一種穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)的穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品包括：緩沖液20-200mmol/L；蛋白質(zhì)類(lèi)穩(wěn)定劑2-10%（w/v）；電解質(zhì)NaCl10-200mmol/L；抗氧化增效劑5-100mmol/L；糖類(lèi)穩(wěn)定劑10-100g/L；防腐劑0.09%（w/v）；抗氧化劑0.02-100mmol/L；蛋白酶抑制劑0.1-5mmol/L；載脂蛋白A-Ⅰ2.0-3.0g/L；載脂蛋白B2-2.5g/L。本發(fā)明有效地提高了載脂蛋白A-Ⅰ與載脂蛋白B的穩(wěn)定性，可在2-8℃穩(wěn)定冷藏一年，使用保存更為方便高效，并且能夠提高測(cè)定樣本中載脂蛋白A-Ⅰ與載脂蛋白B含量測(cè)定的準(zhǔn)確性。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定的用于載脂蛋白A-1與載脂蛋白B含量測(cè)定的校準(zhǔn)品，特別是一種穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品。

【背景技術(shù)】
[0002]傳統(tǒng)的臨床檢驗(yàn)，要使檢驗(yàn)結(jié)果可靠或有依據(jù)，往往有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品(Standard)。以臨床化學(xué)檢驗(yàn)的比色測(cè)定為例，常作三個(gè)檢測(cè):空白、標(biāo)準(zhǔn)、測(cè)定。用空白液調(diào)整吸光度為零，讀出測(cè)定比色液和標(biāo)準(zhǔn)比色液的吸光度，分別為As和Au ；已知標(biāo)準(zhǔn)液濃度為Cs。在一定范圍內(nèi)，某分析物濃度和吸光度呈良好比例關(guān)系。為了克服純標(biāo)準(zhǔn)液和病人樣品間的基體差異，20年前開(kāi)始引用具有與病人樣品基體相似的校準(zhǔn)品替代標(biāo)準(zhǔn)品，用于日常工作。由于以往在使用標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)不強(qiáng)調(diào)它的專(zhuān)用性，國(guó)內(nèi)在應(yīng)用校準(zhǔn)品時(shí)忽略了它的專(zhuān)用性。任何方法或儀器、試劑使用一個(gè)校準(zhǔn)品，嚴(yán)重影響檢驗(yàn)質(zhì)量。
[0003]為了克服基體效應(yīng)，推薦使用校準(zhǔn)品。校準(zhǔn)品的大多來(lái)源為人的樣品混合物，如混合血清。本身內(nèi)含被檢分析物，制備時(shí)可添加某些分析物增加含量。校準(zhǔn)品中被檢分析物的含量無(wú)法由稱(chēng)量法和容量法確定，只能倚賴于分析方法。校準(zhǔn)品的校準(zhǔn)值必須取決于分析方法或檢測(cè)系列。
[0004]新鮮病人標(biāo)本是最佳校準(zhǔn)品，由于所有校準(zhǔn)品都是處理過(guò)的樣品，和新鮮病人標(biāo)本有著基體差異。若使用公認(rèn)的參考方法去標(biāo)化測(cè)定校準(zhǔn)品，測(cè)定程序是嚴(yán)密的，測(cè)定值是可靠的。但使用該測(cè)定值去校準(zhǔn)常規(guī)的檢測(cè)系列時(shí)，校準(zhǔn)品中被檢分析物參與反應(yīng)時(shí)的表現(xiàn)明顯不同于新鮮病人標(biāo)本，不能將參考方法系列的準(zhǔn)確度通過(guò)校準(zhǔn)品傳遞給病人標(biāo)本。
[0005]現(xiàn)有技術(shù)中載脂蛋白A-1與載脂蛋白B標(biāo)準(zhǔn)品易受干擾，不易保存并且保存時(shí)間不長(zhǎng)，給臨床檢驗(yàn)帶來(lái)了很大的困難。
