Ms4a6a作為多發(fā)性骨髓瘤診治標(biāo)志物的用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基因標(biāo)記物，該基因標(biāo)記物是MS4A6A。MS4A6A可用于判斷受試者是否具有患多發(fā)性骨髓瘤的風(fēng)險(xiǎn)或者判斷受試者是否患有多發(fā)性骨髓瘤。另外，MS4A6A還可以用于制備治療多發(fā)性骨髓瘤的藥物。本發(fā)明為臨床在分子水平上診斷多發(fā)性骨髓瘤提供了新的診斷方法，同時為多發(fā)性骨髓瘤的基因治療提供了新的藥物靶點(diǎn)。
【專利說明】
MS4A6A作為多發(fā)性骨髓瘤診治標(biāo)志物的用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及腫瘤診斷、治療、預(yù)測預(yù)后領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及以檢測MS4A6A 異常為手段的腫瘤診斷、預(yù)測預(yù)后方法;及激活MS4A6A基因或蛋白質(zhì)的腫瘤治療劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma)是血液系統(tǒng)的一種較常見的惡性腫瘤，它是由 于機(jī)體的漿細(xì)胞異?？寺⌒栽錾募膊?，起源于B淋巴細(xì)胞，患者的骨髓內(nèi)有漿細(xì)胞(或稱 為骨髓瘤細(xì)胞）的異常性的克隆增殖。由于異常漿細(xì)胞浸潤骨骼，骨髓和全身多個器官組 織，引起病理性的骨骼破壞，患者的血清中出現(xiàn)異常的單克隆免疫球蛋白，從而抑制了機(jī)體 的正常的多克隆免疫球蛋白，患者的尿內(nèi)出現(xiàn)Μ蛋白，患者最后表現(xiàn)出導(dǎo)致貧血、腎功能損 害及病理性骨折等。在我國，ΜΜ的年發(fā)病率為1/10萬，而在西方國家年發(fā)病率為4/10萬，其 平均生存期為3年，占造血系統(tǒng)腫瘤死亡率的20%左右?，F(xiàn)代細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的研 究發(fā)現(xiàn)多發(fā)性骨髓瘤患者的體內(nèi)的信號傳導(dǎo)通路發(fā)生了異常，當(dāng)機(jī)體細(xì)胞的遺傳基因發(fā)生 改變，以及細(xì)胞因子的異常分泌，同時患者骨髓微環(huán)境發(fā)生改變及和細(xì)胞之間的相互作用 發(fā)生了異常，都參與了該病的發(fā)生及其發(fā)展，但我們對多發(fā)性骨髓瘤的確切發(fā)病機(jī)制仍未 完全明了。近年來，雖然有沙利度胺以及蛋白酶抑制劑的臨床應(yīng)用，以及異基因的骨髓移植 技術(shù)，但ΜΜ的治療并沒有得到明顯的改進(jìn)，患者的預(yù)后亦沒有明顯的改善。Wolffe認(rèn)為從遺 傳學(xué)和表達(dá)遺傳學(xué)（6口186]161：；[08)的研究中發(fā)現(xiàn)，由于有些癌基因，包括原癌基因、抑癌基 因的分子發(fā)生了變化，它對腫瘤的發(fā)生起著重要的作用。他認(rèn)為:表達(dá)遺傳學(xué)的定義就是： 由于非基因序列的改變，導(dǎo)致了基因表達(dá)水平的變化。這種變化不影響DNA序列的變化，但 最后卻導(dǎo)致了基因的異常，隨著遺傳學(xué)、分子生物學(xué)以及基因?qū)W的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)一些與腫瘤增 殖與凋亡相關(guān)的基因?qū)τ谖覀兞私舛喟l(fā)性骨髓瘤的發(fā)病機(jī)制，分子特點(diǎn)以及診斷和治療發(fā) 揮了極大的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的之一在于提供一種通過檢測MS4A6A基因或蛋白表達(dá)差異來診斷多 發(fā)性骨髓瘤的方法。
[0004] 本發(fā)明的目的之二在于提供一種通過檢測MS4A6A基因或蛋白表達(dá)差異來預(yù)測多 發(fā)性骨髓瘤預(yù)后的方法。
[0005] 本發(fā)明的目的之三在于提供一種通過激活MS4A6A基因或MS4A6A蛋白來治療多發(fā) 性骨髓瘤的方法。
[0006] 本發(fā)明的目的之四在于提供一種用于篩選治療多發(fā)性骨髓瘤的藥物的方法。
[0007] 本發(fā)明的目的之五在于提供一種用于治療多發(fā)性骨髓瘤的藥物。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：
[0009] 本發(fā)明提供了檢測MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的產(chǎn)品在制備多發(fā)性骨髓瘤診斷工 具中的用途。
[0010]本發(fā)明還提供了檢測MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的產(chǎn)品在制備預(yù)測多發(fā)性骨髓瘤 預(yù)后工具中的用途。
[0011] 進(jìn)一步，所述檢測MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的產(chǎn)品包括檢測MS4A6A基因或MS4A6A 蛋白的表達(dá)水平的產(chǎn)品。所述產(chǎn)品包括能夠結(jié)合MS4A6A基因的核酸或者能夠結(jié)合MS4A6A蛋 白的物質(zhì)（例如抗體）。所述核酸能夠檢測M S 4 A 6 A基因的表達(dá)水平；所述物質(zhì)能夠檢測 MS4A6A蛋白的表達(dá)水平。
[0012] 本發(fā)明的檢測MS4A6A基因的產(chǎn)品可基于使用核酸分子的已知方法來發(fā)揮其功能： 如PCR、如Southern雜交、Northern雜交、點(diǎn)雜交、焚光原位雜交(FISH)、DNA微陣列、AS0法、 高通量測序平臺等。使用該產(chǎn)品可以定性地、定量地、或半定量地實(shí)施分析。
[0013] 包含在上述產(chǎn)品中的核酸可以通過化學(xué)合成來獲得，或通過從生物材料制備含有 期望核酸的基因，然后使用設(shè)計(jì)用于擴(kuò)增期望核酸的引物擴(kuò)增它來獲得。
