以達到滿意結果。在以往的天然產物研究過程中，雖然已積累了豐富的經驗，但對于系統(tǒng)性研究中藥等天然藥物成分仍有缺乏有效的裝備。近年來，二維色譜技術的發(fā)展，采用幾種模式填料的互補性性分離無疑對于解決這一問題鋪平了道路。而將其實現自動化，在實現部位分離并進行在線富集后直接進行純化合物制備可以簡化分離制備過程，最大限度的提高工作效率。邵平(CN101791491A)設計了一套低、中、高壓結合的二維制備色譜系統(tǒng)，通過六通閥和軟件將兩套制備色譜系統(tǒng)連接起來，完成樣品的二維色譜分離，適合于分離已知成分和用于解決過載進樣和分離能力間的矛盾，并不不適合中藥等復雜體系。張維冰設計了一種準動態(tài)二維制備色譜系統(tǒng)及物質分離方法(CN102914610A， CN202870047U)，通過三通閥將兩根制備色譜柱連接，通過閥切換將第一維制備色譜柱分離的組分轉移到第二維制備色譜柱進行分離。李賀然、肖紅斌公開了(CN102961892A、 CN104713973A)采用2位10通閥和多個2位六通閥的在線富集色譜儀分離天然藥物成分的方法。在一定程度上解決了問題，但在分離方法開發(fā)、分離效率及可重復獲得有效部位、有效部位的系統(tǒng)性分離及分離過程的自動化控制上仍存在不足。
【發(fā)明內容】

[0004]為解決現有技術中存在的問題，本發(fā)明提供一種集分離方法開發(fā)、在線分離-富集于一體的天然藥物二維制備色譜儀及其工作方法，該裝置是對中藥、植物藥、海洋藥物等復雜物質體系進行系統(tǒng)性、規(guī)?；斑B續(xù)化分離制備的智能化系統(tǒng)，在有效進行樣品分離方法開發(fā)與優(yōu)化的基礎上，采用計算機控制，過渡到樣品的分離制備，增加了分離效率和針對性，一維、二維色譜的正交性分離和分離后樣品富集模式的設計，極大地提高了制備色譜對于諸如中藥等復雜物質體系的分離制備能力，可重復獲得的有效部位、有效成分單體，對于中藥新藥開發(fā)，藥理活性研究具有重要意義。
[0005]本發(fā)明提供的的技術方案是:一種集分離方法開發(fā)、在線分離-富集于一體的天然藥物二維制備色譜儀該分離裝置由3臺高壓栗、1個兩位六通閥進樣器、1個兩位八通閥、1個六通閥，3個十通閥、1個紫外檢測器、1個混合器、2個可供選擇的一維分離柱、2個可供選擇的二維分離柱、1 個用于方法開發(fā)的色譜柱，18個一維富集柱、9個二維富集柱、控制軟件、餾分收集儀和連接管線組成。
[0006]其中兩位八通閥負責分離方法開發(fā)、一、二維分離-富集模式的切換;六通閥進行分離方法開發(fā)柱，一維分離色譜柱、二維分離色譜柱選擇性切換;3個十通閥實現一維、二維富集柱選擇;紫外檢測器監(jiān)測方法開發(fā)、分離制備的色譜過程;餾分收集儀用來收集分離制備的餾分。
[0007]它包括控制系統(tǒng)、栗入系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、一維色譜柱系統(tǒng)、二維色譜柱系統(tǒng)和二位八通閥，所述二位八通閥包括A口、B口、C口、D口、E口、F口、G口和H口，所述栗入系統(tǒng)包括第一栗、第二栗和混合器，混合器連接有栗入系統(tǒng)輸出管，所述進樣系統(tǒng)包括進樣系統(tǒng)輸入管、二位六通進樣閥、進樣系統(tǒng)輸出管，所述檢測系統(tǒng)包括依次設置的檢測系統(tǒng)輸入管、六通柱選擇閥、檢測儀、三通混合器和檢測系統(tǒng)輸出管;所述一維色譜柱系統(tǒng)包括一維色譜柱輸入管、一維色譜柱和一維色譜柱輸出管;所述二維色譜柱系統(tǒng)包括二維色譜柱輸入管、二維色譜柱和餾分收集器;稀釋液栗連接至三通混合器;控制系統(tǒng)與第一栗、第二栗、 