[0006]現(xiàn)階段，動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病(atherosclerosis card1vasculardisease, ACVD)包括冠心病、腦卒中和周?chē)鷦?dòng)脈疾病。2003年國(guó)際動(dòng)脈粥樣硬化學(xué)會(huì)發(fā)表的“預(yù)防ACVD臨床指南”中確定載脂蛋白異常作為新的ACVD危險(xiǎn)因素。而載脂蛋白A-1和B異常除了可見(jiàn)于腎肝疾病、糖尿病和內(nèi)分泌代謝疾病外，主要作為ACVD危險(xiǎn)因素，用于ACVD危險(xiǎn)程度劃分、預(yù)防和治療。由此可見(jiàn)，載脂蛋白A- 1、B測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性取決了整個(gè)檢測(cè)分析系統(tǒng)的穩(wěn)定可靠，其中校準(zhǔn)品的量值溯源和其穩(wěn)定性在很大程度上影響著測(cè)定結(jié)果。校準(zhǔn)品內(nèi)載脂蛋白濃度的改變直接導(dǎo)致樣本內(nèi)載脂蛋白的檢測(cè)值發(fā)生錯(cuò)誤，失去真實(shí)的參考性。
[0007]目前，國(guó)內(nèi)生化類(lèi)體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)研發(fā)的用于脂類(lèi)中載脂蛋白A-1和載脂蛋白B校準(zhǔn)的校準(zhǔn)品，主要是凍干品，這些校準(zhǔn)品在復(fù)溶后不易保存，而且由于在凍干過(guò)程中載脂蛋白的分子結(jié)構(gòu)會(huì)遭到破壞，導(dǎo)致載脂蛋白免疫反應(yīng)性改變。復(fù)融后，在高溫及反復(fù)凍融條件下同樣可引起部分分析物質(zhì)破壞。如果不注意使用會(huì)導(dǎo)致校準(zhǔn)結(jié)果偏高，實(shí)際測(cè)得病人標(biāo)本結(jié)果也會(huì)影響臨床判斷。國(guó)外知名診斷試劑公司像羅氏診斷以及朗道公司研發(fā)的血脂校準(zhǔn)品，穩(wěn)定時(shí)間長(zhǎng)，準(zhǔn)確度好，產(chǎn)品可溯源性強(qiáng)，但價(jià)格較貴。臨床中綜合考慮到成本、操作等因素，中小醫(yī)院使用起來(lái)不是很方便。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明公開(kāi)了一種穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品，通過(guò)在含有載脂蛋白A-1與載脂蛋白B的血清基質(zhì)液中添加適量硫代二丙酸、沒(méi)食子酸丙酯、EDTA和抑肽酶等成份，均能提高載脂蛋白A-1與載脂蛋白B的穩(wěn)定性，由此制成液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品，可在2-8°C穩(wěn)定冷藏一年，并且對(duì)載脂蛋白A-1與載脂蛋白B具有良好的檢測(cè)性能，檢測(cè)精度高，響應(yīng)效果好。
[0009]本發(fā)明公開(kāi)的穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品包括:
[0010]
緩沖液20-200ramol/L
蛋Cl質(zhì)類(lèi)穩(wěn)定劑2-10% ( W/ V )
電解質(zhì) NaC I10-200mmo I /1.抗1?化增效劑5-1 OOmmo I/L
[0011]
糖類(lèi)穩(wěn)定劑10-1 OOg/丨.防腐劑0.09% (W/Y)
抗氧化劑O, 02-1 OOmmo I / L
蛋P酶抑制_0.l-5mmol/L
載脂蛋 H Λ-12.0-3.0g/L
載脂蛋 Q B2-2.SgZLc
[0012]作為一種優(yōu)選，所述緩沖液為T(mén)ris緩沖液、MOPS緩沖液、PB緩沖液中的一種，并且緩沖液的酸堿度為PH = 7-8。