[0014] 進(jìn)一步，所述PCR方法為已知方法，例如，ARMS (Ampl if i cat ion Refractory Mutation System，擴(kuò)增不應(yīng)突變系統(tǒng))法、RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。擴(kuò)增 的核酸可以通過使用點(diǎn)印跡雜交法、表面等離子共振法(SPR法）、PCR-RFLP法、原位RT-PCR 法、PCR-SS0 (序列特異性寡核苷酸）法、PCR-SSP法、AMPFLP (可擴(kuò)增片段長度多態(tài)性）法、 MVR-PCR法、和PCR-SSCP (單鏈構(gòu)象多態(tài)性)法來檢測。
[0015]上面所述的核酸包括擴(kuò)增MS4A6A基因的引物，產(chǎn)品中包括的引物可以通過通過化 學(xué)合成來制備，通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的方法參考已知信息來適當(dāng)?shù)卦O(shè)計(jì)，并通過 化學(xué)合成來制備。
[0016] 在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述核酸為QPCR實(shí)驗(yàn)中使用的擴(kuò)增引物，所述引物 的序列如SEQ ID N0.1 (正向序列）和SEQ ID N0.2(反向序列）所示。
[0017] 上面所述的核酸還可包括探針，所述探針可以通過化學(xué)合成來制備，通過使用本 領(lǐng)域技術(shù)人員知道的方法參考已知信息來恰當(dāng)設(shè)計(jì)，并通過化學(xué)合成來制備，或者可以通 過從生物材料制備含有期望核酸序列的基因，并使用設(shè)計(jì)用于擴(kuò)增期望核酸序列的引物擴(kuò) 增它來制備。
[0018] 本發(fā)明的檢測MS4A6A蛋白的產(chǎn)品可基于使用抗體的已知方法來發(fā)揮其功能：例 如，可以包括ELI SA、放射免疫測定法、免疫組織化學(xué)法、Wes tern印跡等。
[0019] 本發(fā)明的檢測MS4A6A蛋白的產(chǎn)品包括特異性結(jié)合MS4A6A蛋白的抗體或其片段?？?以使用任何結(jié)構(gòu)、尺寸、免疫球蛋白類別、起源等的抗體或其片段，只要它結(jié)合靶蛋白質(zhì)即 可。本發(fā)明的檢測產(chǎn)品中包括的抗體或其片段可以是單克隆的或多克隆的?？贵w片段指保 留抗體對抗原的結(jié)合活性的抗體一部分(部分片段)或含有抗體一部分的肽?？贵w片段可以 包括F(at/ )2、Fat/、Fab、單鏈Fv(scFv)、二硫化物鍵合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V區(qū) (雙抗體）、或含有CDR的肽。本發(fā)明的檢測MS4A6A蛋白的產(chǎn)品可以包括編碼抗體或編碼抗體 片段的氨基酸序列的分離的核酸，包含該核酸的載體，和攜帶該載體的細(xì)胞。
[0020] 抗體可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法來獲得。例如，制備保留整個或部分靶 蛋白質(zhì)的多肽或整合編碼它們的多核苷酸的哺乳動物細(xì)胞表達(dá)載體作為抗原。使用抗原免 疫動物后，從經(jīng)過免疫的動物獲得免疫細(xì)胞并融合骨髓瘤細(xì)胞以獲得雜交瘤。然后從雜交 瘤培養(yǎng)物收集抗體。最后可以通過使用被用作抗原的MS4A6A蛋白或其部分對獲得的抗體實(shí) 施抗原特異性純化來獲得針對MS4A6A蛋白的單克隆抗體?？梢匀缦轮苽涠嗫寺】贵w：用與 上文相同的抗原免疫動物，從經(jīng)過免疫的動物收集血液樣品，從血液中分離出血清，然后使 用上述抗原對血清實(shí)施抗原特異性純化?？梢酝ㄟ^用酶處理獲得的抗體或通過使用獲得的 抗體的序列信息來獲得抗體片段。
[0021] 標(biāo)記物與抗體或其片段的結(jié)合可以通過本領(lǐng)域普遍知道的方法來實(shí)施。例如，可 以如下熒光標(biāo)記蛋白質(zhì)或肽：用磷酸鹽緩沖液清洗蛋白質(zhì)或肽，添加用DMS0、緩沖劑、等準(zhǔn) 備的染料，然后混合溶液，再于室溫放置10分鐘。另外，標(biāo)記可使用商品化的標(biāo)記試劑盒，諸 如生物素標(biāo)記試劑盒，如生物素標(biāo)記試劑盒-NH2、生物素標(biāo)記試劑盒-SH (DojindoLaboratories);堿性磷酸酶標(biāo)記試劑盒諸如堿性磷酸酶標(biāo)記試劑盒-NH2、堿性磷 酸酶標(biāo)記試劑盒-SH(Dojindo Laboratories);過氧化物酶標(biāo)記試劑盒諸如過氧化物酶標(biāo) 記試劑盒-NH2、過氧化物酶標(biāo)記試劑盒-NH2(Dojindo Laboratories);藻膽蛋白標(biāo)記試劑 盒諸如藻膽蛋白標(biāo)記試劑盒-NH2、藻膽蛋白標(biāo)記試劑盒-SH、B-藻紅蛋白標(biāo)記試劑盒-NH2， B-藻紅蛋白標(biāo)記試劑盒-SH、R-藻紅蛋白標(biāo)記試劑盒-NH2、R-藻紅蛋白標(biāo)記試劑盒SH (DojindoLaboratories);焚光標(biāo)記試劑盒諸如焚光素標(biāo)記試劑盒-NH2、HiLyte Fluor(TM) 555標(biāo)記試劑盒_NH2、HiLyte Fluor(TM)647標(biāo)記試劑盒_NH2(Dojindo Laboratories);及 DyLight 547和DyLight647(Techno Chemical Corp.)、Zenon(TM)、Alexa Fluor(TM)抗體 標(biāo)記試劑盒、Qdot(TM)抗體標(biāo)記試劑盒（Invitrogen Corporation)和EZ-標(biāo)記物蛋白質(zhì)標(biāo) 記試劑盒(Funakoshi Corporation)。為了正確標(biāo)記，可以使用適宜的儀器來檢測經(jīng)過標(biāo)記 的抗體或其片段。
