咪唑并吡啶-6-甲酰-氨基酸芐酯,其合成,活性和應(yīng)用
【專利說明】咪畦并化惦-6-甲醜-氨基酸節(jié)醋，其合成，活性和應(yīng)用 發(fā)明領(lǐng)域
[000。 本發(fā)明涉及下式的2種3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲醜-硝基精氨醜-氨基酸 予醋（式中AA選自kLeu和klle殘基），涉及它們的制備方法、涉及它們對腫瘤生長的抑 制作用，還涉及它們的抗血栓活性。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003] 癌癥是一組可影響身體任何部位的多種疾病的通稱。使用的其它術(shù)語為惡性腫瘤 和賞生物。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，癌癥是世界上的頭號死因之一，尤其是在發(fā)展中國家。而 全世界癌癥死亡人數(shù)預(yù)計將繼續(xù)上升，到2030年將超過1310萬。因此，開發(fā)新的高效，低 毒，毒副作用小的抗腫瘤藥物一直是新藥研究的重要課題之一。
[0004] 隨著對腫瘤特性和發(fā)病本質(zhì)的認識，發(fā)明人曾經(jīng)公開下式代表的3H-咪哇并[4， 5-C]化巧-6-甲醜-AA-OBzl(其中AA代表甘氨基酸或其它k氨基酸殘基）在1Umol/kg 劑量下顯示良好的抗腫瘤活性。通過進一步研究發(fā)明人認識到，在3H-咪哇并[4,5-c]化 巧-6-甲醜-AA-OBzl的6-甲醜基和AA-OBzl基之間插入妒-N〇2-Arg殘基，不僅可W延緩 它的代謝達到提高抗腫瘤活性的目的，而且可W增加抗血栓活性。血栓是危害腫瘤患者預(yù) 后的并發(fā)癥。通過送種修飾，獲得具有抗腫瘤和抗血栓雙重活性的化合物，具有良好的臨床 應(yīng)用前景。根據(jù)送些認識，發(fā)明人提出了本發(fā)明。
[0005]
【發(fā)明內(nèi)容】

[000引本發(fā)明的第一個內(nèi)容是提供3H-咪哇并[4,5-C]化巧-6-甲 醜-NG-N〇2-Arg-AA-(ffizl(式中AA選自kLeu和klle殘基）。
[0007]
[000引本發(fā)明的第二個內(nèi)容是提供制備3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲 醜-N6-N〇2-Arg-AA-〇Bzl(式中AA選自kLeu和klle殘基）的合成方法，該方法包括：
[0009] (I)k組氨酸在稀硫酸催化下與甲醒進行Pictet-Spengler縮合生成6S-4, 5,6， 7-四氨-3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-駿酸；
[0010] (2)65-4,5,6,7-四氨-3護咪哇并[4,5-。]化巧-6-駿酸轉(zhuǎn)化為65-4,5,6,7-四 氨-3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲酸甲醋；
[0011] (3)6S-4,5,6,7-四氨-3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲酸甲醋用高儘酸鐘氧化為 3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲酸甲醋；
[001引 （4) 3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲酸甲醋在化OH溶液（2腳中皂化成3H-咪哇并 [4,5-c]化巧-6-甲酸；
[0013] 巧)3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲酸與NG-N〇2-Arg-〇Bzl偶聯(lián)得到3H-咪哇并[4， 5-C]化巧-6-甲醜NG-N〇2-Arg-〇Bzl ;
[0014] 巧)3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲醜-妒-N〇2-Arg-〇Bzl在化OH溶液（2腳中皂 化成3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲醜-NG-N〇2-Arg ;
[0015] (7)3H-咪哇并[4,5-C]化巧-6-甲醜-NG-N〇2-Arg與L-Leu-Cffizl和L-Ile-Cffizl 偶聯(lián)得到3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲醜NG-N〇2-Arg-AA-〇Bzl。
[001引本發(fā)明的第S個內(nèi)容是評價3H-咪哇并[4,5-C]化巧-6-甲 醜-N6-N〇2-Arg-AA-〇Bzl對腫瘤細胞增殖的抑制作用。
[0017]本發(fā)明的第四個內(nèi)容是評價3H-咪哇并[4,5-C]化巧-6-甲 醜-N6-N〇2-Arg-AA-〇Bzl對腫瘤生長的抑制作用。