[0013]作為一種優(yōu)選，所述穩(wěn)定劑包括蛋白質(zhì)類(lèi)穩(wěn)定劑或者糖類(lèi)穩(wěn)定劑中一種或幾種混合物，所述蛋白質(zhì)類(lèi)穩(wěn)定劑為BSA、HGG、HAS中一種或幾種，所述糖類(lèi)穩(wěn)定劑為蔗糖、葡萄糖、海藻糖中一種或幾種。
[0014]作為一種優(yōu)選，所述蛋白酶抑制劑為EDTA、抑肽酶、PMSF中的一種或幾種。
[0015]作為一種優(yōu)選，所述抗氧化劑為硫代二丙酸、沒(méi)食子酸丙酯、丁基羥基茴香醚、二丁基羥基甲苯、叔丁基對(duì)苯二酚中的一種或幾種。
[0016]作為一種優(yōu)選，所述抗氧化增效劑為檸檬酸、乳酸鈉、EDTA中的一種。
[0017]作為一種優(yōu)選，所述防腐劑為疊氮鹽類(lèi)或proclin系列防腐劑，其中疊氮鹽類(lèi)防腐劑主要為NaN3, proclin系列防腐劑主要為Proclin300。
[0018]作為一種優(yōu)選，本發(fā)明公開(kāi)的穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品主要包括以下組分:
[0019]
IiIiP1-S (緩沖液，pH7-?)20-200mmo丨/1.人沾丨---- (穩(wěn)定劑)卜;5% (w/v)
人 Y 球---- C 穩(wěn)記劑)1-5% (w/ V)
XaCl (電解質(zhì))10-200m1 丨/L
乳酸鈉(抗氣化增效劑)5-1 OOmmo I/1.海藻糖(穩(wěn)定劑)ICM00g/L
呑鉍鈉(防腐劑)0.0!? (w/v)
硫代—:W酸(.抗％〔化劑)5-1OOmmo 1,.1,
沒(méi)食 /-酸WSi (抗鋱化劑)O, 02-1.0mmol/1.EDTA ( M 丨:J ft抑制劑)0.1 -5mmo:l / L
抑呔_ (蛋1+'丨_抑制劑)1-25mg/l.栽脂蛋Π Λ-12.0-3.0g/1.載脂-- 1-H B2~2.0g/1.c
[0020]機(jī)理
[0021]1、該校準(zhǔn)品為液體形式，其優(yōu)勢(shì)在于不用凍干，不易破壞載脂蛋白的結(jié)構(gòu)，比干粉更穩(wěn)定。
[0022]2、加入的穩(wěn)定劑主要從兩方面提高復(fù)合校準(zhǔn)品的穩(wěn)定性:
[0023]載脂蛋白在液體狀態(tài)下極易發(fā)生自發(fā)氧化，使校準(zhǔn)品值在短時(shí)間內(nèi)下降，所以必須使用有效的抗氧化劑阻止或減緩載脂蛋白的氧化速度。然而普通抗氧化劑抗氧化效果經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間后均會(huì)下降。有研究表明硫代二丙酸與酚類(lèi)抗氧化劑聯(lián)合使用可以產(chǎn)生一種協(xié)同效應(yīng)，從而增強(qiáng)抗氧化效果。
[0024]另一方面自然界中存在許多種蛋白水解酶，載脂蛋白在蛋白酶作用下發(fā)生降解，校準(zhǔn)品中有效成分不斷減少。在校準(zhǔn)液中加入蛋白酶抑制劑抑制蛋白酶活性，保存載脂蛋白結(jié)構(gòu)的完整性。EDTA是一種金屬蛋白酶抑制劑，通過(guò)螯合金屬離子奪取金屬蛋白酶活性必需的金屬離子，使其失活；抑肽酶也稱(chēng)胰蛋白酶抑制劑，是一種天然廣譜蛋白酶抑制劑，能與多種蛋白酶的活動(dòng)中心競(jìng)爭(zhēng)一個(gè)賴氨?；种破浠钚浴?br> [0025]通過(guò)在含有載脂蛋白A-1與載脂蛋白B的血清基質(zhì)液中添加適量硫代二丙酸、沒(méi)食子酸丙酯、EDTA和抑肽酶等成份，均能提高載脂蛋白A-1與載脂蛋白B的穩(wěn)定性，由此制成液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品，可在2-8°C穩(wěn)定冷藏一年。

【具體實(shí)施方式】
