粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子及其制劑和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)藥物領(lǐng)域，涉及粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子，其適合用于預(yù)防宮腔粘連術(shù)后的復(fù)發(fā)并能提高妊娠率。另外，本發(fā)明還涉及GM?CSF的藥物制劑及其應(yīng)用等。
【專利說明】
粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子及其制劑和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)藥物領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子，尤其適合用于預(yù)防宮腔粘連術(shù)后的復(fù)發(fā)并能提高妊娠率。另外，本發(fā)明還涉及GM-CSF的藥物制劑及其應(yīng)用等。
【背景技術(shù)】
[0002]粒細(xì)胞巨.細(xì)胞刺激因子(granulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor，簡稱為GM-CSF)由活化T細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞分泌，能夠刺激骨髓前體細(xì)胞增殖分化為粒細(xì)胞和單核/巨噬細(xì)胞，激活成熟的粒細(xì)胞和單核/巨噬細(xì)胞。
[0003]人GM-CSF可以通過成熟的基因重組技術(shù)獲得，如可參見中國專利申請第98126746.7^01105972.9^03137202.3 和 200810137280.5 號等。除了 刺激粒細(xì)胞、單核 / 巨噬細(xì)胞成熟，促進(jìn)成熟細(xì)胞向外周血釋放等作用外，GM-CSF也被發(fā)現(xiàn)能用于治療或預(yù)防乙型肝炎，如可參見中國專利申請第200610167110.2號等。
[0004]重組人GM-CSF (簡稱為rhGM-CSF)主要以注射劑(包括粉針劑)形式提供，也有外用液體制劑和噴霧劑等提供，如可參見中國專利申請第200510012840.0和200510103201.5號等。
[0005]在這些較早期的研究之后，GM-CSF的研究歸于平靜，沒有新的藥用用途被發(fā)現(xiàn)的預(yù)期，也缺乏積極性投入新的制劑的研究，更無法預(yù)期新的制劑與新的藥用用途的配合。
[0006]然而，本發(fā)明人堅持長期深耕于GM-CSF的研究，沒有受近十年來GM-CSF的研究趨勢的束縛，幸運地發(fā)現(xiàn)了GM-CSF在預(yù)防宮腔粘連術(shù)后的復(fù)發(fā)和提高妊娠率等方面可能有藥用價值的跡象，深入研究，設(shè)計出特別適合預(yù)防宮腔粘連術(shù)后的復(fù)發(fā)和提高妊娠率的藥物制劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于提供粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子，其適用于預(yù)防宮腔粘連術(shù)后的復(fù)發(fā)并能提高妊娠率。本發(fā)明的目的還在于提供包含上述GM-CSF的藥物組合物及其制備方法。另外，本發(fā)明的目的還在于提供上述GM-CSF的藥物應(yīng)用。
[0008]具體而言，在第一方面，本發(fā)明提供了粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子，其適用于預(yù)防宮腔粘連術(shù)后的復(fù)發(fā)并能提高妊娠率。優(yōu)選地，本發(fā)明的第一方面的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子是重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子。盡管rhGM-CSF在生物大分子結(jié)構(gòu)上是已知的，但是本發(fā)明人令人意外地發(fā)現(xiàn)了其(尤其是其優(yōu)化的藥物制劑)預(yù)防宮腔粘連術(shù)后的復(fù)發(fā)和提高妊娠率的新用途。
[0009]在第二方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含本發(fā)明第一方面的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子和藥學(xué)上可接受的載體。在本文中，“藥學(xué)上可接受的載體”指無毒固態(tài)、半固態(tài)或液態(tài)填充劑、稀釋劑、緩沖劑、保護(hù)劑、防腐劑、包裹材料或其他制劑輔料。根據(jù)本領(lǐng)域的公知技術(shù)，可以根據(jù)治療目的、給藥途徑的需要將藥物組合物制成各種劑型，優(yōu)選該組合物為單位劑量形式，如固體制劑(如片劑、膜劑、丸劑、膠囊、粉劑、粉針劑、或顆粒劑等)、液體制劑(如糖漿劑和乳液劑、消毒的注射用溶液或懸浮液、氣霧劑或液體噴劑、滴劑、或針劑等)、以及自動注射裝置或栓劑。本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選是子宮腔灌注劑，在本文中，可以被簡稱為宮腔灌注劑或灌注劑，其流動性介于注射用溶液和固體制劑之間，是半固體制劑，適合用于向子宮腔灌注。
[0010]優(yōu)選在本發(fā)明第二方面的藥物組合物中，藥學(xué)上可接受的載體包括羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和/或白蛋白，更優(yōu)選，藥學(xué)上可接受的載體包括羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和白蛋白。
