用于檢測宮頸癌的多肽、檢測器件和檢測試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，特別是可用于宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診斷的多 肽、包含該多肽的檢測器件的檢測試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 抗原一抗體檢測是免疫檢測的常用檢測方法。大量研究表明，血清或血漿中的腫 瘤相關(guān)抗原能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生自身抗體，在眾多患者血清中既存在腫瘤抗原，也存在針對該 腫瘤抗原的自身抗體。因此，既可以利用抗體檢測腫瘤抗原，也可以利用抗原檢測腫瘤抗原 的自身抗體，但利用腫瘤自身抗體檢測腫瘤的特異性和敏感性均比利用腫瘤抗原檢測腫瘤 要高得多。很多腫瘤相關(guān)抗原不僅在腫瘤患者體內(nèi)存在，在正常人體內(nèi)也存在，因此檢測腫 瘤相關(guān)抗原作為診斷依據(jù)可信性差。而腫瘤自身抗體在正常人體內(nèi)含量很低檢測不到或根 本不存在，若體內(nèi)腫瘤自身抗體水平明顯增高，則表明體內(nèi)存在異常免疫情況，表明體內(nèi)相 關(guān)抗原水平發(fā)生波動，預(yù);^疾病的存在或原有疾病加重。
[0003] 近年來的研究表明，在惡性腫瘤體積發(fā)展到可用現(xiàn)代影像學(xué)技術(shù)檢出之前3-5 年，患者血中可出現(xiàn)高濃度的腫瘤相關(guān)抗原自身抗體。因此，檢測血中腫瘤相關(guān)抗原自身抗 體具有預(yù)測腫瘤發(fā)病風(fēng)險和早期診斷腫瘤的重要價值。是腫瘤臨床診斷領(lǐng)域的重點發(fā)展方 向之一。在國外已有診斷肺癌和乳腺癌的早期診斷試劑盒市售。然而，目前所報道的自身 抗體檢測方法敏感度低，特異性差，假陰性比率可高達(dá)50%以上。其主要原因是由于每一種 腫瘤相關(guān)抗原自身抗體在癌癥患者中的陽性檢測率平均在10%左右。如何提高診斷試劑敏 感度是當(dāng)前需要函待解決的關(guān)鍵問題。比較行之有效的方法是尋找新的可充當(dāng)腫瘤標(biāo)志物 的自身抗原，然后與現(xiàn)有己知的腫瘤相關(guān)抗原自身抗體組合成具有敏感度高和特異性強(qiáng)的 診斷試劑盒。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種多肽、包含該多肽的檢測器件、以及包含該檢測器件 的檢測試劑盒，它們對宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診斷有用的。本發(fā)明目的在于提供該 多肽在制備可用于宮頸癌臨床輔助診斷的檢測試劑盒中的用途。
[0005] 即，本發(fā)明包含下述技術(shù)方案：
[0006] L 一種多肽，其氨基酸序列如 SEQ ID NO :1 所示，即：SCQKCDPSCPNG SCWGAGEE。
[0007] 2. -種檢測器件，其包括：
[0008] 固體載體，以及
[0009] 連接于該固體載體上的權(quán)利要求1所述的多肽。
[0010] 3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測器件，其中，所述固體載體是iPDMS薄膜。
[0011] 4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測器件，其用于宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診斷。
[0012] 5. -種檢測試劑盒，其包括權(quán)利要求2-4中任一項所述的檢測器件。
[0013] 6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測試劑盒，其用于宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診 斷。
[0014] 7.權(quán)利要求1所述的多肽在制備檢測試劑盒中的用途。
[0015] 8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其中，所述檢測試劑盒用于宮頸癌的早期篩查和 臨床輔助診斷。
[0016] 9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其中，所述檢測試劑盒包括權(quán)利要求2-4中任一項 所述的檢測器件。
[0017] 將本發(fā)明應(yīng)用于宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診斷，能夠取得令人滿意的效果。
【附圖說明】
[0018] 圖I iPDMS薄膜的制作過程進(jìn)行說明的示意圖。
[0019] 圖2說明多肽微陣列點樣模式的示意圖。
[0020] 圖3是顯示對健康正常人或非宮頸癌病人血清進(jìn)行檢測的結(jié)果的照片。
[0021] 圖4是顯示對宮頸癌病人血清進(jìn)行檢測的結(jié)果的照片。
