且影響著宿主對腫瘤的應(yīng)答。腫瘤發(fā)展的前提是原位增生腫瘤細(xì)胞，上述血管生成是腫瘤生長的必要條件，而整合素可以通過多條途徑激活VEGF信號通路來調(diào)控腫瘤血管的生成。作為跨膜粘連蛋白，多種整合素在腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中出現(xiàn)高表達(dá)。整合素激活后結(jié)合配基，從而會接通細(xì)胞內(nèi)外信號的傳遞。整合素信號一方面影響胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)，促進FAK激酶介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)，激活有絲分裂原蛋白激酶(ΜΑΡΚ)，調(diào)控VEGF的表達(dá)，并在血管內(nèi)皮細(xì)胞受體(VEGFR)胞內(nèi)其他相關(guān)結(jié)合蛋白的磷酸化過程有關(guān)鍵性的調(diào)節(jié)作用；另一方面影響VEGF的釋放以及其與血管內(nèi)皮細(xì)胞受體的結(jié)合。VEGF作為內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂的特異性誘導(dǎo)劑，能夠結(jié)合VEGF受體胞外區(qū)的Ig結(jié)構(gòu)域，促進受體胞內(nèi)激酶區(qū)一系列的磷酸化，活化MAPK，進而結(jié)合胞內(nèi)信號分子，影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、迀移?，F(xiàn)今研究較多的與VEGF及新生血管有關(guān)的整合素是α V β3和α V β5。同時，整合素還直接參與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞惡化過程:一方面可調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，幫助其穿越血管內(nèi)皮屏障；另一方面調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞分泌粘附分子，如1-CAM，促進腫瘤細(xì)胞與血液循環(huán)系統(tǒng)中細(xì)胞的粘附，協(xié)助腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，從而實現(xiàn)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移。此夕卜，整合素與腫瘤治療過程中出現(xiàn)的抗藥性也有一定關(guān)系，其可以通過直接或間接方式調(diào)控并促進腫瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，從而影響腫瘤細(xì)胞對放化療產(chǎn)生的抗藥性。目前研究表明，影響腫瘤血管生成的整合素主要包括4種:ανβ3、ανβ5、α 5β 1和α2β1。其中α ν β 5被認(rèn)為是TNF- α和VEGF促進腫瘤血管生成所必需，并可以促進腫瘤血管生成啟始及血管內(nèi)皮細(xì)胞的迀移。該蛋白分子作為血管內(nèi)皮細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的橋梁，通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附、迀移、增殖等功能，在腫瘤血管生成的過程中發(fā)揮著重要的作用。
[0008]基于整合素在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起的重要作用，以整合素為靶點進行抗腫瘤藥物的研發(fā)及相應(yīng)治療方法的開展已成為近幾年來腫瘤治療的熱點。當(dāng)前以整合素為靶點的抗腫瘤藥物主要分為以下幾類:①整合素抗體類藥物；②含有與整合素配基結(jié)合有高親和力結(jié)合序列的抗腫瘤藥物，其中以含RGD序列(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)的小分子多肽最為典型；③另外，還有以整合素為靶點的其他類藥物等。其中一部分藥物已順利進入臨床研究階段。盡管到目前為止，還未見此類藥物上市的報道，但其潛在具有良好的藥效作用以及對于克服細(xì)胞毒療法所帶來的特異性低、耐受性差、對正常組織毒性大等缺點有很大的優(yōu)勢，因而顯示出巨大的應(yīng)用前景和市場潛力。
[0009]目前針對整合素研發(fā)的抗腫瘤抗體類藥物主要有:①Vitaxin (MED1-523或LM609)，是由Medlmmune公司研究開發(fā)的整合素α Vβ 3的人源化單克隆抗體。對一些晚期實體腫瘤和腎癌(I期臨床試驗)效果好且毒性小。另外，在轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的II期臨床試驗中Vitaxin也具有一定效果。目前該抗體在惡性黑色素瘤、前列腺癌和小腸癌中完成了臨床研究。②Abegrin(MEDI_522或Etaracizumab)，是對Vitaxin的改進。臨床前研究發(fā)現(xiàn)，其除具有抗腫瘤血管生成活性外，Abegrin還能直接作用于腫瘤細(xì)胞并通過抑制破骨細(xì)胞的粘附影響受損的骨質(zhì)吸收，達(dá)到有效減少骨轉(zhuǎn)移的作用；@V0l0Ciximab( M200)是由FOL/B1gen Idee公司研究開發(fā)的整合素α5β1的單克隆抗體。它是一種嵌合的單克隆抗體，能夠阻斷纖連蛋白與整合素α5β1的結(jié)合，并引起增殖內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，能夠抑制腫瘤血管生成及腫瘤細(xì)胞的生長。在對晚期實體瘤的I期臨床試驗中，Volociximab呈現(xiàn)出良好的耐受性和臨床效果[43]。目前，Volociximab已進入實體瘤的II期臨床研究階段。在對晚期上皮卵巢癌和早期腹膜癌的II期臨床試驗中，單獨使用Volociximab每周給藥一次的療法呈現(xiàn)出高效、安全、耐受性好等特點[45] 頂GN388是一種新穎的抗體-藥物復(fù)合物，由整合素α V亞基的完全人源化抗體與具有殺傷癌細(xì)胞作用的DM4共價連接而成，其作用革Ε位點分布廣泛，臨床前研究顯示其具有抗血管生成和細(xì)胞毒雙重效應(yīng)，目前正處于晚期實體瘤I期臨床試驗階段。此外，還有一些整合素抗體類藥物尚處于臨床前研究階段。如以整合素ανβ6為靶點的單克隆抗體6.3G9，其除了作用于整合素外，還能抑制TGF0信號通路，在體內(nèi)外均能顯著抑制人咽喉癌細(xì)胞的增殖。
