一種氨曲南的藥物組合物及其醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種氨曲南的藥物組合物及其醫(yī)藥用途，本發(fā)明提供的氨曲南的藥物組合物中含有氨曲南和一種從細(xì)辛的干燥根莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，氨曲南和該天然產(chǎn)物單獨作用時，防治缺血再灌注損傷效果一般；二者聯(lián)合作用時，防治缺血再灌注損傷效果顯著提高，可以開發(fā)成防治心肌缺血再灌注損傷的藥物。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實質(zhì)性特點和顯著的進步。
【專利說明】
一種氨曲南的藥物組合物及其醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及氨曲南的新用途，具體涉及一種氨曲南的藥物組 合物及其醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 氨曲南為一種單酰胺環(huán)類的新型0-內(nèi)酰胺抗生素?？咕V主要包括革蘭陰性菌， 諸如大腸桿菌、克雷白桿菌、沙雷桿菌、奇異變形桿菌、吲哚陽性變形桿菌、枸櫞酸桿菌、流 感嗜血桿菌、綠膿桿菌及其他假單胞菌、某些腸桿菌屬、淋球菌等。與頭孢他定、慶大霉素相 比、對產(chǎn)氣桿菌、陰溝腸桿菌的作用高于頭孢他定，但低于慶大霉素;對綠膿桿菌的作用低 于頭孢他定、與慶大霉素相近;對其他病原菌的作用都較兩者為高(對某些菌則與頭孢他定 接近）。對于質(zhì)粒傳導(dǎo)的0-內(nèi)酰胺酶，該品較第3代頭孢菌素為穩(wěn)定?？诜晃眨∽g，l 小時血濃度達(dá)峰值，約為46μg/ml，半衰期約1.8小時;靜注lg，5分鐘血藥濃度約為125y/ml， 1小時約為49μg/ml，半衰期約1.6小時。體內(nèi)分布較廣，在膿皰液、心包液、胸水、滑膜液、膽 汁、骨組織、腎、肺、皮膚等部位有較高濃度;在前列腺、子宮肌肉、支氣管分泌物中也有一定 濃度、在腦脊液中濃度低。主要由尿排泄，在尿中原形藥物的濃度甚高。在乳汁中的濃度甚 低，為血藥濃度的1 %，平均0.3μg/ml，一日間母乳內(nèi)總量約0.3mg。該品為第一個應(yīng)用于臨 床的單環(huán)0內(nèi)酰胺類抗生素。主要作用于需氧或兼性厭氧革蘭陰性細(xì)菌和綠膿桿菌。腦膜炎 球菌、淋球菌、摩拉卡他菌和流感桿菌的不產(chǎn)或產(chǎn)0內(nèi)酰胺酶菌株均對該品敏感。90 %以上 的大腸桿菌、肺炎桿菌、變形桿菌屬、普羅菲登菌屬、摩根菌屬、聚團腸桿菌、沙門菌屬、志賀 菌屬、枸椽酸菌屬可為lmg/L或以下的該品所抑制，其對綠膿桿菌的MIC50和MIC90分別為 3. lmg/L和2.5mg/L。但不動桿菌屬、假單胞菌屬(除綠膿桿菌外）、革蘭陽性菌或厭氧菌均耐 藥。氨曲南主要與細(xì)菌的青霉素結(jié)合蛋白3(PBP3)結(jié)合而抑制細(xì)胞壁的合成，使細(xì)胞迅速溶 解死亡。該品對細(xì)菌產(chǎn)生的質(zhì)粒介導(dǎo)和大部分染色體介導(dǎo)的0內(nèi)酰胺酶高度穩(wěn)定，因而許多 耐藥菌對該品仍呈敏感。
[0003] 目前，尚未見氨曲南及其藥物組合物與缺血再灌注損傷的相關(guān)報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種氨曲南的藥物組合物，該藥物組合物中含有氨曲南和 一種從細(xì)辛中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，氨曲南和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同防治缺血再 灌注損傷。
[0005] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0006] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008] -種氨曲南的藥物組合物，包括氨曲南、如上所述的化合物（I)和藥學(xué)上可以接受 的載體。
[0009] 如上所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將細(xì)辛的干燥根莖粉 碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a) 中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用70%乙醇洗脫12個柱 體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙醇洗脫濃縮 物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到 4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠 分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液，洗脫液 減壓濃縮得到化合物(I)。