[0022] 作為依照本發(fā)明的檢測產(chǎn)品的樣品，可以使用例如自活檢受試者獲得的組織樣品 或流體。樣品不受特別限制，只要它適于本發(fā)明的測定;例如，它可以包括組織、血液、血漿、 血清、淋巴液、尿液、漿膜腔液、脊髓液、滑液、房水、淚液、唾液、或其級分或經(jīng)過處理的材 料。
[0023] 在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述樣品來自受試者的組織。
[0024]在本發(fā)明中，"預(yù)后"是指腫瘤患者在通過手術(shù)處理等抑制或緩解腫瘤生長后的過 程或結(jié)果。在本說明書中，預(yù)后可以是通過手術(shù)處理抑制或緩解腫瘤生長后1、2、3、4、5、6、 7、8、9、10、15、20年或更久時的生機(jī)狀態(tài)。預(yù)后可以通過檢查生物標(biāo)志物即MS4A6A蛋白或編 碼MS4A6A蛋白的基因來預(yù)測。預(yù)后預(yù)測可以這樣進(jìn)行:根據(jù)生物標(biāo)志物的有或無，或者升高 或降低，確定患者的預(yù)后是良好還是不良，或者確定良好預(yù)后或不良預(yù)后的概率。
[0025] 在本發(fā)明中，"預(yù)后良好"是指在通過手術(shù)處理等為患者抑制或緩解腫瘤生長之 后，患者長時期(例如3、5、6、7、8、9、10、15、20年或更長)沒有危急狀況?；蛘?，預(yù)后好可以意 指在這樣長時間內(nèi)存活、無轉(zhuǎn)移、無復(fù)發(fā)、或無再發(fā)。例如，預(yù)后良好可以意指至少3年或尤 其是至少5年存活，優(yōu)選沒有轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)。預(yù)后良好最優(yōu)選的狀態(tài)是長期無疾病的存活。如 本文中所使用的，"預(yù)后良好"還可以包括任何這樣的狀態(tài)，其中可以發(fā)現(xiàn)疾病如轉(zhuǎn)移，但是 惡性低且不嚴(yán)重地影響生存能力。
[0026] 在本發(fā)明中，"預(yù)后不良"是指患者在通過手術(shù)處理等抑制或緩解腫瘤生長后的短 時期（例如1、2、3、4、5年或更短）內(nèi)發(fā)生致命狀況?；蛘撸A(yù)后差是指在這樣的短時期里死 亡、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、或再發(fā)。例如，預(yù)后差可以意指至少3年或尤其至少5年內(nèi)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、或死 亡。
[0027] 預(yù)測預(yù)后是指預(yù)測患者狀況的過程或結(jié)果，并不意味著能以100%的準(zhǔn)確度預(yù)測 患者狀況的過程或結(jié)果。預(yù)測預(yù)后是指確定某些過程或結(jié)果的可能性是否增加，而并不意 味著通過與某些過程或結(jié)果不發(fā)生的情況比較來確定發(fā)生某些過程或結(jié)果的可能性。如本 發(fā)明而言，本發(fā)明中MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的水平降低的患者中，與不顯示該特征的患 者相比，更有可能觀察到特定過程或結(jié)果。
[0028] 進(jìn)一步，所述檢測MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的產(chǎn)品可以是檢測MS4A6A基因或 MS4A6A蛋白的試劑、也可以是包含所述試劑的試劑盒、芯片、試紙等，也可以是使用所述試 劑的高通量測序平臺。
[0029]本發(fā)明還提供了一種診斷多發(fā)性骨髓瘤的工具，所述工具能夠檢測MS4A6A基因或 MS4A6A蛋白的表達(dá)水平。所述工具包括能夠結(jié)合MS4A6A基因的核酸或者能夠結(jié)合MS4A6A蛋 白的物質(zhì)（例如抗體）。所述核酸能夠檢測M S 4 A 6 A基因的表達(dá)水平；所述物質(zhì)能夠檢測 MS4A6A蛋白的表達(dá)水平。
[0030] 進(jìn)一步，所述核酸和所述物質(zhì)的性質(zhì)同前面所述。
[0031] 進(jìn)一步，所述診斷多發(fā)性骨髓瘤的工具包括但不限于芯片、試劑盒、試紙、或高通 量測序平臺；高通量測序平臺是一種特殊的診斷多發(fā)性骨髓瘤的工具，隨著高通量測序技 術(shù)的發(fā)展，對一個人的基因表達(dá)譜的構(gòu)建將成為十分便捷的工作。通過對比疾病患者和正 常人群的基因表達(dá)譜，容易分析出哪個基因的異常與疾病相關(guān)。因此，在高通量測序中獲知 MS4A6A基因的異常與多發(fā)性骨髓瘤相關(guān)也屬于MS4A6A基因的用途，同樣在本發(fā)明的保護(hù)范 圍之內(nèi)。
[0032] 本發(fā)明還提供了一種預(yù)測多發(fā)性骨髓瘤預(yù)后的工具，所述預(yù)測多發(fā)性骨髓瘤預(yù)后 工具包括能夠結(jié)合MS4A6A基因的核酸或者能夠結(jié)合MS4A6A蛋白的物質(zhì)(例如抗體）。所述核 酸能夠檢測MS4A6A基因的mRNA水平;所述物質(zhì)能夠檢測MS4A6A蛋白的表達(dá)水平。
[0033]進(jìn)一步，所述核酸和所述物質(zhì)的性質(zhì)同前面所述。
[0034]進(jìn)一步，所述預(yù)測多發(fā)性骨髓瘤預(yù)后的工具包括但不限于芯片、試劑盒、試紙、或 高通量測序平臺；高通量測序平臺是一種特殊的診斷多發(fā)性骨髓瘤的工具，隨著高通量測 序技術(shù)的發(fā)展，對一個人的基因表達(dá)譜的構(gòu)建將成為十分便捷的工作。通過對比疾病患者 和正常人群的基因表達(dá)譜，容易分析出哪個基因的異常與疾病相關(guān)。因此，在高通量測序中 獲知MS4A6A基因的異常與多發(fā)性骨髓瘤相關(guān)也屬于MS4A6A基因的用途，同樣在本發(fā)明的保 護(hù)范圍之內(nèi)。
[0035]本發(fā)明的檢測產(chǎn)品、診斷工具中使用的抗MS4A6A抗體或其片段所識別的氨基酸的 數(shù)目沒有特別限制，只要抗體能夠結(jié)合MS4A6A即可。
[0036]本發(fā)明還提供了一種診斷多發(fā)性骨髓瘤或預(yù)測多發(fā)性骨髓瘤預(yù)后的方法，所述方 法包括如下步驟：