[0010]整合素能與多種保守氨基酸序列有高親和力結(jié)合，其中，RGD序列(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)最為典型。含有RGD序列的化合物或多肽能與ανβ3、ανβ5、α5β1等識別RGD序列的整合素特異性結(jié)合并抑制其生物學(xué)功能，阻滯該受體與細(xì)胞外基質(zhì)的反應(yīng)，并可抑制腫瘤生長[46，47]。目前以RGD序列為基礎(chǔ)開發(fā)的小肽類整合素拮抗分子主要有:①S247，是整合素α νβ 3的阻斷劑，目前處于臨床前研究和EDSM-Y，其作用靶位點為整合素ανβ3。這些多肽在體內(nèi)外實驗中均表現(xiàn)出抗血管生成與抗腫瘤活性。另外，也有一些不含RGD序列的多肽類整合素抑制劑，如ΑΤΝ-161 (針對α 5 β 1)。在I期臨床試驗中ATN-161的抗腫瘤效果、耐受性及安全性均良好；目前，ATN-161正處于II期臨床研究階段。此外，一些非肽類整合素拮抗劑也顯示具有抗腫瘤轉(zhuǎn)移的作用，如PSK1404等。
[0011]Cilengitide是以整合素α νβ 5為靶點開發(fā)的一種具有環(huán)狀多肽cyclo(RGDfV)結(jié)構(gòu)的小分子化合物，由EMD/Merck KGaA公司研究開發(fā)。其能夠阻斷整合素介導(dǎo)的細(xì)胞粘附和迀移，其作用靶點為整合素ανβ3和α νβ5，含有與整合素高親和力結(jié)合的序列(RGD序列)。在臨床前研究發(fā)現(xiàn)，其能夠調(diào)控神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞的性狀，維持細(xì)胞在生長因子調(diào)控下的存活；另外在動物模型中也發(fā)現(xiàn)了其對新生血管生成有抑制作用，同時在不明顯影響已有血管數(shù)量的情況下使腫瘤生長明顯減緩；同時還發(fā)現(xiàn)Cilengitide能夠抑制人類內(nèi)皮細(xì)胞的增生與分化，這也是其抗血管生成的一種機制。在神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的I期、復(fù)發(fā)性神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤II期臨床研究顯示，Cilengitide抗腫瘤效果顯著且毒性及副作用小。但遺憾的是，Cilengitide在神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤III期臨床試驗研究發(fā)現(xiàn)未能提高患者的生存率，從而宣告失敗。這說明針對整合素的抗新生血管形成和抗腫瘤藥物開發(fā)具有復(fù)雜性和挑戰(zhàn)性，同時也揭示用新的思路和切入點開發(fā)新型針對整合素的抗新生血管形成和抗瘤藥物的必要性和迫切性。
[0012]以上所述針對整合素的抗體或小分子拮抗劑都是根據(jù)整合素胞外區(qū)域設(shè)計的，但目前針對整合素胞內(nèi)序列的藥物設(shè)計和相關(guān)研究還處于空白。由于整合素介導(dǎo)的細(xì)胞信號通路是雙向的(由內(nèi)至外和由外至內(nèi))，而雙向信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)都是通過整合素α/β胞內(nèi)序列介導(dǎo)的。尤其是整合素的β胞內(nèi)序列，不同成員之間含有高度保守的位點；并且，β胞內(nèi)序列具有與多種胞內(nèi)信號蛋白因子的結(jié)合位點，如Kindlin，β 3-endonexin, Src等，而這些信號分子在新生血管形成中可能起到重要的調(diào)控作用。比如:①Kindi in-1和Kindi in-2的表達(dá)與多種實體瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用；Kindi in-2和Kindi in_3表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞中并且參與調(diào)控血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附，迀移和新生血管的形成；②在低氧條件下，β 3-endonexin通過HIF途徑起到抗血管形成的作用，過量表達(dá)β 3-endonexin降低了低氧誘導(dǎo)的HIF-1 a mRNA水平，進而抑制了 HIF的激活，這樣便抑制了內(nèi)皮細(xì)胞血管新生的過程Src激酶家族屬胞質(zhì)酪氨酸激酶，其作為活化的癌基因蛋白，跟整合素的激活有關(guān)。Src活化后，能夠調(diào)節(jié)FAK的活性，形成FAK/Src復(fù)合物，激活胞內(nèi)多種信號途徑(如Ras依賴的MAPK途徑)，影響腫瘤新生血管的形成。目前有研究表明Src激酶可作為癌癥治療的靶點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013]本發(fā)明的目的之一在于提供了一種對新生血管形成有阻斷功能的多肽化合物。
[0014]本發(fā)明的目的之二在于提供該多肽化合物的應(yīng)用。
[0015]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種對新生血管形成有阻斷功能的多肽化合物，其特征在于該多肽化合物為SEQ IDN0.1所示的氨基酸序列。
[0016]上述的對新生血管形成有阻斷功能的多肽化合物在制備抑制新生血管形成藥物中的應(yīng)用。
[0017]上述的對新生血管形成有阻斷功能的多肽化合物在制備抑制腫瘤生長藥物中的應(yīng)用。。
[0018]本發(fā)明基于該小分子多肽化合物能夠抑制體外人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞形成血管狀結(jié)構(gòu)；抑制裸鼠皮下接種基底膜基質(zhì)中血管的生成；顯著抑制裸鼠皮下接種實體瘤的生長