[0010] 進一步地，步驟(a)用75%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011] 進一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0012] 如上所述的化合物(I)在制備防治缺血再灌注損傷的藥物中的應(yīng)用。
[0013] 如上所述的氨曲南的藥物組合物在制備防治缺血再灌注損傷的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 本發(fā)明的優(yōu)點：
[0015] 本發(fā)明提供的氨曲南的藥物組合物中含有氨曲南和一種從細(xì)辛中分離得到的結(jié) 構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，氨曲南和該天然產(chǎn)物單獨作用時，防治缺血再灌注損傷效果一般;二者 聯(lián)合作用時，防治缺血再灌注損傷效果顯著提高，可以開發(fā)成防治缺血再灌注損傷的藥物。 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實質(zhì)性特點和顯著的進步。
【具體實施方式】
[0016] 下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0017] 實施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0018] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0019]分離方法：（a)將細(xì)辛的干燥根莖(5kg)粉碎，用75 %乙醇熱回流提取(20L X 3次）， 合并提取液，濃縮至無醇味(4L)，依次用石油醚(4LX3次）、乙酸乙酯(4LX3次)和水飽和的 正丁醇(4LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用70%乙醇 洗脫12個柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙 醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1 (8個柱體積）、20:1 (8個柱體積）、10:1 (8個柱體積)和5:1(10個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組 分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1(8個柱體積）、5:1(10個柱體積)和2:1(5個 柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合 的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (198mg，HPLC歸一化純度大于98% )。
[0020] 結(jié)構(gòu)確證:冊431-]\^顯示[]\?1]+為111/2 457.2442，結(jié)合核磁特征可得分子式為 C27H36〇6，不飽和度為10。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)SH(ppm，CD 30D，500MHz):H-1 (6 ? 76，br，s)，H-4 (5.96，s)，H-5(5.38，s)，H-8(3.25，m)，H-9(1.12，s)，H-10(2.67，d，J=11.4Hz)，H-11 (2.08，m)，H-12(2.83，dd，J=11.9,5.3Hz)，H-12(3.11，dd，J=11.9,7.7Hz)，H-14(2.69， dd，J=12.4，13.3Hz)，H-14(2.92，dd，J= 12.4，3.6Hz)，H-16( 1.02，d，J = 6.7Hz)，H-18 (2.81，m)，H-18(3.27，dd，J=17.1，1.9Hz)，H-20(2.64，m)，H-21(1.34，m)，H-21(1.67，m)， H-22(1.20，m)，H-22(1.26，m)，H-23(1.24，m，2H)，H-24(1.24，m，2H)，H-25(1.25，m，2H)，H-26(0.88，t，J = 7.2Hz)，H-27(1.21，d，J = 7.2Hz);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)心（ppm，CD30D， 125MHz):143.3(CH，卜C)，156.6(C，3-C)，110.8(CH，4-C)，144.2(C，4a-C)，107.3(CH，5-C)， 199.8(C，6-C)，73.4(C，7-C)，40.5(CH，8-C)，120.3(C，8a-C)，21.2(CH 3,9-C)，62.1(CH，10-C)，16.1(CH，11-C)，48.6(CH2，12-C)，193.5(C，13-C)，59.8(CH 2，14-C)，207.1(C，15-C)， 20.3(CH3，16-C)，51.1(CH2，18-C)，206.3(C，19-C)，46.3(CH，20-C)，32.7(CH2,2hC)，27.6 (CH2,22-C)，29.0(CH 2,23-C)，31.3(CH2,24-C)，22.2(CH2,25-C)，14.2(CH3,26-C)，16.6 (CH 3,27-C)。