[0037] (1)獲取受試者的樣品；
[0038] (2)檢測受試者樣品中MS4A6A基因或蛋白的表達(dá)水平；
[0039] (3)將測得的MS4A6A基因或蛋白的表達(dá)水平與受試者的患病與否關(guān)聯(lián)起來。
[0040] (4)與對照相比，MS4A6A基因或蛋白的表達(dá)水平降低，則該受試者被診斷為多發(fā)性 骨髓瘤，或該受試者被確定為預(yù)后不良。
[0041] 本發(fā)明還提供了一種多發(fā)性骨髓瘤的治療方法，所述方法包括激活MS4A6A基因或 MS4A6A蛋白。
[0042] 進(jìn)一步，所述方法包括促進(jìn)MS4A6A基因的表達(dá)，或促進(jìn)MS4A6A蛋白的表達(dá)或增強(qiáng) MS4A6A蛋白的活性。
[0043] 本發(fā)明還提供了一種腫瘤藥物的篩選方法，可以通過在對癌細(xì)胞添加測試藥物后 或在對腫瘤模型動物施用測試藥物后的某個時期測量MS4A6A基因或者M(jìn)S4A6A蛋白的表達(dá) 水平來測定腫瘤藥物改善腫瘤預(yù)后的效果。更具體地說，當(dāng)MS4A6A基因或者M(jìn)S4A6A蛋白的 表達(dá)水平在添加或施用測試藥物后升高時或者恢復(fù)正常水平時，可選擇該藥物作為改善腫 瘤預(yù)后的治療藥物。
[0044]本發(fā)明還提供了一種含有MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的激活劑的藥物。
[0045]本發(fā)明還提供了上述激活劑在制備治療多發(fā)性骨髓瘤的藥物中的應(yīng)用。
[0046]本發(fā)明的MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的激活劑不受限制，只要是可以促進(jìn)或者增強(qiáng) MS4A6A或涉及MS4A6A上游或下游途徑的物質(zhì)的表達(dá)或活性，且對于治療腫瘤有效的藥物即 可。
[0047] 進(jìn)一步，所述激活劑包括MS4A6A基因、MS4A6A蛋白、促進(jìn)型miRNA、促進(jìn)型轉(zhuǎn)錄調(diào)控 因子、或促進(jìn)型靶向小分子化合物。
[0048] 所述激活劑還包括包含攜帶MS4A6A基因的載體或者宿主細(xì)胞。
[0049]本發(fā)明的激活劑一方面可以用于補(bǔ)充內(nèi)源性的MS4A6A蛋白的缺失或不足，通過提 尚MS4A6A蛋白的表達(dá)，從而治療因 MS4A6A蛋白缺之導(dǎo)致的多發(fā)性骨髓瘤。另一方面可以用 于增強(qiáng)MS4A6A蛋白的活性，從而治療多發(fā)性骨髓瘤。
[0050] 本發(fā)明的藥物可以作為醫(yī)藥單獨(dú)施用或與其它藥物一起施用?？梢耘c本發(fā)明的藥 物一起施用的其它藥物不受限制，只要它不損害本發(fā)明的治療性或預(yù)防性藥物的效果即 可，優(yōu)選的是，用于治療或預(yù)防腫瘤的藥物可以包括例如烷化劑，諸如異環(huán)磷酰胺、環(huán)磷酰 胺、達(dá)卡巴嗪、替莫唑胺、尼莫司汀、白消安、丙卡巴肼、美法侖、和雷莫司汀;抗代謝物，諸如 依諾他濱、卡培他濱、卡莫氟、克拉屈濱、吉西他濱、阿糖胞苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸鹽 (cytarabine ocfosfate)、替加氟、替加氟-尿啼啶、替加氟吉美啼啶奧替拉西鉀、去氧氟尿 苷、羥基脲、氟尿嘧啶、氟達(dá)拉濱、培美曲塞、噴司他丁、巰嘌呤、和甲氨蝶呤;植物生物堿，諸 如伊立替康、依托泊苷、索布佐生、多西他賽、nogitecan、帕利他賽、長春瑞濱、長春地辛、和 長春堿;抗癌抗生素，諸如放線菌素 D、阿柔比星、氨柔比星、伊達(dá)比星、表柔比星、凈司他丁 stimalamer、柔紅霉素、多柔比星、啦柔比星、博來霉素、培洛霉素、絲裂霉素 C、和米托蒽醌； 基于鉑的藥物，諸如奧沙利鉑、卡鉑、順鉑、和奈達(dá)鉑;激素藥物，諸如阿那曲唑、依西美坦、 雌莫司汀、炔雌醇、氯地孕酮、戈舍瑞林、他莫昔芬、地塞米松、托瑞米芬、比卡魯胺、氟他胺、 潑尼松龍、磷雌酚、米托坦、甲睪酮、甲羥孕酮、美雄烷、亮丙瑞林、和來曲唑；生物反應(yīng)修飾 劑，諸如干擾素 α、干擾素 β、干擾素 γ、白介素、烏苯美司、干BCG、和香菇多糖;和分子靶向藥 物，諸如伊馬替尼（imatinib)、吉非替尼(gefitinib)、吉姆單抗、奧佐米星、他米巴羅汀、曲 妥單抗、維A酸、硼替佐米(bortezomib)、和利妥昔單抗等。
[0051] 本發(fā)明的藥物可根據(jù)需要制備成各種劑型。包括但不限于，經(jīng)皮、粘膜、鼻、口頰、 舌下或經(jīng)口使用的片劑、溶液劑、顆粒劑、貼劑、膏劑、膠囊劑、氣霧劑或栓劑。
[0052] 本發(fā)明的藥物的施用途徑不受限制，只要它能發(fā)揮期望的治療效果或預(yù)防效果即 可，包括但不限于靜脈內(nèi)，腹膜內(nèi)，眼內(nèi)，動脈內(nèi)，肺內(nèi)，口服，小泡內(nèi)，肌肉內(nèi)，氣管內(nèi)，皮下 的，通過皮膚，通過胸膜，局部的，吸入，通過粘膜，皮膚，腸胃，關(guān)節(jié)內(nèi)，心室內(nèi)，直腸，陰道， 顱骨內(nèi)，尿道內(nèi)，肝內(nèi)，瘤內(nèi)。在某些情況下，可以系統(tǒng)地給藥。在某些情況下是局部地給藥。
[0053]本發(fā)明的藥物的劑量不受限制，只要獲得期望的治療效果或者預(yù)防效果即可，可 以依據(jù)癥狀、性別、年齡等來恰當(dāng)?shù)拇_定。本發(fā)明的治療藥物或預(yù)防藥物的劑量可以使用例 如對疾病的治療效果或者預(yù)防效果作為指標(biāo)來確定。
[0054]在本發(fā)明的上下文中，"診斷多發(fā)性骨髓瘤"既包括判斷受試者是否已經(jīng)患有多發(fā) 性骨髓瘤、也包括判斷受試者是否存在患有多發(fā)性骨髓瘤的風(fēng)險(xiǎn)。
[0055] 本文所用的"治療"涵蓋患有相關(guān)疾病或病癥的哺乳動物例如人類中治療相關(guān)的 疾病或疾病狀態(tài)，并且包括：
