基于積雪草酸及其特定鹽的治療劑的制作方法
【專(zhuān)利說(shuō)明】
[0001] 本申請(qǐng)是國(guó)際申請(qǐng)日為2009年01月08日，國(guó)際申請(qǐng)?zhí)枮镻CT/US2009/030458,國(guó) 家申請(qǐng)?zhí)枮?00980108867. 6,進(jìn)入中國(guó)國(guó)家階段日期為2010年09月09日，發(fā)明名稱(chēng)為基 于積雪草酸及其特定鹽的治療劑的申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
[0002] 優(yōu)先權(quán)要求
[0003] 本申請(qǐng)要求以下美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)：申請(qǐng)?zhí)枮?1/006,432,申請(qǐng)日為2008年 1月11日，并在此全文引用并結(jié)合于本申請(qǐng)中。
技術(shù)領(lǐng)域
[0004] 本發(fā)明涉及化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種積雪草酸的制備方法、以及一種積雪草酸氨 基丁三醇鹽及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0005] Bontems, Bull. Sci. Pharmacol. 49:186-91 (1941)，首次報(bào)道了積雪草酸及其三 糖皂甙能夠從積雪草中提取而得。積雪草是傘形科蒔蘿屬一年生小型草本植物，產(chǎn)自亞 洲-環(huán)太平洋地區(qū)。積雪草酸及積雪草苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下所示：
[0008]參見(jiàn)：Polonsky, Compt. Rend. 232 : 1878-80 (1951);和 Bull. Soc. Chim. 173-80(1953).
[0009] 積雪草提取物中含有積雪草酸和積雪草苷，已知可用于治療皮膚疤痕和慢性潰 瘍。在有關(guān)方面，文獻(xiàn)也披露了使用積雪草提取物治療與結(jié)核病或麻風(fēng)病相關(guān)的皮膚畸形。 比如可參見(jiàn)：Boiteau et al. ,Bull. Soc. Chim. 31:46-51 (1949).
[0010] 此類(lèi)傷口愈合的藥理作用方式與誘發(fā)角質(zhì)化有關(guān)，參見(jiàn)：May，Eur. J. Pharmacol. 4:331-39 (1968)，特別是通過(guò)促進(jìn)皮膚纖維原細(xì)胞增殖和包括I型膠原蛋白 在內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì)的合成。比如可參閱：Lu et al.，Int'l J. Dermatol. 43:801-07(2004); Skukla et al·，J.Ethnopharmacol. 65:1_11 (1999)。根據(jù) Bonte 等人報(bào)道，Bonte et al.，Planta Med. 60:133-35 (1994)，通過(guò)將積雪草苷和積雪草酸進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)，前者分 子中的糖部分對(duì)于其生物活性來(lái)說(shuō)，似乎并非不可或缺。并且正如Grimaldi et al.，J. Ethnopharmacol. 28:235-41 (1990)中所論述，在人體口服之后，積雪草苷完全轉(zhuǎn)化成血楽 積雪草酸。