[001引本發(fā)明的第五個內(nèi)容是評價3H-咪哇并[4,5-C]化巧-6-甲 醜-NG-N〇2-Arg-AA-〇Bzl的抗血栓活性。
【附圖說明】
[001引 圖1. 3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲醜-NG-N〇2-Arg-AA-〇Bzl的合成路線.U肥冊，&0, H2S04,65°C ;U)MeOH，S0Cl2,0°C ;iii)DMF, NMM, KMn〇4;iv)NaOH，H20,0°C ;v)二環(huán)己基 碳二亞胺值CO，I-居基苯并H哇（冊Bt)，N-甲基嗎晰（NMM)，DMF ^UrM)H，H2〇，(rC ;vii) 二環(huán)己基碳二亞胺值CO，I-居基苯并H哇化OBt)，N-甲基嗎晰（NMM)，DMF ;8a中AA = kLeu殘基，8b中AA=klle殘基。
【具體實施方式】
[0020] 為了進一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。送些實施例完全是例證性的，它 們僅用來對本發(fā)明進行具體描述，不應(yīng)當理解為對本發(fā)明的限制。
[0021] 實施例1制備6S-4,5,6,7-四氨-3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-駿酸似
[0022] 冰浴下將15.Og(96.Smmol)k組氨酸置于250血圓底燒瓶中，加入50血蒸傭水， 再逐滴加入3血濃硫酸，攬拌均勻，完全溶解后加入15血甲醒溶液（40% )，6(TC反應(yīng)8小 時。反應(yīng)物冷卻至室溫，用濃氨水在冰浴下調(diào)pH至6,有大量無色沉淀析出，過濾。濾餅用 水洗并干燥，得到15g(93% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z)167[M+田+。
[002引實施例2制備6S-4,5,6,7-四氨-3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲酸甲醋（3)[0024] 冰浴下在500血茄瓶里加100血甲醇，用恒壓漏斗緩慢滴加10血二氯亞諷，1小 時后加入5.0邑(30臟〇1)65-4,5,6,7-四氨-3護咪哇并[4,5-。]化巧-6-駿酸似，室溫反 應(yīng)3天后，TLC顯示反應(yīng)完全，反應(yīng)混合物減壓濃縮，殘留物加甲醇溶解并減壓濃縮。該操 作重復(fù)3次得無色泡狀固體，再加己離抽干重復(fù)3次得無色粉末，最后用甲醇/己離重結(jié)晶 得4. 2g(55%)標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z)181[M+田+。
[00幼實施例3巧[J備3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲酸甲醋（4)
[002引冰浴下在100血茄瓶里加2邑(7.9臟如65-4,5,6,7-四氨-3護咪哇并[4,5-。] 化巧-6-甲酸甲醋，加DMF使溶解。向該溶液中滴加ImLH己胺調(diào)抑到8,分H次加入 1.5g(9.4mmol)高儘酸鐘。反應(yīng)6小時后，TLC監(jiān)測反應(yīng)完畢。反應(yīng)物減壓濃縮至干，得到 的黑色固體用INHCl溶液溶解，冰浴下滴加2N化OH溶液調(diào)抑到7,析出大量無色固體。 該固體W二氯甲焼/甲醇為洗脫劑用硅膠柱純化，得0. 93g(66. 4% )標題化合物，為無色固 體。ESI-MS(m/z)177[]\Wl]+。
[0027]實施例4制備3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-駿酸巧）
[002引 冰浴下在100血茄瓶里力日3血化OH溶液（1. 5腳，IOmin后力日入 0. 93g巧.3mmol)3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲酸甲醋（4)，反應(yīng)1小時后TLC顯示反應(yīng) 完畢，冰浴下向反應(yīng)液中滴加2NHCl溶液調(diào)抑到7,析出大量無色固體。該固體W二氯甲 焼/甲醇為洗脫劑用硅膠柱純化，得〇.56g(65% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/ z)163[]\Wl]+。
[0029]實施例5制備3H-咪哇并[4, 5-c]化巧-6-甲醜-kNG-N〇2-Arg-〇BzU6)