[0056] (1)預(yù)防疾病或疾病狀態(tài)在哺乳動物中發(fā)生，尤其是當(dāng)該哺乳動物易感于所述疾 病狀態(tài)，但尚未被診斷出患有這種疾病狀態(tài)時；
[0057] (2)抑制疾病或疾病狀態(tài)，即阻止其發(fā)生;或者
[0058] (3)緩解疾病或疾病狀態(tài)，即使疾病或疾病狀態(tài)消退。
[0059] 術(shù)語"治療"通常涉及治療人類或動物(例如，被獸醫(yī)所應(yīng)用），其中可達(dá)到某些預(yù) 期的治療效果，例如，抑制病癥的發(fā)展(包括降低發(fā)展速度、使發(fā)展停止）、改善病癥和治愈 病癥。還包括作為預(yù)防措施(例如預(yù)防）的治療。對還沒有發(fā)展為病癥但有發(fā)展為該病癥危 險(xiǎn)的患者的用途，也包括在術(shù)語"治療"中。
[0060] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：
[0061] 本發(fā)明的發(fā)現(xiàn)了一種診斷多發(fā)性骨髓瘤的分子標(biāo)志物，使用該分子標(biāo)志物可以在 多發(fā)性骨髓瘤發(fā)生的早期即可作為判斷，提供了患者的生存率。
[0062] 另外，通過預(yù)測患者的預(yù)后，本發(fā)明能夠提供有意義的信息來為患者決定治療方 案策略。
[0063] 本發(fā)明的包括MS4A6A基因或蛋白的激活劑的治療藥物可用作新的多發(fā)性骨髓瘤 的治療藥物。
【附圖說明】
[0064]圖1顯示MS4A6A基因過表達(dá)對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞增殖的影響；
[0065]圖2顯示MS4A6A基因過表達(dá)對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞侵襲的影響；
[0066]圖3顯示MS4A6A基因過表達(dá)對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞迀移的影響。
[0067]具體的實(shí)施方式
[0068] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。以下實(shí)施例僅用于說明本 發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條 件，例如Sambrook等人，分子克?。簩?shí)驗(yàn)室手冊(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0069] 實(shí)施例1基因芯片篩選差異表達(dá)基因
[0070] 1、取材：
[0071] 多發(fā)性骨髓瘤組織:收集確診的MM患者骨髓活檢標(biāo)本共10例，MM診斷標(biāo)準(zhǔn)參閱《中 國多發(fā)性骨髓瘤診治指南2011修訂版》?；颊咧心?例，女5例，中位年齡59歲。
[0072]正常骨髓組織:收集同時期營養(yǎng)不良性貧血患者骨髓活檢組織標(biāo)本10例作為對照 組，其中男5例，女5例，中位年齡53歲。
[0073] 2、組織RNA的獲取
[0074] 使用Tr i zo 1-步法提取組織總RNA。
[0075] 3、RNA純度及濃度的測定
[0076] 取RNA溶液ΙμL，儀器測定0D260、0D280，RNA濃度為0D260值X稀釋倍數(shù)X40/ 1000,計(jì)算0D260/0D280,比值在1.7-2.0代表1?祖溶液純度高，含蛋白質(zhì)等雜質(zhì)少，-20°(：保 存。
[0077] 4、RNA完整性檢測
[0078] (1)取2μ1 RNA樣品行1.5%瓊脂糖凝膠電泳(80v，15min);
[0079] (2)分出區(qū)帶后，genefinder染色，藍(lán)光下觀察電泳區(qū)帶；
[0080] (3)當(dāng)28s/18s約2:1時，說明RNA穩(wěn)定無降解。
[0081] 5、基因芯片雜交及掃描
[0082] 總RNA經(jīng)線性化擴(kuò)增后，cy3-UTP標(biāo)記，熒光標(biāo)記后的cRNAs采用RNEASY Mini Kit 純化，用Amhion的RNA Fragmentation Reagents對標(biāo)記好的cRNAs進(jìn)行片段化處理。采用美 國Agilent公司的人全基因表達(dá)譜芯片(4x 44K基因），在芯片雜交爐中65°C雜交17h，然后 洗脫、染色，最后用Agilent DNA MicroarrayScanner掃描儀掃描。
[0083] 6、芯片數(shù)據(jù)處理與分析
[0084]雜交后的芯片經(jīng)芯片掃描儀讀取數(shù)據(jù)點(diǎn)后，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入分析軟件，對于兩組比值 的自然對數(shù)絕對值大于2.0或小于0.5的基因作為差異表達(dá)基因。
[0085] 7、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
[0086]采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間差異比較采用單因素方差分析法，P〈 0.05差異有顯著性意義。
[0087] 8、結(jié)果
[0088] 芯片結(jié)果顯示，多發(fā)性骨髓瘤組織與正常骨髓組織之間共篩選出489個差異表達(dá) 基因，其中表達(dá)水平上調(diào)的基因215個，表達(dá)水平下調(diào)的基因274個。
[0089]實(shí)施例2大樣本驗(yàn)證篩選出的差異表達(dá)基因
[0090] 考慮現(xiàn)有技術(shù)中還未見關(guān)于該基因與多發(fā)性骨髓瘤相關(guān)性進(jìn)行研究的基因作為 候選基因，同時考慮基因測序的結(jié)果，選擇MS4A6A基因（其表達(dá)在多發(fā)性骨髓瘤組織中下 調(diào))進(jìn)行驗(yàn)證。
[0091] 1、樣本收集
[0092] 按照實(shí)施例1的方法收集多發(fā)性骨髓瘤組織50例，正常骨髓組織60例。
[0093] 2、在mRNA水平上進(jìn)行驗(yàn)證