[0011] 基于對(duì)這些傷口愈合特性的認(rèn)識(shí)，美國(guó)專(zhuān)利No. 5, 834, 437中提出了包含積雪草 酸或其衍生物的皮膚病制劑的方案。此外，也可參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利No. 6, 417, 349,其中，在肝纖 維化動(dòng)物模型中，通過(guò)腹腔給藥積雪草苷和羥基積雪草苷的水溶性提取物，達(dá)到了緩解癥 狀的效果，其中所述的羥基積雪草苷也是由積雪草產(chǎn)生的一個(gè)相關(guān)化合物。除了愈合傷口 和抗纖維化的功能以外，另?yè)?jù)報(bào)道，在標(biāo)準(zhǔn)的（膠原誘導(dǎo)）關(guān)節(jié)炎嚙齒動(dòng)物模型中，試驗(yàn)證 實(shí)，口服積雪草苷還降低了脾細(xì)胞和炎癥分子的水平，包括C0X-2, PGE2, TNF-α和IL-6， 以及由此抑制或降低了多種關(guān)節(jié)炎參數(shù)，比如足爪腫脹、關(guān)節(jié)炎評(píng)分以及滑膜增生。參見(jiàn)： Li et al·，Yao Xue Xue Bao (Acta Pharma. Sinica)42:698-703(2007)〇
[0012] 盡管這些和其他的披露信息都提示了積雪草酸和積雪草苷的治療潛力，然而該潛 力的實(shí)現(xiàn)卻面臨著很大的障礙。主要問(wèn)題在于，這兩種化合物的提取都很困難，獲得的收率 和純度都相對(duì)偏低。此外，對(duì)于用于治療性組合物中的積雪草酸鹽的制備，人們還知之甚 少。在美國(guó)專(zhuān)利No. 6, 891，063中曾報(bào)道過(guò)某些適用于局部治療的積雪草酸鹽，主要是一些 銨鹽。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 為了解決上述積雪草酸提取困難，所得產(chǎn)物的收率和純度都相對(duì)偏低的技術(shù)問(wèn) 題，本發(fā)明提供了一種積雪草酸的制備方法、以及一種積雪草酸氨基丁三醇鹽及其制備方 法。
[0014] 因此，為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案之一為：一種積雪草酸的制備 方法，所述制備方法包括以下步驟：在積雪草苷粉末中加入8X4% Na0H/50% EtOH溶液，加 熱回流3-4小時(shí)，在所得水解產(chǎn)物中加入鹽酸調(diào)節(jié)pH至4-5抽濾，棄去濾液，將所得濾餅依 次用水、30 % EtOH溶液洗滌直到濾液接近無(wú)色，棄去濾液，在所得濾餅中加入8 X無(wú)水乙醇 回流直到固體溶解，加入2 X活性炭，回流30分鐘，趁熱抽濾，棄去用過(guò)的活性炭，在濾液中 加入2 X活性炭回流30分鐘，趁熱抽濾，棄去用過(guò)的活性炭，將所得濾液冷至室溫，加水，直 到?jīng)]有新的沉淀生成，所得沉淀即為積雪草酸，其中所述的百分比為質(zhì)量體積比。
[0015] 本發(fā)明所述積雪草酸的制備方法較佳地包括以下步驟：將200g純度約為92%的 積雪草苷溶解于8X4% Na0H/50% EtOH溶液中，所得溶液于80°C水浴中加熱回流3~4 小時(shí)，冷卻至室溫，通過(guò)在攪拌下分批少量加入稀鹽酸，調(diào)節(jié)該溶液的pH至4~5,在此過(guò) 程中，不斷有沉淀生成，最后整個(gè)體系成為粘稠的糊狀，將該糊狀物用直徑為200mm的布氏 漏斗抽濾，棄去濾液，沉淀用水多次減壓洗滌，直至洗滌液接近無(wú)色，再用30%的乙醇洗 滌，直至洗滌液接近無(wú)色，兩次的洗滌液均棄去，向上述濾渣中加入8X無(wú)水乙醇，將體系 于80°C水浴中加熱回流，直至固體完全溶解，再加入2X活性炭，繼續(xù)回流30分鐘，用直徑 為200_的布氏漏斗趁熱抽濾，除去活性炭，棄去用過(guò)的活性炭，再向?yàn)V液中加入與前次等 量的活性炭，回流30分鐘，用直徑為200_的布氏漏斗趁熱抽濾，濾液冷至室溫，向其中分 批加入水，每次約100_200ml，直至不再產(chǎn)生白色沉淀，所需水的總體積約為4000ml，用直 徑為200mm的布氏漏斗抽濾,棄去濾液,將漏斗內(nèi)的白色固體干燥后碾碎，即得純度為98% 的積雪草酸，其中所述的百分比為質(zhì)量體積比。