稀釋液栗、二位八通閥、二位六通進樣閥、三個十通柱選擇閥、檢測儀進行電連接，控制系統(tǒng)控制第一栗、第二栗和稀釋液栗的開啟和停止，控制系統(tǒng)控制二位八通閥、二位六通進樣閥、十通閥的通斷切換；所述色譜儀通過控制二位八通閥的連接呈第一連接狀態(tài)或第二連接狀態(tài)，實現分離方法開發(fā)、樣品一維和二維色譜分離；所述第一連接狀態(tài)實現樣品分離方法開發(fā)、樣品的一維色譜分離，其中樣品分離方法開發(fā)實驗時為栗入系統(tǒng)輸入管與A 口連接，經B 口與進樣系統(tǒng)輸入管連接，C 口與進樣系統(tǒng)輸出管連接，D 口與檢測系統(tǒng)輸入管連接，經六通柱選擇閥的進入檢測系統(tǒng)，經3通、支管、進入 G 口后由H口經支管、、進入F口，經E 口進入十通閥的于餾分收集器的廢液口出。
[0008]樣品1維分離的二位八通閥連接狀態(tài)和分離方法開發(fā)相同，區(qū)別是進樣后的六通選擇閥的流路是選擇5個分離柱中的1個串聯(lián)，同時，十通選擇閥選擇1個富集色譜柱串聯(lián)在流路上，稀釋液栗將稀釋液通過三通混合器注入稀釋液。
[0009]所述樣品2維分離的二位八通閥第二連接狀態(tài)為栗入系統(tǒng)輸入管與A 口連接，經H 口與分離系統(tǒng)輸入管連接，再經10通選擇閥選擇串聯(lián)18個1級富集柱的其中1個作為上樣柱，經進入E 口，D 口經與六通柱選擇閥的其中1個色譜柱串聯(lián)后分離，進入檢測系統(tǒng)，經3通、 支管、進入G 口后由F 口經支管和十通選擇閥選擇的其中1個二級富集柱串聯(lián)富集后于餾分收集器的廢液口排出；該儀器分離功能的執(zhí)行均有計算機控制，將分離方法開發(fā)、樣品的二維液相色譜制備分離實現一體化。分離方法開發(fā)柱、一維、二維分離色譜柱的選擇性切換由一個六通閥實現，且對一維、二維分離有兩個可選擇不同填料的色譜柱，以實現對分離對象的二維色譜正交分離。一維和二維色譜分離的餾分經紫外檢測器檢測后，在和第三個高壓栗提供的稀釋液混合后，經過十通閥分別富集在串聯(lián)于其上的色譜柱中，其中，一維色譜可富集18個餾分，二維色譜可富集9個餾分，可以使復雜的天然產物分離得到18個組分，每個組分可以繼續(xù)分離，得到9個化合物或組分。
[0010]—種集分離方法開發(fā)、在線分離-富集于一體的天然藥物二維制備色譜儀的工作方法，包括以下步驟:1)分1?方法開發(fā)所述色譜儀通過控制二位八通閥處于第一連接狀態(tài)，將樣品注入二位六通進樣閥，開啟第一栗和第二栗組成梯度洗脫的液相色譜系統(tǒng)，樣品進入分離方法開發(fā)柱，由檢測儀采集色譜圖，調整液相色譜流動相比例和洗脫程序，色譜儀執(zhí)行方法優(yōu)化模式，使樣品實現最大程度的分離后;所得分離條件置入控制系統(tǒng)中；流動相廢液通過二位八通閥的H號口后， 由一維色譜柱和二維色譜柱的公共通路流出；2)—維分離所述色譜儀通過控制二位八通閥處于第一連接狀態(tài)，將樣品注入二位六通進樣閥，六通閥選擇一維分離色譜柱，開啟第一栗和第二栗組成梯度洗脫的液相色譜系統(tǒng)，由檢測儀采集色譜圖，色譜儀執(zhí)行一維分離模式，使用已置入控制系統(tǒng)中的分離條件進行分離;開啟稀釋液栗注入選定的稀釋液，按照時間程序將對象分離成18個餾分;各餾分通過二位八通閥的H 