[0094] 2.1提取組織RNA [0095] 步驟同實(shí)施例1。
[0096] 2.2逆轉(zhuǎn)錄
[0097] 逆轉(zhuǎn)錄體系共2(^1^，包括細(xì)胞總1?祖2以8/2以1^，501]/^1^1?1^8丨111以1^，5\逆轉(zhuǎn)錄反 應(yīng)緩沖液 4yL，10m M d NTP 2yl，50yg/mL隨機(jī)引物 2yL(promega)，200UAiLM-MLV逆轉(zhuǎn)錄 酶 lyL，DEPC 8yL。
[0098] 37°C反應(yīng)60分鐘，95°C5分鐘終止反應(yīng)。cDNA在-80°C保存或進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
[0099] 2.3PCR
[0100] 反應(yīng)體系按照Real Master Mix(SYBR Green)試劑盒（購自天根生化科技（北京） 有限公司）配置，SYBR反應(yīng)體系共 25yL，2.5XReal Master Mix 10yL，20XSYBR solution 1.25yL，上游引物0.5yL，下游引物0.5yL，去離子水10.75yL，cDNA 2yL。反應(yīng)條件為94°C 5min，94°C 45s，60 °C lmin，30 個循環(huán)，設(shè)空白對照。
[0101] PCR反應(yīng)前10個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號，調(diào)芐基線至適宜處，各熒光曲 線與基線交叉點(diǎn)的循環(huán)數(shù)即為ct值。根據(jù)Δ c(t) = C(t)ge_-C(t)fs-ac；tin，Δ Δ c(t) = 2 ^(t)，計(jì)算目的基因與β-actin相對表達(dá)量。
[0102] PCR引物序列如下：
[0103] MS4A6A基因引物序列如下所示：
[0104] 上游引物：5'-ACTGTTGAACTCTGCTTACC-3'（SEQ ID N0.1);
[0105] 下游引物：5'-TTCTCTGTGGCGATTGATAG-3'（SEQ ID N0.2)。
[0106] β-actin基因引物序列如下所示：
[0107] 上游引物：5'-CTGGCACCACACCTTCTACAAT-3'（SEQ ID N0.3);
[0108] 下游引物：5'-AATGTCACGCACGATTTCCCGC_3'（SEQ ID N0.4)
[0109] 2.4結(jié)果
[0110] 結(jié)果顯示，與正常骨髓組織相比，多發(fā)性骨髓瘤組織中MS4A6A基因的mRNA水平明 顯下調(diào)，相對表達(dá)量為〇. 24±0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.05)。
[0111] 3、在蛋白水平上進(jìn)行驗(yàn)證
[0112] 3.1提取組織總蛋白
[0113]按照EpiQuik組織/細(xì)胞總蛋白提取試劑盒的說明書進(jìn)行蛋白提取的操作。
[0114] 3.2Western blot檢測
[0115] 將提取的蛋白定量進(jìn)行SDS-PAGE電泳，之后進(jìn)行轉(zhuǎn)膜、封閉、一抗孵育、二抗孵育、 顯色。
[0116] 3.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
[0117]將蛋白條帶的灰度值使用Image J軟件進(jìn)行分析，以β-actin為內(nèi)參，將MS4A6A蛋 白條帶的灰度值進(jìn)行歸一化處理。結(jié)果數(shù)據(jù)都是以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的方式來表示，采用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件來進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析的，兩者之間的差異采用t檢驗(yàn)，認(rèn)為當(dāng)P〈0.05時具有統(tǒng) 計(jì)學(xué)意義。
[0118] 3.4 結(jié)果
[0119] 結(jié)果顯示，與正常骨髓組織相比，多發(fā)性骨髓瘤組織中MS4A6A蛋白水平顯著降低， 相對表達(dá)量為0.39 ± 0.08，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.05)。
[0120] 實(shí)施例3 MS4A6A基因過表達(dá)
[0121] 1、質(zhì)粒構(gòu)建
[0122] 根據(jù)MS4A6A基因的編碼序列設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物，引物的設(shè)計(jì)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟 知。從成人胎腦的cDNA文庫(clontech公司，貨號:638831)中擴(kuò)增全長的MS4A6A基因的編碼 序列，上述cDNA序列插入到真核細(xì)胞表達(dá)載體pcDNA3.1中，連接獲得的重組載體pcDNA3.1-MS4A6A用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
[0123] 2、多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染
[0124] 2.1細(xì)胞培養(yǎng)
[0125] 1^118226細(xì)胞采用含有15%胎牛血清$83)、青霉素1001]/1111、鏈霉素10(^8/1111 的RPMI 1640培養(yǎng)基置于37°C，5%C02,飽和濕度環(huán)境下培養(yǎng)。
[0126] 2.2細(xì)胞轉(zhuǎn)染
[0127] (1)轉(zhuǎn)染前一天將0.5_2*105個腫瘤細(xì)胞懸浮于500μ1不含抗生素的培養(yǎng)基，接種 至24孔培養(yǎng)板。