[0030] 稱取194mg(l. 2mm〇U3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-駿酸于100血茄形瓶中，加 入20mLDMF。在冰浴和攬拌下依次加入211mg(l. 6mmol)冊化及333mg(l. 6mmol)DCC，活化 30min。稱取 676mg(l. 4mmol)Tos?妒NOzArg-OBzl于 25血小H角瓶中，用DMF溶解后，用 NMM調(diào)抑至7,然后將該溶液滴加至茄形瓶的反應(yīng)液中，最后用NMM調(diào)反應(yīng)液抑值至8。室 溫反應(yīng)過夜，TLC顯示反應(yīng)完畢后，反應(yīng)混合物減壓濃縮至干，殘留物加50mL二氯甲焼溶 解，過濾除去二環(huán)己基脈值CU),濾液層依次用飽和Na肥化水溶液（20mLX3)和飽和化Cl 水溶液（20mLX3)各洗3遍，己酸己醋層用無水化CI2干燥，過濾，濾液減壓濃縮至干，得到 的黃色油狀物經(jīng)硅膠柱層析純化（二氯甲焼/甲醇為洗脫劑），得到的淡黃色固體，經(jīng)二氯 甲焼/石油離重結(jié)晶得200mg(37%)標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/e)454[M-田. Mpl84-186C. [a]D化=12. 2(c= 0. 12，甲醇）.1H-NMR巧OOMHz,DMSO-de) 5/ppm= 13. 19 (s，IH)，9. 04 (s，2H)，8. 57 (s，IH)，8. 52 (s，IH)，8. 26 (s，IH)，7. 44(m，5H)，5. 18(d，J= 15. 0Hz，2H)，4. 63(dd，J=甜z，J=I甜z，lH)，3. 16(m，2H)，l. 95(m，2H)，l. 59(s，2H)。 [003。 實施例6制備3H-咪哇并[4, 5-c]化巧-6-甲醜-kNG-N〇2-Arg(7)
[0032]稱取200mg (0. 44mmol) 3H-咪哇并[4, 5-c]化巧-6-甲醜-kNG-N〇2-Arg-〇Bzl于 IOOmL茄瓶中，加甲醇溶液使原料溶解，冰浴攬拌下滴加2N化OH溶液調(diào)抑到11，冰浴下 反應(yīng)3小時，TLC顯示反應(yīng)完畢。，冰浴下向反應(yīng)液中滴加飽和硫酸氨鐘溶液調(diào)抑到7,反 應(yīng)化合物減壓濃縮，殘留物用甲醇復(fù)溶，濾去不溶物，濾液減壓濃縮，得74mg(46%)標題 化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z) ;363[M-田；Mpl66-169°C .[a]〇25 =9.8(c=0. 19,甲 醇）.1H-NMR巧00MHz，DMS0-de) 5/卵m = 13. 14(s，lH)，8. 99(s，2H)，8. 65(s，2H)，8. 54(s, 1H)，8. 53(s，lH)，8. 29(m，2H)，4. 60(dd，J=甜z，J = 15Hz，lH)，3. 10(m，2H)，l. 79(m，2H), 1. 55(m，2H)。
[0033]實施例7制備3H-咪哇并[4, 5-c]化巧-6-甲醜-kNG-N〇2-Arg-Leu-〇Bzl (8a)
[0034]稱取 61mg(0. 1 7mmo1)3H-咪哇并[4, 5-c] [I比巧-6_ 甲醜-kNG-N02-Arg于 10OmT,茄 形瓶中，加入20血DMF。在冰浴和攬拌下依次加入27mg(0. 2mmol)冊Bt及41. 3mg(0. 2mmol) DCC，活化 30min。稱取 67mg0). 17mmol)Tos.Leu-OBzl于 25血小H角瓶中，用DMF溶解后， 用NMM調(diào)抑至7,然后將該溶液滴加至茄形瓶的反應(yīng)液中，最后用NMM調(diào)反應(yīng)液抑值至8。 室溫反應(yīng)過夜，TLC顯示反應(yīng)完畢，反應(yīng)混合物減壓濃縮至干，殘留物加20血二氯甲焼溶 解，過濾除去二環(huán)己基脈值CU)，濾液層依次用飽和Na肥化溶液（20mLX3)和飽和化Cl溶液 (20血X3)各洗H遍，有機層用無水化Clz干燥，過濾、濾液減壓濃縮至干，得到的黃色油狀 物經(jīng)硅膠柱層析純化（二氯甲焼/甲醇為洗脫劑），得到的淡黃色固體，經(jīng)硅膠柱層析（二 氯甲焼：甲醇=12 : 1)純化得 12. 9mg(13. 4% )無色固體。ESI-MS(m/z) :566[M-田；Mp: 101. 1-103. 7°C;[a]D化=2. 8(c= 0. 21，甲醇）；IR(邸r) ;3225,2966,2488，1736，1650， 1524，1451，1149,680,540;iH-Mffi(300MHz，DMS0-d6):5/wm=13.24(s，lH)，9.00(s， 1H)，8. 73(d，J= 9Hz，2H)，8. 59(m，2H)，8. 26(s，lH)，7. 91(m，2H)，7. 34(m，5H)，5. 12(m， 2H)4. 63(m，lH)，4. 36(m，lH)，3. 15(m，2H)，l. 58 (m，7H)，0. 88(d，J=細z，3H)，0. 85(d，J= 細z，3H)。
[0035]實施例 8 制備 3H-咪哇并[4, 5-c]化巧-6-甲醜-kNG-N〇2-Arg-Ile-〇Bzl(8b) [003引按照實施例7的方法，從61mg0). 17mm0U3H-咪哇并[4, 5-c]化巧-6-甲 醜-kNG-N〇2-Arg和 67mg(0. 17mmol)Tos?Ile-Cffizl