口后，富集于18個一維色譜柱中，流動相廢液經二維色譜柱公共通路流出；3)二維分離所述色譜儀通過控制二位八通閥處于第二連接狀態(tài)，分離對象為富集在一維色譜柱中的18個組分，六通閥選擇二維分離色譜柱，開啟第一栗和第二栗組成可梯度洗脫的液相色譜系統(tǒng)，由檢測儀采集色譜圖，色譜儀執(zhí)行二維分離模式，使用已置入控制系統(tǒng)中的分離條件進行分離，開啟稀釋液栗注入選定的稀釋液，按照色譜峰收集模式將18個富集柱中的組分分別分離成單體化合物;各成分通過二位八通閥的F 口后，分別富集于9個二維色譜柱中， 流動相廢液經二維色譜柱后流出；4)餾分回收一維分離后獲取18個餾分和18個餾分進一步分離得到單體化合物的回收過程均可以在分離完成后獨立或分別進行。采用開啟稀釋液栗，輸入洗脫劑作為流動相，使目標成分解析溶解在小體積流動相中，回收樣品于餾分收集器中；所述稀釋劑為水、鹽溶液、甲醇、乙腈、丙酮、乙醇或正構烷烴溶劑;所述洗脫劑為甲醇、 乙腈、乙醇、水及其混合物、正構烷烴等常用有機溶劑；在應用中，一維色譜柱選用與分離方法開發(fā)所用相同的填料，減小了分離制備放大實驗的難度，可選擇硅膠、反相硅膠基質填料如C18、X1n、C8、CN基、氨基，大孔吸附樹脂等。二維色譜選擇與一維色譜具有良好正交性分離的填料。富集柱選擇與分離柱相同的填料。富集過程選擇的稀釋液為有利于增強樣品在捕集柱中保留的溶劑，包括，水、鹽溶液、甲醇、乙腈、丙酮、乙醇、正構烷烴溶劑或其他洗脫能力小、且揮發(fā)性高的溶劑。
[0011]本發(fā)明儀器的有益效果是:在同一臺儀器上實現分離方法開發(fā)與優(yōu)化、天然藥物的二維正交色譜分離制備。將復雜的天然產物分離成18個可重復獲得的組分或有效部位， 二維分離可以使18個部位進一步分離得到單體化合物，全部的分離工作在計算機控制下工作。使原本數周甚至數月才能完成的工作在幾天內完成，極大的提高了中藥等天然藥物系統(tǒng)性分離制備的效率，為中藥、植物藥、海洋藥物有效部位、成分的制備分離、活性篩選提供了高效、可靠的平臺?！靖綀D說明】
[0012]圖1是集分離方法開發(fā)、在線分離-富集于一體的天然藥物二維制備色譜儀的第一連接狀態(tài)圖。
[0013]圖2是色譜儀第一連接狀體中二位八通閥的連接圖。[〇〇14]圖3是集分離方法開發(fā)、在線分離-富集于一體的天然藥物二維制備色譜儀的第二連接狀態(tài)圖。
[0015]圖4是色譜儀第二連接狀體中二位八通閥的連接圖。
[0016]圖中:1、第一栗，2、第二栗，3、稀釋液栗，4、混合器，5、二位六通進樣閥，5a、進樣系統(tǒng)輸入管，5b、進樣系統(tǒng)輸出管，6、六通柱選擇閥，6a、檢測系統(tǒng)輸入管，6b、色譜柱，6c、六通柱選擇閥支管，7、檢測儀，8、三通混合器，8a、檢測系統(tǒng)輸出管，9、一維色譜富集柱，9a、一維色譜柱輸入管，％、一維色譜柱輸出管，9c、一維色譜柱公共通路，9d、一維十通柱選擇閥， 10、二維色譜柱，10a、二維色譜柱輸入管，10b、二維色譜柱公共通路，10c、二維十通柱選擇閥，11、餾分收集器，12、二位八通閥。【具體實施方式】
[0017]實施例:中藥甘草水溶性物質的系統(tǒng)性二維色譜分離制備本實施例僅限于對本發(fā)明做進一步詳細說明，而非對本發(fā)明的限定。
[0018]強極性化合物的分離是中藥化學成分分離的難點，鑒于反相C18色譜應用的廣泛性和親水色譜常被用作反相色譜的補充而用于強極性化合物的分離，利用兩者色譜分離的正交性，對中藥甘草的水溶性成分進行系統(tǒng)性分離制備。。