紅外波譜中的1710cm-1吸收帶與UV譜中的224nm吸收帶表明該化合物含有a，f3-不飽和羰基結(jié)構(gòu)。 13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有27個碳信號，包括四個甲基，八個亞甲基， 七個次甲基(三個烯烴碳），以及八個季碳(一個連氧碳，四個羰基碳和三個烯烴碳），以上功 能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合物為三環(huán)結(jié)構(gòu)。 1H-NMR譜結(jié)合HSQC譜顯示四個甲基質(zhì)子 信號SH 1 ? 12(3H，s)、l .02(3H，d，J = 6.5Hz)、0.88(3H，t，J = 7.2Hz)、1.21(3H，d，J = 7.2泡），八組亞甲基質(zhì)子信號知3.11(111，(1(1，1=11.9,7.7他）與2.83(111，(1(1，1=11.9， 5.3泡）、2.92(111，(1(1，了=12.4,3.6抱）與2.69(111，(1(1，了 = 12.4，13.3抱）、3.27(111，(1(1，了 = 17.1，1.9他）與2.81(111，111)、1.77(111，111)與1.34(111，111)、1.26(111，111)與1.20(111，111)、1.24 (2H，m)、1.24(2H，m)、1.25(2H，m)，三個烯烴質(zhì)子信號S H 6.81(lH，s)、6.05(lH，s)、5.38 (lH，s)，四個次甲基質(zhì)子信號SH 3.25(lH，m)、2.67(lH，d，J= 11.4Hz)、2.08(lH，m)，2.64 (lH，!^。1!!-1!! COSY譜中存在H-10/H-ll/H2-12、H3-27/H-20/H2-21/H2-22/H2-23/H2-24/H2-25/H3-26 相關(guān)信號，結(jié)合 HMBC 譜中顯示的 H-l 與 C-4a、C-8a 和 C-8，H-4 與 C-3、C-4a 和 C-8a，H-5 與 C-4、C-4a 和 C-6，H-10 與 03、011、015和(：-16，112-12與(：-11、(：-13、(：-14和(：-16，112-14與 C-12、C-13和C-15，H 2-18與C-8和C-19，H-20與C-19相關(guān)信號，通過上述NMR譜中的相關(guān)信息 可以構(gòu)建該化合物的連接方式，并且根據(jù)上述波譜數(shù)據(jù)確認(rèn)該化合為Cohaerin衍生物。綜 合氫譜、碳譜、HMBC譜和R0ESY譜，以及文獻關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如 下所示，立體構(gòu)型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致。
[0021]該化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)式及碳原子編號如下：
[0023]實施例2:對大鼠心肌缺血/再灌注損傷的保護作用 [0024] 1、材料與方法
[0025] 1.1動物
[0026] SD大鼠，SPF級，體質(zhì)量(250±20)g，罕忒各半。上海斯萊克實驗動物公司提供，動物 許可證號：SCXK(滬)2007-000,批號：20120510。
[0027] 1.2藥物與試劑
[0028]通心絡(luò)膠囊由以嶺藥業(yè)提供。使用時加生理鹽水稀釋成所需濃度。水合氯醛，國藥 集團化學(xué)試劑有限公司。乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(S0D)試劑盒均 由南京建成生物工程研究所提供。
[0029] 1.3分組及給藥
[0030] 60只大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、氨曲南組、化合物（I)組、氨曲南與化合物 (I)組合物組、陽性對照組，每組10只。
[0031] 陽性對照組:通心絡(luò)膠囊100mg ? kg-1 ? d-1;
[0032] 氨曲南組:氨曲南20mg ? kg-1 ? d-S [0033]化合物（I)組:化合物（I)20mg ? kg-1 ? d-S
[0034] 氨曲南與化合物（I)組合物組:氨曲南20mg ? kg-1 ? d-k化合物（I)20mg ? kg-1 ? d -1 ? ，
[0035] 手術(shù)前灌胃（ig)給藥，連續(xù)10d。假手術(shù)組和模型組分別灌胃（ig)給予相應(yīng)容積的 生理鹽水。
[0036] 1.4大鼠心肌缺血/再灌注損傷模型的制備
[0037]實驗前禁食12h，10%水合氯醛ip麻醉(3.5ml ? kg<)大鼠，仰臥位固定，氣管插管， 接人工呼吸機(呼吸頻率:70次/min，潮氣量:20ml，呼吸時比1:1)。開胸結(jié)扎冠脈左前降支， 胸骨左側(cè)2_切開皮膚，鈍性分離肌肉見肋骨，在三四肋間，用拉鉤拉開胸壁，小心剪開心包 膜，在左心耳下緣3~4mm進針，進針深約1.5mm，斜向右上方肺動脈圓錐方向進針，針距約3 ~4mm。穩(wěn)定lmin后，收緊結(jié)扎線，30min后輕拉松結(jié)線，擴開血管再灌注，縫合。假手術(shù)組僅 分離前室間支，不結(jié)扎。
[0038] 1.5大鼠血標(biāo)本和組織標(biāo)本采集
