含有受體的經(jīng)穩(wěn)定的液體配制物的制作方法
【專利說明】含有受體的經(jīng)穩(wěn)定的液體配制物
[0001] 相關(guān)申請的奪叉引用 本申請要求2013年5月14日提交的美國臨時申請序列號61/823, 116的優(yōu)先權(quán)，其通 過引用全部并入本文。
[0002] 發(fā)明背景 本發(fā)明涉及用于確定樣品（例如患者樣品）中的分析物（例如抗體）的組合物、方法 和試劑盒，已知或疑似該樣品包含一種或多種這樣的分析物。在一些實施例中，本發(fā)明更具 體地涉及保持受體試劑作為液體配制物在高于冷凍的溫度下的儲存期間的穩(wěn)定性。在一些 實施例中，本發(fā)明更具體地涉及提高用于測定分析物的受體試劑的靈敏度。
[0003] 臨床診斷領(lǐng)域在過去的35年或更長的時間內(nèi)已經(jīng)出現(xiàn)了廣泛的擴(kuò)展，既關(guān)于可 以被容易且準(zhǔn)確地確定的所關(guān)注的材料的多樣性，還關(guān)于用于確定的方法。用于檢測液體 中的低濃度的材料的存在的方便、可靠且不危險的手段是期望的。在臨床化學(xué)中，這些材料 可以按低于10 12摩爾的濃度存在于體液中。檢測低濃度的這些材料的困難由于可以利用 的相對小的樣本容量而增大。
[0004] 對確定血液和其它生物流體中的許多分析物的需要已經(jīng)在醫(yī)學(xué)的許多分支中變 得越來越明顯。在內(nèi)分泌學(xué)中，經(jīng)常需要許多不同激素的血漿濃度的知識，以針對其中比值 可幫助確定疾病進(jìn)展的給定的診斷來解析（resolve)診斷問題或一組標(biāo)志物。諸如激素受 體的受體通常用于許多體外應(yīng)用中。在診斷測定中，例如，受體（例如，激素受體）被用于 檢測指示一種或多種疾病狀態(tài)的患者抗體。在具體實施例中，促甲狀腺激素（也稱為促甲 狀腺激素或TSH)受體被用在用于檢測作為格雷夫斯氏病的鑒別診斷的輔助手段的TSH受 體抗體的診斷測定中。
[0005] 由于它們在液體形式中的不穩(wěn)定性，許多受體在表面上變干或凍干。這些方法是 不理想的，因為它們增加制造成本，并且對于使用該試劑的那些人是不便的。此外，重構(gòu) (reconstitution)使用時，許多這樣的受體仍具有非常短的半衰期。
[0006] 因此，持續(xù)需要開發(fā)包含受體的組合物，所述組合物在液體形式中表現(xiàn)出良好的 穩(wěn)定性并在采用該受體以測量患者中的抗體和其它分析物的水平的測定中表現(xiàn)出良好的 靈敏度。
[0007] 概沭 根據(jù)本文所述的原理的一些實施例涉及制備受體的液體溶液的方法。所述方法包括在 液體介質(zhì)中將受體、螯合劑和C2-C6多元醇組合。所述螯合劑和所述C2-C6多元醇的量足 以獲得在所述液體溶液中穩(wěn)定和靈敏的受體，在儲存期間將所述液體溶液保持在約2°C至 約40 °C的溫度。
[0008] 根據(jù)本文所述的原理的一些實施例涉及使促甲狀腺激素受體的液體溶液穩(wěn)定的 方法。所述方法包括將包含促甲狀腺激素受體的液體溶液與穩(wěn)定量的（i)選自三乙酸螯合 劑和四乙酸螯合劑的螯合劑和（ii)C3_C5多元醇兩者組合。
[0009] 根據(jù)本文所述的原理的一些實施例涉及包含水性介質(zhì)、受體嵌合體、約0.1 mM至 約20 mM的量的螯合劑和按重量計約5%至約50%的量的C2-C6多元醇的組合物。
[0010] 根據(jù)本文所述的原理的一些實施例涉及檢測樣品中的促甲狀腺激素受體抗體的 方法。在測定介質(zhì)中提供組合，其中所述組合包含疑似含有促甲狀腺激素受體抗體的樣品、 結(jié)合至載體的第一促甲狀腺激素受體和結(jié)合至標(biāo)記物的第二促甲狀腺激素受體。所述第一 和所述第二促甲狀腺激素受體中的一個或兩個來自根據(jù)本文所述的原理儲存的組合物。對 所述組合檢查包含所述促甲狀腺激素受體抗體的復(fù)合物的形成。所述復(fù)合物的存在與所述 樣品中的所述促甲狀腺激素受體抗體的存在和量的其中之一或兩者關(guān)聯(lián)。
[0011] 附圖簡述 本文提供的附圖不是按比例的并出于促進(jìn)根據(jù)本文所述的原理理解某些實施例的目 的而提供，并通過舉例說明且不限制所附的權(quán)利要求書的范圍的方式提供。
[0012] 圖1是描述當(dāng)溶解于根據(jù)本文所述的原理的方法的實施例中的檸檬酸鹽緩沖劑 中時，以及出于比較的目的當(dāng)所述綴合物分別溶解在MES和PIPES緩沖劑中時，綴合到堿性 磷酸酶的受體嵌合體（"綴合物"）的信號對PH的曲線的圖。