[0026]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解下述【具體實(shí)施方式】?jī)H用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。
[0027]本發(fā)明公開(kāi)的穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品包括:
[0028]緩沖液20-200mmol/l.飯「1質(zhì)炎穩(wěn)記劑2-10% (w/v)
電解質(zhì) \a(:l10-200mmo!;1.化増效劑10mmo I / L
糖類(lèi)穩(wěn)定劑HMOOg-L
防腐劑0.09% (w/v)
抗鉍化劑0.02-1OOtiB1 1/L
SiClfti抑制劑0.1-SfnmoI/L
載脂蛋 I+1 Λ-12.0-3.0g/1,
載脂蛋丨?Β2-2.Sgv1.,
[0029]作為一種優(yōu)選，所述緩沖液為T(mén)ris緩沖液、MOPS緩沖液、PB緩沖液中的一種，并且緩沖液的酸堿度為PH = 7-8。
[0030]作為一種優(yōu)選，所述穩(wěn)定劑包括蛋白質(zhì)類(lèi)穩(wěn)定劑或者糖類(lèi)穩(wěn)定劑中一種或幾種混合物，所述蛋白質(zhì)類(lèi)穩(wěn)定劑為BSA、HGG、HAS中一種或幾種，所述糖類(lèi)穩(wěn)定劑為蔗糖、葡萄糖、海藻糖中一種或幾種。
[0031]作為一種優(yōu)選，所述蛋白酶抑制劑為EDTA、抑肽酶、PMSF中的一種或幾種。
[0032]作為一種優(yōu)選，所述抗氧化劑為硫代二丙酸、沒(méi)食子酸丙酯、丁基羥基茴香醚、二丁基羥基甲苯、叔丁基對(duì)苯二酚中的一種或幾種。
[0033]作為一種優(yōu)選，所述抗氧化增效劑為檸檬酸、乳酸鈉、EDTA中的一種。
[0034]作為一種優(yōu)選，所述防腐劑為疊氮鹽類(lèi)或proclin系列防腐劑，其中疊氮鹽類(lèi)防腐劑主要為NaN3, proclin系列防腐劑主要為Proclin300。
[0035]作為一種優(yōu)選，本發(fā)明公開(kāi)的穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品主要包括以下組分:
[0036]
HHPHS (緩沖液，pH7-8)20-2()0mmol/+l.人血沾(:穩(wěn)定劑)1-5% (w/v)
人Y球蛋丨1I (穩(wěn)定劑)1-5?) (w/v )
SaC I (電解質(zhì))I O-200mn1 I / L
乳酸鈉(抗氧化增效劑)5-1 OOmmo I /1.海藻糖(穩(wěn)定劑)10-1OOgZL
疊||1鈉(防腐劑)0.09% (w/v)
硫代-.....:內(nèi)酸(抗氣化劑)5-1 OOmmo I / L
沒(méi)食了酸丙Si (抗氧化劑)0,02-1.0mmol/!.EDTA C 蛋 P Si 抑制劑)0.1 /I
抑肽隱(蛋Ι.Η _抑制劑)1-25mg/1.載脂蛋 ? A-12.0-3.0g/L
載脂蛋 H B2-2,5g/U
[0037]實(shí)施例1
[0038](I)不同穩(wěn)定劑對(duì)校準(zhǔn)品穩(wěn)定性的影響
[0039]按以下配方配制含有待測(cè)目標(biāo)物載脂蛋白A-1與載脂蛋白B的血清基質(zhì)液，在此基質(zhì)內(nèi)添加不同濃度的穩(wěn)定劑，在37°C水浴中放置16小時(shí)，分別在水浴前后，應(yīng)用瑞源公司在售載脂蛋白A-1與載脂蛋白B檢測(cè)試劑盒(免疫比濁法)及其校準(zhǔn)品，按各自說(shuō)明書(shū)檢測(cè)血清基質(zhì)液中的ApoA-1和ApoB含量，根據(jù)水浴前后測(cè)定含量的變化考察穩(wěn)定性，分析添加的不同穩(wěn)定劑的效果。表I中4種添加劑均能提高血清基質(zhì)中ApoA-1和ApoB的穩(wěn)定性，且與各穩(wěn)定劑濃度呈正相關(guān)。