[0011]進(jìn)一步地，優(yōu)選在本發(fā)明第二方面的藥物組合物中，羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和白蛋白的重量比為1.5?2.5:25?40:0.3?0.5:0.45?0.75:0.12?0.18:0.6?I，優(yōu)選為1.8?2.2:30?40: 0.35?0.45:0.55?0.65:0.13?0.16:0.7?0.9。在本發(fā)明的【具體實施方式】中，羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和白蛋白的重量比為2:35:0.4:0.6:0.15:0.8。
[0012]另外，優(yōu)選在本發(fā)明第二方面的藥物組合物中，藥學(xué)上可接受的載體還可以包括水。優(yōu)選羧甲基纖維素鈉和水的重量比為1.5?2.5:45?75，優(yōu)選為1.8?2.2:55?65，例如為約2:61。在本發(fā)明的【具體實施方式】中，配方中的水量為100 %的余量。
[0013]在第三方面，本發(fā)明提供了制備本發(fā)明第二方面的藥物組合物的方法，其包括:
[0014](I)混合羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯和尼泊金甲酯，加水溶脹；
[0015](2)任選補足水量;和，
[0016](3)滅菌后，加入白蛋白和本發(fā)明第一方面的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子，混合均勻。
[0017]本發(fā)明第三方面的方法制備的藥物組合物適合向子宮腔灌注。
[0018]優(yōu)選本發(fā)明第三方面的方法在步驟(3)后還包括分裝和/或封裝等過程。
[0019]在第四方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明第一方面的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子在制備用于預(yù)防宮腔粘連術(shù)后的復(fù)發(fā)的藥物中的應(yīng)用。宮腔粘連(IUA)又稱Asherman綜合征，是指各種原因?qū)е碌淖訉m內(nèi)膜基底層的嚴(yán)重?fù)p傷，引起子宮肌壁的相互粘連。當(dāng)前，宮腔粘連的主要治療手段是通過宮腔鏡手術(shù)分離粘連，然后將球囊或避孕環(huán)置入宮腔。在本文中，這些手術(shù)過程被統(tǒng)稱為宮腔粘連術(shù)。該治療方案的最大問題是高復(fù)發(fā)率，一般術(shù)后兩周或I月復(fù)查，復(fù)發(fā)率約為40?50%。本發(fā)明第一方面的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子能夠預(yù)防宮腔粘連術(shù)后的復(fù)發(fā)。
[0020]在第五方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明第一方面的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子在制備能提高妊娠率的藥物中的應(yīng)用?，F(xiàn)代社會，尤其是我國，由于計劃生育的實施、婦女生育年齡的延遲以及人工流產(chǎn)等因素，導(dǎo)致不孕不育率呈逐漸走高的趨勢，其中有相當(dāng)比例即使采用輔助生殖技術(shù)(如，試管嬰兒)仍然導(dǎo)致受孕失敗。本發(fā)明第一方面的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子能夠提高妊娠率，尤其是試管嬰兒的妊娠率。
[0021]在本發(fā)明第四或第五方面的應(yīng)用中，藥物可以以合適的藥物制劑形式來提供本發(fā)明第一方面的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子。優(yōu)選地，藥物是本發(fā)明第二方面的藥物組合物。
[0022]本發(fā)明的有益效果在于，本發(fā)明的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子，特別是以本發(fā)明的宮腔灌注劑的形式提供，能有效預(yù)防宮腔粘連術(shù)后的復(fù)發(fā)并能提高妊娠率。
[0023]為了便于理解，以下將通過具體的實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地描述。需要特別指出的是，具體實例僅是為了說明，并不構(gòu)成對本發(fā)明范圍的限制。顯然本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以根據(jù)本文說明，在本發(fā)明的范圍內(nèi)對本發(fā)明做出各種各樣的修正和改變，這些修正和改變也納入本發(fā)明的范圍內(nèi)。另外，本發(fā)明引用了公開文獻(xiàn)，這些文獻(xiàn)也是為了更清楚地描述本發(fā)明，它們的全文內(nèi)容均納入本發(fā)明進(jìn)行參考，就好像它們的全文已經(jīng)在本發(fā)明說明書中重復(fù)敘述過一樣。
【具體實施方式】
[0024]以下本文將通過具體的實施例來描述發(fā)明。如未特別指明之處，可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的《藥物制劑學(xué)》等手冊和相關(guān)藥物法規(guī)、規(guī)定(尤其是CFDA的相關(guān)臨床試驗指引)以及本文所引用的參考文獻(xiàn)中所列的方法來實施。另外，實施例中所使用的材料除有特別說明外，均可通過商業(yè)途徑從市場上購買。
[0025]實施例1.rhGM-CSF宮腔灌注劑的制備