[0039] 大鼠心肌缺血再灌注24h后，頸總動脈取血，并迅速取出心臟，去除心臟內(nèi)的淤血， 中性福爾馬林固定或加生理鹽水勻漿，離心取上清，分裝，置-20 °C冰箱凍存?zhèn)溆?。血液離心 取上清，分裝，置_20°C冰箱凍存?zhèn)溆谩Ｈ繉嶒灲Y(jié)束后嚴(yán)格按試劑盒操作測LDH、S0D、MDA等 生化指標(biāo)。
[0040] 1.6免疫組織化學(xué)檢測
[0041] 每組中取2只大鼠心臟用10%福爾馬林固定，經(jīng)脫水、石蠟包埋，常規(guī)切片4讓。采 用快速免疫組化方法，即用型快速免疫組化Max Vision TM試劑盒，檢測大鼠心肌中 caspase-3蛋白表達(dá)的水平，采用PBS來代替一抗作為陰性對照。
[0042] 1.7統(tǒng)計學(xué)方法
[0043] 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料用x±s表示，多組間比較采用 方差分析，組間比較用t檢驗。
[0044] 2、實驗結(jié)果
[0045] 2.1對心肌缺血/再灌注大鼠生化指標(biāo)的影響
[0046] 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清中LDH活力和MDA含量明顯升高，S0D含量明顯降 低，差異有顯著性(P<〇.01)。與模型組比較，氨曲南組、化合物（I)組均能明顯減少LDH活 力，提高S0D含量，降低MDA含量，差異有顯著性(P<0.05);與模型組比較，氨曲南與化合物 (I)組合物組能明顯減少LDH活力，提高S0D含量，降低MDA含量，差異有顯著性(P<0.01)，接 近于陽性對照組。結(jié)果見表1。
[0047]表1心肌缺血/再灌注大鼠血清生化指標(biāo)的變化
[0049] 2.2對心肌缺血/再灌注大鼠心肌細(xì)胞caspase-3蛋白的影響
[0050] Caspase-3蛋白心肌細(xì)胞質(zhì)黃色或棕黃色為陽性細(xì)胞表達(dá)。與假手術(shù)組比較，模型 組caspase-3蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.01 )，氨曲南組、化合物（I)組均能明顯降低心肌細(xì)胞 caspase-3蛋白表達(dá)（P<0.05)，氨曲南與化合物（I)組合物組能明顯降低心肌細(xì)胞 caspase-3蛋白表達(dá)(P < 0.01);提示氨曲南和化合物（I)可抑制缺血/再灌注誘導(dǎo)的大鼠心 肌細(xì)胞caspase-3蛋白表達(dá)，減少心肌細(xì)胞凋亡；而且氨曲南和化合物（I)之間還存在協(xié)同 作用。結(jié)果見表2。
[0051] 表2心肌缺血/再灌注大鼠心肌細(xì)胞caspase-3蛋白的表達(dá)情況
[0053]以上結(jié)果表明，氨曲南、化合物（I)均可以防治心肌缺血/再灌注大鼠心肌細(xì)胞損 傷，而且氨曲南和化合物（I)之間還存在明顯的協(xié)同作用，可以協(xié)同防治心肌缺血/再灌注 大鼠心肌細(xì)胞損傷。
[0054]上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和保護范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物α)，2. -種氨曲南的藥物組合物，其特征在于:包括氨曲南、如權(quán)利要求1所述的化合物（I) 和藥學(xué)上可以接受的載體。3. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將細(xì) 辛的干燥根莖粉碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油 醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用 70%乙醇洗脫12個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b) 中70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比 為8:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基 硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱 體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用75%乙醇熱回 流提取，合并提取液。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。6. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備防治缺血再灌注損傷的藥物中的應(yīng)用。7. 權(quán)利要求2所述的氨曲南的藥物組合物在制備防治缺血再灌注損傷的藥物中的應(yīng) 用。
【文檔編號】C07D311/76GK105820150SQ201610163957
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2016年3月22日
【發(fā)明人】李晨露
【申請人】李晨露