[0013] 圖2是描述圖1的綴合物溶液在37°C下儲存一天之后的保留的百分?jǐn)?shù)信號對pH 的曲線的圖。
[0014] 詳細(xì)說明 一般討論 根據(jù)本文所述的原理的公開內(nèi)容提供了制備受體的液體配制物的方法，所述液體配制 物可儲存延長的時間段，同時保持所述受體的穩(wěn)定性。另外，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，相比于經(jīng) 過干燥或凍干以及隨后的重構(gòu)的受體的靈敏度，根據(jù)本文所述的原理制備的受體的靈敏度 提高。如上所述，根據(jù)本文所述的原理的一些實施例涉及制備受體的液體溶液、這樣的液體 溶液的儲存的方法和這樣的液體溶液在用于檢測所關(guān)注的分析物的測定中的用途。
[0015] 詳細(xì)討論 如本文所使用的術(shù)語"受體"是指與物質(zhì)結(jié)合的化合物（有時稱為配體），所述化合物 對于該物質(zhì)在結(jié)構(gòu)上是特異性的。所述受體具有在表面上或在腔室中的面積，所述面積特 異性地結(jié)合至有時被稱為配體的另一分子，并由此被定義為與所述有時被稱為配體的另一 分子的特定的空間和極性排列組織（organization)互補(bǔ)。配體可以是小的分子，包括但不 限于，例如藥物、小肽或甾族化合物，或大的分子例如大的肽，蛋白質(zhì)，包括例如抗體、激素、 DNA、RNA，碳水化合物，并包括其部分或區(qū)域（region)。通過舉例說明而不是限制的方式， 受體包括例如激素受體、藥物受體和抗原受體。所述受體可以是完整或完全的受體或其片 段或鏈段。片段或鏈段可以通過使完整的受體經(jīng)過片段化技術(shù)來制備。另一方面，可以合 成制備受體的片段或鏈段以及完整或完全的受體。因此，所述受體可以是天然存在且從來 源分離出來的，或所述受體可以是合成的且通過包括但不限于例如重組技術(shù)和嵌合技術(shù)的 合成技術(shù)制備。
[0016] 在一些實施例中，所述受體是對抗體特異性的那些，所述抗體例如，與某些疾病狀 態(tài)相關(guān)的自身抗體，所述疾病狀態(tài)包括但不限于，例如皮肌炎、糖尿病、癲癇病、川崎氏病、 腎小球性腎炎、格雷夫斯氏病、古德帕斯徹氏綜合征（Goodpasture's syndrome)、格林-巴 利綜合癥、炎癥性腸病、狼瘡性腎炎、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、心肌炎、帕金森病、天皰瘡、 惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動脈炎、多發(fā)性肌炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、牛皮癬、風(fēng)濕熱、類風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)病、硬皮病、干燥綜合征（sjogren' s syndrome)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、甲狀腺炎、 潰瘍性結(jié)腸炎、葡萄膜炎、白癜風(fēng)、韋格納氏肉芽腫?。╓egener's granulomatosis)和威爾 遜病。
[0017] 在根據(jù)本文所述的原理的實施例中，通過舉例說明而不是限制的方式，所述受體 是TSH受體并且所述自身抗體是TSH自身抗體。在根據(jù)本文所述的原理的另一個實施例 中，通過舉例說明而不是限制的方式，所述受體是TSH受體嵌合體并且所述自身抗體是TSH 自身抗體。在根據(jù)本文所述的原理的另一個實施例中，通過舉例說明而不是限制的方式， 所述受體是TSH受體嵌合體，其實例公開在2009年12月31日公布的美國專利申請公布號 2009/0325310 Al(Loos)中并且所述自身抗體是TSH自身抗體。
[0018] 術(shù)語"受體"還包括結(jié)合或連接到綴合部分的受體。受體綴合物包含受體和任選 地通過連接基團(tuán)結(jié)合在一起以形成單一結(jié)構(gòu)的綴合部分。所述結(jié)合可以是共價連接或非共 價連接的結(jié)果。共價連接包括直接連接，例如，受體和綴合部分之間的化學(xué)鍵或者受體和綴 合部分之間通過中間性連接基團(tuán)直接連接。非共價連接包括連接到所述綴合物的受體和綴 合部分的互補(bǔ)特異性結(jié)合對（sbp)成員之間的特異性結(jié)合。