[0026]配方量100%中，2%羧甲基纖維素鈉、35%甘油、0.4%吐溫-80,0.6%對羥基苯甲酸甲酯和0.15%尼泊金甲酯溶脹過夜，如有蒸發(fā)，次日補足水量，118°C、滅菌30分鐘，溫度在40 °C時加入0.8 %白蛋白及rhGM-CSF (每克輔料基質(zhì)中含有10yg rhGM-CSF)，攪拌均勻后放涼、封裝，即成。
[0027]實施例2.rhGM-CSF預(yù)防宮腔粘連術(shù)后復(fù)發(fā)的臨床試驗
[0028]知情同意的60例宮腔粘連患者隨機(jī)分成兩組，其中試驗組(30例)的患者在宮腔鏡下實施粘連宮腔組織銳性分離，術(shù)后宮腔灌注實施例1制備的rhGM-CSF灌注制劑5g，然后放置宮腔球囊;過48小時后取出宮腔球囊，然后再宮腔灌注實施例1制備的rhGM-CSF灌注制劑5g;
[0029]對照組(30例)與試驗組的宮腔鏡下手術(shù)方法一致，術(shù)后同樣放置球囊進(jìn)行擴(kuò)張，只是并未進(jìn)行宮腔灌注治療。
[0030]患者一月后復(fù)診，結(jié)果顯示，試驗組無一例宮腔粘連復(fù)發(fā)，即復(fù)發(fā)率為0%;而對照組有13例宮腔粘連復(fù)發(fā)，即復(fù)發(fā)率為43%。這表明，本發(fā)明的rhGM-CSF灌注制劑能夠有效預(yù)防宮腔粘連術(shù)后的復(fù)發(fā)。另外，使用中沒有需要停止試驗的不良反應(yīng)和副作用事件被報告。[0031 ] 實施例3.rhGM-CSF對提高妊娠率的臨床試驗
[0032]知情同意的78例先期試管嬰兒(IVF)失敗的患者隨機(jī)分成三組，其中:
[0033]試驗組1(28例患者)，口服戊酸雌二醇Smg/日，共10日進(jìn)行內(nèi)膜準(zhǔn)備;檢測卵泡達(dá)至IJ12mm后進(jìn)行宮腔處理，即輕微搔刮子宮內(nèi)膜+灌注實施例1制備的rhGM-CSF灌注制劑5g。
[0034]試驗組2(25例患者)，口服戊酸雌二醇8mg/日，共10日進(jìn)行內(nèi)膜準(zhǔn)備;檢測卵泡達(dá)至IJ12mm后進(jìn)行宮腔處理，即灌注實施例1制備的rhGM-CSF灌注制劑5g，但不進(jìn)行內(nèi)膜搔刮。
[0035]對照組(25例患者)，口服戊酸雌二醇Smg/日，共10日進(jìn)行內(nèi)膜準(zhǔn)備;未進(jìn)行任何宮腔處理。
[0036]然后，觀察患者行試管嬰兒的妊娠成功率，結(jié)果顯示，試驗組I共有14例患者受孕，妊娠率50%;試驗組2共有9例患者受孕，為36%;對照組共有6例患者受孕，妊娠率僅為24%。這表明，本發(fā)明的rhGM-CSF灌注制劑能夠提高妊娠率，尤其是有效促進(jìn)試管嬰兒的妊娠成功。另外，使用中沒有需要停止試驗的不良反應(yīng)和副作用事件被報告。
【主權(quán)項】
1.粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子，其適用于預(yù)防宮腔粘連術(shù)后的復(fù)發(fā)并能提高妊娠率。2.權(quán)利要求1所述的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子，其是重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子。3.藥物組合物，其包含權(quán)利要求1或2所述的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子和藥學(xué)上可接受的載體。4.權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其為宮腔灌注劑。5.權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其中，藥學(xué)上可接受的載體包括羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和/或白蛋白。6.權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其中，羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和白蛋白的重量比為1.5?2.5:25?40:0.3?0.5:0.45?0.75:0.12?0.18:0.6?I，優(yōu)選為1.8?2.2:30?40:0.35?0.45:0.55?0.65:0.13?0.16:0.7?0.9，例如為 2:35:0.4:0.6:0.15:0.8。7.權(quán)利要求5或6所述的藥物組合物的制備方法，其包括: (1)混合羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯和尼泊金甲酯，加水溶脹； (2)任選補足水量;和， (3)滅菌后加入白蛋白和權(quán)利要求1或2所述的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子，混合均勻。8.權(quán)利要求1或2所述的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子在制備用于預(yù)防宮腔粘連術(shù)后的復(fù)發(fā)和/或能提高妊娠率的藥物中的應(yīng)用。9.權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其中妊娠率是試管嬰兒的妊娠率。10.權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其中藥物是權(quán)利要求3至6之一所述的藥物組合物。
【文檔編號】A61P15/08GK105859869SQ201610172455
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年3月24日
【發(fā)明人】金磊, 王思勤, 岳本亮, 劉云杉
【申請人】長春金賽藥業(yè)有限責(zé)任公司