[0019]本實施例采用X1n/C18二維在線分離模式分離甘草水溶性樣品，具體過程如下:1)分尚方法開發(fā)1.1兩位八通閥處于第一狀態(tài)，每次將甘草水溶性樣品甲醇溶液5mg/ml 500ul注入六通進樣器，六通閥選擇方法開發(fā)色譜柱X1N (10_X150mm，10iim)。開啟栗A、B組成可梯度洗脫的液相色譜系統(tǒng)，以甲醇/水(95/100—5/100)為流動相進行分離，色譜工作站執(zhí)行方法開發(fā)模式，在全波長UV230II紫外檢測器采集色譜圖，根據分離的情況，調整液相色譜流動相比例和洗脫程序，使樣品實現最大程度的分離后，確定分離條件為:A為水，B為甲醇，梯度洗脫:0-13 min，95%?85%B;13?33 min，85%?60%B;33?80 min，60%?5%B;流速為8 mL/min;紫外檢測波長為254 nm。將獲得分離條件置入一維制備程序內。
[0020]1.2采用選定的流動相條件，按照1.1的流程選擇一維分離柱為X1N (20mmX 250mm，1 Own)進行分離制備，分離的流動相通過兩位八通閥的H 口后，由3個十通閥的公共通路流出進入餾分收集儀，每15分鐘收集1個餾分，共收集18個餾分。[〇〇21]1.3選擇反相C18分離方法開發(fā)色譜柱(10mmX150mm，10Mi)，紫外檢測波長254nm，色譜條件:流動相:A為水，B為甲醇，梯度洗脫:0?60min，5 %?95 % B間進行色譜分離方法實驗，進樣量為l〇〇yL，對1.2得到的餾分進行分離方法選擇與優(yōu)化。優(yōu)化的每個方法置入二維分離方法軟件內。
[0022]1.4兩位八通閥處于第一狀態(tài)，六通閥選擇一維色譜分離柱X1n (250mmX 20mm，l〇Mi)，調入一維分離程序即高壓栗:A為水，B為甲醇，梯度洗脫:0-13 min，95%?85%B;13 ?33 min，85%?60%B;33?80 min，60%?5%B;流速為10 mL/min;紫外檢測波長為254 nm，一維富集柱為18支X1n (20mm X80mm，10iim)，甘草水溶性樣品進樣量為50mg/ml，4ml〇稀釋液栗C的溶劑為甲醇，lOml/min，每隔15min—維富集柱閥切換1次，將樣品分為18個餾分，富集在18個一維富集柱上。流動相廢液經二維富集柱十通閥的公共通路流出。
[0023]1.5對18個餾分的組分分別采用C18柱進行二維分離。
[0024]將兩位八通閥置于第二狀態(tài)，將一維富集柱中的18個組分作為樣品，采用方法開發(fā)中獲得的二維柱分離條件，依次對富集在一維富集柱中的樣品進行分離，以峰收集模式將各單體化合物富集在二維富集柱中。二維色譜分離柱C18 (20mmX250mm，10Mi)，紫外檢測波長254nm，二維富集柱為C18(20mm X 80mm，10_)，色譜條件:流動相:A為水，B為甲醇，洗脫程序依據1.3確定的各餾分條件。稀釋液栗C的溶劑為水，10ml/min。[〇〇25]1.6樣品回收:18個餾分的每個組分完成分離后，開啟栗C，用200-300ml甲醇溶液通過二維富集十通閥，洗脫富集在二維富集柱上的單體化合物進入餾分收集儀中，濃縮后鑒定化合物的純度和結構。[〇〇26] 分離后，經TLC和HPLC同時檢測后合并濃縮，共得到4.9mg到55mg不等的32個組分， 其中含量90%以上單體化合物29個，兩個化合物的簡單組分3個。
【主權項】