[0019] 所述綴合部分是可綴合到受體以形成在用于檢測所述受體或所述受體所結(jié)合的 實體（entity)(受體結(jié)合分析物）的測定中采用的試劑的任意實體。綴合部分包括，通過 舉例說明而不是限制的方式，例如載體、信號產(chǎn)生系統(tǒng)的成員、結(jié)合對的成員，例如配體和 受體（例如，生物素-抗生蛋白鏈菌素或熒光素-抗熒光素抗體），和對藥物類似物提供錨 的大分子。
[0020] 載體可以由有機(jī)或無機(jī)、固體或流體、水不溶性的材料組成，其可以是透明的或部 分透明的。所述載體可以是合成的或天然存在的。所述載體可具有許多形狀中的任一種， 例如顆粒（包括珠粒）、薄膜（film)、膜（membrane)、管、孔（well)、條、棒、平坦的表面（例 如板、紙等）、纖維等等。根據(jù)測定的類型，所述載體可懸浮是或不可懸浮在采用所述載體 的介質(zhì)中?？蓱腋〉妮d體的實例是例如聚合材料，例如膠乳、脂質(zhì)雙層或脂質(zhì)體，油滴、細(xì)胞 和水凝膠、金屬顆粒和磁性顆粒。其它載體組合物包括例如聚合物，例如交聯(lián)的多糖，包括 瓊脂糖和葡聚糖，纖維素、硝基纖維素、乙酸纖維素、聚乙烯醇、聚（氯乙烯）、聚丙烯酰胺、 聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚乙烯、聚丙烯、聚（4-甲基丁烯）、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸 酯、聚（對苯二甲酸乙二醇酯）、尼龍和聚（丁酸乙烯酯），可以單獨(dú)使用或與其它材料組合 使用。
[0021] 所述載體可以是顆粒。所述顆粒可具有至少約0. 02微米且不大于約100微米的平 均直徑。在一些實施方案中，所述顆粒具有約0. 05微米至約20微米或約0. 3微米至約10 微米的平均直徑。所述顆?？梢允怯袡C(jī)或無機(jī)的、可溶脹的或不溶脹的、多孔的或無孔的， 優(yōu)選具有近似水的密度，通常為約0.7 g/mL到約1.5g/mL，并且由可以是透明的、部分透明 的或不透明的材料組成。所述顆粒可以是生物材料，例如細(xì)胞和微生物，例如紅細(xì)胞、白細(xì) 胞、淋巴細(xì)胞、雜交瘤、鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌（E. coli)和病毒。所述顆粒也可 以由例如有機(jī)和無機(jī)聚合物、脂質(zhì)體、膠乳顆粒、金屬顆粒、磁性或非磁性顆粒、磷脂囊泡、 乳糜微粒和脂蛋白組成。在一些實施例中，所述顆粒是膠乳顆?；蚨趸t（鉻（chrome)) 顆粒。在一些實施例中，所述顆粒容易分散在水性介質(zhì)中，并且可以是吸附的或可官能化 的，從而允許直接或通過連接基團(tuán)間接地綴合到受體。
[0022] 在下文中，在各種測定系統(tǒng)的討論中更詳細(xì)地討論了特異性信號產(chǎn)生系統(tǒng)和標(biāo) 記物，根據(jù)本文所述的原理的實施例可被應(yīng)用于所述測定系統(tǒng)。簡要地說，信號產(chǎn)生系統(tǒng) (SPS)可以具有一種或多種組分或成員，至少一種組分或成員是標(biāo)記物，其能夠直接被檢 測或可通過產(chǎn)生可檢測信號的特異性結(jié)合反應(yīng)可檢測。所述信號產(chǎn)生系統(tǒng)生成與樣品中 的受體或受體結(jié)合分析物的存在相關(guān)的信號。所述信號產(chǎn)生系統(tǒng)包含產(chǎn)生可測量的信號 所需的所有試劑。所述信號產(chǎn)生系統(tǒng)的其它組分可包含在顯影劑溶液中，并且可以包括例 如底物、增強(qiáng)子、活化劑、化學(xué)發(fā)光化合物、輔因子、抑制劑、清除劑、金屬離子和對于信號產(chǎn) 生物質(zhì)的結(jié)合所需的特異性結(jié)合物質(zhì)。所述信號產(chǎn)生系統(tǒng)的其它組分可以是例如輔酶、與 酶產(chǎn)物反應(yīng)的物質(zhì)、其它酶和催化劑。所述信號產(chǎn)生系統(tǒng)提供通過外部裝置，通過使用電 磁輻射，理想的是通過目視檢查可檢測的信號。示例性的信號產(chǎn)生系統(tǒng)描述在美國專利號 5, 508, 178 (Rose等人）和Ullman等人，美國專利號5, 185, 243第11-13欄中，其相關(guān)公開 內(nèi)容通過引用并入本文。
[0023] 對于綴合物的組分（即受體和綴合部分）的共價連接，一種或多種組分包含適于 連接到一種或多種其它組分的官能團(tuán)。適于連接所述組分的官能團(tuán)可以是羰基官能團(tuán)，氧 代羰基（例如，醛）和非氧代羰基（包括氮和硫類似物），例如羧基、脒，酰胺化物、硫代羧 基和硫羰羧基（thiocarboxy)兩者。氧代的替代官能團(tuán)包括活性鹵素、重氮基、巰基、