[0128] (2)轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞密度應(yīng)達(dá)80%-90%，準(zhǔn)備以下復(fù)合物Α:將lyg質(zhì)粒DNA稀釋于無 血清培養(yǎng)基中，輕輕混勾；復(fù)合物B:取4μ1 Lipofectamine2000稀釋于無血清培養(yǎng)基中，混 勻。
[0129] (3)將復(fù)合物A和B混合，輕輕混勻，室溫孵育。
[0130] (4)將100μΙ脂質(zhì)體復(fù)合體加入腫瘤細(xì)胞中，上下左右輕輕混勻，將細(xì)胞放入37°C 含5 % C02培養(yǎng)箱孵育5-7小時。
[0131] (5)加 lml含有2倍正常血清和抗生素濃度的生長培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞18-24小 時。
[0132] 3、利用QPCR實(shí)驗(yàn)檢測pcDNA3.1-MS4A6A的過表達(dá)情況
[0133] 3.1提取細(xì)胞總RNA利用常規(guī)方法進(jìn)行操作。
[0134] 3.2逆轉(zhuǎn)錄
[0135] 步驟同實(shí)施例2。
[0136] 3.3QPCR
[0137] 步驟同實(shí)施例2。
[0138] 3.4 結(jié)果
[0139] 結(jié)果顯示，pcDNA3.1-MS4A6A能夠成功過表達(dá)，相對表達(dá)量為6.25 ± 0.78，差異具 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈〇.〇5)。
[0140] 3、Western blot實(shí)驗(yàn)檢測pcDNA3 · 1-MS4A6A過表達(dá)情況
[0141] 步驟同實(shí)施例2。
[0142] 結(jié)果顯示，與轉(zhuǎn)染pcDNA3.1組相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-MS4A6A的細(xì)胞中MS4A6A蛋白的 含量明顯增加，相對表達(dá)量為2.97 ±0.43，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.05)。
[0143] 實(shí)施例4 MS4A6A基因的表達(dá)對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞增殖能力的測定
[0144] 1、步驟：
[0145] (1)將細(xì)胞接種于96孔板中，每個濃度做3復(fù)孔；
[0146] (2)加入MTT工作濃度的溶液，與細(xì)胞37°C共同孵育4h;
[0147] (3)除去培養(yǎng)基，加入200μ1二甲基亞砜來溶解甲瓚晶體；
[0148] (4)連續(xù)5d測0D570,所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次以上，求取平均值；
[0149] 2、結(jié)果：
[0150] 結(jié)果如圖1所示，與轉(zhuǎn)染pcDNA3.1組相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-MS4A6A組細(xì)胞增殖速度 明顯減慢，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈〇. 05)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，MS4A6A基因表達(dá)抑制了多發(fā) 性骨髓瘤細(xì)胞的增殖。
[0151] 實(shí)施例7檢測MS4A6A基因表達(dá)對細(xì)胞迀移、侵襲的影響
[0152] 1、侵襲實(shí)驗(yàn)
[0153] 1.1實(shí)驗(yàn)步驟：
[0154] (1)上室用Matrigel(人工基底膜)預(yù)涂；
[0155] (2)在上室中種入轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，接種濃度為5*104/100μ1細(xì)胞，在無血清培養(yǎng)基 中培養(yǎng)18h;
[0156] (3)將細(xì)胞加入到0.1%的FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)18h;
[0157] (4)在冰上吸取 50μ1 Matrigel;
[0158] (5)加入預(yù)冷的150μ1無血清RPMI-1640培養(yǎng)基中充分混勻；
[0159] (6)分別取（5)中混合的Matrigel 50μ1，加入到transwell上室，覆蓋整個膜；
[0160] (7)37°C至過夜，使Matrigel聚合成膠；
[0161] (8)細(xì)胞用無血清RPMI-1640培養(yǎng)基洗2遍，再加入無血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中， 至總體積?〇〇μ1;
[0162] (9)將(8)均勻加入Transwe 11上室中，下層培養(yǎng)液和小室間，避免氣泡；
[0163] (10)向下室加入500-600μ1 含 5%FBS 的 RPMI-1640培養(yǎng)，37°C，5%C〇2;
[0164] (11)48h后吸盡液體，擦去未穿透的細(xì)胞，迀移到膜的下表面的細(xì)胞用100 %甲醇 固定30min，PBS洗2遍；
[0165] (12)0.2%結(jié)晶紫染色上室3〇11^11，？85洗去多余結(jié)晶紫；
[0166] (13)倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)。
[0167] 1.2 結(jié)果：
[0168] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2顯示，與轉(zhuǎn)染pcDNA3.1組相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-MS4A6A組細(xì)胞侵襲 數(shù)明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈〇. 05)。
[0169] 2、迀移實(shí)驗(yàn)