[0040]含有ApoA-1與ApoB的血清基質(zhì)液:ρΗ7.4
[0041]
綏沖液〗(Μ)ι_?Ι/?,
人血沾 ? I ill -- (I luin1-m S<%rum Λ i biimi η, I ISA)2.5% (w/v )
人 Y 球?Κ-- (I in man gamin<i globulin, IKSG)2, 5% (w/v )
鼠”50i 腿
乳酸蚋lOinmol / I,
海藻糖20g/l,
Proclin 3000.05% (w/v)
[0042]
載脂蛋 0 A-12.5g/L
載脂蛋N B2.0g/1.
[0043]表I不同添加劑對(duì)ApoA-1和ApoB在37°C穩(wěn)定性的影響
[0044]
ApoA-1含量ApoB含量添加物 ft度水浴前I水浴后—^Ll她率水前水浴后 N收率_____(g/L) [ (g/L) (%) (g/L) (g/L) (?): ______________2'j53______________________________2_.__02_______________ ——79_._8________________ ^^97...............................1"；51 _______________76,_5_______________
硫代.'.W酸 5 2.48 2.02 ' 61.3.98 1.；T1 ^ 76.4
(inmo 1/L) 25~ 2:.:15.................2......15...............'.............87.7...............................................1:98...............................?.'70^...............85:8
(inmol/U 0.廠 2.16 2.27 — 92.1 1.91 1.86^ 96.1
EDTA(,ol/L)2.46 L984^
0.5 2.47 2.08 84.1 1.95 1.66 84.9
TZTIZ^:,、 I — 2.49 I 2.01 ^80.8 1.98^ 1.72 畫(huà) 86.7jlHA_lmg/U 丨 5 2.,t6 I 2, U) 85,4 L 95 1.74 89.3
(2)本發(fā)明脂類(lèi)校準(zhǔn)品配制與標(biāo)定
[0045]該脂類(lèi)校準(zhǔn)品為含有高值載脂蛋白A-1與載脂蛋白B的復(fù)合校準(zhǔn)品，配方如下:
[0046]
\10PS 緩沖液(ρΗ7.0)lOOmml/L
人血沾廣丨叛㈧(Hunan Seruii Alburain, USA) 2, 5% (w/v)
人 Y 球--? (llnmm gaiaiia globulin, HGG)2.δ% (w/v)
XaC I5()mmol/l,
乳酸鈉I Ommo I/L
海藻糖20g/丨.flM 鈉0.09% (w/v)
硫代.25mmo 1:1.沒(méi)食子酸內(nèi)0.lmn1l/1,
ΗΙ)ΤΛ0,5mmol/L
挪肽_5mg/L
載斷蛋 Ι?Λ?!2, Dg/L
載詣蛋Ι? B2.3g/L
[0047]用Roche校準(zhǔn)品配合公司在售載脂蛋白A-1和載脂蛋白B檢測(cè)試劑(免疫比濁法)測(cè)定復(fù)合校準(zhǔn)品中的載脂蛋白A-1和載脂蛋白B含量，每個(gè)測(cè)定10次，以平均值作為該校準(zhǔn)品的標(biāo)示值。最終標(biāo)定此脂類(lèi)校準(zhǔn)品中載脂蛋白A-1的標(biāo)示值為2.54g/L，載脂蛋白B的表示值為2.33g/L
[0048]表2脂類(lèi)復(fù)合校準(zhǔn)品中載脂蛋白A-1和載脂蛋白B含量標(biāo)定
[0049]
測(cè)定次數(shù) ApoA-1 (g/L) ApoB (g/L)
?2.572.28
22.552.30
32.532.35
42?522?36
52.552?32
62.572.35
72?562?32
82?522.35
92?512.35
102.552.35
