一種藍(lán)莓耐熱品種篩選的分子標(biāo)記檢測試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及果樹分子遺傳育種領(lǐng)域，特別涉及一種藍(lán)莓耐熱品種篩選的分子標(biāo)記檢測試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]氣候變暖是世界性的問題，使得極端氣候頻繁出現(xiàn)，對植物生長發(fā)育造成各種逆境脅迫，如高溫、低溫、干旱、鹽堿等。高溫使細(xì)胞內(nèi)有害活性氧(ROS)產(chǎn)生與清除的動態(tài)平衡被打破，對植物造成氧化脅迫。植物體內(nèi)活性氧化物積累增多，影響植物的生長、發(fā)育，甚至導(dǎo)致其死亡，嚴(yán)重影響收獲的作物產(chǎn)品產(chǎn)量和品質(zhì)。因此，耐熱品種的篩選和培育，對植物健康生長、提高作物產(chǎn)量非常重要。
[0003]藍(lán)莓果實富含花青甙、黃酮類化合物、多種氨基酸以及磷、鐵、鋅、鎂等礦質(zhì)元素，具有極高的經(jīng)濟(jì)價值和廣闊的開發(fā)前景，堪稱“世界第三代水果之王”。近幾年，藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)在南方省份發(fā)展迅速。但由于長江以南地區(qū)夏季天氣燥熱，日照強烈，易對藍(lán)莓造成高溫傷害，甚至造成生長停滯，因此篩選和培育出適合南方省份栽培的耐熱藍(lán)莓品種對當(dāng)?shù)厣a(chǎn)實踐具有重要的意義。
[0004]利用分子標(biāo)記及生物工程技術(shù)深入挖掘耐熱材料，可加速藍(lán)莓耐熱遺傳改良。活性氧清除體系中最主要的一條途徑是SOD聯(lián)合其他抗氧化酶進(jìn)行的。SOD催化超氧陰離子歧化為H2O2和O2，為此途徑中清除ROS的關(guān)鍵酶。植物體內(nèi)SOD根據(jù)其酶蛋自結(jié)合的金屬輔基的不同可分為MnSOD (主要位于線粒體)、Cu/ZnS0D (主要位于細(xì)胞質(zhì)和葉綠體)和FeSOD(主要位于葉綠體)。其中FeSOD與植物抗病性、抗鹽性、抗熱性、耐寒性、耐鹽性等能力密切相關(guān)。FeSOD表達(dá)量受這些逆境脅迫因子影響會迅速升高，從而減少植物氧化脅迫傷害?？梢奆eSOD基因為植物體內(nèi)重要的抗逆性基因。因此，可以FeSOD酶基因作為分子標(biāo)記輔助藍(lán)莓耐熱性狀篩選，極大加速藍(lán)莓耐熱育種進(jìn)程。
[0005]由于目前用于檢測FeSOD基因的各個試劑都是分散盛放在不同的試劑盒內(nèi)，當(dāng)進(jìn)行試驗時，需將使用的試劑分別從其盛放的試劑盒中分別取出后放置在試管架后，再進(jìn)行后續(xù)的試驗，但由于每天會試驗多次，這樣每天就會來回取放很多次試劑，溫度的頻繁變化容易造成試劑失活，此外，目前購買時試劑都是盛放在沒有保溫功能的紙盒里面，買來后再將其迅速放入冰箱冷藏，試驗前將其從冰箱中拿出放置在試管架上，再將試管架放置在冰上用于保冷，但夏天做試驗冰容易融化，所以會給試驗造成許多的不便，因此提出一種既能將試驗所需試劑放置于同一且能夠保冷的試劑盒中成為現(xiàn)在亟待解決的問題。
【實用新型內(nèi)容】
[0006]本實用新型為了解決目前存在的問題而進(jìn)行的，目的在于提供靈敏度高、快捷、易用、具有良好的應(yīng)用前景的保冷性強，且方便攜帶結(jié)構(gòu)簡單的藍(lán)莓耐熱性狀鑒別試劑盒。為了實現(xiàn)上述目的，本實用新型采用了以下技術(shù)方案。