1.一種集分離方法開發(fā)、在線分離-富集于一體的天然藥物二維制備色譜儀，它包括控 制系統(tǒng)，其特征在于:它包括栗入系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、一維色譜柱系統(tǒng)、二維色譜柱 系統(tǒng)和二位八通閥(12)，所述二位八通閥(12)包括A口、B口、C口、D 口、E 口、F口、G口和H口； 所述栗入系統(tǒng)包括第一栗(1)、第二栗(2)和混合器(4)，混合器(4)連接有栗入系統(tǒng)輸出管 (4a);所述進樣系統(tǒng)包括進樣系統(tǒng)輸入管(5a)、二位六通進樣閥(5)、進樣系統(tǒng)輸出管(5b); 所述檢測系統(tǒng)包括依次設置的檢測系統(tǒng)輸入管(6a)、六通柱選擇閥(6)的六通柱選擇閥支 管(6c)、檢測儀(7)、三通混合器(8)和檢測系統(tǒng)輸出管(8a);所述一維色譜柱分離系統(tǒng)采用 連接在六通柱選擇閥(6)的5個色譜柱(6b)之一作為分離柱、再依次連接一維色譜柱輸入管 (9a)、兩個串聯(lián)的一維十通柱選擇閥(9d)、18個一維色譜富集柱(9)和一維色譜柱輸出管 (9b);所述二維色譜柱系統(tǒng)采用18個一維色譜富集柱(9)之一作為上樣柱、連接在六通柱選 擇閥(6)的5個色譜柱(6b)之一作為分離柱、再依次連接二維色譜柱輸入管(10a)、二維十通 柱選擇閥(l〇c)及9個二維色譜富集柱(10)和餾分收集器(11);稀釋液栗(3)連接至三通混 合器(8);控制系統(tǒng)與第一栗(1)、第二栗(2)、稀釋液栗(3)、二位八通閥(12)、二位六通進樣 閥(5 )、六通柱選擇閥(6 )、檢測儀(7 )—維十通柱選擇閥(9d)、二維十通柱選擇閥(10c )進行 電連接，控制系統(tǒng)控制第一栗(1)、第二栗(2)和稀釋液栗(3)的開啟和停止，控制系統(tǒng)控制 二位八通閥(12 )、二位六通進樣閥(5 )、六通柱選擇閥(6 )、一維十通柱選擇閥(9d )、二維十 通柱選擇閥(l〇c)的通斷切換；所述色譜儀通過控制二位八通閥(12)的連接呈第一連接狀態(tài)或第二連接狀態(tài)，實現分 離方法開發(fā)、樣品一維和二維色譜分離；所述第一連接狀態(tài)分為樣品分離方法開發(fā)狀態(tài)與樣品的一維色譜分離狀態(tài);樣品分離 方法開發(fā)狀態(tài)為栗入系統(tǒng)輸入管(4a)與A 口連接，經B 口與進樣系統(tǒng)輸入管(5a)連接，C 口與 進樣系統(tǒng)輸出管(5b)連接，D 口與檢測系統(tǒng)輸入管(6a)連接，六通柱選擇閥(6)的六通柱選 擇閥支管(6c)進入檢測系統(tǒng)，經三通混合器(8)、檢測系統(tǒng)輸出管(8a)、進入G 口后由H 口經 一維色譜柱輸出管(9a)、一維色譜柱公共通路(9c)和一維色譜柱輸出管(9b)進入F口，經E 口進入二維十通選擇閥(l〇c)的二維色譜柱公共通路(l〇b)連接至餾分收集器(11);樣品的一維色譜分離狀態(tài)為栗入系統(tǒng)輸入管(4a)與A 口連接，經B 口與進樣系統(tǒng)輸入管 (5a )連接，C 口與進樣系統(tǒng)輸出管(5b)連接，D 口與檢測系統(tǒng)輸入管(6a )連接，六通柱選擇閥 (6)的5個色譜柱(6b)之一進入檢測系統(tǒng)，經三通混合器(8)、檢測系統(tǒng)輸出管(8a)進入G 口 后由H口經一維色譜柱輸出管(9a)、由一維十通選擇閥(9d)選擇的1個一維色譜富集柱(9) 和一維色譜柱輸出管(9b)進入F口，經E口進入二維十通選擇閥(10c)的二維色譜柱公共通 路(10b)連接至餾分收集器(11);同時，稀釋液栗(3)、三通混合器(8)、檢測系統(tǒng)輸出管(8a) 連接至G 