【具體實施方式】
[0022] 本發(fā)明的多肽
[0023] 在另一個方面中，本發(fā)明提供對宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診斷有用的多肽， 由SEQ ID N0:1所示的氨基酸序列構(gòu)成，即：SCQKCDPSCPNGSC WGAGEE。如實施例所示，本發(fā) 明的多肽對宮頸癌病人的血清呈陽性反應(yīng)，而對健康正常人或非宮頸癌病人血清呈陰性反 應(yīng)。因此，本發(fā)明的多肽作為宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診斷工具是有用的。本發(fā)明的 多肽可以用于制造可用于宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診斷的檢測器件（例如下述的本 發(fā)明的檢測器件）或檢測試劑盒（例如下述的本發(fā)明的檢測試劑盒）。
[0024] 本發(fā)明的多肽可以適宜采用（1)化學(xué)合成方法、或（2)酶反應(yīng)合成方法等公知方 法來獲得，但不限于此，其中化學(xué)合成更為簡便。在化學(xué)合成本發(fā)明的多肽情況下，通過使 用肽合成儀合成或者半合成該多肽來進(jìn)行。作為化學(xué)合成方法，可以列舉出例如肽固相合 成法等。這樣合成的肽可以采用常規(guī)手段例如離子交換色譜、反相高效液體色譜、親和色譜 等進(jìn)行純化。這樣的肽固相合成方法以及其后的肽純化都是本技術(shù)領(lǐng)域公知的。
[0025] 此外，在通過酶反應(yīng)生產(chǎn)本發(fā)明的多肽的情況下，可以采用例如國際公開小冊子 W02004/011653號所述的方法。即，可以這樣來生產(chǎn)：將一方的氨基酸或二肽的羧基末端被 酯化或酰胺化而得到的氨基酸或二肽、與氨基酸處于游離狀態(tài)的氨基酸（例如羧基保護(hù)的 氨基酸）在肽合成酶的存在下進(jìn)行反應(yīng)，生成的二肽或三肽。作為肽合成酶，可以列舉出： 具有生成肽的能力的微生物的培養(yǎng)物、由該培養(yǎng)物分離的微生物菌體、或該微生物的菌體 處理物、或該微生物來源的肽合成酶。
[0026] 而且，除了上述的酶方法、化學(xué)合成方法以外，還可以采用例如基因工程方法來生 產(chǎn)本發(fā)明的多肽。
[0027] 本發(fā)明的多肽的氨基酸序列可以采用常規(guī)的方法進(jìn)行分析和確認(rèn)，例如可以利用 質(zhì)譜、色譜等方法來進(jìn)行分析和確認(rèn)。
[0028] 本發(fā)明的檢測器件
[0029] 在另一方面中，本發(fā)明還提供一種檢測器件（本發(fā)明的檢測器件），其包括固體載 體、以及連接于該固體載體上的本發(fā)明的蛋白質(zhì)或本發(fā)明的多肽。所述檢測器件對于宮頸 癌的早期篩查和臨床輔助診斷是有用的。
[0030] 在本發(fā)明中，對固體載體沒有特殊限制，只要是作為固體或不溶性材料（例如是 可以通過過濾、沉淀、磁性分離等從反應(yīng)混合物中分離的材料）的載體即可。
[0031] 構(gòu)成固體載體的材料包括但不限于：硅膠（聚二甲基硅氧烷，PDMS)、纖維素、特 氟隆TM、硝基纖維素、瓊脂糖、葡聚糖、殼聚糖、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚酯、聚碳酸酯、聚 酰胺、聚丙烯、尼龍、聚偏二氟乙烯、膠乳、二氧化硅、玻璃、玻璃纖維、金、鉑、銀、銅、鐵、不銹 鋼、鐵氧體、硅晶片、聚乙烯、聚乙烯亞胺、聚乳酸、樹脂、多糖類、蛋白（白蛋白等）、碳或它 們的組合等。
[0032] 固體載體的形狀包括但不要限于：珠子、磁珠、薄膜、微細(xì)管、濾膜、板、微量板、碳 納米管、傳感器芯片等。正如本技術(shù)領(lǐng)域公知的那樣，薄膜或板等平坦的固體載體上可以設(shè) 置凹坑、溝槽、濾膜底部等。
[0033] 在本發(fā)明中，磁珠可以具有約25nm_約Imm范圍的球體直徑。在優(yōu)選的實施方式 中，磁珠具有約50nm_約10 μπι范圍的直徑。磁珠的尺寸可以根據(jù)特定的用途來進(jìn)行選擇。
[0034] 在本發(fā)明中，由Sepharose等高交聯(lián)球形瓊脂糖制成的珠子具有約24 μm-約 165 μ m范圍的直徑。優(yōu)選地，高交聯(lián)球形瓊脂糖珠具有約24 μ m-約44 μ m范圍的直徑。高 交聯(lián)球形瓊脂糖珠的尺寸可以根據(jù)特定的用途來進(jìn)行選擇。
[0035] 具有疏水性表面的固體載體的例子包括可從Polysciences，Warrington，PA或 Spherotech，Liberville，IL購買的制品等聚苯乙稀膠乳珠。
[0036] 二氧化硅（SiO2)-處理或二氧化硅（SiO2)基的固體載體的例子包括可從 Polysciences，Warrington，PA購買的超常磁性二氧化娃珠等，其可以用于捕捉核酸（例如 DNA)?；蛘撸€可以使用可從Dynal Biotech購買的M-280等。
[0037] 具有親水性表面的磁珠可用于捕捉增殖期的細(xì)菌細(xì)胞、核酸以及其它成分。作為 該磁珠的例子，可以列舉出Polys