平均值~ 2.542.33

STDEV 0.02160.0267

【權(quán)利要求】
1.一種穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品，其特征在于，所述穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品包括: 緩沖液20-200mmol/L 蛋白質(zhì)類(lèi)穩(wěn)定劑2-10% (w/v)
電解質(zhì) NaCl10-200mmol/L 抗氧化增效劑5-100mmol/L 糖類(lèi)穩(wěn)定劑10-100g/L 防腐劑0.09% (w/v) 抗氧化劑0.02-100mmol/L 蛋白酶抑制劑0.l-5mmol/L
載脂蛋白 A-12.0-3.0g/L 載脂蛋白B2-2.5g/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品，其特征在于，所述緩沖液為HEPES緩沖液、Tris緩沖液、GOOD’ S緩沖液、PB緩沖液中的一種，并且緩沖液的酸堿度為PH=7_8。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品，其特征在于，所述穩(wěn)定劑包括蛋白質(zhì)類(lèi)穩(wěn)定劑或者糖類(lèi)穩(wěn)定劑中一種或幾種混合物，所述蛋白質(zhì)類(lèi)穩(wěn)定劑為BSA、HAS、人Y球蛋白中一種或幾種，所述糖類(lèi)穩(wěn)定劑為蔗糖、葡萄糖、海藻糖中一種或幾種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品，其特征在于，所述蛋白酶抑制劑為EDTA、抑肽酶、PMSF中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品，其特征在于，所述抗氧化劑為硫代二丙酸、沒(méi)食子酸丙酯、丁基羥基茴香醚、二丁基羥基甲苯、叔丁基對(duì)苯二酚中的一種或幾種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品，其特征在于，所述抗氧化增效劑為檸檬酸、乳酸鈉、EDTA中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品，其特征在于，所述防腐劑為疊氮鹽類(lèi)或proclin系列防腐劑,其中疊氮鹽類(lèi)防腐劑主要為NaN3, proclin系列防腐劑主要為Proclin300o
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7所述的穩(wěn)定的液體脂類(lèi)校準(zhǔn)品，其特征在于，主要包括以下組分:
HEPES (緩沖液，pH7-8)20-200mmol/L 人血清白蛋白(穩(wěn)定劑)1-5% (w/v) 人Y球蛋白(穩(wěn)定劑)1-5% (w/v) NaCl (電解質(zhì))10-200mmol/L
乳酸鈉(抗氧化增效劑)5-100mmol/L 海藻糖(穩(wěn)定劑)10-100g/L 疊氮鈉(防腐劑)0.09% (w/v)
硫代二丙酸(抗氧化劑)5-100mmol/L
沒(méi)食子酸丙酯(抗氧化劑)0.02-1.0mmoI/L
EDTA (蛋白酶抑制劑)0.l-5mmol/L 抑肽酶(蛋白酶抑制劑)l-25mg/L載脂蛋白 A-12.0-3.0g/L載脂蛋白B2-2.5g/L。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104198733SQ201410431757
【公開(kāi)日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年8月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月13日
【發(fā)明者】陳媛, 張聞, 周海濱, 王建飛 申請(qǐng)人:寧波瑞源生物科技有限公司