口；所述第二連接狀態(tài)為栗入系統(tǒng)輸入管(4a)與A 口連接，經H 口與一維色譜柱輸入管(9a) 連接，再經一維十通選擇閥(9d)選擇串聯(lián)18個一維色譜富集柱(9)的其中1個作為上樣柱， 經一維色譜柱輸出管(9b )進入E 口，D 口經檢測系統(tǒng)輸出管(6a)與六通柱選擇閥(6 )的其中1 個色譜柱(6b)串聯(lián)后分離，進入檢測系統(tǒng)(7)，經三通混合器(8)、檢測系統(tǒng)輸出管(8a)、進 入G 口后由F 口經二維色譜柱輸入管(10a)和由二維十通選擇閥(10c)選擇的1個二級富集柱 (10)串聯(lián)富集后連接至餾分收集器(11)。2.根據權利要求1所述的一種集分離方法開發(fā)、在線分離-富集于一體的天然藥物二維制備色譜儀的工作方法，其特征在于，包括以下步驟:1)分1?方法開發(fā)所述色譜儀通過控制二位八通閥處于第一連接狀態(tài)，采用樣品分離方法開發(fā)狀態(tài)，將 樣品注入二位六通進樣閥(5)，開啟第一栗(1)和第二栗(2)組成梯度洗脫的液相色譜系統(tǒng)， 樣品進入分離方法開發(fā)柱，由檢測儀(7)采集色譜圖，調整液相色譜流動相比例和洗脫程 序，色譜儀執(zhí)行方法優(yōu)化模式，使樣品實現最大程度的分離后;所得分離條件置入控制系統(tǒng) 中；流動相廢液通過二位八通閥(12)的H號口后，由一維色譜柱和二維色譜柱的公共通路 流出；2)—維分離所述色譜儀通過控制二位八通閥處于第一連接狀態(tài)，采用樣品的一維色譜分離狀態(tài)， 將樣品注入二位六通進樣閥(5)，六通閥選擇一維分離色譜柱，開啟第一栗(1)和第二栗(2) 組成梯度洗脫的液相色譜系統(tǒng)，由檢測儀(7)采集色譜圖，色譜儀執(zhí)行一維分離模式，使用 已置入控制系統(tǒng)中的分離條件進行分離;開啟稀釋液栗(3)注入選定的稀釋液，按照時間程 序將對象分離成18個餾分;各餾分通過二位八通閥(12)的H 口后，富集于18個一維色譜富集 柱(9)中，流動相廢液經二維色譜柱公共通路流出；3)二維分離所述色譜儀通過控制二位八通閥處于第二連接狀態(tài)，分離對象為富集在一維色譜柱中 的18個組分，六通閥選擇二維分離色譜柱，開啟第一栗(1)和第二栗(2)組成可梯度洗脫的 液相色譜系統(tǒng)，由檢測儀(7)采集色譜圖，色譜儀執(zhí)行二維分離模式，使用已置入控制系統(tǒng) 中的分離條件進行分離，開啟稀釋液栗(3)注入選定的稀釋液，按照色譜峰收集模式將18個 富集柱中的組分分別分離成單體化合物;各成分通過二位八通閥(12)的F 口后，分別富集于 9個二維色譜柱中，流動相廢液經二維色譜柱后流出；4)餾分回收一維分離后獲取18個餾分和18個餾分進一步分離得到單體化合物的回收過程均可以 在分離完成后獨立或分別進行。3.采用開啟稀釋液栗(3)，輸入洗脫劑作為流動相，使目標成分解析溶解在小體積流動 相中，回收樣品于餾分收集器(11)中；所述稀釋劑為水、鹽溶液、甲醇、乙腈、丙酮、乙醇或正構烷烴溶劑;所述洗脫劑為甲醇、 乙腈、乙醇、水、正構烷烴中的一種或多種。4.根據權利要求1或2所述的一種集分離方法開發(fā)、在線分離-富集于一體的天然藥物 二維制備色譜儀，其特征在于:一維色譜富集柱選用與分離方法開發(fā)柱相同的填料，所述填 料為正向娃膠、帶有Cl 8、X1n、C8、氰基或氨基的反相娃膠基質填料或大孔吸附樹脂。
【文檔編號】G01N30/89GK105938130SQ201610494373
【公開日】2016年9月14日
【申請日】2016年6月30日
【發(fā)明人】朱靖博
【申請人】朱靖博