[0016] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案之二為：一種積雪草酸氨基丁三醇 鹽的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：將2g積雪草酸和0. 59g氨基丁三醇加入到 30ml甲醇中，室溫下攪拌24小時(shí)后，再回流0. 5小時(shí)，將體系濃縮，再加入少量水，有沉淀生 成，過(guò)濾，將濾餅置于適量甲醇中，加熱使之溶解，過(guò)濾，除去不溶物，濃縮，向濃縮液中加入 足量丙酮使體系均勻，冷卻，有沉淀生成，過(guò)濾后所得固體于50°C下干燥，得到I. 5g積雪草 酸氨基丁三醇鹽，為米色固體。
[0017] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案之三為：一種積雪草酸氨基丁三醇 鹽，其結(jié)構(gòu)式如下所示：
[0018]
[0019] 本發(fā)明提供了高純度的積雪草酸。在一實(shí)施例中，該積雪草酸為醫(yī)藥級(jí)，優(yōu)選純 度約98%。
[0020] 本發(fā)明還提供了由高純度積雪草酸制備的鹽。該鹽可以為堿金屬鹽、堿土金屬鹽 或任意取代的銨鹽。具體的可以為鉀鹽、鈉鹽或由氨基丁三醇形成的銨鹽。本發(fā)明還提供 了一種包含上述任意一種或多種鹽的固體制劑。
[0021] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了高純度積雪草酸的衍生物。所述的衍生物可以是酰胺或酯。 優(yōu)選的衍生物為積雪草苷。
[0022] 本發(fā)明還提供了一種治療性組合物，該組合物由以下步驟制備而得：將高純度的 積雪草酸或積雪草苷和藥學(xué)上可接受的載體配制成含有治療有效量的積雪草酸或積雪草 苷的劑型。
[0023] 本發(fā)明還進(jìn)一步提供了一種治療或預(yù)防纖維化疾病的方法。該方法包括給已患病 或存在患病風(fēng)險(xiǎn)的受試者施用上述治療性組合物。本發(fā)明中所涉及的典型的纖維化疾病是 放射性肺炎及纖維化、特發(fā)性肺纖維化、糖尿病、腎病以及慢性阻塞性肺?。–OPD)。
[0024] 本發(fā)明還提供了一種治療或預(yù)防炎癥疾病的方法，包括給已患病或存在患病風(fēng)險(xiǎn) 的受試者施用上述治療性組合物。這些炎癥性疾病類(lèi)型可以為關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病以及銀 屑病。
[0025] 在符合本領(lǐng)域常識(shí)的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實(shí) 例。
[0026] 本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。
[0027] 本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：利用本發(fā)明所述積雪草酸以及積雪草酸氨丁三醇鹽 的制備方法，提取積雪草酸較為容易，而且所得產(chǎn)物積雪草酸和積雪草酸氨丁三醇鹽的收 率和純度都較高。利用本發(fā)明制備的積雪草酸以及積雪草酸氨基丁三醇鹽制備的藥用組合 物可用于治療關(guān)節(jié)炎、銀屑病以及其它炎癥，還可用于治療肺纖維化、糖尿病腎病等纖維化 疾病，并且能夠獲得顯著的療效。
【附圖說(shuō)明】
[0028] 圖1為積雪草酸及其鹽的疊加譜圖。
[0029] 圖 2 為積雪草酸（Lot071109)及其鈉鹽（AJF09,99b)的1H-NMR (300MHz, DMS0-d6) 譜圖。
[0030] 圖 3 為積雪草酸（Lot071109)及其鈉鹽（AJF09,99b)的 13C-NMR (300MHz, DMS0-d6) 譜圖。
[0031] 圖4為積雪草酸（Lot071109)及其鈉鹽（AJF09, 99b)在化學(xué)位移ll-41ppm部分 的 13C-NMR(300MHz, DMS0-d6)譜圖。
[0032] 圖4a為積雪草酸在DMS0-d6*的完整1H-NMR譜圖。
[0033] 圖4b為積雪草酸1H-NMR譜的放大圖。
[0034] 圖4c為積雪草酸鈉鹽（AJF09, 99b)的完整1H-NMR譜圖。
[0035] 圖4d為積雪草酸1H-NMR譜的放大圖。
[0036] 圖4e為積雪草酸在DMS0-d6*的完整13C-NMR譜圖。
[0037] 圖4f為積雪草酸13C-NMR譜的放大圖。
[0