[0007]藍(lán)莓耐熱品種篩選的分子標(biāo)記檢測試劑盒，包括盒體和蓋合在盒體上的盒蓋，所述盒體，包括真空壁、保溫裝置和海綿固定座，所述海綿固定座容置在保溫裝置內(nèi)，其上開設(shè)3個大容置孔和3個小容置孔，所述3個大容置孔容置實時定量PCR反應(yīng)試劑混合液試劑管，所述3個小容置孔分別容置外源參照物試劑管、內(nèi)參基因引物試劑管和FeSOD基因引物試劑管；所述保溫裝置具有雙層結(jié)構(gòu)，層間填充有保冷劑，外層的材質(zhì)為隔熱材料；所述真空壁為雙層硬質(zhì)塑料，中間抽真空。
[0008]所述盒蓋與盒體材料相同，外層為真空壁，中間層為可填充保冷劑的保溫層，內(nèi)層為海綿墊。
[0009]優(yōu)選的，所述6個容置孔在海綿固定座上分兩排排列，上排兩個大容置孔，下排一個大容置孔和3個小容置孔，3個所述小容置孔呈環(huán)形排列，所述大容置孔能容納5mLEP管，所述小容置孔可容納1.5mLEP管。
[0010]優(yōu)選的，所述6個容置孔深度小于海綿固定座高度，孔腔底部有海綿。
[0011]優(yōu)選的，所述盒體的保溫裝置高度低于真空壁，所述盒蓋的保溫層呈凸起狀，盒蓋與盒體相接觸的端面相互嵌合匹配。
[0012]優(yōu)選的，所述盒蓋一側(cè)與盒體通過轉(zhuǎn)軸連接，另一側(cè)有一個塑料搭扣，相應(yīng)的，所述盒體的該側(cè)設(shè)有對應(yīng)的塑料搭扣扣合部件。
[0013]優(yōu)選的，所述實時定量PCR反應(yīng)試劑混合液試劑管為5mL棕色不透明EP管，EP管身設(shè)有刻度標(biāo)記，刻度標(biāo)記處管壁為白色透明，刻度標(biāo)記極細(xì)，EP管管底外側(cè)為圓柱，內(nèi)側(cè)為半球形，EP管管蓋有翻蓋開和旋開兩種打開方式；所述外源參照物試劑管、內(nèi)參基因引物試劑管和FeSOD基因引物試劑管為1.5mL EP管，管蓋形狀分別為圓形、橢圓形、六邊形。
[0014]本實用新型采用了真空壁和保溫裝置來保持實時定量PCR反應(yīng)試劑混合液、外源參照物、內(nèi)參基因引物及FeSOD基因引物在運輸過程中處于低溫環(huán)境，防止高溫造成試劑失活。實時定量PCR反應(yīng)試劑混合液試劑管為棕色不透明避免試劑降解，管身標(biāo)有可視刻度便于觀察使用情況，具有兩種開蓋方式，便于吸取，避免過多暴露在空氣中；外源參照物、內(nèi)參引物及FeSOD基因引物以不同形狀的管蓋的試劑管盛放，避免了實驗過程中的混淆；盒蓋與盒體相接觸的端面相互嵌合匹配，并有塑料搭扣，保證試劑盒密封性，方便運輸。本實用新型可以快捷簡便的對藍(lán)莓耐熱品種進(jìn)行鑒別，使用簡單、靈敏度高、篩選效率高、周期短，同時，所使用的試劑有廣泛的商業(yè)供應(yīng)商。
【附圖說明】
[0015]圖1是本實用新型試劑盒結(jié)構(gòu)示意圖；
[0016]圖2是5mLEP管的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實施方式】
[0017]如圖1所示，本實用新型提供的藍(lán)莓耐熱品種篩選的分子標(biāo)記檢測試劑盒，包括盒體I和蓋合在盒體I上的盒蓋2。盒蓋2的一側(cè)與盒體I通過轉(zhuǎn)軸連接，另一側(cè)設(shè)有一個塑料搭扣10，相應(yīng)的，盒體I的該側(cè)設(shè)有對應(yīng)的塑料搭扣扣合部件11，塑料搭扣10能與對應(yīng)的塑料搭扣扣合部件11扣在一起，提高密封性。盒蓋2的材料與盒體I材料相同，其外層21為真空壁，中間層22為可填充保冷劑的保溫層，內(nèi)層23為海綿墊。
[0018]本實施例的盒體I包括真空壁3、設(shè)置在真空壁3內(nèi)側(cè)的保溫裝置4以及設(shè)置在保溫裝置4形成的空間內(nèi)的海綿固定座5。真空壁3為雙層硬質(zhì)塑料，中間抽真空，使內(nèi)外環(huán)境隔離。保溫裝置4具有雙層結(jié)構(gòu)，層間填充有保冷劑，外