[0170] 2.1實(shí)驗(yàn)步驟
[0171] (1)上室中不需要預(yù)涂Matrigel人工基底膜。在上室中種入轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，接種濃 度為（?*?〇 5)Λ〇〇μ1個細(xì)胞，在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)I8h;
[0172] (2)將細(xì)胞加入到0.1%的FBS的無血清RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)18h;
[0173] (3)在冰上用預(yù)冷的槍頭吸取50μ1 Matrigel;
[0174] (4)加入預(yù)冷的150μ1無血清RPMI-1640培養(yǎng)基中充分混勻；
[0175] (5)分別取(4)中混合的Matrigel 50μ1加入到Transwell上室，覆蓋整個膜；
[0176] (6)37°C至過夜，使Matrigel聚合成膠；
[0177] (7)細(xì)胞用無血清RPMI-1640培養(yǎng)基洗2次，再加入無血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中， 至總體積?〇〇μ1;
[0178] (8)將(7)均勻加入Transwell上室中，下層培養(yǎng)液和小室間，避免氣泡，向下室加 入500-600μ1 含 10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)，37°C，5%C〇2;
[0179] (9)48h后吸盡液體，擦去未穿透的細(xì)胞，迀移到膜的下表面的細(xì)胞用100%甲醇固 定 30min，PBS洗2遍；
[0180] (10)0.2%結(jié)晶紫染色上室3〇11^11，？85洗去多余結(jié)晶紫；
[0181] (11)倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)。
[0182] 2.2 結(jié)果
[0183] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3顯示，與轉(zhuǎn)染pcDNA3.1組相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-MS4A6A組細(xì)胞迀移 數(shù)明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈〇. 05)。
[0184] 上述結(jié)果表明，MS4A6A基因表達(dá)抑制了骨髓瘤細(xì)胞的迀移和侵襲。
[0185] 上述實(shí)施例的說明只是用于理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對于本 領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn) 和修飾，這些改進(jìn)和修飾也將落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 檢測MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的產(chǎn)品在制備診斷多發(fā)性骨髓瘤或預(yù)測多發(fā)性骨髓 瘤預(yù)后的工具中的應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的產(chǎn)品 包括檢測MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的表達(dá)水平的產(chǎn)品。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)品包括能夠結(jié)合MS4A6A基因的 核酸或者能夠結(jié)合MS4A6A蛋白的物質(zhì);所述核酸能夠檢測MS4A6A基因的表達(dá)水平;所述物 質(zhì)能夠檢測MS4A6A蛋白的表達(dá)水平。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述核酸是實(shí)時定量PCR中使用的特異擴(kuò) 增MS4A6A基因的引物如SEQIDN0.1和SEQIDN0.2所示。5. -種診斷多發(fā)性骨髓瘤或預(yù)測多發(fā)性骨髓瘤預(yù)后的工具，其特征在于，所述工具包 括能夠檢測MS4A6A基因或MS4A6A蛋白的表達(dá)水平的工具。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的工具，其特征在于，所述工具包括能夠結(jié)合MS4A6A基因的核酸 或者能夠結(jié)合MS4A6A蛋白的物質(zhì)；所述核酸能夠檢測MS4A6A基因的表達(dá)水平;所述物質(zhì)能 夠檢測MS4A6A蛋白的表達(dá)水平。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的工具，其特征在于，所述核酸是實(shí)時定量PCR中使用的特異擴(kuò) 增MS4A6A基因的引物如SEQIDN0.1和SEQIDN0.2所示。8. -種治療多發(fā)性骨髓瘤的藥物，其特征在于，所述藥物包含MS4A6A基因或MS4A6A蛋 白的激活劑。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物，其特征在于，所述激活劑能夠促進(jìn)或增強(qiáng)MS4A6A或涉及 MS4A6A上游或下游途徑的物質(zhì)的表達(dá)或活性。10. 權(quán)利要求8或9所述的激活劑在制備治療多發(fā)性骨髓瘤的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12Q1/68GK105969901SQ201610599598
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年7月27日
【發(fā)明人】楊承剛, 肖楓, 任靜
【申請人】北京泱深生物信息技術(shù)有限公司